本發(fā)明屬于藥物制劑及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物的制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

“黃芩-黃連”作為清熱燥濕配伍的經(jīng)典藥對(duì)，兩藥均為苦寒之藥，入手陽(yáng)明大腸經(jīng)，皆能起到清熱燥濕、瀉火解毒的作用；兩藥合用既能協(xié)同增效又能使二者發(fā)揮出最佳療效。兩藥配伍后在臨床上用于急性腸炎、細(xì)菌性痢疾、急性胃炎、慢性萎縮性胃炎、牙痛、糖尿病等。黃芩、黃連的配伍在傳統(tǒng)中醫(yī)方劑中占很大的比例，它們之間最為突出的配伍現(xiàn)象就是兩藥在煎煮過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的絮狀沉淀，對(duì)于此類沉淀性配伍的研究已經(jīng)引起了廣泛的關(guān)注。目前主要的研究認(rèn)為，由于形成沉淀，從而導(dǎo)致有效成分含量降低，所以應(yīng)避免這種沉淀現(xiàn)象（參見“黃芩-黃連藥對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)及相互作用研究”，馮瑾，碩士學(xué)位論文，第二軍醫(yī)大學(xué)，2010年6月）。

兩藥共煎形成的沉淀致使復(fù)方煎液中黃連生物堿（小檗堿、巴馬汀等）及黃芩中黃酮化合物（黃芩苷、漢黃芩素、黃芩素等）的含量均有不同程度降低。分析其原因是由于黃連中所含小檗堿型生物堿與黃芩中的黃芩苷等多酚類酸性化合物結(jié)合生成了分子量較大的水不溶物。由于藥材所含成分較多，導(dǎo)致對(duì)沉淀的認(rèn)識(shí)不足、利用較低，更無(wú)法為此類沉淀的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。本發(fā)明出人意料的開發(fā)一種此類沉淀物的制備方法，為其制備及應(yīng)用提供參考。

黃芩以黃酮類成分為主，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗病毒以及保護(hù)免疫、消化系統(tǒng)等作用，研究表明上述作用均與黃芩苷密切相關(guān)。黃連的化學(xué)成分以生物堿為主，其中小檗堿含量最高；已證實(shí)黃連具有抗炎、抗腫瘤、降血糖、抗血栓形成及保護(hù)胃粘膜等多種藥理作用，小檗堿也具有上述作用。大量化學(xué)、藥理、藥效研究結(jié)果均表明，黃芩苷、小檗堿可分別作為黃芩、黃連藥材的代表性有效成分。本發(fā)明直接以黃芩苷、小檗堿為研究對(duì)象，成功的制備了“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物并對(duì)其進(jìn)行應(yīng)用。

小檗堿具有毒性、強(qiáng)烈刺激的苦味，故此嚴(yán)重限制了小檗堿口服制劑的發(fā)展和臨床應(yīng)用。本發(fā)明出人意料地發(fā)現(xiàn)，將黃芩苷和小檗堿共同加熱后制備成“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物，這種復(fù)合物既能削弱小檗堿的毒性又能掩蓋小檗堿強(qiáng)烈的苦味，在4%dss誘導(dǎo)的uc小鼠模型中展示了良好的抗炎活性，且該復(fù)合物所制備的片劑體外釋藥迅速。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作簡(jiǎn)便、毒性弱、苦味低、抗炎活性顯著、起效迅速的“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物，并提供這種復(fù)合物的制備方法及應(yīng)用。

本發(fā)明提供一種具有抗炎作用的“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物，其特征在于所述復(fù)合物由黃芩苷、小檗堿復(fù)合而成；或者所述復(fù)合物由黃芩苷、小檗堿和藥學(xué)上可接受的輔料復(fù)合而成，其中黃芩苷與小檗堿的質(zhì)量份數(shù)比為1:0.5~1:5；

