葡萄糖衍生物陽(yáng)離子脂質(zhì)體納米顆粒的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一系列葡萄糖衍生物陽(yáng)離子脂質(zhì)體納米顆粒的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來(lái)，基因治療在治療遺傳疾病、多種傳染病W及癌癥方面起到越來(lái)越重要的 作用。目前基因治療面臨最大的挑戰(zhàn)是找到一種安全高效的基因載體將外援基因?qū)氲饺?體細(xì)胞內(nèi)。常用的基因載體有病毒載體和非病毒載體，病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高、復(fù)雜的裝配過(guò) 程由細(xì)胞完成、不同病毒載體具有不同表達(dá)特點(diǎn)，但是由于存在無(wú)法控制病毒復(fù)制的風(fēng)險(xiǎn) 并具內(nèi)在免疫原性，而使其應(yīng)用受到限制；相比于病毒載體而言非病毒載體具有毒性低、免 疫反應(yīng)低，而且所攜帶的基因不整合至宿主細(xì)胞基因組等優(yōu)點(diǎn)。而作為非病毒性載體之一 的陽(yáng)離子脂質(zhì)體在臨床試驗(yàn)中具有較好的發(fā)展前景。陽(yáng)離子脂質(zhì)體本身帶有正電荷，所W 可作為帶負(fù)電荷藥物的傳遞載體，特別適用于蛋白、多膚、DNA和RNA類藥物，故在抗病毒、 抗癌癥等方面的基因治療研究中有獨(dú)特應(yīng)用。
[0003] W葡萄糖為原料，通過(guò)全己醜化、脫1-0-己醜基、Η氯己醜亞胺醋化、糖巧化、疊 氮化、脫全部己醜基、4, 6-0-異丙叉基保護(hù)、離化、脫叉基保護(hù)、還原氨化和季倭鹽化反應(yīng)， 合成不同疏水鏈長(zhǎng)度和不同物理結(jié)構(gòu)的一系列葡萄糖衍生物陽(yáng)離子脂質(zhì)：扣-Ci2-G1u-TMA、 i/i-Ci2-Glu-TMA、i/i-Ci2-Glu-TMA 和扣-Ci2-G1u-TMA ; W葡萄糖為原料，通過(guò)全己醜化、脫 1-0-己醜基、Η氯己醜亞胺醋化、糖巧化、疊氮化、脫全部己醜基、還原氨化、叔胺化、和季 倭鹽化反應(yīng)，合成不同疏水鏈長(zhǎng)度、和不同物理結(jié)構(gòu)的一系列葡萄糖衍生物陽(yáng)離子脂質(zhì)： Glu-DiCizMA、Glu-DiCwMA、Glu-DiCieMA和Glu-DiCisMA ;利用上述八種葡萄糖衍生物陽(yáng)離子 脂質(zhì)帶正電荷的季倭鹽頭部可通過(guò)靜電作用結(jié)合核酸藥物，利用帶長(zhǎng)鏈的疏水端可與細(xì)胞 壁麟脂雙分子層結(jié)合的特征，可望通過(guò)融合內(nèi)吞作用實(shí)現(xiàn)核酸藥物從胞外到胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)。
[0004] 所制備的葡萄糖衍生物陽(yáng)離子脂質(zhì)體納米顆粒具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性好、粒度尺寸適 中、粒徑分布窄、表面電荷適中、制備成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，能滿足核酸藥物轉(zhuǎn)運(yùn)載體應(yīng)具備的 基本要求。
[0005] 所制備的葡萄糖衍生物陽(yáng)離子脂質(zhì)體納米顆粒，亦可用于構(gòu)建非核酸藥物緩釋給 藥系統(tǒng)，或用于非核酸藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)載體。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種合成成本低、操作容易的一系列葡萄糖衍生物陽(yáng)離子脂 質(zhì)體納米顆粒的制備方法。
