本發(fā)明屬于化妝品原料制備技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種γ-PGA(γ-聚谷氨酸)修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉，本發(fā)明還涉及該脂質(zhì)體的制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

臭氧層的不斷變薄，致使到達(dá)地面的紫外線輻射(UVR)強(qiáng)度增強(qiáng)，過量照射紫外線(UV)引起曬傷、色素沉著、日光性皮炎甚至皮膚癌等問題。為此，皮膚防曬已引起廣泛的關(guān)注。

市場(chǎng)上的防曬產(chǎn)品多是通過添加物理防曬劑和化學(xué)防曬劑來達(dá)到廣譜紫外線防護(hù)的效果，但物理防曬劑存在防護(hù)能力弱、易堵塞毛孔等問題，化學(xué)防曬劑則存在光穩(wěn)定性差、有刺激性等問題。近年來具有防曬功能的天然植物成分，不僅具有優(yōu)良的防曬性能，而且滿足了人們?cè)诎踩?、綠色環(huán)保方面的訴求。

目前已有學(xué)者對(duì)天然防曬劑進(jìn)行篩選和開發(fā)，并將其直接添加到化妝品中，但是其受自身穩(wěn)定性等影響，透皮吸收不理想；大多數(shù)的防曬化妝品成分單一，達(dá)不到廣譜吸收紫外線的效果；并且大多數(shù)的防曬化妝品的保濕效果不甚理想。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉，該脂質(zhì)體包封兩種互補(bǔ)型的紫外線吸收劑，解決了現(xiàn)有防曬產(chǎn)品成分單一、穩(wěn)定性差、功能單一的問題。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉的制備方法。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供上述γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉的應(yīng)用。

本發(fā)明采用的第一個(gè)技術(shù)方案是，一種γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉，按質(zhì)量百分比包括以下組分：蘆丁和菠蘿葉提取物2～5％，磷脂15～35％，膽固醇5～10％，正電荷控制劑2～8％，Tween-803～12％，VE 0.5～2％，VC 0.5～2％，β-葡聚糖1～14％，γ-聚谷氨酸1～3％，凍干保護(hù)劑20～60％，水≤5％，以上各組分的質(zhì)量總和是100％。

優(yōu)選地，磷脂為二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)或與二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、氫化卵磷脂(HSPC)、溶血磷脂(MSPC)、二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)等的一種的混合物；凍干保護(hù)劑為海藻糖和甘露醇混合物；正電荷控制劑為十八胺、磷脂酰乙醇胺或二烷基醚銨鹽中的一種或幾種；

優(yōu)選地，蘆丁和菠蘿葉提取物的質(zhì)量比為1:1～3:1。

本發(fā)明的另一個(gè)技術(shù)方案是，上述γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉的制備方法，以下步驟：

步驟1，按以下質(zhì)量百分比稱取原料組分：蘆丁和菠蘿葉提取物2～5％，磷脂15～35％，膽固醇5～10％，正電荷控制劑2～8％，T ween-803～12％，VE0.5～2％，VC 0.5～2％，β-葡聚糖1～14％，γ-聚谷氨酸1～3％，凍干保護(hù)劑20～60％，以上各組分的質(zhì)量總和是100％。

步驟2：將磷脂、膽固醇、VE、Tween-80、正電荷控制劑、蘆丁和菠蘿葉提取物溶于無水乙醇得A液，將A液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除無水乙醇，并在容器壁上形成一層脂質(zhì)薄膜。

步驟3：將VC、β-葡聚糖和凍干保護(hù)劑溶于磷酸鹽緩沖溶液(PBS)，得B液。

步驟4：將B溶液加入步驟2得到的脂質(zhì)薄膜中，使薄膜脫落，充分水化后，得脂質(zhì)體混懸液C液。

步驟5：將γ-聚谷氨酸溶于水，并加入脂質(zhì)體混懸液C液，離心后得到γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體，再依次經(jīng)過膜整粒、凍融、冷凍干燥后得到γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉。

優(yōu)選地，步驟2旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度30～40℃，真空度0.008～0.01Mpa。