所述黃芩苷和小檗堿包括來(lái)源于天然或合成途徑的各種黃芩苷和小檗堿及其衍生物或異構(gòu)體中的一種或其混合物。

優(yōu)選的所述藥學(xué)上可接受的輔料是淀粉、纖維素及其衍生物、殼聚糖、葡萄糖、果糖、乳糖、甘露糖；最優(yōu)選的，所述藥學(xué)上可接受的輔料是葡萄糖。

優(yōu)選的，所述的“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物是將黃芩苷和小檗堿通過(guò)加熱法形成復(fù)合物制備得到的；具體是將黃芩苷和小檗堿分別裝入透析袋，置于溶劑介質(zhì)中加熱，離心、經(jīng)干燥后得到“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物；各組分的含量按濃度，即物料質(zhì)量/溶劑介質(zhì)體積m/v計(jì)為：黃芩苷0.01~1%，小檗堿0.01~1%；或者將黃芩苷和小檗堿分別裝入透析袋，置于含藥學(xué)上可接受的輔料溶劑介質(zhì)中加熱，離心、經(jīng)干燥后得到“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物；各組分的含量按濃度，即物料質(zhì)量/溶劑介質(zhì)體積m/v計(jì)為：黃芩苷0.01~1%，小檗堿0.01~1%，輔料3~6%。

所述溶劑介質(zhì)可以是藥學(xué)領(lǐng)域可接受的介質(zhì)，如乙醇、甘油、水等；優(yōu)選的，所述溶劑介質(zhì)是水；更優(yōu)選的所述溶劑介質(zhì)是ph為1.2~8.0的水溶液。

本發(fā)明還提供一種“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物的制備方法，其特征在于是將黃芩苷和小檗堿通過(guò)加熱法形成復(fù)合物；將黃芩苷和小檗堿分別裝入透析袋，置于溶劑介質(zhì)中加熱，離心、經(jīng)干燥后得到“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物；各組分的含量按濃度，即物料質(zhì)量/溶劑介質(zhì)體積m/v計(jì)為：黃芩苷0.01~1%，小檗堿0.01~1%；或者將黃芩苷和小檗堿分別裝入透析袋，置于分散有藥學(xué)上可接受的輔料的溶劑介質(zhì)中加熱，離心、經(jīng)干燥后得到“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物；各組分的含量按濃度，即物料質(zhì)量/溶劑介質(zhì)體積m/v計(jì)為：黃芩苷0.01~1%，小檗堿0.01~1%，輔料3~6%。

優(yōu)選的，所述復(fù)合物的加熱方法為：保持溶劑介質(zhì)的溫度為80~100℃。

優(yōu)選的，所述復(fù)合物所需透析袋的透析分子量為5000~50000。

優(yōu)選的所述復(fù)合物所需溶劑介質(zhì)是水；更優(yōu)選的，所述水是ph為1.2~8.0的水溶液。

本發(fā)明還提供一種如權(quán)利要求1所述的“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物在制備抗炎藥物中的用途。

具體的，本發(fā)明的“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物由原料藥、輔料和煎液介質(zhì)構(gòu)成，各組分的含量按濃度（物料質(zhì)量/煎液介質(zhì)體積，m/v）計(jì)為：黃芩苷0.01~1%，小檗堿0.01~1%，輔料3~6%。其中，該復(fù)合物是通過(guò)將黃芩苷和小檗堿分別裝入透析袋，置于煎液中加熱，離心、經(jīng)干燥后得到。

上述復(fù)合物所需的材料包括原料藥、輔料、煎液介質(zhì)；各組分的含量按濃度（物料質(zhì)量/煎液介質(zhì)體積，m/v）計(jì)為：原料藥：黃芩苷0.01~1%，小檗堿0.01~1%，輔料3~6%，煎液介質(zhì)。