[0007] 本發(fā)明提供的送種丙二醇胺衍生物陽(yáng)離子脂質(zhì)體納米顆粒的制備方法，包括如下 步驟： (1) W葡萄糖為原料，W高氯酸為催化劑，己酸酢為溶劑及反應(yīng)物，經(jīng)柱層析分離純化 得到白色粉末狀固體1，2, 3, 4, 6-五-0-己醜基-α，目-D-化喃葡萄糖； (2) W二氧六環(huán)和甲醇為混合溶劑，1，2, 3, 4, 6-五-0-己醜基-α，目-D-化喃葡萄糖 與氨氣發(fā)生反應(yīng)脫去1位己醜基，經(jīng)柱層析分離純化得到淡黃色漿狀物2, 3, 4, 6-四-0-己 醜基-α，目-D-化喃葡萄糖； (3) W無(wú)水二氯甲焼為溶劑，無(wú)水碳酸鐘提供弱堿性環(huán)境，2, 3, 4, 6-四-0-己醜 基-α，目-D-化喃葡萄糖與Η氯己臘發(fā)生施密特反應(yīng)，經(jīng)經(jīng)柱層析分離純化得到淡黃色漿 狀物2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α -D-化喃葡萄糖Η氯己醜亞胺醋； (4) W無(wú)水二氯甲焼為溶劑，TMSOTf為催化劑，步驟（3)所得淡黃色漿狀物 2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α -D-化喃葡萄糖Η氯己醜亞胺醋與3-氯-1-丙醇發(fā)生糖巧化反 應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得到白色晶體3'-氯丙基2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-目-D-化喃葡萄 糖巧； 妨WyV，yV-二甲基甲醜胺為溶劑，3'-氯丙基2,3,4,6-四-0-己醜基-目-〇-口比 喃葡萄糖巧與疊氮化鋼反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得到白色固體3'-疊氮基丙基 2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-目-D-化喃葡萄糖巧； (6) W甲醇為溶劑，3'-疊氮基丙基2, 3, 4,6-四-0-己醜基-目-D-化喃葡萄糖巧與 氨氣反應(yīng)脫去全部己醜基，經(jīng)柱層析分離純化得到淡黃色漿狀物3'-疊氮基丙基目-D-化 喃葡萄糖巧； (7) W步驟（6)得到的3'-疊氮基丙基目-D-化喃葡萄糖巧為原料，2, 2-二甲氧基 丙焼為溶劑及反應(yīng)物，W濃硫酸為催化劑，室溫反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得到淡黃色漿狀物 3'-疊氮基丙基4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃葡萄糖巧； (8) 二甲基甲醜胺為溶劑，W氨化鋼為催化劑，3'-疊氮基丙基4,6-0-異 丙叉基-目-D-化喃葡萄糖巧與烷基漠反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得到3'-疊氮基丙基 2, 3-二-0-二烷基-4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃葡萄糖巧； (9) W甲醇為溶劑，3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正烷基-4, 6-0-異丙叉基-目-D-化 喃葡萄糖巧與己醜氯反應(yīng)脫去異丙叉基，經(jīng)柱層析分離純化得到3'-疊氮基丙基 2, 3-二-0-正烷基-目-D-化喃葡萄糖巧； (10) W甲醇為溶劑，鉛碳為催化劑，3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正烷基-目-D-口比 喃葡萄糖巧與甲醒和氨氣反應(yīng)得到叔胺，經(jīng)柱層析分離純化得到3' -W，W-二甲胺基丙基 2, 3-二-0-正烷基-目-D-化喃葡萄巧； (11) 步驟（10)得到的3' -yV，yV-二甲胺基丙基2, 3-二-0-正烷基-β -D-化喃葡萄 巧與賄甲焼進(jìn)行季倭鹽化反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得白色固體； (。）W步驟（6)得到的3'-疊氮基丙基目-D-化喃葡萄糖巧為原料，W四氨巧喃和 水為溶劑，用Η苯基麟還原疊氮得到伯胺，經(jīng)柱層析分離純化得淡黃色漿狀物3'-氨基丙基 目-D-化喃葡萄糖巧； (13) 步驟（12)所得產(chǎn)物3'-氨基丙基目-D-化喃葡萄糖巧，W甲醇、己醇為溶劑，無(wú) 水碳酸鐘提供堿性環(huán)境，在加熱的條件下與漠代焼姪反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得無(wú)色漿狀 物3' -〇V，W-二正烷基）丙基目-D-化喃葡萄糖巧； (14) 步驟（13)得到的3'-〇ν，Λ^-二正烷基）丙基目-D-化喃葡萄糖巧與賄甲焼進(jìn)行 季倭鹽化反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得白色固體； (15) 步驟（11)和步驟（14)得到的白色固體經(jīng)超聲波振蕩水分散后得到相應(yīng)的葡萄 糖衍生物陽(yáng)離子脂質(zhì)體納米顆粒。
