本發(fā)明涉及一種新穎陽(yáng)離子性脂質(zhì)。本申請(qǐng)是基于2014年12月26日在日本提出申請(qǐng)的日本專利特許2014-266548號(hào)而主張優(yōu)先權(quán)，并將其內(nèi)容引用到本文中。
背景技術(shù)：
：sirna(小干擾rna)、mirna(微小rna)、shrna(短發(fā)夾rna、或小發(fā)夾rna)表達(dá)載體、反義寡核苷酸等核酸是在活體內(nèi)誘導(dǎo)序列特異性基因表達(dá)抑制的核酸，其作為核酸醫(yī)藥而為公眾所知。在這些核酸醫(yī)藥中，特別是sirna備受矚目。sirna是包含19～23個(gè)堿基對(duì)的雙鏈rna，其會(huì)誘導(dǎo)稱為rna干擾(rnainterference，rnai)的序列特異性基因表達(dá)抑制。sirna雖化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，但在治療用途中存在如下問(wèn)題：容易被血漿中的rnase(核糖核酸酶，ribonuclease)分解、及當(dāng)單獨(dú)存在時(shí)難以透過(guò)細(xì)胞膜等(例如，參照專利文獻(xiàn)1)。針對(duì)所述問(wèn)題，已知有通過(guò)將sirna封入到含有陽(yáng)離子性脂質(zhì)的微粒子內(nèi)，而保護(hù)所封入的sirna免于在血漿中發(fā)生分解，且可使sirna透過(guò)脂溶性細(xì)胞膜(例如，參照專利文獻(xiàn)1)。另外，專利文獻(xiàn)2～4記載了用于傳遞sirna等核酸醫(yī)藥的陽(yáng)離子性脂質(zhì)，其生物降解性得到提高。另外，含有陽(yáng)離子性脂質(zhì)的微粒子存在保管期間容易發(fā)生凝聚的穩(wěn)定性問(wèn)題，已知有使聚乙二醇修飾脂質(zhì)(peg脂質(zhì))包含于該微粒子中而抑制凝聚的方法。此外，專利文獻(xiàn)5中記載了如下方法，即，通過(guò)將特定peg脂質(zhì)peg-dpg設(shè)為微粒子的構(gòu)成成分，或制成包含該微粒子與經(jīng)過(guò)脫離子化的溶劑的制劑，而改善凝聚抑制及核酸的傳遞效率。先前技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)1：日本專利特許2012-530059號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2：國(guó)際公開(kāi)第2011/153493號(hào)手冊(cè)專利文獻(xiàn)3：國(guó)際公開(kāi)第2013/086354號(hào)手冊(cè)專利文獻(xiàn)4：國(guó)際公開(kāi)第2013/158579號(hào)手冊(cè)專利文獻(xiàn)5：國(guó)際公開(kāi)第2014/089239號(hào)手冊(cè)技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明所要解決的問(wèn)題然而，盡管最近有所進(jìn)展，但業(yè)界仍然在尋求可利用于向細(xì)胞質(zhì)傳遞核酸的陽(yáng)離子性脂質(zhì)。解決問(wèn)題的技術(shù)手段本發(fā)明涉及以下的[1]至[8]。[1]一種化合物或其藥學(xué)上所容許的鹽，該化合物是選自由下述式(1)～(11)所表示的化合物所組成的族群中。[化1][化2][化3][化4][化5][化6][化7][化8][化9][化10][化11][2]根據(jù)[1]所述的化合物或其藥學(xué)上所容許的鹽，該化合物是選自由下述式(1)及(6)～(9)所表示的化合物所組成的族群中。[化12][化13][化14][化15][化16][3]根據(jù)[1]或[2]所述的化合物或其藥劑學(xué)上所容許的鹽，該化合物是以下述式(1)表示。[化17]所述式(1)所表示的化合物為陽(yáng)離子性脂質(zhì)。[4]根據(jù)[1]或[2]所述的化合物或其藥劑學(xué)上所容許的鹽，該化合物是以下述式(6)表示。[化18]所述式(6)所表示的化合物為陽(yáng)離子性脂質(zhì)。[5]根據(jù)[1]或[2]所述的化合物或其藥劑學(xué)上所容許的鹽，該化合物是以下述式(8)表示。[化19]所述式(8)所表示的化合物為陽(yáng)離子性脂質(zhì)。[6]一種脂質(zhì)復(fù)合物，其含有(i)[1]至[5]中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上所容許的鹽和(ii)選自由中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的族群中的至少一種脂質(zhì)。[7]一種組合物，其含有(i)[1]至[5]中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上所容許的鹽、(ii)選自由中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的族群中的至少一種脂質(zhì)及(iii)核酸。[8]一種組合物的制造方法，其包括如下步驟：將含有(i)[1]至[5]中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上所容許的鹽和(ii)選自由中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的族群中的至少一種脂質(zhì)的含極性有機(jī)溶劑的水溶液、與含有(iii)核酸的水溶液進(jìn)行混合，而獲得混合液的步驟；以及，使混合液中的極性有機(jī)溶劑的含量減少的步驟。發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明的陽(yáng)離子性脂質(zhì)，可向細(xì)胞質(zhì)高效率地釋放核酸。因此，本發(fā)明的陽(yáng)離子性脂質(zhì)具有作為用于向細(xì)胞質(zhì)傳遞核酸的脂質(zhì)的可利用性。附圖說(shuō)明圖1是表示動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(4)的結(jié)果的圖表。圖2是表示動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(5)的結(jié)果的圖表。具體實(shí)施方式<陽(yáng)離子性脂質(zhì)>在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明為所述式(1)～(11)中的任一個(gè)式所表示的化合物或其藥劑學(xué)上所容許的鹽，其可用作陽(yáng)離子性脂質(zhì)。陽(yáng)離子性脂質(zhì)也可以是所述鹽的水合物或所述鹽的溶劑合物。在本說(shuō)明書(shū)中，所謂陽(yáng)離子性脂質(zhì)是指具有脂質(zhì)親和性區(qū)域和親水性區(qū)域的兩親分子，該脂質(zhì)親和性區(qū)域包含一個(gè)以上的烴基，該親水性區(qū)域包含在生理ph值下會(huì)質(zhì)子化的極性基。即，本發(fā)明的陽(yáng)離子性脂質(zhì)能夠發(fā)生質(zhì)子化而形成陽(yáng)離子。作為與所述陽(yáng)離子成對(duì)，且本實(shí)施方式的陽(yáng)離子性脂質(zhì)可含有的陰離子，只要為藥劑學(xué)上所容許的陰離子，則沒(méi)有特別限定，例如可列舉：氯化物離子、溴化物離子、硝酸根離子、硫酸根離子、磷酸根離子等無(wú)機(jī)離子；醋酸根離子、草酸根離子、馬來(lái)酸根離子、富馬酸根離子、檸檬酸根離子、苯甲酸根離子、甲磺酸根離子等有機(jī)酸根離子等。<陽(yáng)離子性脂質(zhì)的制造方法>對(duì)本發(fā)明的陽(yáng)離子性脂質(zhì)的制造方法進(jìn)行說(shuō)明。下述式(12)中表示陽(yáng)離子性脂質(zhì)的合成流程的一個(gè)實(shí)施方式。[化20]所述式(12)中，r3表示碳數(shù)4～12的烷撐，r4表示碳數(shù)7～12的烷基，r8表示下述式(13)所表示的結(jié)構(gòu)，r9表示下述式(14)所表示的結(jié)構(gòu)。[化21][式(13)中，r1表示可具有由碳鏈的一部分縮合而形成的1個(gè)以上的環(huán)丙烷或者環(huán)丁烷的碳數(shù)4～10的烷基、或碳數(shù)4～10的烯基，r2表示氫原子或碳數(shù)2～8的烷基，m表示0～5的整數(shù)。][化22][式(14)中，r5、r6及r7分別獨(dú)立表示氫原子或碳數(shù)1～10的烷基，n表示0～5的整數(shù)；r5及r6也可一并形成單環(huán)式雜環(huán)，r6及r7也可一并形成單環(huán)式雜環(huán)。]在本實(shí)施方式的合成流程中，陽(yáng)離子性脂質(zhì)(1-7)可通過(guò)如下方式合成。首先，例如將式(1-1)所表示的二羧酸二烷基酯水解，而獲得式(1-2)所表示的單酯體。此處，披露了式(1-1)中二羧酸二烷基酯的烷基為甲基的例子，但二羧酸二烷基酯的烷基并不限于甲基，可選擇適當(dāng)?shù)耐榛＝又?，將?1-2)所表示的化合物酰氯化，而獲得式(1-3)所表示的化合物。接著，通過(guò)使式(1-3)所表示的化合物與格氏試劑進(jìn)行反應(yīng)，而獲得式(1-4)所表示的化合物。接著，通過(guò)酯交換反應(yīng)而獲得式(1-5)所表示的化合物，再將其還原，由此獲得式(1-6)所表示的化合物。接著，可通過(guò)使式(1-6)所表示的化合物與羧酸進(jìn)行縮合，而合成陽(yáng)離子性脂質(zhì)(1-7)。<脂質(zhì)復(fù)合物>本發(fā)明提供一種脂質(zhì)復(fù)合物，其含有(i)所述陽(yáng)離子性脂質(zhì)和(ii)選自由中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的族群中的至少一種脂質(zhì)。作為本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，脂質(zhì)復(fù)合物含有(i)所述陽(yáng)離子性脂質(zhì)、(ii)選自由中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的族群中的至少一種脂質(zhì)及(iii)核酸。本實(shí)施方式的脂質(zhì)復(fù)合物能夠?qū)崿F(xiàn)將核酸高效率地釋放到細(xì)胞質(zhì)中。關(guān)于本實(shí)施方式的脂質(zhì)復(fù)合物，以脂質(zhì)復(fù)合物所含有的全部脂質(zhì)為基準(zhǔn)，所述陽(yáng)離子性脂質(zhì)的含量為例如10～100摩爾％、例如20～90摩爾％、例如40～70摩爾％。陽(yáng)離子性脂質(zhì)可單獨(dú)使用1種，或者將2種以上混合使用。作為核酸，可列舉：sirna、mirna、shrna表達(dá)載體、反義寡核苷酸、核酶等。核酸也可為sirna、mirna。本實(shí)施方式的脂質(zhì)復(fù)合物含有例如0.01～50重量％、例如0.1～30重量％、例如1～10重量％的核酸。本實(shí)施方式的脂質(zhì)復(fù)合物，作為脂質(zhì)成分，含有(i)所述陽(yáng)離子性脂質(zhì)和(ii)選自由中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的族群中的至少一種脂質(zhì)。作為中性脂質(zhì)，可列舉：二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)、棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿(popc)、卵磷脂酰膽堿(epc)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(dmpc)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(dppc)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(dspc)、二花生酰磷脂酰膽堿(dapc)、二山崳酰磷脂酰膽堿(dbpc)、二(二十四酰)磷脂酰膽堿(dlpc)、二油酰磷脂酰膽堿(dopc)、鞘磷脂、神經(jīng)酰胺、二油酰磷脂酰甘油(dopg)、二棕櫚酰磷脂酰甘油(dppg)、磷脂酰乙醇胺(pope)、二油酰-磷脂酰乙醇胺4-(n-馬來(lái)酰亞胺甲基)-環(huán)己烷-1-羧酸酯(dope-mal)等。中性脂質(zhì)可單獨(dú)使用1種，或者將2種以上混合使用。本實(shí)施方式的脂質(zhì)復(fù)合物中，以脂質(zhì)復(fù)合物所含有的全部脂質(zhì)為基準(zhǔn)，也可含有例如0～50摩爾％、例如0～40摩爾％、例如0～30摩爾％的中性脂質(zhì)。