上述的黃芩苷和小檗堿包括來(lái)源于天然或合成途徑的各種黃芩苷和小檗堿及其衍生物或異構(gòu)體中的一種或其混合物。

上述黃芩苷和小檗堿的組分按濃度計(jì)為：黃芩苷0.01~1%，小檗堿0.01~1%；可根據(jù)質(zhì)量進(jìn)行配比。

上述復(fù)合物的制備方法為：水浴煮沸、磁力攪拌、超聲。

上述復(fù)合物制備所需透析袋的分子量為5000~50000。

上述復(fù)合物所需煎煮液可以是水，也可以是ph為1.2~8.0的水溶液。

上述復(fù)合物制備添加輔料可以是葡萄糖，組分按濃度為3~6%。

上述“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物具有低毒性、可掩蓋小檗堿的苦味、具有強(qiáng)烈的抗炎活性、釋藥迅速等用途。

更具體地，本申請(qǐng)還涉及如下技術(shù)方案：

一種“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物，是將黃芩苷和小檗堿裝入透析袋置于煎液介質(zhì)中使用加熱法所得；

更進(jìn)一步地，所述加熱法是將黃芩苷和小檗堿裝入透析袋中置于煎液介質(zhì)，選用一定的加熱方法加熱一段時(shí)間后，待煎液放冷至室溫后，離心，干燥，得到“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物；

更進(jìn)一步的，所述“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物是將黃芩苷和小檗堿裝入透析袋中放入煎煮介質(zhì)，采用水浴加熱、磁力攪拌、超聲法制備；

更進(jìn)一步地，所述煎液介質(zhì)是水，或者是加入輔料的水、不同ph條件的水溶液；

更進(jìn)一步地，所述煎液中的輔料可以是葡萄糖，或者ph為1.2~8.0的水溶液；

上述“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物的制備方法為：稱取一定質(zhì)量的黃芩苷和小檗堿，裝入透析袋中分別用蒸餾水分散后，置于盛有煎液介質(zhì)的燒杯中，密封，加熱一段時(shí)間，放冷至室溫后離心，分離上清液，將沉淀物使用蒸餾水反復(fù)洗滌2~3次，離心，干燥即得“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物的終產(chǎn)物。

上述“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物具有毒性低、相比于原藥或者共混物，可以顯著掩蓋小檗堿的苦味；對(duì)4%dss誘導(dǎo)的uc小鼠具有良好的抗炎效果、迅速釋藥等用途。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明利用加熱法，先將黃芩苷和小檗堿在介質(zhì)中加熱得到黃色絮狀物，離心、進(jìn)一步干燥得到“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物。該復(fù)合物在毒性測(cè)試時(shí)，未顯示出其毒性；并經(jīng)志愿者口嘗法發(fā)現(xiàn)，可顯著抑制小檗堿的苦味；口服給藥后，在4%dss誘導(dǎo)的uc模型小鼠上顯示了良好的抗炎活性；同等條件下該復(fù)合物片劑的崩解時(shí)間顯著小于原料藥及其物理混合物的片劑、體外釋放度更優(yōu)。綜上所述，該復(fù)合物可作為一種安全、有效、起效迅速的口服制劑。

附圖說(shuō)明

圖1“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物（a）外觀（b）光學(xué)顯微鏡及（c）tem圖

圖2原料藥、物理混合物、“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物制得片劑的體外釋放度曲線。其中“■”為原料藥片（黃芩苷片、小檗堿片），“●”為物理共混物片，“▲”為“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物片。（*表示與“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物片作對(duì)比，p＜0.05；#表示與共混物片作對(duì)比，p＜0.05）。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步說(shuō)明，可以理解，本發(fā)明的具體實(shí)施方式僅是試圖用于進(jìn)一步解釋和理解發(fā)明的技術(shù)方案，但不會(huì)影響本發(fā)明權(quán)利要求請(qǐng)求保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1：

取黃芩苷0.5g和小檗堿0.25g，分別用蒸餾水（6ml）分散后裝入透析袋中（mw，8000~14000），置于盛有300ml蒸餾水的燒杯中，密封，于80℃下磁力攪拌下加熱4h，放冷至室溫后離心（4000rpm，10min），分離上清液與沉淀，沉淀物加入少量蒸餾水反復(fù)洗滌2~3次，干燥即得“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物。