[0008] W葡萄糖為原料，W高氯酸為催化劑，己酸酢為溶劑及醜化試劑，濃縮，結(jié)晶得白 色粉末狀固體1，2,3,4,6-五-0-己醜基-(1，目-〇-化喃葡萄糖。反應(yīng)溫度；1〇°〇~2〇乂；反 應(yīng)時(shí)間；1〇 h;反應(yīng)投料比為；葡萄糖(mol):己酸?。╩ol):高氯酸(mol) = 1 : 7.5 : 0. 06;結(jié)晶使用溶劑為；石油離：己酸己醋=10 : 1(體積比）。所得1，2, 3, 4,6-五-0-己 醜基-α,目-D-化喃葡萄糖，W環(huán)氧六環(huán)和甲醇為混合溶劑（環(huán)氧六環(huán)：甲醇=5 : 2， 體積比），常溫下通入氨氣反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得淡黃色漿狀物2, 3, 4, 6-四-0-己醜 基-α,目-D-化喃葡萄糖。反應(yīng)時(shí)間；20 min~40 min ;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己 酸己醋=2 : 1 (體積比）。所得2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α，目-D-化喃葡萄糖，W無(wú)水 二氯甲焼為溶劑，無(wú)水碳酸鐘提供弱堿性環(huán)境，常溫下與Η氯己臘反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化 得淡黃色漿狀物2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α -D-化喃葡萄糖Η氯己醜亞胺醋。反應(yīng)時(shí)間： 24 h;反應(yīng)投料比為；2, 3, 4,6-四-0-己醜基-α,目-D-化喃葡萄糖（mol) : Η氯己臘 (mol):無(wú)水碳酸鐘（mol) = 1 : 2. 5 : 1 ;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋= 3 : 1 (體積比）。所得2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α -D-化喃葡萄糖Η氯己醜亞胺醋，W無(wú) 水二氯甲焼為溶劑，4Α分子篩為除水劑，W TMSOTf為催化劑在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下與3-氯-1-丙 醇反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得白色晶體3'-氯丙基2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-目-D-化喃 葡萄糖巧。反應(yīng)溫度；-20 °C -室溫；反應(yīng)時(shí)間；2 h ;反應(yīng)投料比為；2, 3, 4, 6-四-0-己 醜基-a-D-化喃葡萄糖Η氯己醜亞胺醋（mol) : 3-氯丙醇（mol) : TMSOTf(mol) = 1 :2.4 : 0.01;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=3 : 1(體積比）。所得產(chǎn)物 3'-氯丙基2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-目-D-化喃葡萄糖巧，二甲基甲醜胺為溶劑， 在加熱條件下與疊氮化鋼反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮基丙基2, 3, 4, 6-四-0-己 醜基-目-D-化喃葡萄糖巧。反應(yīng)溫度；75°C，反應(yīng)時(shí)間；24 h ;反應(yīng)投料比為；3' -氯丙基 2, 3, 4,6-四-0-己醜基-目-D-[]比喃葡萄糖巧（mol):疊氮化鋼（mol) = 1 : 6;柱層析分 離洗脫劑為；石油離：己酸己醋=3 : 1(體積比）。