作為聚乙二醇修飾脂質(zhì)，可列舉：peg2000-dmg(peg2000-二肉豆蔻基甘油、peg2000-dpg(peg2000-二棕櫚酰甘油)、peg2000-dsg(peg2000-二硬脂酰甘油)、peg5000-dmg(peg5000-二肉豆蔻基甘油)、peg5000-dpg(peg5000-二棕櫚酰甘油)、peg5000-dsg(peg5000-二硬脂酰甘油)、peg-cdma(n-[(甲氧基聚(乙二醇)2000)氨基甲?；鵠-1，2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-胺)、peg-c-domg(r-3-[(ω-甲氧基-聚(乙二醇)2000)氨基甲?；?]-1，2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-胺)、聚乙二醇(peg)-二酰甘油(dag)、peg-二烷氧基丙基(daa)、peg-磷脂質(zhì)、peg-神經(jīng)酰胺(cer)等。作為peg-二烷氧基丙基，可列舉：peg-二月桂氧基丙基、peg-二肉豆蔻氧基丙基、peg-二棕櫚氧基丙基、peg-二硬脂氧基丙基等。聚乙二醇修飾脂質(zhì)可單獨(dú)使用1種，或者將2種以上混合使用。本實(shí)施方式的脂質(zhì)復(fù)合物中，以脂質(zhì)復(fù)合物所含有的全部脂質(zhì)為基準(zhǔn)，也可含有例如0～30摩爾％、例如0～20摩爾％、例如0～10摩爾％的聚乙二醇修飾脂質(zhì)。作為固醇，可列舉：膽固醇、二氫膽固醇、羊毛固醇、β-谷固醇、菜油固醇、豆固醇、菜籽固醇、麥角固醇、巖藻固醇、3β-[n-(n′，n′-二甲基氨基乙基)氨基甲?；鵠膽固醇(dc-chol)等。固醇可單獨(dú)使用1種，或者將2種以上混合使用。本實(shí)施方式的脂質(zhì)復(fù)合物中，以脂質(zhì)復(fù)合物所含有的全部脂質(zhì)為基準(zhǔn)，也可含有例如0～90摩爾％、例如10～80摩爾％、例如20～50摩爾％的固醇。本實(shí)施方式的脂質(zhì)復(fù)合物中的脂質(zhì)成分的組合沒(méi)有特別限定，例如可列舉：所述的陽(yáng)離子性脂質(zhì)、中性脂質(zhì)及固醇的組合，所述的陽(yáng)離子性脂質(zhì)、中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇的組合等。<組合物>在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種組合物，其含有(i)所述陽(yáng)離子性脂質(zhì)、(ii)選自由中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的族群中的至少一種脂質(zhì)及(iii)核酸。本實(shí)施方式的組合物能夠?qū)崿F(xiàn)將核酸高效率地釋放到細(xì)胞質(zhì)中。本實(shí)施方式的組合物也可為包含所述脂質(zhì)復(fù)合物、藥學(xué)上所容許的介質(zhì)、及根據(jù)需要的其他添加劑的組合物。關(guān)于藥學(xué)上所容許的介質(zhì)、其他添加劑，在下文進(jìn)行說(shuō)明。本實(shí)施方式的組合物中，以組合物所含有的全部脂質(zhì)為基準(zhǔn)，含有例如10～100摩爾％、例如20～90摩爾％、例如40～70摩爾％的所述陽(yáng)離子性脂質(zhì)。陽(yáng)離子性脂質(zhì)可單獨(dú)使用1種，或者將2種以上混合使用。作為核酸，可列舉與所述相同的核酸。本實(shí)施方式的組合物含有例如0.01～50重量％、例如0.1～30重量％、例如1～10重量％的核酸。本實(shí)施方式的組合物含有(i)所述陽(yáng)離子性脂質(zhì)和(ii)選自由中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的族群中的至少一種脂質(zhì)作為脂質(zhì)成分。作為中性脂質(zhì)，可列舉與所述相同的中性脂質(zhì)。本實(shí)施方式的組合物中，以組合物所含有的全部脂質(zhì)為基準(zhǔn)，也可含有例如0～50摩爾％、例如0～40摩爾％、例如0～30摩爾％的中性脂質(zhì)。作為聚乙二醇修飾脂質(zhì)，可列舉與所述相同的聚乙二醇修飾脂質(zhì)。本實(shí)施方式的組合物中，以組合物所含有的全部脂質(zhì)為基準(zhǔn)，也可含有例如0～30摩爾％、例如0～20摩爾％、例如0～10摩爾％的聚乙二醇修飾脂質(zhì)。作為固醇，可列舉與所述相同的固醇。本實(shí)施方式的組合物中，以組合物所含有的全部脂質(zhì)為基準(zhǔn)，也可含有例如0～90摩爾％、例如10～80摩爾％、例如20～50摩爾％的固醇。本實(shí)施方式的組合物中的脂質(zhì)成分的組合沒(méi)有特別限定，例如可列舉：所述的陽(yáng)離子性脂質(zhì)、中性脂質(zhì)及固醇的組合，所述的陽(yáng)離子性脂質(zhì)、中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇的組合等。本實(shí)施方式的組合物中，除了所述成分以外，作為其他添加劑，也可含有：蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、乳糖等糖；谷氨酰胺、谷氨酸、谷氨酸鈉、組氨酸等氨基酸；檸檬酸、磷酸、醋酸、乳酸、碳酸、酒石酸等酸的鹽等。本實(shí)施方式的組合物也可制劑化為醫(yī)藥組合物。作為醫(yī)藥組合物的劑型，例如可列舉注射劑。本實(shí)施方式的組合物例如可為通過(guò)冷凍干燥等而去除了溶劑的粉末狀態(tài)，也可為液體狀態(tài)。在組合物為粉末狀態(tài)的情況下，可在使用前懸濁或溶解到藥學(xué)上所容許的介質(zhì)中制成注射劑而使用。在組合物為液體狀態(tài)的情況下，可直接使用或者懸濁或溶解到藥學(xué)上所容許的介質(zhì)中制成注射劑而使用。作為藥學(xué)上所容許的介質(zhì)，可列舉：無(wú)菌水；生理鹽水；含有葡萄糖、d-山梨糖醇、d-甘露糖、d-甘露糖醇、氯化鈉等輔助藥的等滲液等。本實(shí)施方式的組合物還可含有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等醇等溶解輔助劑，穩(wěn)定劑、抗氧化劑、防腐劑等添加劑。對(duì)患者投予組合物例如可通過(guò)動(dòng)脈內(nèi)注射、靜脈內(nèi)注射、皮下注射等而進(jìn)行。組合物的投予量根據(jù)投予對(duì)象、對(duì)象臟器、癥狀、投予方法而異。本實(shí)施方式的組合物是形成由含有陽(yáng)離子性脂質(zhì)的脂質(zhì)所構(gòu)成的微粒子內(nèi)封入了核酸的脂質(zhì)復(fù)合物。脂質(zhì)復(fù)合物的“平均粒徑”可通過(guò)體積平均、數(shù)量平均、z-平均的任一種方法算出。在本實(shí)施方式的組合物中，脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑(z-平均)可為例如10～1000nm、例如30～500nm、例如30～200nm。關(guān)于本實(shí)施方式的組合物，就抑制非特異性吸附或免疫反應(yīng)的觀點(diǎn)而言，例如優(yōu)選在血液中等ph值約7.4的環(huán)境下表面幾乎無(wú)電荷。另外，就因內(nèi)吞作用而被吞入到細(xì)胞內(nèi)時(shí)提高內(nèi)吞體膜的融合效率的觀點(diǎn)而言，優(yōu)選在低ph值環(huán)境下帶正電。<組合物的制造方法>在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種組合物的制造方法，其包括步驟(a)及步驟(b)，步驟(a)是將含有(i)所述陽(yáng)離子性脂質(zhì)和(ii)選自由中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的族群中的至少一種脂質(zhì)的含極性有機(jī)溶劑的水溶液、與含有(iii)核酸的水溶液加以混合而獲得混合液，步驟(b)是使混合液中的極性有機(jī)溶劑的含量減少。根據(jù)本實(shí)施方式的制造方法，可制造能夠?qū)⒑怂岣咝实蒯尫诺郊?xì)胞質(zhì)中的組合物。通過(guò)水溶性核酸和所述陽(yáng)離子性脂質(zhì)的靜電相互作用、及脂質(zhì)間的疏水相互作用，可形成由脂質(zhì)構(gòu)成的微粒子內(nèi)封入了核酸的脂質(zhì)復(fù)合物。例如，通過(guò)改變含有(i)所述陽(yáng)離子性脂質(zhì)和(ii)選自由中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的族群中的至少一種脂質(zhì)的脂質(zhì)成分在含極性有機(jī)溶劑的水溶液中的溶解度，可形成脂質(zhì)復(fù)合物。作為極性有機(jī)溶劑，可列舉乙醇等醇。首先，在步驟(a)中，將溶解了(i)所述陽(yáng)離子性脂質(zhì)和(ii)選自由中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的族群中的至少一種脂質(zhì)的含極性有機(jī)溶劑的水溶液、與含有(iii)核酸的水溶液加以混合而獲得混合液。含極性有機(jī)溶劑的水溶液中的極性有機(jī)溶劑的濃度只要在與核酸的水溶液混合后仍然滿足溶解脂質(zhì)分子的條件，則沒(méi)有特別限定。接著，在步驟(b)中，通過(guò)向所述混合液中添加水等，而使極性有機(jī)溶劑的含量減少。由此，可形成脂質(zhì)復(fù)合物。為了高效率地形成脂質(zhì)復(fù)合物，優(yōu)選使極性有機(jī)溶劑的含量急劇降低。根據(jù)本實(shí)施方式的組合物的制造方法，可獲得核酸被高效率地封入到微粒子內(nèi)部的脂質(zhì)復(fù)合物。在封入到組合物中的核酸為核酸醫(yī)藥的情況下，可將組合物作為醫(yī)藥組合物而使用。實(shí)施例以下，列舉實(shí)施例更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限定于這些實(shí)施例。另外，實(shí)施例中的化合物名是使用軟件(商品名“chemdrawultraver.12.0”、珀金埃爾默(perkinelmer)公司制造)進(jìn)行命名。實(shí)施例中所使用的簡(jiǎn)稱是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的慣用簡(jiǎn)稱。以下披露若干簡(jiǎn)稱。dmf：n，n-二甲基甲酰胺tfa：三氟醋酸wsc：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二酰亞胺鹽酸鹽dmap：n，n-二甲基-4-氨基吡啶thf：四氫呋喃lc-ms：液相色譜法-質(zhì)譜聯(lián)用(liquidchromatography-massspectrometry)esi-ms：電噴霧電離質(zhì)譜法(electrosprayionizationmassspectrometry)質(zhì)子核磁共振波譜的化學(xué)位移是以相對(duì)于四甲基硅烷的δ單位(ppm)進(jìn)行記錄。圖案的簡(jiǎn)稱如下。s：?jiǎn)畏?、d：二重峰、t：三重峰、q：四重峰、dd：雙二重峰、ddd：雙雙二重峰、dt：雙三重峰、tt：三重三重峰、m：多重峰。<陽(yáng)離子性脂質(zhì)的合成>[實(shí)施例1](1-甲基哌啶-4-羧酸1-((2-己基環(huán)丙基)甲氧基)-1-氧代十九烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-102”)的合成)以下披露ys-102的合成流程。[化23](第1步驟：水解)將在乙醇(868ml)中溶解有癸二酸二甲酯(200g、868.4mmol)的溶液冷卻到0℃。向該溶液中滴加氫氧化鉀(48.73g、868.4mmol)的乙醇(300ml)溶液，滴加后在0℃下攪拌12小時(shí)。反應(yīng)完畢后，添加醋酸乙酯和水，通過(guò)將未反應(yīng)物萃取到有機(jī)層中而去除。利用鹽酸使水層成為酸性，添加醋酸乙酯而萃取目標(biāo)物。利用水、食鹽水將有機(jī)層洗凈，并進(jìn)行濃縮。對(duì)于第1步驟品單酯體(150.3g、652.6mmol、75％)，不進(jìn)行純化而用于下一步驟。(第2步驟：酰氯化)向第1步驟品單酯體(50.0g、231.2mmol)與催化劑量的dmf(23ml)的懸濁液中滴加亞硫酰氯(41.3g、346.8mmol)。反應(yīng)完畢后，在減壓下將亞硫酰氯蒸餾去除后，進(jìn)行蒸餾純化，而獲得第2步驟品(25.8g、109.9mmol、48％)。