優(yōu)選地，步驟5中γ-聚谷氨酸分子量為70～100萬，γ-聚谷氨酸水溶液濃度為0.1％，pH為5～6。

優(yōu)選地，步驟5過膜整粒為：依次經(jīng)過0.8μm濾膜、0.65μm濾膜、0.45μm濾膜和0.22μm濾膜進(jìn)行整粒。

優(yōu)選地，步驟5凍融處理過程為：首先在-60℃環(huán)境中冷凍30～60min，然后置于15～20℃環(huán)境中使其融化，融化完成后在15～20℃的環(huán)境中超聲處理1min，循環(huán)處理3～4次。

優(yōu)選地，步驟5冷凍干燥處理過程為：在-60±1℃環(huán)境條件下預(yù)凍10h后，再在-52±2℃、真空度小于100mT的環(huán)境條件下冷凍干燥25h。

本發(fā)明還提供了上述γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉在化妝品中的應(yīng)用。

制備防曬化妝品時(shí)，對(duì)上述γ-PGA修飾的包封防曬成分的脂質(zhì)體加去離子水水化后然后直接加入化妝品中，可應(yīng)用于乳液、防曬霜膏、噴霧、面膜或水劑等多種化妝品劑型。γ-PGA修飾的包封防曬成分的脂質(zhì)體在防曬化妝品中的添加量為0.2～15％。

本發(fā)明選用蘆丁和菠蘿葉提取物作為紫外線吸收劑，蘆丁對(duì)UVA、UVC的吸收活性大，菠蘿葉提取物對(duì)UVB、UVC的吸收活性大，由于兩種活性成分復(fù)配對(duì)紫外線吸收活性具有互補(bǔ)性，將兩種混合使用可達(dá)到廣譜吸收紫外線的效果。而且直接添加使用，環(huán)境中的光、熱、氧及體系中的金屬離子和pH值等因素，嚴(yán)重影響其穩(wěn)定性和透皮吸收性。

本發(fā)明利用脂質(zhì)體技術(shù)將活性成分或藥物包裹起來制備成納米脂質(zhì)體，可促進(jìn)透皮吸收。脂質(zhì)體是由磷脂、膽固醇等類脂形成的雙分子層的完全封閉的多層囊泡。用于化妝品的脂質(zhì)體可以包封穩(wěn)定性差的物質(zhì)，改善原料的刺激性，具有靶向、緩釋可控和安全無毒的特點(diǎn)，同時(shí)脂質(zhì)體的磷脂雙分子層還可以幫助有效成分更好的滲透到皮膚中，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于化妝品中。

本發(fā)明在膜材中加入了二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)，將普通脂質(zhì)體制備成DPPC溫敏性脂質(zhì)體，當(dāng)外界溫度達(dá)到或高于膜材的相變溫度(Tm)時(shí)，磷脂雙分子層由“凝膠”態(tài)結(jié)構(gòu)向“液晶”態(tài)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變，磷脂中疏水端的脂酰鏈紊亂度增加導(dǎo)致了，脂質(zhì)體膜的流動(dòng)性增大，包封在脂質(zhì)內(nèi)核的藥物或活性成分和鑲嵌在雙分子層內(nèi)部的藥物或活性成分的釋放速率增大，可更大的發(fā)揮其功效。

本發(fā)明還采用γ-聚谷氨酸對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行了修飾。γ-聚谷氨酸(γ-PGA)是一種多聚羧酸，具有極強(qiáng)的保濕性。含有γ-PGA的化妝品，能在皮膚上形成一層薄膜，防止水分蒸發(fā)，甚至還能恢復(fù)皮膚的自我修復(fù)功能。γ-聚谷氨酸與脂質(zhì)體中攜正電荷的有效成分發(fā)生分子作用，以其緩釋能力使得有效成分在相對(duì)較長(zhǎng)周期內(nèi)緩慢釋放并作用于皮膚，利于皮膚的充分吸收，發(fā)揮有效成分的作用。

本發(fā)明的有益效果是:

(1)本發(fā)明的天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉包封了兩種互補(bǔ)型的紫外線吸收劑，可以達(dá)到紫外線的高效吸收。