3'-疊氮基丙基2, 3, 4,6-四-0-己 醜基-目-D-化喃葡萄糖巧，W甲醇為溶劑，通入氨氣至飽和條件下反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純 化得3'-疊氮基丙基目-D-化喃葡萄糖巧。反應(yīng)時(shí)間；24 h ;柱層析分離洗脫劑為；己酸己 醋：甲醇=2 : 1(體積比）。所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基目-D-化喃葡萄糖巧，W 2, 2-二 甲氧基丙焼為溶劑及反應(yīng)物，W濃硫酸為催化劑，室溫反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮 基丙基4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃葡萄糖巧。反應(yīng)時(shí)間；4 h，柱層析分離洗脫劑為：石油 離：己酸己醋=2 : 1(體積比）。所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基4, 6-0-異丙叉基-目-D-口比 喃葡萄糖，W 二甲基甲醜胺為溶劑，氨化鋼為催化劑，常溫下與月桂基漠反應(yīng)，經(jīng)柱層 析分貿(mào)純化得3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十二烷基-4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃葡 萄糖巧。反應(yīng)時(shí)間；10 h;反應(yīng)投料比；3'-疊氮基丙基4, 6-0-異丙叉基-β-D-化喃葡 萄糖巧（mol):氨化鋼（mol):月桂基漠（mol) = 1 : 6 : 4;柱層析分離洗脫劑為：石 油離：己酸己醋=16 : 1(體積比）。所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十二焼 基-4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃葡萄糖巧，W甲醇為溶劑，與己醜氯反應(yīng)脫除異丙叉基， 經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十二烷基-目-D-化喃葡萄糖巧。反 應(yīng)溫度；(TC至室溫；反應(yīng)時(shí)間；1 h;反應(yīng)投料比；3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十二焼 基-4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃葡萄糖巧（mol):己醜氯（mol) = 1 : 8;柱層析分離洗 脫劑為：石油離：己酸己醋=2 : 1(體積比）。所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正 十二烷基-目-D-化喃葡萄糖巧，W甲醇為溶劑，鉛碳為催化劑，與甲醒和氨氣反應(yīng)，經(jīng)柱層 析分離純化得3' -yV，yV-二甲胺基丙基2, 3-二-0-正十二烷基-目-D-化喃葡萄巧。反應(yīng) 時(shí)間；24 h;反應(yīng)投料比；3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十二烷基-目-D-化喃葡萄糖巧 (mol):甲醒（mol) = 1 : 8,3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十二烷基-目-D-化喃葡萄 糖巧（g):鉛碳（g) = 1 : 0.3;柱層析分離洗脫劑為：己酸己醋：甲醇=5 : 1(體積 比）。所得產(chǎn)物3' -yV，yV-二甲胺基丙基2, 3-二-0-正十二烷基-目-D-化喃葡萄巧，W四 氨巧喃為溶劑，常溫下與賄甲焼反應(yīng)，分離純化得白色固體3' Η甲基賄化倭基） 丙基2,3-二-0-正十二烷基-目-D-化喃葡萄巧。反應(yīng)時(shí)間；3 h;反應(yīng)投料比；3'-A；yV-二 甲胺基丙基2,3-二-0-正十二烷基-目-D-化喃葡萄巧（mol):賄甲焼（mol) = 1 : 4; 純化；反應(yīng)混合液經(jīng)冰浴冷卻析晶。所得白色固體經(jīng)超聲波振蕩水分散后得到陽(yáng)離子脂質(zhì) 體3'-〇ν，Λ；Λ^- S甲基賄化倭基）丙基2, 3-二-0-正十二烷基-β -D-化喃葡萄巧（簡(jiǎn)寫(xiě) 為扣-Ci2-G1u-TMA)納米顆粒。