(第3步驟：與格氏試劑的反應(yīng))使氯化鋅(2.7g、20.1mmol)溶解到thf(61ml)中，并冷卻到-78℃。向該溶液中在氮?dú)猸h(huán)境下且在-78℃下滴加1m的溴化壬基鎂(40.2ml、40.2mmol)。滴加后，升溫到0℃，在0℃下攪拌30分鐘后，投入四(三苯基膦)鈀(0.58mg、0.5mmol)，接著滴加第2步驟品(5.0g、20.1mmol)。在0℃下進(jìn)一步攪拌1小時(shí)后，加入1m鹽酸水溶液進(jìn)行淬滅。從反應(yīng)溶液中過(guò)濾分離析出物，利用醋酸乙酯對(duì)濾液進(jìn)行萃取，利用水、食鹽水將有機(jī)層洗凈后，利用無(wú)水硫酸鎂進(jìn)行干燥。通過(guò)過(guò)濾而去除干燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得第3步驟品(5.0g、14.7mmol、73％)。(第4步驟：酯交換)一邊對(duì)第3步驟品(2.0g、5.9mmol)、2-壬烯醇(4.2g、29.4mmol)、四丙醇鈦(0.2g、0.6mmol)的混合液進(jìn)行攪拌，一邊將外浴升溫到110℃。一邊去除所產(chǎn)生的餾出液一邊繼續(xù)攪拌，將不再見(jiàn)到餾出的時(shí)刻設(shè)為反應(yīng)終點(diǎn)，在冷卻后添加水進(jìn)行淬滅。利用醋酸乙酯對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行萃取，并利用水、食鹽水進(jìn)行洗凈后，利用無(wú)水硫酸鎂進(jìn)行干燥。通過(guò)過(guò)濾而去除干燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得第4步驟品(2.6g、5.8mmol、99％)。(第5步驟：環(huán)丙烷化)使二乙基鋅(8.3ml、8.3mmol)溶解到二氯甲烷(15ml)中，并冷卻到0℃。向其中滴加三氟甲磺酸(0.9g、8.3mmol)，接著滴加二碘甲烷(2.2g、8.3mmol)后，在0℃下攪拌1小時(shí)。向該溶液中滴加第4步驟品(1.2g、2.8mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液，并升溫到室溫。通過(guò)tlc(thinlayerchromatography，薄層色譜法)確認(rèn)反應(yīng)，將原料消失設(shè)為終點(diǎn)，利用水進(jìn)行淬滅。將所析出的固體過(guò)濾分離，利用醋酸乙酯對(duì)濾液進(jìn)行萃取，利用水、食鹽水進(jìn)行洗凈后，利用無(wú)水硫酸鎂進(jìn)行干燥。通過(guò)過(guò)濾而去除干燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得第4步驟品(1.2g、2.7mmol、99％)。(第6步驟：還原)向在乙醇(22ml)中溶解了第5步驟品(1.0g、2.2mmol)的溶液中，添加硼氫化鈉(0.08g、2.2mmol)使之反應(yīng)10分鐘。反應(yīng)完畢后，利用1n鹽酸進(jìn)行淬滅。利用醋酸乙酯進(jìn)行萃取，并利用水、食鹽水進(jìn)行洗凈后，將有機(jī)層在減壓下加以濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得第6步驟品(0.3g、0.7mmol、30％)。(第7步驟：縮合)向在二氯甲烷(7ml)中溶解了第6步驟品(0.8g、1.8mmol)的溶液中，添加wsc(0.7g、3.7mmol)、二甲基氨基吡啶(0.04g、0.4mmol)、1-甲基哌啶-4-羧酸(0.5g、3.7mmol)。在室溫下攪拌到次日后，添加水，使有機(jī)層分液。將有機(jī)層利用水洗凈5次后，利用1n氫氧化鈉水溶液洗凈1次，利用無(wú)水硫酸鎂進(jìn)行干燥。通過(guò)過(guò)濾而去除干燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得下述式(15)所表示的ys-102(0.12g、0.2mmol、12％)。[化24]在以下條件下利用hplc-lc/ms(highperformanceliquidchromatography-liquidchromatography/massspectrometry，高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用)對(duì)所獲得的化合物進(jìn)行確認(rèn)。色譜柱：ymc-triartc18、150-4.6mm、5μm、洗提液：meoh(均勻溶劑)、流速：1.0ml/分鐘、運(yùn)行時(shí)間：15分鐘、柱溫：45℃、檢測(cè)：uv(215nm)、電噴霧電離質(zhì)譜(esi-ms)。hplc-lc/ms、rt6.24分鐘、esi-ms(m+h)計(jì)算值577.5、測(cè)量值578.6、1hnmr(400mhz、cdcl3)δ4.87(1h，q)、2.82(2h，d)、2.27(4h，m)、2.04(1h，m)、1.91(1h，m)、1.82(2h，m)、1.61(2h，m)、1.50(4h，m)、1.36(5h，m)、1.25(24h，m)、0.88(6h，m)[實(shí)施例2](1-甲基哌啶-4-羧酸(z)-1-(壬-2-烯-1-基氧基)-1-氧代十九烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-101”)的合成)除了不進(jìn)行第5步驟的方面以外，和實(shí)施例1同樣地合成下述式(16)所表示的ys-101。[化25]hplc-lc/ms、rt5.51分鐘、esi-ms(m+h)計(jì)算值563.5、測(cè)量值564.5、1hnmr(400mhz、cdcl3)δ5.32(2h，m)、4.87(1h，q)、4.11(1h，dd)、4.05(2h，t)、2.82(2h，d)、2.27(7h，m)、2.04(8h，m)、1.89(2h，m)、1.79(2h，m)、1.61(4h，m)、1.49(4h，m)、1.36(5h，m)、1.25(30h，m)、0.95(3h，m)、0.88(3h，m)[實(shí)施例3](1-甲基哌啶-4-羧酸1-氧代-1-(十一烷-5-基氧基)十九烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-103”)的合成)在第4步驟中，使用2-丁基辛烷-1-醇代替2-壬烯醇進(jìn)行反應(yīng)，且不進(jìn)行第5步驟，除此以外，和實(shí)施例1同樣地合成下述式(2)所表示的ys-103。[化26]hplc-lc/ms、rt7.52分鐘、esi-ms(m+h)計(jì)算值593.5、測(cè)量值594.6、1hnmr(400mhz、cdcl3)δ4.86(1h，q)、4.06(2h，t)、2.82(2h，d)、2.27(7h，m)、1.99(2h，m)、1.88(2h，m)、1.79(2h，m)、1.60(4h，m)、1.49(4h，m)、1.38(7h，m)、1.25(30h，m)、0.97(3h，m)、0.88(3h，m)、0.64(2h，m)、0.59(1h，m)、-0.33(1h，dd)[實(shí)施例4](1-甲基哌啶-4-羧酸1-((2-丁基辛基)氧基)-1-氧代十九烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-119”)的合成)以下披露ys-119的合成流程。[化27](第1步驟到第3步驟)第1步驟到第3步驟是和所述ys-102的合成同樣地進(jìn)行。(第4步驟：酯交換)一邊對(duì)第3步驟品(4.1g、12.0mmol)、2-丁基辛烷-1-醇(6.73g、36.12mmol)、四丙醇鈦(0.34g、1.2mmol)的混合液進(jìn)行攪拌，一邊將外浴升溫到110℃。一邊去除所產(chǎn)生的餾出液一邊繼續(xù)攪拌，將不再見(jiàn)到餾出的時(shí)刻設(shè)為反應(yīng)終點(diǎn)，在冷卻后添加水進(jìn)行淬滅。利用醋酸乙酯對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行萃取，利用水、食鹽水進(jìn)行洗凈后，利用無(wú)水硫酸鎂進(jìn)行干燥。通過(guò)過(guò)濾而去除干燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得第4步驟品(4.5g、9.4mmol、78％)。(第5步驟：還原)向在thf(18.7ml)、甲醇(18.7ml)中溶解了第4步驟品(4.5g、9.4mmol)的溶液中，添加硼氫化鈉(1.8g、46.8mmol)，使之反應(yīng)一小時(shí)。反應(yīng)完畢后，利用1n鹽酸進(jìn)行淬滅。利用醋酸乙酯進(jìn)行萃取，利用水、食鹽水進(jìn)行洗凈后，將有機(jī)層在減壓下加以濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得第5步驟品(3.1g、6.42mmol、69％)。(第6步驟：縮合)向在二氯甲烷(8.28ml)中溶解了第5步驟品(2.0g、4.14mmol)的溶液中，添加wsc(1.59g、8.28mmol)、二甲基氨基吡啶(0.04g、0.4mmol)、1-甲基哌啶-4-羧酸(1.19g、8.28mmol)。在室溫下攪拌到次日后，添加水，使有機(jī)層分液。將有機(jī)層利用水洗凈5次后，利用1n氫氧化鈉水溶液洗凈1次，利用無(wú)水硫酸鎂進(jìn)行干燥。通過(guò)過(guò)濾而去除干燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得式(1)所表示的ys-119(1.9g、3.1mmol、74％)。[化28]hplc-lc/ms、rt8.01分鐘、esi-ms(m+h)計(jì)算值607.6、測(cè)量值608.6、1hnmr(400mhz、cdcl3)δ4.87(1h，q)、3.96(2h，d)、2.81(2h，d)、2.27(6h，m)、1.98(2h，m)、1.91(2h，m)、1.82(2h，m)、1.61(4h，m)、1.49(4h，m)、1.20(46h，m)、0.86(9h，m)[實(shí)施例5](1-甲基哌啶4-羧酸1-氧代-1-(十一烷-5-基氧基)十五烷-6-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-111”)的合成)在第1步驟中，使用己二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進(jìn)行反應(yīng)，在第4步驟中，使用十一烷-5-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例4同樣地合成下述式(17)所表示的ys-111。[化29]hplc-lc/ms、rt5.35分鐘、esi-ms(m+h)計(jì)算值537.5、測(cè)量值538.5、1hnmr(400mhz、cdcl3)δ4.87(2h，q)、2.81(2h，d)、2.27(6h，m)、1.98(2h，m)、1.91(2h，m)、1.82(2h，m)、1.62-1.50(10h，m)、1.24(28h，m)、0.87(9h，m)[實(shí)施例6](1-甲基哌啶4-羧酸1-氧代-1-(十一烷-5-基氧基)十七烷-8-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-112”)的合成)在第1步驟中，使用辛二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進(jìn)行反應(yīng)，在第4步驟中，使用十一烷-5-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例4同樣地合成下述式(4)所表示的ys-112。[化30]hplc-lc/ms、rt6.05分鐘、esi-ms(m+h)計(jì)算值565.5、測(cè)量值566.5、1hnmr(400mhz、cdcl3)δ4.87(2h，q)、2.81(2h，d)、2.27(6h，m)、1.98(2h，m)、1.91(2h，m)、1.82(2h，m)、1.62-1.50(10h，m)、1.24(32h，m)、0.87(9h，m)[實(shí)施例7](1-甲基哌啶4-羧酸21-氧代-21-(十一烷-5-基氧基)二十一烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-113”)的合成)在第1步驟中，使用十二烷二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進(jìn)行反應(yīng)，在第4步驟中，使用十一烷-5-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例4同樣地合成下述式(5)所表示的ys-113。