(2)刺激性低，透皮吸收效果好，解決了直接添加于化妝品中存在一定的刺激性，穩(wěn)定性差，透皮吸收能力不甚理想等問題；

(3)本發(fā)明防曬保濕活性成分在溫度達(dá)到一定程度時(shí)的釋放速率大，可更大的發(fā)揮其功效。

(4)本發(fā)明有效保護(hù)皮膚曬傷的同時(shí)還能起到保濕功效。

附圖說明

圖1為本發(fā)明天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉制備方法流程圖；

圖2為本發(fā)明脂質(zhì)體凍干粉粒徑分布圖；

圖3為本發(fā)明天然防曬成分的脂質(zhì)體透皮吸收?qǐng)D；

圖4為本發(fā)明天然防曬成分的脂質(zhì)體累計(jì)釋放量隨溫度變化圖；

圖5為本發(fā)明天然防曬成分的脂質(zhì)體紫外線吸光度圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但本發(fā)明并不限于這些實(shí)施方式。

實(shí)施例1

制備方法如圖1所示。

步驟1：分別稱取二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)2.40g，膽固醇0.80g、VE0.06g、Tween-80 0.30g、十八胺0.36g、蘆丁0.12g、菠蘿葉提取物0.12g，溶于42mL無水乙醇得A液；

步驟2：將步驟1得到的A溶液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上35℃，0.009Mpa旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除無水乙醇形成一層脂質(zhì)薄膜；

步驟3：將β-葡聚糖0.58g、VC 0.08g、海藻糖1.6g、甘露醇1.6g溶于129mL pH＝7.0的磷酸鹽緩沖溶液得B液；將B液加入減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)50min使薄膜脫落，充分水化后，35℃水浴中超聲15min得脂質(zhì)體混懸液。

步驟4：配制濃度為0.1％的γ-聚谷氨酸水溶液，用NaOH調(diào)pH為5，攪拌20min；

步驟5：步驟3的包封天然防曬成分的脂質(zhì)體溶液加到步驟4的聚谷氨酸溶液，離心后得到γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體；

步驟6：依次經(jīng)過0.8μm濾膜、0.65μm濾膜、0.45μm濾膜和0.22μm濾膜進(jìn)行整粒。

步驟7：在-60℃環(huán)境中冷凍60min，然后置于15℃環(huán)境中使其融化，融化完成后在15℃的環(huán)境中超聲處理1min，循環(huán)處理3次，分裝入西林瓶中在-60±1℃環(huán)境條件下預(yù)凍10h后，再在-52±2℃、真空度小于100mT的環(huán)境條件下冷凍干燥25h，得到γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉。

本實(shí)施例制得的γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉其組分質(zhì)量百分比為蘆丁和菠蘿葉提取物2.81％，磷脂28.10％，膽固醇9.37％，正電荷控制劑4.21％，Tween-80 3.51％，VE 0.70％，VC 0.94％，β-葡聚糖6.79％，γ-聚谷氨酸2.00％，凍干保護(hù)劑37.47％，水4.10％。

實(shí)施例2

步驟1：稱取二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)與二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)4.90g(DPPC:DPPG＝10:1)，膽固醇1.30g、VE 0.10g、Tween-80 0.40g、二-十八烷-二-甲基胺鹽0.60g、蘆丁0.30g、菠蘿葉提取物0.20g，溶于78mL無水乙醇得A液；

步驟2：將步驟1得到的A溶液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上40℃，0.01Mpa旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除無水乙醇形成一層脂質(zhì)薄膜；

步驟3：將β-葡聚糖0.50g、VC 0.10g、海藻糖3.2g、甘露醇3.2g溶于233mL pH＝6.9的磷酸鹽緩沖溶液得B液；將B液加入減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)50min使薄膜脫落，充分水化后，35℃水浴中超聲15min得脂質(zhì)體混懸液。

步驟4：配制濃度為0.1％的γ-聚谷氨酸水溶液，用NaOH調(diào)pH為5.5，攪拌20min；

步驟5：步驟3的包封天然防曬成分的脂質(zhì)體溶液加到步驟4的γ-聚谷氨酸溶液，離心后得到γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體；

步驟6：依次經(jīng)過0.8μm濾膜、0.65μm濾膜、0.45μm濾膜和0.22μm濾膜進(jìn)行整粒。

步驟7：在-60℃環(huán)境中冷凍60min，然后置于18℃環(huán)境中使其融化，融化完成后在18℃的環(huán)境中超聲處理1min，循環(huán)處理3次，分裝入西林瓶中在-60±1℃環(huán)境條件下預(yù)凍10h后，再在-52±2℃、真空度小于100mT的環(huán)境條件下冷凍干燥25h，得到γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉。

