本發(fā)明涉及藥物化學領域，更具體地說涉及一種氮雜色胺酮衍生物作為色氨酸沿犬尿酸途徑代謝關鍵酶—ido1和/或tdo的抑制劑的用途，治療具有ido1和/或tdo介導的色氨酸代謝的病理學特征的疾病，包括但不限于腫瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病、阿爾茨海默病、抑郁癥、焦慮癥。

背景技術：

色氨酸作為人體內的必需氨基酸，只能通過飲食攝取，體內含量較少，成人血漿中的色氨酸濃度約為40-80μm，約95％的色氨酸是通過犬尿酸途徑代謝的[armstrong,m.d.andstave,u.metabolism.1973,22,561–569.]。該途徑的代謝產物具有免疫抑制作用，在腫瘤的免疫逃逸過程中起著關鍵作用。最早發(fā)現(xiàn)的色氨酸代謝酶為色氨酸-2,3-雙加氧酶(tdo)[kotake,y.；masayama,i.z.physiol.chem.1936,243,237-244.]，后來又發(fā)現(xiàn)了吲哚胺-2,3-雙加氧酶1(ido1)[higuchi,k.；hayaishi,o.1967,arch.biochem.biophys.120,397–403]。這兩個酶都可以使色氨酸及其它含吲哚的內源性物質沿犬尿酸途徑代謝，并且都是該代謝過程的限速酶。在體內、外，ido1或tdo可以在分子氧的協(xié)助下，將色氨酸中吲哚環(huán)的2,3-雙鍵氧化斷裂，進而生成n-甲?；蛩?nfk)，進一步氧化生成犬尿酸、吡啶甲酸和喹啉酸等代謝產物(路線1)。

吲哚胺-2,3-雙加氧酶1(簡稱ido1,ec1.13.11.52)是哺乳動物體內催化色氨酸沿犬尿酸途徑代謝的第一個酶，而且也是限速酶，是腫瘤免疫耐受的原因之一，并且與腫瘤患者預后不良有關[platten,m.；wick,w.；vandeneynde,b.j.cancerres.2012,72,5435-5440]。ido1在多種腫瘤組織中有較高的表達，導致局部的色氨酸耗竭，誘導t細胞停滯于g1期，從而抑制t細胞增殖；而且ido依賴性的色氨酸降解導致犬尿氨酸水平的提高，也誘導氧自由基介導t細胞凋亡；還有當抗原呈遞細胞，如巨噬細胞、樹突狀細胞高表達ido時，加強局部調節(jié)性t細胞(treg)介導的免疫抑制，促使機體對腫瘤特異性抗原的外周免疫耐受。體內、外的研究表明，ido1抑制劑可以增強腫瘤治療性疫苗、治療性單克隆抗體、化療和放療的作用[godin-ethier,j.；hanafi,l.-a.；piccirillo,c.a.；lapointe,r.clin.cancerres.2011,17,6985-6991]。

ido1加強感染部位調節(jié)性t細胞介導的免疫抑制，促使機體對病原微生物產生免疫耐受，這與抗菌、抗病毒藥物的耐藥性產生密切相關。此外，ido1還與多種疾病的發(fā)病機制密切相關，已被證實的有自身免疫性疾病、阿爾茨海默病、抑郁癥、焦慮癥、白內障等。因此ido1抑制劑作為極具潛力的藥物已引起越來越多的關注。

色氨酸-2,3-雙加氧酶(tdo)作為另一個調節(jié)色氨酸沿犬尿酸途徑代謝的重要酶，近年來其作為抑制劑成為研究熱點。platten等人證實tdo在人膠質瘤細胞中高表達。通過藥物抑制或敲除tdo可以阻礙犬尿酸的釋放，相反，敲除ido1并不影響犬尿酸的濃度，這說明tdo是這些細胞代謝色氨酸的關鍵酶之一[c.a.opitz,u.m.litzenburger,f.sahm,m.ott,i.tritschler,s.trump,t.schumacher,l.jestaedt,d.schrenk,m.weller,m.jugold,g.j.guillemin,c.l.miller,c.lutz,b.radlwimmer,i.lehmann,a.vondeimling,w.wick,m.platten,nature.2011,478,197–203.]。在對104個人腫瘤細胞株的評價研究中，vandeneynde等人發(fā)現(xiàn)有20個細胞株只表達tdo，17個細胞株只表達ido1，16個細胞株同時表達tdo和ido1(惡性膠質瘤、間皮瘤、頭頸癌、胰腺癌、非小細胞肺癌、惡性肉瘤、膀胱癌、膽囊癌等)。也就是說，ido1抑制劑對32％的腫瘤細胞株有效，tdo抑制劑對35％的腫瘤細胞株有效，而ido1與tdo雙重抑制劑則可以對51％的腫瘤細胞株有效。理論上，ido1與tdo雙重抑制劑將會進一步提高腫瘤免疫治療的有效性[l.pilotte,p.larrieu,v.stroobant,d.colau,e.dolusic,r.frederick,e.deplaen,c.uyttenhove,j.wouters,b.masereel,b.j.vandeneynde,proc.natl.acad.sci.usa2012,109,2497–2502.]。

色胺酮為吲哚喹唑啉類生物堿，存在于馬藍、菘藍等產藍植物中。研究表明此類化合物具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗寄生蟲以及抗腫瘤的作用。復旦大學楊青等人合成了一系列色胺酮衍生物，并且測試了其對ido1的抑制活性。其中，氟取代的色胺酮衍生物(結構如下)具有很好的活性，對重組人源ido-1的ic50值為0.534μm，可以促進t細胞的增殖，表面等離子體共振(spr)實驗證明該化合物可與ido1直接結合，kd值為46.8μm[yang,s.；li,x.；hu,f.；li,y.；yang,y.；yan,j.；kuang,c.；yang,q.j.med.chem.2013,56,8321-8231]。楊青等人還在色胺酮3位引入氨甲基取代基，發(fā)現(xiàn)抑制ido1的活性沒有顯著變化(wo2015070766)。

valliante等人合成了一系列色胺酮和氮雜色胺酮衍生物，發(fā)現(xiàn)此類化合物有助于tnf-α的生成，部分化合物在5μm或更低濃度即可產生效果(美國專利號：us8193185b2)。但是該專利未涉及ido1及tdo靶點，而且其研究結果也表明，苯環(huán)中氮原子的引入與活性沒有直接關系，其中8-硝基-1-氮雜色胺酮濃度高達20μm時仍未表現(xiàn)出活性。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明人令人驚奇地發(fā)現(xiàn)了一種氮雜色胺酮衍生物，其具有顯著的吲哚胺-2,3-雙加氧酶1和/或色氨酸-2,3-雙加氧酶抑制活性。

本發(fā)明的目的是提供氮雜色胺酮衍生物作為吲哚胺-2,3-雙加氧酶1和/或色氨酸-2,3-雙加氧酶抑制劑的用途。

本發(fā)明的第二個目的是提供一種新型氮雜色胺酮衍生物。

本發(fā)明的第三個目的是提供一種制備上述新型氮雜色胺酮衍生物的方法。

本發(fā)明的第四個目的是提供包含上述新型氮雜色胺酮衍生物的藥用組合物。

具體地說，本發(fā)明提供了一種氮雜色胺酮衍生物作為吲哚胺-2,3-雙加氧酶1和/或色氨酸-2,3-雙加氧酶抑制劑的用途，所述的衍生物如通式(i)所示，或其幾何異構體、互變異構體、同位素標記物、水合物、溶劑化物、代謝產物、藥學上可接受的鹽或前藥：