[0009] 二甲基甲醜胺為溶劑，氨化鋼為催化劑，常溫下3'-疊氮基丙基4, 6-0-異 丙叉基-目-D-化喃葡萄糖與肉豆護(hù)基漠反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮基丙基 2, 3-二-0-正十四烷基-4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃葡萄糖巧。反應(yīng)時(shí)間；10 h;反應(yīng)投 料比；3'-疊氮基丙基4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃葡萄糖巧（mol):氨化鋼（mol):肉 豆護(hù)基漠 （moU = 1 : 6 : 4;柱層析分離洗脫劑為擊油離：己酸己醋=16 : 1(體積 比）。所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十四烷基-4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃 葡萄糖巧，W甲醇為溶劑，與己醜氯反應(yīng)脫除異丙叉基，經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮基丙 基2, 3-二-0-正十四烷基-目-D-化喃葡萄糖巧。反應(yīng)溫度；0°C至室溫；反應(yīng)時(shí)間；1 h ; 反應(yīng)投料比；3' -疊氮基丙基2,3-二-0-正十四烷基-4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃葡 萄糖巧（mol):己醜氯（mol) = 1 : 8 ;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=2 : 1 (體積比）。所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十四烷基-目-D-化喃葡萄糖巧，W 甲醇為溶劑，鉛碳為催化劑，與甲醒和氨氣反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得3' -Λ;Λ^-二甲胺基丙 基2,3-二-0-正十四烷基-目-D-化喃葡萄巧。反應(yīng)時(shí)間；24 h ;反應(yīng)投料比；3'-疊氮基 丙基2,3-二-0-正十四烷基-目-〇-化喃葡萄糖巧〇11〇^:甲醒（111〇^=1:8,3'-疊 氮基丙基2,3-二-0-正十四烷基-目-D-化喃葡萄糖巧（g):鉛碳（g) = 1 : 0.3;柱層 析分離洗脫劑為：己酸己醋：甲醇=5 : 1(體積比）。所得產(chǎn)物3'-Λ;Λ^-二甲胺基丙基 2, 3-二-0-正十四烷基-目-D-化喃葡萄巧，W四氨巧喃為溶劑，常溫下與賄甲焼反應(yīng)，分 離純化得白色固體3'-〇ν，Λ；Λ^- Η甲基賄化倭基）丙基2, 3-二-0-正十四烷基-目-D-化 喃葡萄巧。反應(yīng)時(shí)間；3 h;反應(yīng)投料比；3'-yV，yV-二甲胺基丙基2,3-二-0-正十四焼 基-目-D-化喃葡萄巧（mol):賄甲焼（mol) = 1 : 4;純化；反應(yīng)混合液經(jīng)冰浴冷卻析晶。 所得白色固體經(jīng)超聲波振蕩水分散后得到陽(yáng)離子脂質(zhì)體3' -〇ν，Λ；Λ" Η甲基賄化倭基）丙 基2, 3-二-0-正十四烷基-β -D-化喃葡萄巧（簡(jiǎn)寫(xiě)為扣-Ci4-G1u-TMA)納米顆粒。