本實(shí)施例制得的γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉其組分質(zhì)量百分比為蘆丁和菠蘿葉提取物3.24％，磷脂32.42％，膽固醇8.43％，正電荷控制劑3.87％，Tween-80 2.59％，VE 0.65％，VC 0.65％，β-葡聚糖3.24％，γ-聚谷氨酸2.02％，凍干保護(hù)劑41.50％，水1.36％。

實(shí)施例3

步驟1：稱取二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)與二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)1.60g(DPPC:DMPC＝10:1)，膽固醇0.46g、VE 0.18g、Tween-80 1.00g、二油?；字Ｒ掖及?DOPE)0.60g、蘆丁0.12g、菠蘿葉提取物0.04g，溶于40mL無水乙醇得A液；

步驟2：將步驟1得到的A溶液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上30℃，0.008Mpa旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除無水乙醇形成一層脂質(zhì)薄膜；

步驟3：將β-葡聚糖1.10g、VC 0.18g、海藻糖1.6g、甘露醇1.6g溶于150mL pH＝6.8的磷酸鹽緩沖溶液得B液；將B液加入減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)50min使薄膜脫落，充分水化后，35℃水浴中超聲15min得脂質(zhì)體混懸液；

步驟4：配制濃度為0.1％的γ-聚谷氨酸水溶液，用NaOH調(diào)pH為6，攪拌20min；

步驟5：步驟3的包封天然防曬成分的脂質(zhì)體加到步驟4的聚谷氨酸溶液，離心后得到γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體；

步驟6：依次經(jīng)過0.8μm濾膜、0.65μm濾膜、0.45μm濾膜和0.22μm濾膜進(jìn)行整粒。

步驟7：在-60℃環(huán)境中冷凍60min，然后置于20℃環(huán)境中使其融化，融化完成后在20℃的環(huán)境中超聲處理1min，循環(huán)處理3次，分裝入西林瓶中在-60±1℃環(huán)境條件下預(yù)凍10h后，再在-52±2℃、真空度小于100mT的環(huán)境條件下冷凍干燥25h，得到γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉。

本實(shí)施例制得的γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體凍干粉其組分質(zhì)量百分比為蘆丁和菠蘿葉提取物1.79％，磷脂17.94％，膽固醇1.79％，正電荷控制劑6.73％，Tween-80 11.21％，VE 2.02％，VC 2.02％，β-葡聚糖12.33％，γ-聚谷氨酸2.13％，凍干保護(hù)劑35.87％，水2.80％。

經(jīng)檢測(cè)，本發(fā)明脂質(zhì)體懸浮液的平均粒徑為280±30nm，如圖2所示。

考察本發(fā)明制備的γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬保濕脂質(zhì)體的功效，以實(shí)施例1、實(shí)施例2以及實(shí)施例3的脂質(zhì)體凍干粉為例，進(jìn)行以下方面的檢測(cè)：

1.溫度敏感程度檢測(cè)

測(cè)試方法為：取實(shí)施例1中的脂質(zhì)體凍干粉適量溶于水后取10mL置于透析袋中，放在生理鹽水中釋放，溫度范圍35℃到44℃，每個(gè)設(shè)定溫度情況下釋放20min，分別取一定樣用HPLC測(cè)定檢測(cè)，得到藥物累計(jì)釋放量。如圖3所示，從圖中可以看出，在35℃到39℃內(nèi)活性成分的釋放幾乎沒有變化，當(dāng)溫度在39℃到42℃范圍內(nèi)釋放量增大，隨著溫度繼續(xù)升高，釋放量趨于平穩(wěn)?；钚猿煞衷?9℃時(shí)的快速釋放歸結(jié)于第一個(gè)相變溫度38.13℃，當(dāng)溫度上升至42℃時(shí)釋放量趨于平穩(wěn)由其第二相變溫度41.99℃決定，當(dāng)在35℃到39℃范圍內(nèi)釋放量隨溫度變化僅有輕微增加，出現(xiàn)這種情況的原因是釋放溫度低于溫敏脂質(zhì)體相變溫度，磷脂雙分子層的滲透性能僅有略微變化。