[化31]hplc-lc/ms、rt8.95分鐘、esi-ms(m+h)計(jì)算值621.6、測(cè)量值622.6、1hnmr(400mhz、cdcl3)δ4.87(2h，q)、2.81(2h，d)、2.27(6h，m)、1.98(2h，m)、1.91(2h，m)、1.82(2h，m)、1.62-1.50(10h，m)、1.24(40h，m)、0.87(9h，m)[實(shí)施例8](1-甲基哌啶4-羧酸23-氧代-23-(十一烷-5-基氧基)二十三烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-114”)的合成)在第1步驟中，使用十四烷二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進(jìn)行反應(yīng)，在第4步驟中，使用十一烷-5-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例4同樣地合成下述式(18)所表示的ys-114。[化32]hplc-lc/ms、rt11.1分鐘、esi-ms(m+h)計(jì)算值649.6、測(cè)量值650.6、1hnmr(400mhz、cdcl3)δ4.87(2h，q)、2.81(2h，d)、2.27(6h，m)、1.98(2h，m)、1.91(2h，m)、1.82(2h，m)、1.62-1.50(10h，m)、1.24(44h，m)、0.87(9h，m)[實(shí)施例9](1-甲基哌啶-4-羧酸1-((2-丁基辛基)氧基)-1-氧代十七烷-8-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-115”)的合成)在第1步驟中，使用辛二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例4同樣地合成下述式(19)所表示的ys-115。[化33]hplc-lc/ms、rt6.72分鐘、esi-ms(m+h)計(jì)算值579.5、測(cè)量值580.7、1hnmr(400mhz、cdcl3)δ4.87(2h，q)、3.96(2h，d)、2.81(2h，d)、2.27(6h，m)、1.98(2h，m)、1.91(2h，m)、1.82(2h，m)、1.62-1.50(10h，m)、1.24(32h，m)、0.87(9h，m)[實(shí)施例10](1-甲基哌啶-4-羧酸21-((2-丁基辛基)氧基)-21-氧代二十一烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-116”)的合成)在第1步驟中，使用辛二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進(jìn)行進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例4同樣地合成下述式(20)所表示的ys-116。[化34]hplc-lc/ms、rt10.0分鐘、esi-ms(m+h)計(jì)算值635.6、測(cè)量值636.7、1hnmr(400mhz、cdcl3)δ4.87(2h，q)、3.96(2h，d)、2.81(2h，d)、2.27(6h，m)、1.98(2h，m)、1.91(2h，m)、1.82(2h，m)、1.62-1.50(10h，m)、1.24(40h，m)、0.87(9h，m)[實(shí)施例11](1-甲基哌啶-4-羧酸1-(辛烷-3-基氧基)-1-氧代十七烷-8-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-117”)的合成)在第1步驟中，使用辛二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進(jìn)行反應(yīng)，在第4步驟中，使用辛烷-3-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例4同樣地合成下述式(21)所表示的ys-117。[化35]hplc-lc/ms、rt4.71分鐘、esi-ms(m+h)計(jì)算值523.5、測(cè)量值524.6、1hnmr(400mhz、cdcl3)δ4.87(1h，q)、4.80(1h，q)、2.82(2h，d)、2.27(6h，m)、1.98(2h，m)、1.91(2h，m)、1.82(2h，m)、1.62-1.29(10h，m)、1.24(26h，m)、0.87(9h，m)[實(shí)施例12](1-甲基哌啶-4-羧酸1-((s)辛烷-3-基氧基)-1-氧代十七烷-8-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-117s”)的合成)在第1步驟中，使用辛二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進(jìn)行反應(yīng)，在第4步驟中，使用(s)-辛烷-3-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例4同樣地合成下述式(22)所表示的ys-117s。[化36]hplc-lc/ms、rt4.70分鐘、esi-ms(m+h)計(jì)算值523.5、測(cè)量值524.6、1hnmr(400mhz、cdcl3)δ4.87(1h，q)、4.80(1h，q)、2.82(2h，d)、2.27(6h，m)、1.98(2h，m)、1.91(2h，m)、1.82(2h，m)、1.62-1.29(10h，m)、1.24(26h，m)、0.86(9h，m)[實(shí)施例13](1-甲基哌啶-4-羧酸21-(辛烷-3-基氧基)-21-氧代二十一烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-118”)的合成)在第1步驟中，使用十二烷二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進(jìn)行反應(yīng)，在第4步驟中，使用辛烷-3-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例4同樣地合成下述式(3)所表示的ys-118。[化37]hplc-lc/ms、rt6.55分鐘、esi-ms(m+h)計(jì)算值579.5、測(cè)量值580.6、1hnmr(400mhz、cdcl3)δ4.87(1h，q)、4.80(1h，q)、2.82(2h，d)、2.27(6h，m)、1.98(2h，m)、1.91(2h，m)、1.82(2h，m)、1.62-1.29(10h，m)、1.24(30h，m)、0.86(9h，m)[實(shí)施例14](1-甲基哌啶-4-羧酸21-((s)-辛烷-3-基氧基)-21-氧代二十一烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-118s”)的合成)在第1步驟中，使用十二烷二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進(jìn)行反應(yīng)，在第4步驟中，使用(s)-辛烷-3-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例4同樣地合成下述式(23)所表示的ys-118s。[化38]hplc-lc/ms、rt6.54分鐘、esi-ms(m+h)計(jì)算值579.5、測(cè)量值580.6、1hnmr(400mhz、cdcl3)δ4.87(1h，q)、4.80(1h，q)、2.82(2h，d)、2.27(6h，m)、1.98(2h，m)、1.91(2h，m)、1.82(2h，m)、1.62-1.29(10h，m)、1.24(30h，m)、0.86(9h，m)[實(shí)施例15](1-甲基哌啶-4-羧酸1-((2-丁基辛基)氧基)-1-氧代二十烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-120”)的合成)在第3步驟中，使用溴化癸基鎂代替溴化壬基鎂進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例4同樣地合成下述式(6)所表示的ys-120。[化39]hplc-lc/ms、rt8.70分鐘、esi-ms(m+h)計(jì)算值621.6、測(cè)量值622.7、1hnmr(400mhz，cdcl3)δ4.86(1h，ddd)、3.96(2h，d)、2.81(2h，d)、2.27(6h，m)、2.03(2h，m)、1.98(1h，d)、1.90(1h，m)、1.78(4h，m)、1.61(4h，m)、1.49(4h，m)、1.27-1.21(41h，m)、0.87(9h，m)如下所述，如果利用所述式(6)所表示的化合物形成脂質(zhì)復(fù)合物，則在保管一定時(shí)間的情況下的脂質(zhì)復(fù)合物的粒徑增大得到抑制，而穩(wěn)定性高。[實(shí)施例16](1-甲基哌啶-4-羧酸1-((2-丁基辛基)氧基)-1-氧代二十烷-10-基酯(“ys-120”)的合成)以下披露ys-120的另一合成流程。[化40](第1步驟到第3步驟)第1步驟到第3步驟是和所述ys-102的合成同樣地進(jìn)行。(第4步驟：酯交換)一邊對(duì)第3步驟品(150.0g、440.5mmol)、芐醇(142.9g、1321.4mmol)、四丙醇鈦(12.5g、44.5mmol)的混合液進(jìn)行攪拌，一邊將外浴升溫到130℃。一邊去除所產(chǎn)生的餾出液一邊繼續(xù)攪拌，將不再見(jiàn)到餾出的時(shí)刻設(shè)為反應(yīng)終點(diǎn)，在冷卻后添加水進(jìn)行淬滅。利用醋酸乙酯對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行萃取，利用水、食鹽水進(jìn)行洗凈后，利用無(wú)水硫酸鎂進(jìn)行干燥。通過(guò)過(guò)濾而去除干燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得第4步驟品(146.2g、350.9mmol)。(第5步驟：還原)向在thf(480.0ml)、甲醇(480.0ml)中溶解了第4步驟品(100.0g、240.0mmol)的溶液中，添加硼氫化鈉(10.9g、288.0mmol)，使之反應(yīng)10分鐘。反應(yīng)完畢后，利用1n鹽酸進(jìn)行淬滅。利用醋酸乙酯進(jìn)行萃取，利用水、食鹽水進(jìn)行洗凈后，將有機(jī)層在減壓下加以濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得第5步驟品(70.0g、167.2mmol)。(第6步驟：縮合)向在thf(480.0ml)中溶解了第5步驟品(50.0g、119.4mmol)的溶液中，添加wsc(45.8g、238.9mmol)、二甲基氨基吡啶(2.92g、23.9mmol)、1-甲基哌啶-4-羧酸(34.2g、238.9mmol)。在室溫下攪拌到次日后，添加水，使有機(jī)層分液。將有機(jī)層利用水洗凈5次后，利用1n氫氧化鈉水溶液洗凈1次，利用無(wú)水硫酸鎂進(jìn)行干燥。通過(guò)過(guò)濾而去除干燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得第6步驟品(37.2g、68.4mmol)。(第7步驟：接觸還原)使第6步驟品(37.2g、68.4mmol)、鈀/碳(4.9ml)懸濁在醋酸乙酯(136.8ml)中，并在氫氣環(huán)境下攪拌一晚。將反應(yīng)液過(guò)濾分離，去除鈀/碳進(jìn)行濃縮。通過(guò)硅膠色譜法進(jìn)行純化，而獲得第7步驟品(26.8g、59.1mmol)。(第8步驟：縮合)向在二氯甲烷(220.0ml)中溶解了第7步驟品(20.0g、44.1mmol)的溶液中，添加wsc(8.9g、46.3mmol)、二甲基氨基吡啶(1.08g、0.4mmol)、2-丁基辛烷-1-醇(16.4g、88.2mmol)。在室溫下攪拌到次日后，添加水，使有機(jī)層分液。將有機(jī)層利用水洗凈5次后，利用無(wú)水硫酸鎂進(jìn)行干燥。通過(guò)過(guò)濾而去除干燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得式(6)所表示的ys-120(22.0g、35.4mmol)。[實(shí)施例17](1-甲基哌啶-4-羧酸1-((2z，5z)-癸-2，5-二烯-1-基氧基)-1-氧代二十烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-121”)的合成)在第8步驟中，使用(2z，5z)-癸-2，5-二烯-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例16同樣地合成下述式(24)所表示的ys-121。