測(cè)得上述復(fù)合物記為樣品1，具體參數(shù)見表1。

實(shí)施例2：

取黃芩苷0.5g和小檗堿0.5g，分別用蒸餾水（6ml）分散后裝入透析袋中（mw，8000~14000），置于盛有300ml蒸餾水的燒杯中，密封，于80℃下磁力攪拌下加熱4h，放冷至室溫后離心（4000rpm，10min），分離上清液與沉淀，沉淀物加入少量蒸餾水反復(fù)洗滌2~3次，干燥即得“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物。

測(cè)得上述復(fù)合物記為樣品2，具體參數(shù)見表1。

實(shí)施例3：

取黃芩苷0.5g和小檗堿1.0g，分別用蒸餾水（6ml）分散后裝入透析袋中（mw，8000~14000），置于盛有300ml蒸餾水的燒杯中，密封，于80℃下磁力攪拌下加熱4h，放冷至室溫后離心（4000rpm，10min），分離上清液與沉淀，沉淀物加入少量蒸餾水反復(fù)洗滌2~3次，干燥即得“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物。

測(cè)得上述復(fù)合物記為樣品3，具體參數(shù)見表1。

實(shí)施例4：

取黃芩苷0.25g和小檗堿0.25g，分別用蒸餾水（6ml）分散后裝入透析袋中（mw，8000~14000），置于盛有300ml蒸餾水的燒杯中，密封，于80℃下磁力攪拌下加熱4h，放冷至室溫后離心（4000rpm，10min），分離上清液與沉淀，沉淀物加入少量蒸餾水反復(fù)洗滌2~3次，干燥即得“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物。

測(cè)得上述復(fù)合物記為樣品4，具體參數(shù)見表1。

實(shí)施例5：

取黃芩苷0.5g和小檗堿0.5g，分別用蒸餾水（6ml）分散后裝入透析袋中（mw，8000~14000），置于盛有300ml蒸餾水的燒杯中，密封，于80℃下磁力攪拌下加熱4h，冷卻至室溫后離心（4000rpm，10min），分離上清液與沉淀，沉淀物加入少量蒸餾水反復(fù)洗滌2~3次，干燥即得“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物。

測(cè)得上述復(fù)合物記為樣品5，具體參數(shù)見表1。

實(shí)施例6：

取黃芩苷1.0g和小檗堿1.0g，分別用蒸餾水（6ml）分散后裝入透析袋中（mw，8000~14000），置于盛有300ml蒸餾水的燒杯中，密封，于80℃下磁力攪拌下加熱4h，放冷至室溫后離心（4000rpm，10min），分離上清液與沉淀，沉淀物加入少量蒸餾水反復(fù)洗滌2~3次，干燥即得“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物。

測(cè)得上述復(fù)合物記為樣品6，具體參數(shù)見表1。

實(shí)施例7：

取黃芩苷1.5g和小檗堿1.5g，分別用蒸餾水（6ml）分散后裝入透析袋中（mw，8000~14000），置于盛有300ml蒸餾水的燒杯中，密封，于80℃下磁力攪拌下加熱4h，放冷至室溫后離心（4000rpm，10min），分離上清液與沉淀，沉淀物加入少量蒸餾水反復(fù)洗滌2~3次，干燥即得“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物。

測(cè)得上述復(fù)合物記為樣品7，具體參數(shù)見表1。

實(shí)施例8：

取黃芩苷2.0g和小檗堿2.0g，分別用蒸餾水（6ml）分散后裝入透析袋中（mw，8000~14000），置于盛有300ml蒸餾水的燒杯中，密封，于80℃下磁力攪拌下加熱4h，放冷至室溫后離心（4000rpm，10min），分離上清液與沉淀，沉淀物加入少量蒸餾水反復(fù)洗滌2~3次，干燥即得“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物。