[0010] 二甲基甲醜胺為溶劑，氨化鋼為催化劑，常溫下3'-疊氮基丙基4, 6-0-異 丙叉基-目-D-化喃葡萄糖與錄蠟基漠反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮基丙基 2, 3-二-0-正十六烷基-4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃葡萄糖巧。反應(yīng)時(shí)間；10 h;反應(yīng) 投料比；3'-疊氮基丙基4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃葡萄糖巧（mol):氨化鋼（mol): 錄蠟基漠 （moU = 1 : 6 : 4;柱層析分離洗脫劑為擊油離：己酸己醋=16 : 1(體積 比）。所得廣物3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十六烷基-4, 6-0-異丙叉基-β -D-化喃 葡萄糖巧，W甲醇為溶劑，與己醜氯反應(yīng)脫除異丙叉基，經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮基丙 基2,3-二-0-正十六烷基-目-D-化喃葡萄糖巧。反應(yīng)溫度；0°C至室溫；反應(yīng)時(shí)間；1 h; 反應(yīng)投料比；3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十六烷基-4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃葡 萄糖巧（mol):己醜氯（mol) = 1 : 8 ;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=2 : 1 (體積比）。所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十六烷基-β -D-化喃葡萄糖巧，W 甲醇為溶劑，鉛碳為催化劑，與甲醒和氨氣反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得3' -Λ;Λ^-二甲胺基丙 基2, 3-二-0-正十六烷基-目-D-化喃葡萄巧。反應(yīng)時(shí)間；24 h ;反應(yīng)投料比；3'-疊氮基 丙基2,3-二-0-正十六烷基-目-D-化喃葡萄糖巧（mol):甲醒（mol) = 1 : 8, 3'-疊 氮基丙基2,3-二-0-正十六烷基-β-D-化喃葡萄糖巧（g):鉛碳（g) = 1 : 0.3;柱層 析分離洗脫劑為：己酸己醋：甲醇=5 : 1(體積比）。所得產(chǎn)物3'-Λ;Λ^-二甲胺基丙基 2, 3-二-0-正十六烷基-目-D-化喃葡萄巧，W四氨巧喃為溶劑，常溫下與賄甲焼反應(yīng)，分 離純化得白色固體3'-〇ν，Λ；Λ^-Η甲基賄化倭基）丙基2,3-二-0-正十六烷基-目-D-化 喃葡萄巧。反應(yīng)時(shí)間；3 h;反應(yīng)投料比；3'-yV，yV-二甲胺基丙基2,3-二-0-正十六焼 基-目-D-化喃葡萄巧（mol):賄甲焼（mol) = 1 : 4;純化；反應(yīng)混合液經(jīng)冰浴冷卻析晶。 所得白色固體經(jīng)超聲波振蕩水分散后得到陽(yáng)離子脂質(zhì)體3' -〇ν，Λ；Λ^-Η甲基賄化倭基）丙 基2, 3-二-0-正十六烷基-β -D-化喃葡萄巧（簡(jiǎn)寫(xiě)為扣-Cie-Glu-TMA)納米顆粒。
[0011] 二甲基甲醜胺為溶劑，氨化鋼為催化劑，常溫下3'-疊氮基丙基4, 6-0-異 丙叉基-β-D-化喃葡萄糖與硬脂基漠反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮基丙基 2, 3-二-0-正十八烷基-4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃葡萄糖巧。反應(yīng)時(shí)間；10 h;反應(yīng) 投料比；3'-疊氮基丙基4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃葡萄糖巧（mol):氨化鋼（mol): 硬脂基漠（mol) = 1 : 6 : 4;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=16 : 1(體積 比）。所得廣物3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十八烷基-4, 6-0-異丙叉基-β -D-化喃 葡萄糖巧，W甲醇為溶劑，與己醜氯反應(yīng)脫除異丙叉基，經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮基丙 基2, 3-二-0-正十八烷基-目-D-化喃葡萄糖巧。