這里，式(i)中

a和b其中一個為n，而另一個為c-r3；

e為n或-c-r6；

g為o或n-y-z，其中，y為-o-，而z為氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c2-c4烯烴基或取代的c2-c4烯烴基、未取代的c2-c4炔烴基或取代的c2-c4炔烴基、羧甲基(-ch2c(＝o)oh)、磺?；?-s(＝o)2oh)、或磷?；?-p(＝o)(oh)2)；或者，y為-n(h)-，而z為氫、-c(＝s)-n(r8)(r9)、或-c(＝o)-n(r8)(r9)、或-c(＝n)-n(r8)(r9)；

r1至r7各自獨立地選自氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c1-c4烷氧基或取代的c1-c4烷氧基、鹵素、硝基、氰基、甲砜基或羥基；

r8和r9各自獨立地選自氫、或者未取代的c1-c4烷烴基。

在本發(fā)明的實施方案中，本發(fā)明提供的氮雜色胺酮衍生物作為ido1和/或tdo抑制劑的用途，其中，所述未取代的c1-c4烷烴基選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基。所述取代的c1-c4烷烴基是指其碳鏈上任意位置的氫被任選的下列基團所取代：鹵素、羥基、氨基、或-n(r10)(r11)，這里，r10和r11各自獨立地選自氫、或者未取代的c1-c4烷烴基；例如三氟甲基、2-羥基乙基、2-(二甲基氨基)乙基、或3-(二甲基氨基)丙基、或r10與r11及其連接n一起形成的含氮4～7元雜環(huán)(例如四氫吡咯、哌啶、嗎啉、哌嗪、高哌嗪等)。

在本發(fā)明的實施方案中，本發(fā)明提供的氮雜色胺酮衍生物作為ido1和/或tdo抑制劑的用途，其中，所述未取代的c1-c4烷氧基選自甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基或叔丁氧基。所述取代的c1-c4烷氧基是指其碳鏈上任意位置的氫被任選的下列基團所取代：鹵素、羥基、氨基、或-n(r10)(r11)，這里，r10和r11各自獨立地選自氫、或者未取代的c1-c4烷烴基；例如三氟甲氧基、2-羥基乙氧基、2-(二甲基氨基)乙氧基、或3-(二甲基氨基)丙氧基。

在本發(fā)明的實施方案中，本發(fā)明提供的氮雜色胺酮衍生物作為ido1和/或tdo抑制劑的用途，其中，所述未取代的c2-c4烯烴基選自乙烯基、烯丙基、1-丁烯基、2-丁烯基等。所述取代的c2-c4烯烴基是指其碳鏈上任意位置的氫被任選的下列基團所取代：鹵素、或羥基。

在本發(fā)明的實施方案中，本發(fā)明提供的氮雜色胺酮衍生物作為ido1和/或tdo抑制劑的用途，其中，所述未取代的c2-c4炔烴基選自乙炔基、丙炔基、丁炔基等。所述取代的c2-c4炔烴基是指其碳鏈上任意位置的氫被任選的下列基團所取代：鹵素、或羥基。

在本發(fā)明的實施方案中，本發(fā)明提供的氮雜色胺酮衍生物作為ido1和/或tdo抑制劑的用途，其中，所述鹵素為氟、氯、溴、或碘。

在本發(fā)明的一種實施方案中，本發(fā)明提供的一種氮雜色胺酮衍生物作為ido1和/或tdo抑制劑的用途，所述的衍生物如通式(i)所示，其中，g為o；a為n、而b為-ch，或者b為n、而a為-ch。

在本發(fā)明的一種實施方案中，本發(fā)明提供的一種氮雜色胺酮衍生物作為ido1和/或tdo抑制劑的用途，所述的衍生物如通式(i)所示，其中，g為o；a為n、而b為-ch，或者b為n、而a為-ch；而且，e為n。

在本發(fā)明的一種實施方案中，本發(fā)明提供的一種氮雜色胺酮衍生物作為ido1和/或tdo抑制劑的用途，所述的衍生物如通式(i)所示，其中，g為o；a為n、而b為-ch，或者b為n、而a為-ch；

而且，e為-c-r6；

r1、r2、r4至r7各自獨立地選自氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c1-c4烷氧基或取代的c1-c4烷氧基、鹵素、硝基、氰基、甲砜基或羥基。

在本發(fā)明的一種實施方案中，本發(fā)明提供的一種氮雜色胺酮衍生物作為ido1和/或tdo抑制劑的用途，所述的衍生物如通式(i)所示，其中，g為o；a為n、而b為-ch，或者b為n、而a為-ch；

而且，e為-c-r6；

r1和r2為氫，r4至r7各自獨立地選自氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c1-c4烷氧基或取代的c1-c4烷氧基、鹵素、硝基、氰基、甲砜基或羥基。

在本發(fā)明的一種實施方案中，本發(fā)明提供的一種氮雜色胺酮衍生物作為ido1和/或tdo抑制劑的用途，所述的衍生物如通式(i)所示，其中，g為o；a為n、而b為-ch，或者b為n、而a為-ch；

而且，e為-c-r6；

r1和r2為氫，r4至r7各自獨立地選自氫、甲基、三氟甲氧基、甲氧基、氟、氯、溴、硝基、氰基、甲砜基或羥基。

在本發(fā)明的一種實施方案中，本發(fā)明提供的一種氮雜色胺酮衍生物作為ido1和/或tdo抑制劑的用途，所述的衍生物如通式(i)所示，其中，g為n-y-z，其中，y為-o-，而z為氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c2-c4烯烴基或取代的c2-c4烯烴基、未取代的c2-c4炔烴基或取代的c2-c4炔烴基、羧甲基(-ch2c(＝o)oh)、磺?；?-s(＝o)2oh)、或磷酰基(-p(＝o)(oh)2)；或者，y為-n(h)-，而z為氫、-c(＝s)-n(r8)(r9)、或-c(＝o)-n(r8)(r9)、或-c(＝n)-n(r8)(r9)；a為n、而b為-ch，或者b為n、而a為-ch。

在本發(fā)明的一種實施方案中，本發(fā)明提供的一種氮雜色胺酮衍生物作為ido1和/或tdo抑制劑的用途，所述的衍生物如通式(i)所示，其中，g為n-y-z，其中，y為-o-，而z為氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c2-c4烯烴基或取代的c2-c4烯烴基、未取代的c2-c4炔烴基或取代的c2-c4炔烴基、羧甲基(-ch2c(＝o)oh)、磺?；?-s(＝o)2oh)、或磷?；?-p(＝o)(oh)2)；或者，y為-n(h)-，而z為氫、-c(＝s)-n(r8)(r9)、或-c(＝o)-n(r8)(r9)、或-c(＝n)-n(r8)(r9)；a為n、而b為-ch，或者b為n、而a為-ch；而且，e為n。