測(cè)得上述復(fù)合物記為樣品8，具體參數(shù)見表1。

實(shí)施例9：

取黃芩苷0.5g和小檗堿1.0g，分別用蒸餾水（6ml）分散后裝入透析袋中（mw，8000~14000），置于盛有300ml蒸餾水的燒杯中，密封，于40℃下超聲下加熱4h，放冷至室溫后離心（4000rpm，10min），分離上清液與沉淀，沉淀物加入少量蒸餾水反復(fù)洗滌2~3次，干燥即得“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物。

測(cè)得上述復(fù)合物記為樣品9，具體參數(shù)見表1。

實(shí)施例10：

取黃芩苷0.5g和小檗堿1.0g，分別用蒸餾水（6ml）分散后裝入透析袋中（mw，8000~14000），置于盛有300ml蒸餾水的燒杯中，密封，于80℃下磁力加熱4h，放冷至室溫后離心（4000rpm，10min），分離上清液與沉淀，沉淀物加入少量蒸餾水反復(fù)洗滌2~3次，干燥即得“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物。

測(cè)得上述復(fù)合物記為樣品10，具體參數(shù)見表1。

實(shí)施例11：

取黃芩苷0.5g和小檗堿1.0g，分別用蒸餾水（6ml）分散后裝入透析袋中（mw，8000~14000），置于盛有300ml蒸餾水的燒杯中，密封，于100℃下水浴加熱4h，放冷至室溫后離心（4000rpm，10min），分離上清液與沉淀，沉淀物加入少量蒸餾水反復(fù)洗滌2~3次，干燥即得“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物。

測(cè)得上述復(fù)合物記為樣品11，具體參數(shù)見表1。

實(shí)施例12：

取黃芩苷0.5g和小檗堿1.0g，分別用蒸餾水（6ml）分散后裝入透析袋中（mw，8000~14000），置于盛有300mlph6.8介質(zhì)的燒杯中，密封，于100℃下水浴加熱4h，放冷至室溫后離心（4000rpm，10min），分離上清液與沉淀，沉淀物加入少量蒸餾水反復(fù)洗滌2~3次，干燥即得“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物。

測(cè)得上述復(fù)合物記為樣品12，具體參數(shù)見表1。

實(shí)施例13：

取黃芩苷0.5g和小檗堿1.0g，分別用蒸餾水（6ml）分散后裝入透析袋中（mw，8000~14000），置于盛有300mlph7.4介質(zhì)的燒杯中，密封，于100℃下水浴加熱4h，放冷至室溫后離心（4000rpm，10min），分離上清液與沉淀，沉淀物加入少量蒸餾水反復(fù)洗滌2~3次，干燥即得“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物。

測(cè)得上述復(fù)合物記為樣品13，具體參數(shù)見表1。

實(shí)施例14：

取黃芩苷0.5g和小檗堿1.0g，分別用蒸餾水（6ml）分散后裝入透析袋中（mw，8000~14000），置于盛有300ml含3%葡萄糖水溶液的燒杯中，密封，于100℃下水浴加熱4h，放冷至室溫后離心（4000rpm，10min），分離上清液與沉淀，沉淀物加入少量蒸餾水反復(fù)洗滌2~3次，干燥即得“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物。

測(cè)得上述復(fù)合物記為樣品14，具體參數(shù)見表1。

表1樣品1-14的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)例1：

對(duì)實(shí)施例14所得的“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物進(jìn)行毒性評(píng)價(jià)：