[化41]esi-ms(m+h)計(jì)算值589.5、測(cè)量值590.7、1hnmr(400mhz，cdcl3)δ5.60(1h，m)、5.36(1h，m)、4.87(1h，tt)、4.64(1h，d)、2.86(2h，m)、2.36(3h，s)2.32(2h，t)、2.22(1h，m)、2.02(2h，m)、1.97(2h，m)、1.61(2h，m)、1.50(3h，m)、1.27(40h，m)、0.88(6h，m)[實(shí)施例18](1-甲基哌啶-4-羧酸(z)-1-((2-丁基壬-3-烯-1-基)氧基)-1-氧代二十烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-122”)的合成)在第8步驟中，使用(z)-2-丁基壬-3-烯-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例16同樣地合成下述式(25)所表示的ys-122。[化42]esi-ms(m+h)計(jì)算值633.6、測(cè)量值634.7、1hnmr(400mhz，cdcl3)δ5.60(1h，m)、5.36(1h，m)、4.87(1h，tt)、4.64(1h，d)、2.86(2h，m)、2.36(3h，s)、2.32(2h，t)、2.22(1h，m)、2.02(2h，m)、1.97(2h，m)、1.61(2h，m)、1.50(3h，m)、1.27(48h，m)、0.88(6h，m)如下所述，如果利用所述式(25)所表示的化合物形成脂質(zhì)復(fù)合物，則在保管一定時(shí)間的情況下的脂質(zhì)復(fù)合物的粒徑增大得到抑制，而穩(wěn)定性高。[實(shí)施例19](1-甲基哌啶-4-羧酸(z)-1-氧代-1-((5-丙基壬-2-烯-1-基)氧基)二十烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-123”)的合成)在第8步驟中，使用(z)-5-丙基壬-2-烯-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例16同樣地合成下述式(26)所表示的ys-123。[化43]esi-ms(m+h)計(jì)算值619.6、測(cè)量值620.7、1hnmr(400mhz，cdcl3)δ5.60(2h，m)、4.87(1h，tt)、4.61(2h，d)、2.93(2h，d)、2.42(3h，s)、2.31(2h，t)、2.29(2h，t)、2.05(4h，t)、1.93(2h，m)、1.61(2h，m)、1.50(4h，m)、1.27(43h，m)、0.88(6h，m)如下所述，如果利用所述式(26)所表示的化合物形成脂質(zhì)復(fù)合物，則在保管一定時(shí)間的情況下的脂質(zhì)復(fù)合物的粒徑增大得到抑制，而穩(wěn)定性高。[實(shí)施例20](1-甲基哌啶-4-羧酸1-氧代-1-((3-戊基辛基)氧基)二十烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-124”)的合成)在第8步驟中，使用3-戊基辛烷-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例16同樣地合成下述式(27)所表示的ys-124。[化44]esi-ms(m+h)計(jì)算值635.6、測(cè)量值636.7、1hnmr(400mhz，cdcl3)δ4.87(1h，tt)、4.06(2h，m)、2.81(2h，d)、2.27(6h，m)、2.02(2h，m)、1.97(2h，m)、1.77(4h，m)、1.61(2h，m)、1.50(3h，m)、1.43(1h，m)、1.27(43h，m)、0.88(9h，m)如下所述，如果利用所述式(27)所表示的化合物形成脂質(zhì)復(fù)合物，則在保管一定時(shí)間的情況下的脂質(zhì)復(fù)合物的粒徑增大得到抑制，而穩(wěn)定性高。[實(shí)施例21](1-甲基哌啶-4-羧酸1-((2，4-二丙基庚基)氧基)-1-氧代二十烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-125”)的合成)在第8步驟中，使用2，4-二丙基庚烷-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例16同樣地合成下述式(28)所表示的ys-125。[化45]esi-ms(m+h)計(jì)算值635.6、測(cè)量值636.7、1hnmr(400mhz，cdcl3)δ4.87(1h，tt)、3.95(1h，d)、3.55(2h，t)、2.96(2h，m)、2.45(3h，s)、2.32(2h，t)、2.22(1h，m)、2.02(2h，m)、1.97(2h，m)、1.61(2h，m)、1.50(3h，m)、1.27(49h，m)、0.88(12h，m)如下所述，如果利用所述式(28)所表示的化合物形成脂質(zhì)復(fù)合物，則在保管一定時(shí)間的情況下的脂質(zhì)復(fù)合物的粒徑增大得到抑制，而穩(wěn)定性高。[實(shí)施例22](1-甲基哌啶-4-羧酸1-((3，4-二丙基庚基)氧基)-1-氧代二十烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-126”)的合成)在第8步驟中，使用3，4-二丙基庚烷-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例16同樣地合成下述式(29)所表示的ys-126。[化46]esi-ms(m+h)計(jì)算值635.6、測(cè)量值636.7、1hnmr(400mhz，cdcl3)δ4.87(1h，tt)、4.06(2h，m)、3.00(2h，m)、2.45(5h，m)、2.27(2h，t)、2.02(2h，m)、1.97(2h，m)、1.61(2h，m)、1.50(3h，m)、1.43(2h，m)、1.27(42h，m)、0.88(12h，m)如下所述，如果利用所述式(29)所表示的化合物形成脂質(zhì)復(fù)合物，則在保管一定時(shí)間的情況下的脂質(zhì)復(fù)合物的粒徑增大得到抑制，而穩(wěn)定性高。[實(shí)施例23](1-甲基哌啶-4-羧酸1-(4-(己基雙硫基)-3-((己基雙硫基)甲基)丁氧基)-1-氧代二十烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-127”)的合成)在第8步驟中，使用4-(己基雙硫基)-3-((己基雙硫基)甲基)丁烷-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例16同樣地合成下述式(30)所表示的ys-127。[化47]esi-ms(m+h)計(jì)算值819.5、測(cè)量值820.6、1hnmr(400mhz，cdcl3)δ4.86(1h，tt)、4.13(2h，t)、2.81(6h，d)、2.67(2h，t)、2.29(3h，t)、2.27(3h，s)、1.99(2h，m)、1.90(2h，dd)、1.79(2h，dt)、1.68(12h，m)、1.50(6h，m)、1.42(6h，m)、1.24(29h，m)、0.88(9h，m)[實(shí)施例24](1-甲基哌啶-4-羧酸1-((6-(丁基雙硫基)-3-(3-(丁基雙硫基)丙基)己基)氧基)-1-氧代二十烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-128”)的合成)在第8步驟中，使用6-(丁基雙硫基)-3-(3-(丁基雙硫基)丙基)己烷-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例16同樣地合成下述式(31)所表示的ys-128。[化48]esi-ms(m+h)計(jì)算值819.5、測(cè)量值821.0、1hnmr(400mhz，cdcl3)δ4.86(1h，tt)、4.08(2h，t)、2.81(2h，d)、2.67(8h，dd)、2.29(3h，t)、2.27(3h，s)、1.99(2h，m)、1.90(2h，dd)、1.79(2h，dt)、1.68(12h，m)、1.50(6h，m)、1.42(6h，m)、1.24(37h，m)、0.92-0.88(9h，m)[實(shí)施例25](1-甲基吡咯烷-3-羧酸1-((2-丁基辛基)氧基)-1-氧代二十烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-129”)的合成)在第6步驟中，使用1-甲基吡咯烷-3-羧酸代替1-甲基哌啶-4-羧酸進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例16同樣地合成下述式(32)所表示的ys-129。[化49]esi-ms(m+h)計(jì)算值607.6、測(cè)量值608.8、1hnmr(400mhz，cdcl3)δ4.86(1h，tt)、3.98(2h，d)、3.05(1h，tt)、2.86(1h，tt)、2.67(2h，m)、2.49(1h，tt)、2.35(3h，s)、2.29(2h，t)、2.17(2h，m)、1.72(2h，s)、1.60(3h，m)、1.50(4h，m)、1.24(44h，m)、0.92-0.88(9h，m)[實(shí)施例26](1-甲基吖丁啶-3-羧酸1-((2-丁基辛基)氧基)-1-氧代二十烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-131”)的合成)在第6步驟中，使用1-甲基吖丁啶-3-羧酸代替1-甲基哌啶-4-羧酸進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例16同樣地合成下述式(33)所表示的ys-131。[化50]esi-ms(m+h)計(jì)算值593.4、測(cè)量值594.7、1hnmr(400mhz，cdcl3)δ4.87(1h，tt)、3.96(2h，d)、3.57(2h，d)、3.25(2h，d)、3.23(1h，tt)、2.32(3h，s)、2.29(2h，t)、2.03(2h，m)、1.61(4h，m)、1.49(4h，m)、1.27-1.21(41h，m)、0.87(9h，m)[實(shí)施例27](1-乙基哌啶-4-羧酸1-((2-丁基辛基)氧基)-1-氧代二十烷-10-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-132”)的合成)在第6步驟中，使用1-乙基哌啶-4-羧酸代替1-甲基哌啶-4-羧酸進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例16同樣地合成下述式(34)所表示的ys-132。[化51]esi-ms(m+h)計(jì)算值636.0、測(cè)量值636.7、1hnmr(400mhz，cdcl3)δ4.87(1h，ddd)、3.96(2h，d)、2.91(2h，d)、2.40(2h，dd)、2.29(4h，m)、2.03-1.93(4h，m)、1.80(2h，m)、1.61(4h，m)、1.49(4h，m)、1.27-1.21(41h，m)、1.08(4h，t)、0.87(9h，m)[實(shí)施例28](10-((4-(二甲基氨基)丁?；?氧基)二十烷酸2-丁基辛酯(以下，有時(shí)稱為“ys-133”)的合成)在第6步驟中，使用4-(二甲基氨基)丁酸代替1-甲基哌啶-4-羧酸進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，和實(shí)施例16同樣地合成下述式(35)所表示的ys-133。[化52]esi-ms(m+h)計(jì)算值609.6、測(cè)量值610.7、1hnmr(400mhz，cdcl3)δ4.86(1h，tt)、3.96(2h，d)、2.33-2.26(6h，m)、2.21(6h，s)、2.03(2h，m)、1.80(2h，m)、1.61(4h，m)、1.49(4h，m)、1.27-1.21(41h，m)、0.87(9h，m)<組合物的制備(1)>[實(shí)施例29](ys-102)使用實(shí)施例1的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-102)而制備組合物。作為核酸，使用包含有義鏈5′-ggafufcafufcfufcaagfufcfufuafct＊t-3′(序列編號(hào)1、t：dna、fu，fc＝2′-氟代rna、＊＝硫代磷酸酯連結(jié)子)、反義鏈5′-gfuaagafcfufugagafugafufcfct＊t-3′(序列編號(hào)2、t：dna、fu，fc＝2′-氟代rna、＊＝硫代磷酸酯連結(jié)子)的堿基序列的抑制factorvii(凝血因子7)基因的表達(dá)的sirna，且該sirna經(jīng)過(guò)退火(genedesign股份有限公司、以下有時(shí)稱為“factorviisirna”)。將factorviisirna在25mm醋酸鈉(ph值4.0)中溶解為216μg/ml，而制成sirna稀釋液。