在本發(fā)明的一種實施方案中，本發(fā)明提供的一種氮雜色胺酮衍生物作為ido1和/或tdo抑制劑的用途，所述的衍生物如通式(i)所示，其中，g為n-y-z，其中，y為-o-，而z為氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c2-c4烯烴基或取代的c2-c4烯烴基、未取代的c2-c4炔烴基或取代的c2-c4炔烴基、羧甲基(-ch2c(＝o)oh)、磺?；?-s(＝o)2oh)、或磷?；?-p(＝o)(oh)2)；或者，y為-n(h)-，而z為氫、-c(＝s)-n(r8)(r9)、或-c(＝o)-n(r8)(r9)、或-c(＝n)-n(r8)(r9)；a為n、而b為-ch，或者b為n、而a為-ch；

而且，e為-c-r6；

r1、r2、r4至r7各自獨立地選自氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c1-c4烷氧基或取代的c1-c4烷氧基、鹵素、硝基、氰基、甲砜基或羥基。

在本發(fā)明的一種實施方案中，本發(fā)明提供的一種氮雜色胺酮衍生物作為ido1和/或tdo抑制劑的用途，所述的衍生物如通式(i)所示，其中，g為n-y-z，其中，y為-o-，而z為氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c2-c4烯烴基或取代的c2-c4烯烴基、未取代的c2-c4炔烴基或取代的c2-c4炔烴基、羧甲基(-ch2c(＝o)oh)、磺?；?-s(＝o)2oh)、或磷?；?-p(＝o)(oh)2)；或者，y為-n(h)-，而z為氫、-c(＝s)-n(r8)(r9)、或-c(＝o)-n(r8)(r9)、或-c(＝n)-n(r8)(r9)；a為n、而b為-ch，或者b為n、而a為-ch；

而且，e為-c-r6；

r1和r2為氫，r4至r7各自獨立地選自氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c1-c4烷氧基或取代的c1-c4烷氧基、鹵素、硝基、氰基、甲砜基或羥基。

在本發(fā)明的一種實施方案中，本發(fā)明提供的一種氮雜色胺酮衍生物作為ido1和/或tdo抑制劑的用途，所述的衍生物如通式(i)所示，其中，g為n-y-z，其中，y為-o-，而z為氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c2-c4烯烴基或取代的c2-c4烯烴基、未取代的c2-c4炔烴基或取代的c2-c4炔烴基、羧甲基(-ch2c(＝o)oh)、磺?；?-s(＝o)2oh)、或磷?；?-p(＝o)(oh)2)；或者，y為-n(h)-，而z為氫、-c(＝s)-n(r8)(r9)、或-c(＝o)-n(r8)(r9)、或-c(＝n)-n(r8)(r9)；a為n、而b為-ch，或者b為n、而a為-ch；

而且，e為-c-r6；

r1和r2為氫，r4至r7各自獨立地選自氫、甲基、三氟甲氧基、甲氧基、氟、氯、溴、硝基、氰基、甲砜基或羥基。

在本發(fā)明特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供的一種上述通式(i)化合物的用途，其選自下列化合物：

吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮(化合物cy-1-1)；

9-氟吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮(化合物cy-1-2)；

9-(三氟甲氧基)吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮(化合物cy-1-3)；

9-硝基吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮(化合物cy-1-4)；

9-氯吡啶并[2',3'；4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮(化合物cy-1-5)；

9-甲氧基吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮(化合物cy-1-6)；

9-甲基吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮(化合物cy-1-7)；

吡啶并[3',4':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮(化合物cy-1-8)；

9-甲氧基吡啶并[3',4':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮(化合物cy-1-9)；

9-氯吡啶并[3',4':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮(化合物cy-1-10)；

9-氟吡啶并[3',4':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮(化合物cy-1-11)；

11-(羥基亞氨基)吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-12)；

9-氯-11-(肟基)吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-13)；

11-(羥基亞氨基)-9-甲基吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-14)；

11-(羥基亞氨基)-9-甲氧基吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-15)；

11-((2-(二甲基氨基)乙氧基)亞氨基)吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-16)；

11-((2-(二甲基氨基)乙氧基)亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-17)；

9-氯11-((2-(二甲基氨基)乙氧基)亞氨基)吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(1h)-酮(化合物cy-1-18)；

11-((2-(二甲基氨基)乙氧基)亞氨基)-9-氟吡啶[2'，3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-19)；

9-氯11-((3-(二甲基氨基)丙基)亞氨基)吡啶并[2'，3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-20)；

11-(2-羥基乙氧基)亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-21)；

n,n-二甲基-2-(9-硝基-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-11(5h)-亞基)肼硫代甲酰胺(化合物cy-1-22)；

2-(9-硝基-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼甲脒(化合物cy-1-23)；

(((9-硝基-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-11(5h)-亞基)氨基)氧基)磺酸(化合物cy-1-24)；

11-(甲氧基亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-25)；

11-(乙氧基亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3:4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-26)；

11-((烯丙氧基)亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-27)；

11-((羧基氧亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-28)；

2-(9-硝基-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚11(5h)-亞基)肼硫代甲酰胺(化合物cy-1-29)；

2-(9-甲氧基-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-11(5h)-亞基)-n，n-二甲基肼硫代甲酰胺(化合物cy-1-30)；

吡啶并[2,3-d]吡啶并[3'，4':4,5]吡咯并[1,2-a]嘧啶-5,11-二酮(化合物cy-1-31)；

2-(9-氯-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼甲脒(化合物ldb-1-1)；

2-(9-氯-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼硫代甲酰胺化合物(ldb-1-2)；

2-(9-(三氟甲氧基)-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼甲脒(化合物ldb-1-3)；

2-(9-(三氟甲氧基)-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼硫代甲酰胺(化合物ldb-1-4)；

2-(9-氯-5-氧代吡啶并[3',4':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼甲脒(化合物ldb-1-5)；和

2-(9-氯-5-氧代吡啶并[3',4':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼硫代甲酰胺(化合物ldb-1-6)。

本發(fā)明提供了式(i)化合物在治療具有ido1和/或tdo介導的色氨酸代謝的病理學特征的疾病中的應用，這樣的疾病包括但不限于腫瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病、阿爾茨海默病、抑郁癥、焦慮癥。人每次用藥的參考劑量為0.1-20mg/kg體重，使用方法為口服或注射。

第二方面，本發(fā)明提供了一種作為ido1和/或tdo抑制劑的新型氮雜色胺酮衍生物，如式(ii)所示，或其幾何異構體、互變異構體、同位素標記物、水合物、溶劑化物、代謝產物、藥學上可接受的鹽或前藥：

這里，式(ii)中

a和b其中一個為n，而另一個為c-r3；

e為n或-c-r6；

y為-o-，而z為氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c2-c4烯烴基或取代的c2-c4烯烴基、未取代的c2-c4炔烴基或取代的c2-c4炔烴基、或羧甲基(-ch2c(＝o)oh)、磺?；?-s(＝o)2oh)、或磷?；?-p(＝o)(oh)2)；或者，y為-n(h)-，而z為氫，-c(＝s)-n(r8)(r9)、或-c(＝o)-n(r8)(r9)、或-c(＝n)-n(r8)(r9)；

r1至r7各自獨立地選自氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c1-c4烷氧基或取代的c1-c4烷氧基、鹵素、硝基、氰基、甲砜基或羥基；

r8和r9各自獨立地選自氫、或者未取代的c1-c4烷烴基。

在本發(fā)明的一種實施方案中，本發(fā)明提供的一種新型氮雜色胺酮衍生物，如通式(ii)所示，其中，a為n、而b為-ch，或者b為n、而a為-ch。

在本發(fā)明的一種實施方案中，本發(fā)明提供的一種新型氮雜色胺酮衍生物，如通式(ii)所示，其中，a為n、而b為-ch，或者b為n、而a為-ch；而且，e為n。