選取健康昆明種小鼠90只（雌雄各半），適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后，按照隨機(jī)分組的方法分為小檗堿組、黃芩苷組、物理共混物組和“小檗堿-黃芩苷”復(fù)合物組。每組10只小鼠，雌雄各半，并用苦味酸溶液對(duì)小鼠進(jìn)行標(biāo)記。藥物配制濃度按照灌胃體積0.8ml/20g進(jìn)行配制，實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行藥物灌胃前禁食12h，藥液分兩次灌胃，間隔lh，每次灌胃0.4ml，灌胃后禁食3h。給藥觀察7天，記錄小鼠死亡情況，通過(guò)bliss法計(jì)算小鼠半數(shù)致死量（ld50）。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：小檗堿的ld50為1048.1mg/kg。共混物和復(fù)合物給藥劑量達(dá)到最大耐受量仍未測(cè)出其半數(shù)致死量，表明小檗堿與黃芩苷配伍后會(huì)降低小檗堿的毒性，將兩者制備成復(fù)合物后同樣降低了小檗堿的毒性，表明該復(fù)合物口服更加安全。

具體參見表2：

表2“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物的急性毒性

實(shí)驗(yàn)例2：

對(duì)實(shí)施例14所得的“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物進(jìn)行苦度評(píng)價(jià)：

參比溶液的配置：陰性參比溶液取純水1000ml置于1000ml燒杯中，即為i號(hào)陰性參比藥液，沒(méi)有苦味。將含鹽酸小檗堿的質(zhì)量濃度分別為0.01、0.05、0.1、0.5g/l對(duì)應(yīng)的苦度等級(jí)定為ii、iii、iv、v。

具體可參見表3：

表3苦味評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

口嘗評(píng)價(jià)：受試者1h內(nèi)，不品嘗任何有味道影響味覺得食物。先對(duì)參比溶液進(jìn)行測(cè)試，分別取20ml各濃度的參比溶液于口嘗紙杯中，由志愿者含于口中，計(jì)時(shí)15s，此間口腔做漱口動(dòng)作，以使舌根及舌側(cè)的苦味感受區(qū)能夠感受藥物苦味，并被告知該溶液的苦度分級(jí)和具體苦度值，吐出，漱口5次，至口腔內(nèi)無(wú)苦味，15min后測(cè)定另一濃度的參比溶液。

樣品的測(cè)定（同參比溶液的測(cè)定）：配置一定濃度的“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物，對(duì)照組中藥物的含量及成分根據(jù)復(fù)合物的濃度來(lái)設(shè)定。首先參照表3中的苦味表述確定苦度等級(jí)，記錄與事先設(shè)計(jì)好的“藥物苦味描述表”中，然后再根據(jù)同一級(jí)別內(nèi)各藥液的相對(duì)苦度大小，在該級(jí)別的苦度值允許的取值范圍內(nèi)，給所償樣品賦予一個(gè)具體的苦度值。此外，受試人員對(duì)樣品測(cè)試時(shí)，均采用單盲的方法對(duì)樣品進(jìn)行逐步測(cè)試。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：黃芩苷與小檗堿配伍可減弱小檗堿的苦味，但是與共混物相比，本專利所發(fā)明的“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物具有更優(yōu)良的苦味掩蓋作用，苦味得分顯著減少，明顯的抑制了小檗堿的不良苦味。

具體可參見表4：

表4苦味評(píng)價(jià)結(jié)果

*表示與小檗堿作對(duì)比、^#表示與“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物作對(duì)比，p＜0.05

實(shí)驗(yàn)例3：

對(duì)實(shí)施例14所得的“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物進(jìn)行抗炎活性的評(píng)價(jià)：

正常組：小鼠正常飲食飲水，不做其他處理。模型組：小鼠正常飲食，飲用4%dss溶液，飲用3天后進(jìn)行分組給予藥物治療，給藥劑量如表5所示。在給藥7天時(shí)，小鼠眼眶采血，離心獲得血清（4000r/min，10min），用elisa法測(cè)定小鼠血清中tnf-α、il-1和il-10的含量。