另外，將陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-102)、dspc(日本精化股份有限公司)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、mpeg2000-dmg(日油股份有限公司)以60/8.5/30/1.5(摩爾比)的比例且以總脂質(zhì)濃度為15mm的方式溶解到乙醇中，而制成脂質(zhì)溶液。將sirna稀釋液與脂質(zhì)溶液分別以2.4ml/分鐘、1.29ml/分鐘的流速進(jìn)行混合，進(jìn)而將25mm醋酸鈉(ph值4.0)以9.25ml/分鐘的流速進(jìn)行混合，由此獲得脂質(zhì)復(fù)合物水溶液。將所獲得的脂質(zhì)復(fù)合物水溶液供于使用透析膜(商品名“float-a-lyzerg2”、美國(guó)斯百全(spectrum)公司、50kmwco)的透析，將外液換成磷酸緩沖液(pbs、ph值7.5)。透析后，進(jìn)行濃縮及過(guò)濾滅菌，而獲得實(shí)施例29的組合物。[實(shí)施例30](ys-101)使用實(shí)施例2的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-101)代替ys-102作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例29同樣地獲得實(shí)施例30的組合物。[實(shí)施例31](ys-103)使用實(shí)施例3的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-103)代替ys-102作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例29同樣地獲得實(shí)施例31的組合物。[參考例1](ys-021)使用下述式(36)所表示的1-甲基哌啶-4-羧酸1-(2-辛基環(huán)丙基)十七烷-8-基酯(以下，有時(shí)稱為“ys-021”)代替ys-102作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例29同樣地獲得參考例1的組合物。[化53]<組合物的分析(1)>針對(duì)實(shí)施例29～31及參考例1的組合物，測(cè)定sirna向脂質(zhì)復(fù)合物中的封入率。具體而言，利用無(wú)rna酶水(rnasefreewater)稀釋組合物，使用quant-itribogreenrna試劑(美國(guó)英杰(invitrogen)公司)進(jìn)行測(cè)定，將所測(cè)得的sirna濃度(a)設(shè)為脂質(zhì)復(fù)合物外液中所存在的sirna。另外，將組合物利用1％tritonx-100進(jìn)行稀釋并測(cè)定，將所測(cè)得的sirna濃度(b)設(shè)為組合物中的總sirna濃度。接著，根據(jù)下式(f1)算出核酸的封入率。封入率(％)＝100-(a/b)×100(f1)另外，利用粒徑測(cè)定裝置(商品名“zetasizernanozs”、英國(guó)馬爾文(malvern)公司制造)測(cè)定脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑。表1中表示sirna的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑(z-平均)。[表1]組合物陽(yáng)離子性脂質(zhì)封入率(％)平均粒徑(nm)實(shí)施例29ys-1029874實(shí)施例30ys-101＞9979實(shí)施例31ys-1039868參考例1ys-021＞9965<組合物的制備(2)>[實(shí)施例32](ys-111)使用實(shí)施例5的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-111)而制備組合物。作為核酸，使用和實(shí)施例29的組合物所使用者相同的factorviisirna。將factorviisirna利用25mm醋酸鈉(ph值4.0)溶解為181μg/ml，而制成sirna稀釋液。另外，將陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-111)、dspc(日本精化股份有限公司)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、mpeg2000-dmg(日油股份有限公司)以60/8.5/30/1.5(摩爾比)的比例且以總脂質(zhì)濃度為10mm的方式溶解到乙醇中，而制成脂質(zhì)溶液。將sirna稀釋液與脂質(zhì)溶液分別以2.4ml/分鐘、1.29ml/分鐘的流速進(jìn)行混合，進(jìn)而將25mm醋酸鈉(ph值4.0)以5.0ml/分鐘的流速進(jìn)行混合，由此獲得脂質(zhì)復(fù)合物水溶液。將所獲得的脂質(zhì)復(fù)合物水溶液供于使用透析膜(商品名“float-a-lyzerg2”、美國(guó)斯百全(spectrum)公司、50kmwco)的透析，將外液換成磷酸緩沖液(pbs、ph值7.5)。透析后，進(jìn)行濃縮及過(guò)濾滅菌，而獲得實(shí)施例32的組合物。[實(shí)施例33](ys-112)使用實(shí)施例6的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-112)代替ys-111作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例32同樣地獲得實(shí)施例33的組合物。[實(shí)施例34](ys-113)使用實(shí)施例7的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-113)代替ys-111作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例32同樣地獲得實(shí)施例34的組合物。[實(shí)施例35](ys-114)使用實(shí)施例8的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-114)代替ys-111作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例32同樣地獲得實(shí)施例35的組合物。[實(shí)施例36](ys-115)使用實(shí)施例9的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-115)代替ys-111作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例32同樣地獲得實(shí)施例36的組合物。[實(shí)施例37](ys-116)使用實(shí)施例10的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-116)代替ys-111作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例32同樣地獲得實(shí)施例36的組合物。[比較例1](aln-319)使用專利文獻(xiàn)1中記載的下述式(32)所表示的9-((4-(二甲基氨基)丁酰基)氧基)十七烷二酸二((z)-壬-2-烯-1-基)酯(以下，有時(shí)稱為“aln-319”)代替ys-111作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，依據(jù)專利文獻(xiàn)1中記載的方法進(jìn)行合成并使用，除此以外，和實(shí)施例32同樣地獲得比較例1的組合物。[化54]<組合物的分析(2)>和實(shí)施例29的組合物同樣地，針對(duì)實(shí)施例32～37及比較例1的組合物，測(cè)定sirna向脂質(zhì)復(fù)合物中的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑。表2中表示sirna的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑(z-平均)。[表2]組合物陽(yáng)離子性脂質(zhì)封入率(％)平均粒徑(nm)實(shí)施例32ys-1119578實(shí)施例33ys-1129471實(shí)施例34ys-1138870實(shí)施例35ys-1148673實(shí)施例36ys-1159568實(shí)施例37ys-1169172比較例1aln-3199677<組合物的制備(3)>[實(shí)施例38](ys-117)使用實(shí)施例11的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-117)而制備組合物。作為核酸，使用和實(shí)施例29的組合物所使用者相同的factorviisirna。將factorviisirna利用25mm醋酸鈉(ph值4.0)溶解為108μg/ml，而制成sirna稀釋液。另外，將陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-111)、dspc(日本精化股份有限公司)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、mpeg2000-dmg(日油股份有限公司)以60/8.5/30/1.5(摩爾比)的比例且以總脂質(zhì)濃度為6mm的方式溶解到乙醇中，而制成脂質(zhì)溶液。將sirna稀釋液與脂質(zhì)溶液分別以2.4ml/分鐘、1.29ml/分鐘的流速進(jìn)行混合，進(jìn)而將25mm醋酸鈉(ph值4.0)以9.25ml/分鐘的流速進(jìn)行混合，由此獲得脂質(zhì)復(fù)合物水溶液。將所獲得的脂質(zhì)復(fù)合物水溶液供于使用透析膜(商品名“float-a-lyzerg2”、美國(guó)斯百全(spectrum)公司、50kmwco)的透析，將外液換成磷酸緩沖液(pbs、ph值7.5)。透析后，進(jìn)行濃縮及過(guò)濾滅菌，而獲得實(shí)施例38的組合物。[實(shí)施例39](ys-117s)使用實(shí)施例12的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-117s)代替ys-117作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例38同樣地獲得實(shí)施例39的組合物。[實(shí)施例40](ys-118)使用實(shí)施例13的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-118)代替ys-117作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例38同樣地獲得實(shí)施例40的組合物。[實(shí)施例41](ys-118s)使用實(shí)施例14的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-118s)代替ys-117作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例38同樣地獲得實(shí)施例41的組合物。[實(shí)施例42](ys-119)使用實(shí)施例4的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-119)代替ys-117作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例38同樣地獲得實(shí)施例42的組合物。<組合物的分析(3)>和實(shí)施例29的組合物同樣地，針對(duì)實(shí)施例38～42的組合物，測(cè)定sirna向脂質(zhì)復(fù)合物中的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑。表3中表示sirna的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑(z-平均)。[表3]組合物陽(yáng)離子性脂質(zhì)封入率(％)平均粒徑(nm)實(shí)施例38ys-11758110實(shí)施例39ys-117s65126實(shí)施例40ys-1187474實(shí)施例41ys-118s7371實(shí)施例42ys-1197772<組合物的制備(4)>[實(shí)施例43](ys-119)使用實(shí)施例4的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-119)而制備組合物。作為核酸，使用和實(shí)施例29的組合物所使用者相同的factorviisirna。