在本發(fā)明的一種實施方案中，本發(fā)明提供的一種新型氮雜色胺酮衍生物，如通式(ii)所示，其中，a為n、而b為-ch，或者b為n、而a為-ch；

而且，e為-c-r6；

r1、r2、r4至r7各自獨立地選自氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c1-c4烷氧基或取代的c1-c4烷氧基、鹵素、硝基、氰基、甲砜基或羥基。

在本發(fā)明的一種實施方案中，本發(fā)明提供的一種新型氮雜色胺酮衍生物，如通式(ii)所示，其中，a為n、而b為-ch，或者b為n、而a為-ch；

而且，e為-c-r6；

r1和r2為氫，r4至r7各自獨立地選自氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c1-c4烷氧基或取代的c1-c4烷氧基、鹵素、硝基、氰基、甲砜基或羥基。

在本發(fā)明的一種實施方案中，本發(fā)明提供的一種新型氮雜色胺酮衍生物，如通式(i)所示，其中，a為n、而b為-ch，或者b為n、而a為-ch；

而且，e為-c-r6；

r1和r2為氫，r4至r7各自獨立地選自氫、甲基、三氟甲氧基、甲氧基、氟、氯、溴、硝基、氰基、甲砜基或羥基；

y為-o-，而z為氫、未取代的c1-c4烷烴基或取代的c1-c4烷烴基、未取代的c2-c4烯烴基或取代的c2-c4烯烴基、未取代的c2-c4炔烴基或取代的c2-c4炔烴基、或羧甲基(-ch2c(＝o)oh)、磺?；?-s(＝o)2oh)、或磷?；?-p(＝o)(oh)2)；或者，y為-n(h)-，而z為氫、-c(＝s)-n(r8)(r9)、或-c(＝o)-n(r8)(r9)、或-c(＝n)-n(r8)(r9)；

r8和r9各自獨立地選自氫、或者未取代的c1-c4烷烴基。

在本發(fā)明特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供的一種新型氮雜色胺酮衍生物，其選自下列化合物：

11-(羥基亞氨基)吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-12)；

9-氯-11-(肟基)吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-13)；

11-(羥基亞氨基)-9-甲基吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-14)；

11-(羥基亞氨基)-9-甲氧基吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-15)；

11-((2-(二甲基氨基)乙氧基)亞氨基)吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-16)；

11-((2-(二甲基氨基)乙氧基)亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-17)；

9-氯11-((2-(二甲基氨基)乙氧基)亞氨基)吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(1h)-酮(化合物cy-1-18)；

11-((2-(二甲基氨基)乙氧基)亞氨基)-9-氟吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-19)；

9-氯11-((3-(二甲基氨基)丙基)亞氨基)吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-20)；

11-(2-羥基乙氧基)亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-21)；

n,n-二甲基-2-(9-硝基-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-11(5h)-亞基)肼硫代甲酰胺(化合物cy-1-22)；

2-(9-硝基-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼甲脒(化合物cy-1-23)；

(((9-硝基-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-11(5h)-亞基)氨基)氧基)磺酸(化合物cy-1-24)；

11-(甲氧基亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-25)；

11-(乙氧基亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3:4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-26)；

11-((烯丙氧基)亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-27)；

11-((羧基氧亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮(化合物cy-1-28)；

2-(9-硝基-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼硫代甲酰胺(化合物cy-1-29)；

2-(9-甲氧基-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-11(5h)-亞基)-n，n-二甲基肼硫代甲酰胺(化合物cy-1-30)；

吡啶并[2,3-d]吡啶并[3'，4'：4,5]吡咯并[1,2-a]嘧啶-5,11-二酮(化合物cy-1-31)；

2-(9-氯-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼甲脒(化合物ldb-1-1)；

2-(9-氯-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼硫代甲酰胺化合物(ldb-1-2)；

2-(9-(三氟甲氧基)-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼甲脒(化合物ldb-1-3)；

2-(9-(三氟甲氧基)-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼硫代甲酰胺(化合物ldb-1-4)；

2-(9-氯-5-氧代吡啶并[3',4':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼甲脒(化合物ldb-1-5)；和

2-(9-氯-5-氧代吡啶并[3',4':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼硫代甲酰胺(化合物ldb-1-6)。

第三方面，本發(fā)明提供了一種制備如通式(ii)所示的氮雜色胺酮類似物的方法，包括如下步驟：

式(iii)化合物與式(iv)化合物反應，得到式(ii’)化合物，式(ii’)化合物進一步再與式(v)化合物反應，得到式(ii)化合物

這里，式(iii)、(iv)、(v)、(ii’)化合物中涉及的取代基a、b、e、y、z以及r1、r2、r4、r5和r7的定義與其在前述如式(ii)化合物中的定義相同。

本發(fā)明提供的制備如通式(ii)所示氮雜色胺酮類似物的方法，具體說可以參照下述方法：

將靛紅衍生物iv(0.9mmol)和1,8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯(英文簡稱dbu,2.0mmol)溶于dmf(3ml)中，室溫攪拌十分鐘，得溶液(1)。將2-氨基煙酸類似物iii(1mmol)、n-甲基嗎啡啉(1.8mmol)、hbtu(1.0mmol)溶于dmf中(3ml)，得溶液(2)。將溶液(1)滴加入溶液(2)中，室溫攪拌20h，tlc監(jiān)測，待反應完全，蒸干溶劑，柱層析分離(二氯甲烷—甲醇混合溶劑洗脫)得到式(ii’)化合物，為固體。

將上述反應得到的固體與含氨基的化合物v或其鹽酸鹽(1mmol)溶于甲醇中(10ml)，加熱回流過夜，待反應完全，濃縮后析出固體可得通式ii化合物；或蒸干溶劑，柱層析分離(二氯甲烷—甲醇混合洗脫溶劑)得到產品。

第四方面，本發(fā)明提供了一種包含上述新型色胺酮類似物的藥用組合物。該藥用組合物包括藥理學上有效量的式(ii)化合物和藥學上可接受的輔料。對于本領域技術人員而言，這些輔料都是已知的，例如，生理鹽水，明膠，阿拉伯樹膠，乳糖，微晶纖維素，淀粉，改性淀粉，纖維素，改性纖維素，羥乙酸鈉，磷酸氫鈣，硬脂酸鎂，滑石，膠體二氧化硅等。此外，這些組合物還可進一步地包含：穩(wěn)定劑，潤濕劑，乳化劑，甜味劑，香味劑，緩沖劑等。

本發(fā)明提供的包含上述色胺酮類似物的藥用組合物，根據需要，能夠配制成用于口服給藥的固體或液體形式，如片劑、丸劑、口服液等；用于非腸道給藥的無菌溶液、懸浮液或乳液形式，噴霧劑等。

與復旦大學楊青課題組的化合物(5a、5b、5c、5i)相比較(見下表1)，本發(fā)明將氮原子引入色胺酮結構的特定位置，得到的新衍生物對酶ido1的抑制活性具有出人意料的提高作用，最高可超過100倍。而且本發(fā)明中的化合物還對tdo具有顯著的抑制活性。

表1.ido-1的抑制活性(ic50,μm)對比

注：++++＝0.001-0.10μm；+++＝0.10-1.0μm；++＝1.1-10μm；+>10μm.