2.透皮性能檢測(cè)

樣品組為實(shí)施例1脂質(zhì)體凍干粉，對(duì)照品為配制與實(shí)施例1相同濃度的防曬成分溶液，區(qū)別在于對(duì)照品中的防曬成分未經(jīng)脂質(zhì)體包裹。

測(cè)試方法為：采用離體皮膚透皮吸收實(shí)驗(yàn)，選取厚度均勻的離體兔皮，以生理鹽水沖洗干凈，冷凍保存。采用Franz透皮擴(kuò)散儀，將兔皮置于Franz擴(kuò)散池的上下室之間，角質(zhì)層朝上，取測(cè)試樣品涂于皮膚表面，接收池中盛磷酸鹽緩沖溶液，內(nèi)置攪拌子，保持溫度36±1℃。分別于0.5、2、4、6、8、10、12、24h取出全部接收液，并迅速補(bǔ)充等體積接收液。利用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，并計(jì)算防曬成分的累積透過量Q(μg/cm²)。

測(cè)試具體結(jié)果見圖4，從圖中可以看出γ-聚谷氨酸修飾后的天然防曬保濕脂質(zhì)體在每一個(gè)取樣點(diǎn)透皮吸收效果明顯高于未經(jīng)脂質(zhì)體包裹的防曬成分的透皮效果，說明γ-聚谷氨酸修飾后的脂質(zhì)體可以改善透皮受阻的問題。

3.防曬功效測(cè)試

a、防曬SPF值測(cè)定

測(cè)試對(duì)象為本發(fā)明三個(gè)實(shí)施例以及設(shè)置的兩個(gè)對(duì)比例，兩個(gè)對(duì)比例制備步驟及條件與實(shí)施例3相同，不同之處在于，對(duì)比例1步驟(1)中加入蘆丁0.16g，不加菠蘿葉提取物，對(duì)比例2中步驟(1)加入菠蘿葉提取物0.16g，不加蘆丁。

采用美國(guó)公司Optometrics生產(chǎn)的便攜式光譜儀Optometrics LLC SPF-290S在室內(nèi)進(jìn)行測(cè)量，測(cè)量時(shí)為了保證測(cè)量精度，其操作過程嚴(yán)格按照該儀器規(guī)定的測(cè)量步驟進(jìn)行：

測(cè)試環(huán)境條件：恒溫恒濕室，溫度22℃±1℃，濕度50％±10％。

用一次性針筒吸取適量標(biāo)樣或樣品(2mg/cm²)，將其均勻點(diǎn)在PMMA板上，戴上乳膠醫(yī)用指套涂抹均勻，黑暗中放置30min。預(yù)熱儀器15min后，插入空白板，調(diào)節(jié)光強(qiáng)和最大波長(zhǎng)到通過儀器預(yù)檢，隨后插入標(biāo)樣及樣品板，隨機(jī)選取8點(diǎn)測(cè)試，得出MPF曲線，由儀器配套軟件計(jì)算得出樣品SPF值。測(cè)試具體結(jié)果見表2。

表2樣品SPF值的測(cè)定

從表2可以看出，本發(fā)明制備的γ-聚谷氨酸修飾的天然防曬脂質(zhì)體的SPF值較單一防曬成分的高，其組合的功效明顯提升，具有一定的防護(hù)效果。

b、紫外線吸收活性測(cè)定

將實(shí)施例3與對(duì)比例1、對(duì)比例2所制得的脂質(zhì)體精確稱量100mg溶于50mL容量瓶中，添加無水乙醇作為溶劑制成溶液。將制成的溶液倒至1cm×1cm×5cm的石英比色池中，在調(diào)試好的紫外可見光分光光度計(jì)中測(cè)量200～400nm的波長(zhǎng)范圍紫外線吸光度。測(cè)試結(jié)果如圖5所示，從圖中可以看出，制備的只包封菠蘿葉提取物脂質(zhì)體在UVA平均吸光度比制備只包封蘆丁的脂質(zhì)體在UVA平均吸光度值低，而在UVB、UVC區(qū)間的平均吸光度值均比只包封蘆丁的脂質(zhì)體高，而制備的將蘆丁和菠蘿葉提取物作為紫外線吸收劑的脂質(zhì)體在吸收紫外線效果較單一成分的更佳。