將factorviisirna利用25mm醋酸鈉(ph值4.0)溶解為108μg/ml，而制成sirna稀釋液。另外，將陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-119)、dspc(日本精化股份有限公司)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、mpeg2000-dmg(日油股份有限公司)以60/8.5/30/1.5(摩爾比)的比例且以總脂質(zhì)濃度為6mm的方式溶解到乙醇中，而制成脂質(zhì)溶液。將sirna稀釋液與脂質(zhì)溶液分別以1.80ml/分鐘、0.97ml/分鐘的流速進(jìn)行混合，進(jìn)而將25mm醋酸鈉(ph值4.0)以6.94ml/分鐘的流速進(jìn)行混合，由此獲得脂質(zhì)復(fù)合物水溶液。將所獲得的脂質(zhì)復(fù)合物水溶液供于使用透析膜(商品名“float-a-lyzerg2”、美國(guó)斯百全(spectrum)公司、50kmwco)的透析，將外液換成磷酸緩沖液(pbs、ph值7.5)。透析后，進(jìn)行濃縮及過(guò)濾滅菌，而獲得實(shí)施例43的組合物。[比較例2](aln-319)使用所述aln-319代替ys-119作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例43同樣地獲得比較例2的組合物。<組合物的分析(4)>和實(shí)施例29的組合物同樣地，針對(duì)實(shí)施例43及比較例2的組合物，測(cè)定sirna向脂質(zhì)復(fù)合物中的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑(z-平均)。表4中表示sirna的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑。[表4]組合物陽(yáng)離子性脂質(zhì)封入率(％)平均粒徑(nm)實(shí)施例43ys-1198894比較例2aln-3197595<組合物的制備(5)>[實(shí)施例44](ys-119)使用實(shí)施例4的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-119)而制備組合物。作為核酸，使用和實(shí)施例29的組合物所使用者相同的factorviisirna。將factorviisirna利用25mm醋酸鈉(ph值4.0)溶解為216μg/ml，而制成sirna稀釋液。另外，將陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-119)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、mpeg2000-dpg(日油股份有限公司)以60/38.5/1.5(摩爾比)的比例且以總脂質(zhì)濃度為6mm的方式溶解到乙醇中，而制成脂質(zhì)溶液。將sirna稀釋液與脂質(zhì)溶液分別以3.36ml/分鐘、1.81ml/分鐘的流速進(jìn)行混合，進(jìn)而將25mm醋酸鈉(ph值4.0)以12.95ml/分鐘的流速進(jìn)行混合，由此獲得脂質(zhì)復(fù)合物水溶液。將所獲得的脂質(zhì)復(fù)合物水溶液供于使用透析膜(商品名“float-a-lyzerg2”、美國(guó)斯百全(spectrum)公司、50kmwco)的透析，將外液換成磷酸緩沖液(pbs、ph值7.5)。透析后，進(jìn)行濃縮及過(guò)濾滅菌，而獲得實(shí)施例44的組合物。[實(shí)施例45](ys-120)使用實(shí)施例15的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-120)代替ys-119作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例44同樣地獲得實(shí)施例45的組合物。<組合物的分析(5)>和實(shí)施例29的組合物同樣地，針對(duì)實(shí)施例44及45的組合物，測(cè)定sirna向脂質(zhì)復(fù)合物中的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑(z-平均)。表5中表示sirna的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑。[表5]組合物陽(yáng)離子性脂質(zhì)封入率(％)平均粒徑(nm)實(shí)施例44ys-1199680實(shí)施例45ys-1209479<組合物的制備(6)>[實(shí)施例46](ys-120)使用實(shí)施例16的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-120)而制備組合物。作為核酸，使用和實(shí)施例29的組合物所使用者相同的factorviisirna。將factorviisirna利用25mm醋酸鈉(ph值4.0)溶解為450μg/ml，而制成sirna稀釋液。另外，將陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-120)、dspc(日本精化股份有限公司)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、mpeg2000-dmg(日油股份有限公司)以60/8.5/30/1.5(摩爾比)的比例且以總脂質(zhì)濃度為40mm的方式溶解到乙醇中，而制成脂質(zhì)溶液。將脂質(zhì)相對(duì)于sirna的比設(shè)為質(zhì)量比0.06，將sirna稀釋液與脂質(zhì)溶液分別以4.0ml/分鐘、1.3ml/分鐘的流速進(jìn)行混合，由此獲得脂質(zhì)復(fù)合物水溶液。將所獲得的脂質(zhì)復(fù)合物水溶液供于使用透析膜(商品名“float-a-lyzerg2”、美國(guó)斯百全(spectrum)公司、50kmwco)的透析，將外液換成磷酸緩沖液(pbs、ph7.4)。透析后，進(jìn)行濃縮及過(guò)濾滅菌，而獲得實(shí)施例46的組合物。[實(shí)施例47](ys-121)使用實(shí)施例17的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-121)代替ys-120作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例46同樣地獲得實(shí)施例47的組合物。[實(shí)施例48](ys-122)使用實(shí)施例18的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-122)代替ys-120作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例46同樣地獲得實(shí)施例48的組合物。[實(shí)施例49](ys-123)使用實(shí)施例19的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-123)代替ys-120作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例46同樣地獲得實(shí)施例49的組合物。[實(shí)施例50](ys-124)使用實(shí)施例20的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-124)代替ys-120作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例46同樣地獲得實(shí)施例50的組合物。[實(shí)施例51](ys-125)使用實(shí)施例21的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-125)代替ys-120作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例46同樣地獲得實(shí)施例51的組合物。[實(shí)施例52](ys-126)使用實(shí)施例22的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-126)代替ys-120作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例46同樣地獲得實(shí)施例52的組合物。<組合物的分析(6)>和實(shí)施例29的組合物同樣地，針對(duì)實(shí)施例46～52的組合物，測(cè)定sirna向脂質(zhì)復(fù)合物中的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑(z-平均)。表6中表示sirna的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑。[表6]組合物陽(yáng)離子性脂質(zhì)封入率(％)平均粒徑(nm)實(shí)施例46ys-1209964實(shí)施例47ys-1218474實(shí)施例48ys-1229866實(shí)施例49ys-1239961實(shí)施例50ys-1249964實(shí)施例51ys-1249663實(shí)施例52ys-1259963<組合物的分析(7)>將實(shí)施例46～52的組合物在密閉的玻璃小瓶中在4℃下保管，和實(shí)施例29的組合物同樣地測(cè)定保管前、保管后第3個(gè)月及第6個(gè)月的粒徑(z-平均及多分散指數(shù))。表7中表示實(shí)施例46～52的組合物的平均粒徑的隨時(shí)間經(jīng)過(guò)而產(chǎn)生的變化及保管后第6個(gè)月和保管前的粒徑變化(d)。包含ys-121以外的陽(yáng)離子性脂質(zhì)的組合物在保管期間顯示出脂質(zhì)復(fù)合物的粒徑的增大得到抑制。[表7]<組合物的制備(7)>[實(shí)施例53](ys-120)和“組合物的制備(6)”同樣地使用實(shí)施例16的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-120)而制備組合物。[實(shí)施例54](ys-124)使用實(shí)施例23的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-127)代替ys-120作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例53同樣地獲得實(shí)施例54的組合物。[比較例3](aln-319)使用所述aln-319代替ys-120作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例53同樣地獲得比較例3的組合物。<組合物的分析(8)>和實(shí)施例29的組合物同樣地，針對(duì)實(shí)施例53、54及比較例3的組合物，測(cè)定sirna向脂質(zhì)復(fù)合物中的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑(z-平均)。表8中表示sirna的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑。[表8]組合物陽(yáng)離子性脂質(zhì)封入率(％)平均粒徑(nm)實(shí)施例53ys-1209766實(shí)施例54ys-1249667比較例3aln-3199895<組合物的分析(9)>針對(duì)實(shí)施例53、54及比較例3的組合物，在各組合物的制備中通過(guò)sirna稀釋液和脂質(zhì)溶液的混合而產(chǎn)生脂質(zhì)復(fù)合物后，立即將該脂質(zhì)復(fù)合物在pbs中進(jìn)行透析后，在密閉的玻璃小瓶中在4℃下保管后，利用粒徑測(cè)定裝置(商品名“zetasizernanozs”、英國(guó)馬爾文(malvern)公司制造)測(cè)定第2個(gè)月及第6個(gè)月的粒徑(z-平均及多分散指數(shù))。表9中表示實(shí)施例53、54及比較例3的組合物的平均粒徑的隨時(shí)間經(jīng)過(guò)而產(chǎn)生的變化及保管后第6個(gè)月和剛混合后的粒徑變化(d)。包含ys-120或ys-124的陽(yáng)離子性脂質(zhì)的組合物和比較例3的組合物相比，在保管期間中顯示出脂質(zhì)復(fù)合物的粒徑的增大得到抑制。[表9]<組合物的制備(8)>[實(shí)施例55](ys-120)和“組合物的制備(6)”同樣地使用實(shí)施例16的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-120)而制備組合物。