具體實施方式

以下通過實施例來示例性說明本發(fā)明的實施方案，對于本領域的普通技術人員而言，在本發(fā)明的教導下，根據現(xiàn)有技術，對本發(fā)明實施方案進行的改進，仍屬于本發(fā)明的保護范圍內。

反應過程中使用的二氯甲烷、甲醇、n,n-二甲基甲酰胺、等溶劑均為市售分析純試劑并按文獻方法干燥重蒸處理；其它試劑和原料為國產分析純或化學純試劑。

熔點用xt5b或x-4型精密顯微熔點儀(控溫型)測定(北京福凱儀器有限公司)，溫度未校正。核磁共振氫譜(¹hnmr,¹³cnmr)用brukernmrsystem400mhz超導核磁共振譜儀測定，tms為內標。

實施例1

化合物cy-1-1：吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮

將靛紅(0.9mmol)和dbu(2mmol)溶于dmf中(3ml)，室溫攪拌十分鐘。將2-氨基煙酸(1mmol)、n-甲基嗎啡啉(1.8mmol)、hbtu(1mmol)溶于dmf中(3ml)，將反應好的靛紅與dbu的溶液滴加入該溶液中，室溫攪拌20h，tlc監(jiān)測，待反應完全，蒸干溶劑，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇＝80:1)得到橙黃色固體，產率59％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.08(dd,j＝4.6,2.0hz,1h),8.71(dd,j＝7.9,2.0hz,1h),8.45(d,j＝8.0hz,1h),7.90(t,j＝7.9,4.4hz,2h),7.75(dd,j＝7.9,4.6hz,1h),7.51(t,j＝7.6,0.7hz,1h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ182.28,158.08,157.20,156.11,147.63,145.70,137.90,136.30,127.23,124.92,124.70,122.14,119.17,116.89。

實施例2

化合物cy-1-2：9-氟吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮

采用5-氟靛紅代替靛紅，制備方法同實施例1的cy-1-1。產物為黃色固體，產率51％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.07(s,1h),8.69(d,j＝6.4hz,1h),8.44(d,j＝4.7hz,1h),7.83(d,j＝4.5hz,1h),7.75(d,j＝7.5hz,2h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ181.85,160.13,158.53,157.46,156.72,142.41,136.83,125.34,124.62,124.34,119.54,119.23,112.48,112.18。

實施例3

化合物cy-1-3：9-(三氟甲氧基)吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮

采用5-三氟甲氧基靛紅代替靛紅，制備方法同實施例1的cy-1-1。產物為淡黃色固體，產率29％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.09(d,j＝3.7hz,1h),8.71(d,j＝7.7hz,1h),8.54(d,j＝8.7hz,1h),7.97(s,1h),7.92(d,j＝8.7hz,1h),7.77(dd,j＝7.7,4.6hz,1h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ181.56,158.48,157.55,156.84,148.22,146.96,144.61,136.89,130.69,125.40,124.39,121.75,119.46,119.19,119.06,118.38。

實施例4

化合物cy-1-4：9-硝基吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮

采用5-硝基靛紅代替靛紅，制備方法同實施例1的cy-1-1。產物為棕色固體，產率42％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.12(d,j＝3.9hz,1h),8.75(d,j＝8.0hz,2h),8.69-8.55(m,2h),7.88-7.70(m,1h)。

實施例5

化合物cy-1-5：9-氯吡啶并[2',3'；4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮

采用5-氯靛紅代替靛紅，制備方法同實施例1的cy-1-1。產物為橙黃色固體，產率37％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.09(dd,j＝4.6,2.0hz,1h),8.72(dd,j＝7.9,2.0hz,1h),8.44(d,j＝8.6hz,1h),8.02(d,j＝2.2hz,1h),7.95(dd,j＝8.6,2.3hz,1h),7.82-7.70(m,1h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ181.11,157.96,157.11,156.28,147.50,144.11,136.98,136.36,131.56,124.86,124.51,123.89,119.02,118.46。

實施例6

化合物cy-1-6：9-甲氧基吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮

采用5-甲氧基靛紅代替靛紅，制備方法同實施例1的cy-1-1。產物為黃色固體，產率61％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.06(dd,j＝4.6,2.0hz,1h),8.69(dd,j＝7.9,1.9hz,1h),8.43-8.28(m,1h),7.74(dd,j＝7.9,4.6hz,1h),7.43(dd,j＝7.2,2.6hz,2h),3.88(s,3h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ182.17,158.21,157.63,157.16,155.94,147.93,139.60,136.15,124.65,123.79,123.31,119.27,118.10,108.76,56.07。

實施例7

化合物cy-1-7：9-甲基吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮

采用5-甲基靛紅代替靛紅，制備方法同實施例1的cy-1-1。產物為黃色固體，產率32％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.06(d,j＝4.2hz,1h),8.68(d,j＝7.8hz,1h),8.29(d,j＝8.1hz,1h),7.73(dd,j＝7.9,4.2hz,2h),7.68(d,j＝8.1hz,1h),2.41(s,3h)。

實施例8

化合物cy-1-8：吡啶并[3',4':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮

采用3-氨基異煙酸代替2-氨基煙酸，制備方法同實施例1的cy-1-1。黃色固體，產率43％。¹hnmr(400mhz,cd3cood)δ9.74(s,1h),9.01(d,j＝15.9hz,2h),8.55(d,j＝8.0hz,1h),8.00(d,j＝7.4hz,1h),7.91(t,j＝7.6hz,1h),7.57(t,j＝7.5hz,1h)。¹³cnmr(101mhz,cd3cood)δ184.26,156.83,151.80,148.25,148.12,146.82,142.87,142.20,139.53,132.11,129.29,128.30,123.65,120.90。

實施例9

化合物cy-1-9：9-甲氧基吡啶并[3',4':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮

采用3-氨基異煙酸代替2-氨基煙酸，5-甲氧基靛紅代替靛紅，制備方法同實施例1的cy-1-1。產物為黃色固體，產率33％。¹hnmr(400mhz,cd3cood)δ10.06-9.45(m,1h),9.16-8.73(m,2h),8.39(t,j＝21.2hz,1h),7.72-7.25(m,2h)。¹³cnmr(101mhz,cd3cood)δ182.06,161.25,154.76,150.46,150.06,146.16,144.42,140.05,137.18,126.85,126.32,122.96,120.36,110.90,55.62。

實施例10

化合物cy-1-10：9-氯吡啶并[3',4':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮

采用3-氨基異煙酸代替2-氨基煙酸，5-氯靛紅代替靛紅，制備方法同實施例1的cy-1-1。產物為黃色固體，產率63％。¹hnmr(400mhz,cd3cood)δ9.51(s,1h),8.82(d,j＝6.0hz,1h),8.76(d,j＝6.0hz,1h),8.29(d,j＝8.6hz,1h),7.72(s,1h),7.69-7.52(m,1h)。¹³cnmr(101mhz,cd3cood)δ181.09,155.04,149.60,146.28,144.69,144.09,140.44,140.08,137.57,137.19,126.88,126.37,122.90,119.78。