表5分組及給藥劑量

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：4%dss誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型小鼠體內(nèi)炎癥因子il-1和tnf-α顯著增加，抑炎因子il-10顯著減弱。給予藥物治療后，各組動(dòng)物的il-1和il-10含量在不同程度上得到了改善，復(fù)合物能夠顯著抑制il-1、促進(jìn)il-10（p＜0.01）；由表6可知：黃芩苷只能顯著降低uc小鼠血清中炎性細(xì)胞因子il-1的含量，并不能提高抑炎因子il-10的含量，表明黃芩苷抗炎活性需與小檗堿配伍才能增效；模型組小鼠血清中tnf-α的含量顯著高于正常組（p＜0.01），黃芩苷和小檗堿在一定程度上抑制了tnf-α的表達(dá)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。美沙拉嗪、共混物、復(fù)合物的中、高劑量組顯著降低了uc小鼠血清中tnf-α含量（p＜0.05）。因此，復(fù)合物的抗炎機(jī)制主要是通過(guò)減少4%dss誘導(dǎo)的uc小鼠血清中炎癥因子il-1和tnf-α含量以及增加抗炎因子il-10的含量，從而發(fā)揮療效。

具體可參見表6：

表6小鼠血清中il-1、il-10、tnf-α的含量測(cè)定結(jié)果

^#與正常組比較，p＜0.05；^*與模型組比較，p＜0.05

實(shí)驗(yàn)例4：

對(duì)實(shí)施例14所得的“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物進(jìn)行片劑的制備與評(píng)價(jià)：

干燥的黃芩苷、小檗堿、共混物和“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物粉末過(guò)80目篩后，與微晶纖維素1:1（w/w）混勻。加適量65%（v/v）乙醇濕法制粒，過(guò)16目篩擠出顆粒，干燥后過(guò)14目篩整粒，壓片。分別測(cè)定片重差異、硬度、脆碎度和崩解時(shí)限。

結(jié)果各組片劑的片重差異均符合要求，且硬度適宜，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組片劑脆碎度均小于1%，符合藥典規(guī)定。除“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物片組外，其余3組片劑的崩解時(shí)間大于30min，與復(fù)合物片劑相比差異顯著。

具體可參見表7：

表7“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物片劑指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

*表示與“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物作對(duì)比，p＜0.05

采用轉(zhuǎn)籃法測(cè)定各組片劑的體外釋放度，固定轉(zhuǎn)速50rpm，溫度為（37±0.5）℃，以ph為7.4的磷酸緩沖溶液作溶出介質(zhì)，體積為900ml。精密成取上述各組片劑，置于溶出杯中，樣品接觸到溶出介質(zhì)時(shí)立即計(jì)時(shí)，至規(guī)定時(shí)間（3、5、10、15、30、45、60、90、120、150、180min）取樣5ml，同時(shí)補(bǔ)充等體積的新鮮介質(zhì)。樣品經(jīng)0.22μm的微孔濾膜濾過(guò)后，采用hplc法分別測(cè)定樣品中小檗堿、黃芩苷含量，計(jì)算各組片劑的累計(jì)釋放百分率并繪制體外釋放曲線圖，累積釋放度使用one-wayanova做統(tǒng)計(jì)分析。

結(jié)果表明“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物片的體外釋放度顯著優(yōu)于原藥片和共混物片。在15min時(shí)，復(fù)合物中黃芩苷累積釋藥約65.1%，大于黃芩苷片的19.2%和共混物片的14.4%；此刻，小檗堿從復(fù)合物中釋放約45.9%，高于小檗堿片的6.4%和共混物的13.1%。3h后，復(fù)合物中黃芩苷和小檗堿累計(jì)釋放達(dá)到80%以上，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于原料藥片和共混物的累積釋放。表明復(fù)合物的形成，致使所制備的“黃芩苷-小檗堿”復(fù)合物片能夠起到速釋效果，復(fù)合物中黃芩苷的釋藥行為與原料藥存在顯著差異（p＜0.5）；但是與共混物相比，未產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.5）。復(fù)合物中小檗堿的釋藥行為與原料藥和共混存在顯著差異（p＜0.5）。相比于原料藥片或者共混物片，復(fù)合物片可以達(dá)到給藥后藥物迅速起效的目的。

具體可參見圖2。