反應(yīng)溫度；0°C至室溫；反應(yīng)時(shí)間；1 h ; 反應(yīng)投料比；3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十八烷基-4, 6-0-異丙叉基-目-D-化喃葡 萄糖巧（mol):己醜氯（mol) = 1 : 8 ;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=2 : 1 (體積比）。所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十八烷基-β -D-化喃葡萄糖巧，W 甲醇為溶劑，鉛碳為催化劑，與甲醒和氨氣反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得3' -Λ;Λ^-二甲胺基丙 基2,3-二-0-正十八烷基-β-D-化喃葡萄巧。反應(yīng)時(shí)間；24 h;反應(yīng)投料比；3'-疊氮基 丙基2,3-二-0-正十八烷基-目-D-化喃葡萄糖巧（mol):甲醒（mol) = 1 : 8, 3'-疊 氮基丙基2,3-二-0-正十八烷基-β-D-化喃葡萄糖巧（g):鉛碳（g) = 1 : 0.3;柱層 析分離洗脫劑為：己酸己醋：甲醇=5 : 1(體積比）。所得產(chǎn)物3'-Λ;Λ^-二甲胺基丙基 2, 3-二-0-正十八烷基-目-D-化喃葡萄巧，W四氨巧喃為溶劑，常溫下與賄甲焼反應(yīng)，分 離純化得白色固體3'-〇ν，Λ；Λ^-Η甲基賄化倭基）丙基2,3-二-0-正十八烷基-目-D-口比 喃葡萄巧。反應(yīng)時(shí)間；3 h;反應(yīng)投料比；3'-yV，yV-二甲胺基丙基2,3-二-0-正十八焼 基-目-D-化喃葡萄巧（mol):賄甲焼（mol) = 1 : 4;純化；反應(yīng)混合液經(jīng)冰浴冷卻析晶。 所得白色固體經(jīng)超聲波振蕩水分散后得到陽(yáng)離子脂質(zhì)體3' -〇ν，Λ；Λ^-Η甲基賄化倭基）丙 基2, 3-二-0-正十八烷基-β -D-化喃葡萄巧（簡(jiǎn)寫(xiě)為扣-Cis-Glu-TMA)納米顆粒。
[0012] W四氨巧喃和水為溶劑，用Η苯基麟還原3'-疊氮基丙基目-D-化喃葡萄糖巧的 疊氮基為氨基，分離純化得到3'-氨基丙基目-D-化喃葡萄糖巧。反應(yīng)溫度；75°C;反應(yīng) 時(shí)間；3 h ;反應(yīng)投料比；3' -疊氮基丙基目-D-化喃葡萄糖巧（mol) : Η苯基麟（mol)= 1 : 2;純化；加水除去雜質(zhì)。所得產(chǎn)物3'-氨基丙基目-D-化喃葡萄糖巧，W甲醇和己醇 為混合溶劑，無(wú)水碳酸鐘為縛酸劑，在加熱的條件下與月桂基漠反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得 3'-〇V，W-二正十二烷基）丙基目-D-化喃葡萄糖巧。反應(yīng)溫度；75°C;反應(yīng)時(shí)間；48h;反 應(yīng)投料比；3'-氨基丙基目-D-化喃葡萄糖巧：月桂基漠（mol):無(wú)水碳酸鐘=1 : 4 :2,柱層析分離洗脫劑為：己酸己醋：甲醇=4 : 1(體積比）。所得產(chǎn)物3'-〇ν，Λ^-二 正十二烷基）丙基目-D-化喃葡萄糖巧，W四氨巧喃為溶劑，常溫下與賄甲焼反應(yīng)，丙麗 結(jié)晶得到白色固體3' -0V-甲基-Λ;Λ^-二正十二烷基賄化倭基）丙基目-D-化喃葡萄糖 巧。反應(yīng)時(shí)間；3 h，反應(yīng)投料比；3'-〇ν，Λ^-二正十二烷基）丙基目-D-化喃葡萄糖巧： 賄甲焼（mol) = 1 : 4;純化；丙麗結(jié)晶。所得白色固體經(jīng)超聲波振蕩水分散后得到陽(yáng)離子 脂質(zhì)體3' -0V-甲基-W，W-二正十二烷基賄化倭基）丙基目-D-化喃葡萄糖巧（簡(jiǎn)寫(xiě)為 Glu-DiCizMA)納米顆粒。
[0013] W甲醇和己醇為混合溶劑，無(wú)水碳酸鐘為縛酸劑，在加熱的條件下，3'-氨基丙基 目-D-化喃葡萄糖巧與肉豆護(hù)基漠反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得3' -〇V，W-二正十四烷基） 丙基目-D-化喃葡萄糖巧。反應(yīng)溫度；75°C;反應(yīng)時(shí)間；48 h;反應(yīng)投料比；3'-氨基丙基 目-D-化喃葡萄糖巧：肉豆護(hù)基漠(mol):無(wú)水碳酸鐘=1 : 4 : 2,柱層析分離洗脫劑 為：己酸己醋：甲醇=4 : 1(