實施例11

化合物cy-1-11：9-氟吡啶并[3',4':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-5,11-二酮

采用3-氨基異煙酸代替2-氨基煙酸，5-氟靛紅代替靛紅，制備方法同實施例1的cy-1-1。產物為黃色固體，產率67％。¹hnmr(400mhz,cd3cood)δ9.68(s,1h),8.97(dd,j＝19.7,6.1hz,2h),8.54(dd,j＝8.8,3.7hz,1h),7.60(dd,j＝6.2,2.5hz,1h),7.54(td,j＝8.6,2.6hz,1h)。¹³cnmr(101mhz,cd3cood)δ182.67,156.28,151.28,147.40,146.11,143.84,141.71,139.01,128.71,128.39,127.75,124.91,124.83,122.34,122.26,115.34。

實施例12

化合物cy-1-12：11-(羥基亞氨基)吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮

將化合物cy-1-1(1mmol)與鹽酸羥胺(1mmol)溶于甲醇中(10ml)，加入吡啶(1mmol)，加熱回流過夜，待反應完全，蒸干溶劑，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇＝80:1)得到橙黃色固體，產率69％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ14.01(s,1h),9.02(m,1h),8.71(d,j＝7.8hz,1h),8.45(d,j＝8.0hz,1h),8.35(d,j＝7.6hz,1h),7.71-7.60(m,2h),7.47(t,j＝7.6hz,1h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ159.07,157.11,155.34,152.31,144.70,139.30,137.46,132.60,127.75,127.54,123.31,119.19,117.90,116.60。

實施例13

化合物cy-1-13：9-氯-11-(肟基)吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮

采用化合物cy-1-5代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為黃色固體，產率56％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ14.16(s,1h),9.03(s,1h),8.63(d,j＝7.7hz,1h),8.37(t,j＝8.0hz,h),8.32(s,1h),7.79-7.48(m,2h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ159.17,157.63,156.32,151.44,143.93,137.99,136.47,132.11,131.24,126.98,123.36,120.64,118.03,117.35。

實施例14

化合物cy-1-14：11-(羥基亞氨基)-9-甲基吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮

采用化合物cy-1-7代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為黃色固體，產率71％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.31(s,1h),8.99(s,1h),8.61(d,j＝7.6hz,1h),8.30(d,j＝8.0hz,1h),8.15(s,1h),7.61(d,j＝4.8hz,1h),7.41(d,j＝7.9hz,1h),2.38(s,4h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ159.03,157.59,156.13,151.80,144.68,137.23,136.89,136.33,132.84,128.06,123.13,119.21,117.57,116.24,21.04。

實施例15

化合物cy-1-15：11-(羥基亞氨基)-9-甲氧基吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮

采用化合物cy-1-6代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為黃色固體，產率48％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.92(s,1h),9.52-8.78(m,1h),8.61(d,j＝7.8hz,1h),8.33(d,j＝8.8hz,1h),7.84(s,1h),7.60(dd,j＝7.7,4.6hz,1h),7.17(d,j＝8.7hz,1h),3.82(s,3h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ158.73,158.24,157.62,156.05,151.66,144.65,136.36,132.99,123.07,120.15,117.62,117.56,117.48,112.81,55.99。

實施例16

化合物cy-1-16：11-((2-(二甲基氨基)乙氧基)亞氨基)吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮

采用化合物n,n-二甲基-2-氨氧基乙胺鹽酸鹽代替鹽酸羥胺，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為黃色固體。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.19-8.92(m,1h),8.83-8.60(m,1h),8.45(m,1h),8.28(d,j＝7.6hz,1h),7.59(m,3h),4.78-4.48(m,2h),2.97-2.66(m,2h),2.33(s,6h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ159.21,157.63,156.27,151.01,144.78,140.08,136.60,133.43,128.28,127.21,123.56,118.82,117.78,116.62,75.05,57.54,45.78。

實施例17

化合物cy-1-17：11-((2-(二甲基氨基)乙氧基)亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3'：4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮

采用化合物n,n-二甲基-2-氨氧基乙胺鹽酸鹽代替鹽酸羥胺，cy-1-4代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為黃色固體，產率32％。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),9.09-9.04(m,1h),8.83-8.65(m,2h),8.59-8.41(m,1h),7.55(dd,j＝7.3,4.9hz,1h),4.79(t,j＝5.5hz,2h),2.98(t,j＝10.9,10.0hz,2h),2.36(s,6h)。

實施例18

化合物cy-1-18：9-氯11-((2-(二甲基氨基)乙氧基)亞氨基)吡啶并[2',3'：4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(1h)-酮

采用化合物n,n-二甲基-2-氨氧基乙胺鹽酸鹽代替鹽酸羥胺，cy-1-5代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為黃色固體，產率41％。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.03(s,1h),8.70(s,1h),8.58-8.46(m,1h),8.26(s,1h),7.59-7.43(m,2h),4.65(m,2h),2.89(s,2h),2.31(s,6h)。¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ158.93,157.47,156.12,150.59,143.27,137.66,136.38,132.73,132.52,128.09,123.01,119.98,117.87,117.36,57.90,45.77,29.80。

實施例19

化合物cy-1-19：11-((2-(二甲基氨基)乙氧基)亞氨基)-9-氟吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮

采用化合物n,n-二甲基-2-氨氧基乙胺鹽酸鹽代替鹽酸羥胺，cy-1-2代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為黃色固體，產率43％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.06-8.98(m,1h),8.71-8.59(m,1h),8.52-8.36(m,1h),8.15(dd,j＝8.2,2.5hz,1h),7.76–7.63(m,2h),7.55(ddd,j＝27.5,9.1,2.6hz,1h),4.92(s,2h),3.66(s,2h),2.93(s,6h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ159.04,156.49,150.83,136.85,124.62,123.90,120.31,120.01,119.20,118.66,118.16,117.88,115.56,108.50,71.81,55.72,43.10。

實施例20

化合物cy-1-20：9-氯11-((3-(二甲基氨基)丙基)亞氨基)吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮

采用化合物n,n-二甲基-2-氨氧基丙胺鹽酸鹽代替鹽酸羥胺，cy-1-5代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為黃色固體，產率49％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.11-8.92(m,1h),8.60(dd,j＝7.9,1.7hz,1h),8.35(d,j＝8.6hz,1h),8.11(d,j＝1.7hz,1h),7.72(dd,j＝8.6,2.1hz,1h),7.65(dd,j＝7.8,4.6hz,1h),4.66(t,j＝5.9hz,2h),3.32-3.19(m,3h),2.80(s,6h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ158.41,156.85,156.04,150.09,143.62,138.01,136.10,132.73,130.96,127.02,123.36,119.63,117.58,117.16,74.61,53.63,42.35,24.24。

實施例21

化合物cy-1-21：11-(2-羥基乙氧基)亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮

采用化合物2-氨氧基乙醇代替鹽酸羥胺，cy-1-4代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為淡黃色固體，產率48％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.02(s,1h),8.89(s,1h),8.72-8.41(m,3h),7.66(s,1h),4.99(m,1h),4.65(s,2h),3.88(s,2h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ159.29,157.29,156.73,150.96,145.79,143.81,143.47,136.71,129.26,124.04,122.71,119.41,117.67,117.12,80.33,60.05。

實施例22

化合物cy-1-22：n,n-二甲基-2-(9-硝基-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-11(5h)-亞基)肼硫代甲酰胺