[實(shí)施例56](ys-127)使用實(shí)施例23的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-127)代替ys-120作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例55同樣地獲得實(shí)施例56的組合物。[實(shí)施例57](ys-128)使用實(shí)施例24的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-128)代替ys-120作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例55同樣地獲得實(shí)施例57的組合物。[實(shí)施例58](ys-129)使用實(shí)施例25的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-129)代替ys-120作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例55同樣地獲得實(shí)施例58的組合物。<組合物的分析(10)>和實(shí)施例29的組合物同樣地，針對(duì)實(shí)施例55～58的組合物，測(cè)定sirna向脂質(zhì)復(fù)合物中的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑(z-平均)。表10中表示sirna的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑。[表10]組合物陽(yáng)離子性脂質(zhì)封入率(％)平均粒徑(nm)實(shí)施例55ys-1208763實(shí)施例56ys-1277280實(shí)施例57ys-1288465實(shí)施例58ys-1297661<組合物的制備(9)>[實(shí)施例59](ys-101)和“組合物的制備(6)”同樣地使用實(shí)施例2的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-101)而制備組合物。[實(shí)施例60](ys-131)使用實(shí)施例26的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-131)代替ys-101作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例59同樣地獲得實(shí)施例60的組合物。[實(shí)施例61](ys-132)使用實(shí)施例27的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-132)代替ys-101作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例59同樣地獲得實(shí)施例61的組合物。[實(shí)施例62](ys-133)使用實(shí)施例28的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-133)代替ys-101作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例59同樣地獲得實(shí)施例62的組合物。[實(shí)施例63](ys-120)使用實(shí)施例16的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(ys-120)代替ys-101作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例59同樣地獲得實(shí)施例63的組合物。[比較例4](aln-319)使用所述aln-319代替ys-101作為陽(yáng)離子性脂質(zhì)，除此以外，和實(shí)施例59同樣地獲得比較例4的組合物。<組合物的分析(11)>和實(shí)施例29的組合物同樣地，針對(duì)實(shí)施例59～63及比較例4的組合物，測(cè)定sirna向脂質(zhì)復(fù)合物中的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑(z-平均)。表11中表示sirna的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑。[表11]組合物陽(yáng)離子性脂質(zhì)封入率(％)平均粒徑(nm)實(shí)施例59ys-1019670實(shí)施例60ys-1319275實(shí)施例61ys-1329574實(shí)施例62ys-1339871實(shí)施例63ys-1209770比較例4aln-3199776<動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(1)>將實(shí)施例29～31及參考例1的組合物以封入到脂質(zhì)復(fù)合物中的factorviisirna濃度為10μg/ml的方式利用pbs進(jìn)行稀釋。將各組合物以10ml/kg的投予容量對(duì)c57/bl6小鼠(5周齡、雄性)進(jìn)行尾靜脈內(nèi)投予，從投予起24小時(shí)后在麻醉下實(shí)施采血及肝臟的采集。通過(guò)離心將血漿從血液分離，利用市售的試劑盒(商品名“biophenfvii”、hyphenbiomed公司)對(duì)血漿中的factorvii蛋白質(zhì)濃度進(jìn)行定量。作為陰性對(duì)照，對(duì)投予了pbs的組群進(jìn)行相同處理。將pbs投予組的factorvii蛋白質(zhì)濃度設(shè)為100％，以相對(duì)值算出組合物投予組的factorvii蛋白質(zhì)濃度。另外，將肝臟均質(zhì)化，利用甲醇萃取構(gòu)成組合物的脂質(zhì)后，通過(guò)lc-ms對(duì)陽(yáng)離子性脂質(zhì)進(jìn)行定量。將所投予的陽(yáng)離子性脂質(zhì)的量設(shè)為100％，以相對(duì)值算出肝臟中殘存的陽(yáng)離子性脂質(zhì)的量。將結(jié)果示于表12。[表12]<動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(2)>將實(shí)施例32～37及比較例1的組合物與“動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(1)”同樣地進(jìn)行稀釋，并對(duì)c57/bl6小鼠(5周齡、雄性)進(jìn)行投予，算出投予24小時(shí)后的血漿中的factorvii蛋白質(zhì)濃度的相對(duì)值及肝臟中殘存的陽(yáng)離子性脂質(zhì)量的相對(duì)值。將結(jié)果示于表13。[表13]<動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(3)>將實(shí)施例38～42的組合物和“動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(1)”同樣地進(jìn)行稀釋，并對(duì)c57/bl6小鼠(5周齡、雄性)進(jìn)行投予，算出投予24小時(shí)后的血漿中的factorvii蛋白質(zhì)濃度的相對(duì)值及肝臟中殘存的陽(yáng)離子性脂質(zhì)量的相對(duì)值。將結(jié)果示于表14。[表14]<動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(4)>將實(shí)施例43及比較例2的組合物以封入到脂質(zhì)復(fù)合物中的factorviisirna濃度為1μg/ml或5μg/ml的方式利用pbs進(jìn)行稀釋。將各組合物以10ml/kg的投予容量對(duì)c57/bl6小鼠(5周齡、雄性)進(jìn)行尾靜脈內(nèi)投予，從投予起24小時(shí)后在麻醉下實(shí)施采血及肝臟的采集。通過(guò)離心將血漿從血液分離，利用市售的試劑盒(商品名“biophenfvii”、hyphenbiomed公司)對(duì)血漿中的factorvii蛋白質(zhì)濃度進(jìn)行定量。作為陰性對(duì)照，對(duì)投予了pbs的組群進(jìn)行相同處理。將pbs投予組的factorvii蛋白質(zhì)濃度設(shè)為100％，以相對(duì)值算出組合物投予組的factorvii蛋白質(zhì)濃度。將結(jié)果示于表15及圖1。實(shí)施例43的組合物顯示出高于比較例2的組合物的factorvii蛋白質(zhì)的表達(dá)抑制效果。[表15]<動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(5)>將實(shí)施例44及45的組合物以封入到脂質(zhì)復(fù)合物中的factorviisirna濃度為1μg/ml或5μg/ml的方式利用pbs進(jìn)行稀釋。將各組合物以10ml/kg的投予容量對(duì)c57/bl6小鼠(5周齡、雄性)進(jìn)行尾靜脈內(nèi)投予，從投予起24小時(shí)后在麻醉下實(shí)施采血及肝臟的采集。通過(guò)離心將血漿從血液分離，利用市售的試劑盒(商品名“biophenfvii”、hyphenbiomed公司)對(duì)血漿中的factorvii蛋白質(zhì)濃度進(jìn)行定量。作為陰性對(duì)照，對(duì)投予了pbs的組群進(jìn)行相同處理。將pbs投予組的factorvii蛋白質(zhì)濃度設(shè)為100％，以相對(duì)值算出組合物投予組的factorvii蛋白質(zhì)濃度。將結(jié)果示于表16及圖2。實(shí)施例44及45的組合物均顯示出較高的factorvii蛋白質(zhì)的表達(dá)抑制效果。[表16]<動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(6)>將實(shí)施例46～52的組合物和“動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(5)”同樣地進(jìn)行稀釋，并對(duì)c57/bl6小鼠(5周齡、雄性)進(jìn)行投予，算出投予24小時(shí)后的血漿中的factorvii蛋白質(zhì)濃度的相對(duì)值。將結(jié)果示于表17。[表17]<動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(7)>將實(shí)施例53、54及比較例3的組合物以封入到脂質(zhì)復(fù)合物中的factorviisirna濃度為2μg/ml或10μg/ml的方式利用pbs進(jìn)行稀釋。將各組合物以10ml/kg的投予容量對(duì)icr小鼠(6周齡、雌性)進(jìn)行尾靜脈內(nèi)投予，從投予起24小時(shí)后在麻醉下實(shí)施采血及肝臟的采集。通過(guò)離心將血漿從血液分離，利用市售的試劑盒(商品名“biophenfvii”、hyphenbiomed公司)對(duì)血漿中的factorvii蛋白質(zhì)濃度進(jìn)行定量。作為陰性對(duì)照，對(duì)投予了pbs的組群進(jìn)行相同處理。將pbs投予組的factorvii蛋白質(zhì)濃度設(shè)為100％，以相對(duì)值算出組合物投予組的factorvii蛋白質(zhì)濃度。將結(jié)果示于表18。實(shí)施例53及54的組合物顯示出高于比較例3的組合物的factorvii蛋白質(zhì)的表達(dá)抑制效果。[表18]<動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(8)>將實(shí)施例55～58的組合物和“動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(7)”同樣地進(jìn)行稀釋，并對(duì)icr小鼠(6周齡、雌性)進(jìn)行投予，算出投予24小時(shí)后的血漿中的factorvii蛋白質(zhì)濃度的相對(duì)值。將結(jié)果示于表19。[表19]<動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(9)>將實(shí)施例59～63及比較例4的組合物和“動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(7)”同樣地進(jìn)行稀釋，并對(duì)icr小鼠(5周齡、雌性)進(jìn)行投予，算出投予24小時(shí)后的血漿中的factorvii蛋白質(zhì)濃度的相對(duì)值。將結(jié)果示于表20。[表20][產(chǎn)業(yè)上的利用可能性]根據(jù)本發(fā)明，可提供能夠?qū)⒑怂岣咝实蒯尫诺郊?xì)胞質(zhì)中的陽(yáng)離子性脂質(zhì)。當(dāng)前第1頁(yè)12