采用化合物n,n-二甲基氨基硫脲代替鹽酸羥胺，cy-1-4代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為紫色固體，產率39％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.14-8.71(m,2h),8.27(m,3h),7.48(m,1h),3.06(m,6h)。

實施例23

化合物cy-1-23：2-(9-硝基-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼甲脒

采用化合物氨基胍代替鹽酸羥胺，cy-1-4代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為橙色固體，產率21％。¹hnmr(400mhz,cd3cood)δ9.31(d,j＝7.9hz,1h),9.02(d,j＝5.7hz,1h),8.72(d,j＝1.7hz,1h),8.59(s,1h),8.52(d,j＝8.9hz,1h),8.44-8.34(m,1h),8.01(d,j＝1.7hz,1h)。

實施例24

化合物cy-1-24：(((9-硝基-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-11(5h)-亞基)氨基)氧基)磺酸

采用化合物氨基磺酸代替鹽酸羥胺，cy-1-4代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為白色固體，產率47％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ14.43(s,1h),9.03(dd,j＝4.4,1.7hz,1h),8.99(d,j＝2.3hz,1h),8.70-8.61(m,2h),8.56(dd,j＝8.9,2.4hz,1h),7.66(dd,j＝7.9,4.6hz,1h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ159.44,157.55,156.62,151.63,145.77,143.55,143.36,136.69,128.47,123.66,122.19,119.53,117.43,117.05。

實施例25

化合物cy-1-25：11-(甲氧基亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮

采用化合物o-甲羥基胺代替鹽酸羥胺，cy-1-4代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為淡黃色固體，產率28％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.03(dd,j＝4.4,1.8hz,1h),8.82(s,1h),8.66(dd,j＝7.8,1.6hz,1h),8.63-8.54(m,2h),7.67(dd,j＝7.9,4.6hz,1h),4.42(s,3h)。

實施例26

化合物cy-1-26：11-(乙氧基亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3:4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮

采用化合物o-乙基羥胺代替鹽酸羥胺，cy-1-4代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為淡黃色固體，產率57％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.07-9.02(m,1h),8.85(s,1h),8.67(t,j＝7.0hz,1h),8.65(m,2h),7.68(dd,j＝7.8,4.6hz,1h),4.68(q,j＝7.0hz,2h),1.50(t,j＝7.1hz,3h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ159.22,157.30,156.68,150.99,145.79,143.92,143.31,136.70,129.23,123.92,122.39,119.31,117.60,117.17,74.28,14.65。

實施例27

化合物cy-1-27：11-((烯丙氧基)亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3'：4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮

采用化合物o-烯丙基羥胺代替鹽酸羥胺，cy-1-4代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為淡黃色固體，產率32％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.08-9.03(m,1h),8.90(d,j＝1.9hz,1h),8.74-8.59(m,3h),7.69(dd,j＝7.8,4.6hz,1h),6.22(m,1h),5.55(d,j＝17.2hz,1h),5.44(d,j＝10.7hz,1h),5.18(d,j＝5.6hz,2h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ159.34,157.27,156.77,151.03,145.85,144.18,143.96,136.47,133.64,129.20,123.99,122.44,120.07,119.54,117.67,117.04,78.70。

實施例28

化合物cy-1-28：11-((羧基甲氧亞氨基)-9-硝基吡啶[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚-5(11h)-酮

采用3-氨氧基乙酸代替鹽酸羥胺，cy-1-4代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為白色固體，產率33％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.11-8.92(m,2h),8.63(m,3h),7.74-7.62(m,1h),3.79(s,2h)。¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ170.31,169.20,159.29,157.45,156.73,150.82,145.84,144.76,144.54,144.30,144.27,136.76,129.83,129.69,124.11,123.13,119.30,117.89,117.29,73.79。

實施例29

化合物cy-1-29：2-(9-硝基-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼硫代甲酰胺

采用氨基硫脲代替鹽酸羥胺，cy-1-4代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為紅色固體，產率29％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.19-8.98(m,1h),8.84-8.64(m,2h),8.63-8.47(m,2h),7.89-7.65(m,1h),4.56(m,1h)。

實施例30

化合物cy-1-30：2-(9-甲氧基-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-a]吲哚11(5h)-亞基)-n，n-二甲基肼硫代甲酰胺

采用n，n-二甲基氨基硫脲代替鹽酸羥胺，cy-1-6代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為紅色固體，產率52％。¹hnmr(400mhz,cd3cood)δ9.22(t,j＝10.8hz,1h),8.99–8.72(m,1h),8.21–8.03(m,1h),7.99–7.74(m,1h),7.26(m,1h),7.16–6.83(m,1h),4.00–2.95(m,9h)。

實施例31

化合物cy-1-31：吡啶并[2,3-d]吡啶并[3',4':4,5]吡咯并[1,2-a]嘧啶-5,11-二酮

用5-氮雜靛紅替換靛紅，制備方法同實施例1的cy-1-1，產物為黃色固體，產率41％。hr-esi-ms:c13h6n4o2理論值：251.05032[m+h]⁺,實測值：251.04989[m+h]⁺。

實施例32

化合物ldb-1-1：2-(9-氯-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼甲脒

采用氨基胍代替鹽酸羥胺，cy-1-5代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為橙黃色固體，產率43％。hr-esi-ms:c15h10cln7o理論值：340.10[m+h]⁺，實測值：340.10[m+h]⁺。

實施例33

化合物ldb-1-2：2-(9-氯-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼硫代甲酰胺

采用氨基硫脲代替鹽酸羥胺，cy-1-5代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為黃色固體，產率65％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.85(s,1h),9.30(s,1h),9.07(s,2h),8.73(s,1h),8.39(s,1h),8.23(s,1h),7.73(s,1h),7.70(s,1h)。

實施例34

化合物ldb-1-3：2-(9-(三氟甲氧基)-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼甲脒

采用氨基胍代替鹽酸羥胺，cy-1-3代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為橙黃色固體，產率：49％。hr-esi-ms:c16h10f3n7o2理論值：390.10[m+h]⁺,實測值：390.10[m+h]⁺。

實施例35

化合物ldb-1-4：2-(9-(三氟甲氧基)-5-氧代吡啶并[2',3':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼硫代甲酰胺

采用氨基硫脲代替鹽酸羥胺，cy-1-3代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為黃色固體，產率56％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.87(s,1h),9.33(s,1h),9.15–9.04(m,2h),8.74(dd,j＝7.9,2.2hz,1h),8.46(d,j＝8.8hz,1h),8.16(s,1h),7.74(dd,j＝7.7,4.9hz,1h),7.64(d,j＝8.9hz,1h)。¹³cnmr(101mhz,dmso)δ114.07,117.39,117.74,123.67,123.85,125.39,129.35,136.30,137.56,146.54,148.03,156.03,156.26,158.14,178.89。

實施例36

化合物ldb-1-5：2-(9-氯-5-氧代吡啶并[3',4':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼甲脒

采用氨基胍代替鹽酸羥胺，cy-1-10代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為橙色固體，產率52％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.84(s,1h),9.73(s,1h),9.34(s,1h),8.85(d,j＝5.0hz,1h),8.60(s,2h),8.34(d,j＝8.6hz,1h),8.25(s,1h),8.16(d,j＝4.9hz,1h),7.72(d,j＝8.6hz,1h)。¹³cnmr(101mhz,dmso)δ117.95,118.84,121.70,124.73,127.09,131.34,131.51,134.54,138.00,140.56,146.18,148.43,151.37,155.71,156.76。

實施例37

化合物ldb-1-6：2-(9-氯-5-氧代吡啶并[3',4':4,5]嘧啶并[1,2-α]吲哚-11(5h)-亞基)肼硫代甲酰胺

采用氨基硫脲代替鹽酸羥胺，cy-1-10代替cy-1-1，制備方法同實施例12的cy-1-12。產物為黃色固體，產率47％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.54(s,1h),9.26(s,1h),9.10(d,j＝2.4hz,1h),8.99(s,1h),8.82(d,j＝4.8hz,1h),8.27(d,j＝8.5hz,1h),8.12(s,2h),7.59(d,j＝8.5hz,1h)。¹³cnmr(101mhz,dmso)δ117.80,118.99,120.96,125.20,126.76,128.62,130.46,131.38,137.20,140.46,146.46,148.14,150.19,156.67,178.72。

生物活性試驗實施例

吲哚胺-2,3-雙加氧酶1抑制活性

實驗方法：ido-1可以將色氨酸的吲哚環(huán)氧化斷裂生成n-甲酰化犬尿酸。參照文獻(eddyw.yue,etal.j.med.chem.2009,52,7364-7367)方法，室溫條件下向50mm磷酸鉀緩沖液中依次加入20nmido-1,2mmd-色氨酸，20mm抗壞血酸，3.5μm甲基藍和0.2mg/ml抗氧化酶。由于生成n-甲酰化犬尿酸，反應速率通過溶液在321nm不斷升高的吸收度來記錄。運用prismgraphpad軟件計算ic50值。美國incyte制藥公司開發(fā)的化合物incb024360作為陽性對照藥，實驗結果如下：

表2.化合物對ido-1的抑制活性(ic50,μm)

注：++++＝0.001—0.10μm；+++＝0.11—1.0μm；++＝1.1—10μm.

色氨酸-2,3-雙加氧酶抑制活性

實驗方法：tdo可以將色氨酸的吲哚環(huán)氧化斷裂生成n-甲?；蛩?。參照文獻(eddyw.yue,etal.j.med.chem.2009,52,7364-7367)方法，室溫條件下依次加入含有50nmtdo的檢測緩沖液，10μm抑制劑，200μm色氨酸等。由于生成n-甲?；蛩?，反應速率通過溶液在321nm不斷升高的吸收度來記錄。運用prismgraphpad軟件計算ic50值?；衔?0μm濃度下的酶抑制率實驗結果如下：

表3.化合物在10μm對tdo的抑制率活性

注：-表示尚未進行測試。

降低大鼠靜脈血中犬尿酸含量實驗

大鼠靜脈血中犬尿酸濃度的下降程度可以反映出化合物在體內對ido1的抑制活性。每組隨機分配3只體重約為300克的雄性大鼠，將化合物cy-1-4、cy-1-10、cy-1-17的富馬酸鹽、cy-1-26的鹽酸鹽和cy-1-32等一次性灌胃給藥50mg/kg，在0,0.5,1,2,4,8,12,24小時八個時間點，從大鼠眼眶取血120-150微升，3000rpm離心10min，取上清得到血清。通過犬尿酸elisa檢測試劑盒測定不同時間點血清中犬尿酸的濃度。每組均取三只大鼠體內犬尿酸濃度的平均值。

結果顯示，測試化合物表現(xiàn)出不同程度的降低犬尿酸濃度的活性，下降比例為18-56％。

體內抗腫瘤實驗：

cy-1-17的富馬酸鹽抑制小鼠體內路易斯肺癌實驗

用荷路易斯肺癌的c57bl/6j小鼠測試化合物的體內藥效，采用腹腔注射給藥途徑(20mg/kg)，環(huán)磷酰胺(20mg/kg)為陽性對照。于首次給藥當天開始觀察、測量并記錄相關指標，實驗終點時處死荷瘤小鼠，并解剖分離瘤塊稱重。荷瘤小鼠連續(xù)腹腔注射給藥11天，給藥組動物體重較陰性對照組體重增長略緩慢，動物狀態(tài)良好，未見明顯的毒副反應。荷瘤小鼠連續(xù)腹腔注射給藥11天后，將動物安樂死，解剖皮下腫瘤，稱重、拍照，并解剖動物進行大體觀察。給藥組動物腫瘤重量明顯低于陰性對照組，環(huán)磷酰胺的抑瘤率為29.9％，cy-1-17(20mg/kg)的抑瘤率為51.8％。解剖小鼠進行大體觀察,未見明顯的腫瘤轉移灶。

cy-1-26鹽酸鹽抑制小鼠體內黑色素瘤實驗

(1)實驗方法

用荷黑色素瘤b16的c57bl/6j小鼠測試化合物的體內藥效，灌胃給藥20mg/kg，1-mt為陽性對照(200mg/kg)，均為每日一次劑量。于首次給藥當天開始觀察、測量并記錄相關指標，實驗終點時處死荷瘤小鼠，并解剖分離瘤塊稱重。

(2)對荷瘤小鼠體重的影響

荷瘤小鼠連續(xù)灌胃給藥10天，給藥組動物體重較陰性對照組體重增長略緩慢，動物狀態(tài)良好，未見明顯的毒副反應。

(3)對荷瘤小鼠腫瘤生長的影響

給藥10天后，將動物安樂死，解剖皮下腫瘤，稱重、并解剖動物進行大體觀察。給藥組動物腫瘤重量均低于陰性對照組，1-mt的抑瘤率為26.3％，cy-1-26的抑瘤率為33.0％。

cy-1-26鹽酸鹽抑制小鼠體內黑色素瘤實驗的重復驗證

(1)實驗方法

用三組(每組6只)荷黑色素瘤b16的c57bl/6j小鼠測試化合物的體內藥效，cy-1-26鹽酸鹽灌胃給藥20mg/kg(懸浮于0.5％羧甲基纖維素鈉水溶液)，1-mt為陽性對照(200mg/kg，懸浮于0.5％羧甲基纖維素鈉水溶液)，空白對照為0.5％羧甲基纖維素鈉水溶液，均為每日一次劑量。于首次給藥當天開始觀察、測量并記錄相關指標，實驗終點時處死荷瘤小鼠，并解剖分離瘤塊稱重。

(2)對荷瘤小鼠體重的影響

荷瘤小鼠連續(xù)灌胃給藥14天，給藥組動物體重較陰性對照組體重增長略緩慢，動物狀態(tài)良好，未見明顯的毒副反應。

(3)對荷瘤小鼠腫瘤生長的影響

給藥14天后，將動物安樂死，解剖皮下腫瘤，稱重、并解剖動物進行大體觀察。給藥組動物腫瘤重量均低于陰性對照組，cy-1-26鹽酸鹽的抑瘤率為46.0％，顯著優(yōu)于1-mt。

綜上所述，本發(fā)明將氮原子引入色胺酮結構的特定位置，得到的新衍生物對酶ido1抑制活性具有出人意料的提高作用，并顯示出對tdo的強烈抑制活性。

以上僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并非用于限定本發(fā)明的保護范圍，因此，凡在本發(fā)明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內。