本發(fā)明涉及疫苗，其用于減少豬中與胞內(nèi)勞森氏菌(lawsoniaintracellularis)的亞臨床感染有關(guān)的胞內(nèi)勞森氏菌細(xì)菌脫落的方法中。
背景技術(shù)：
：增殖性腸病變(也被稱作回腸炎)是全世界斷奶后豬的一種常見(jiàn)腸病，其由專性細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌胞內(nèi)勞森氏菌造成。特征性病變是回腸腸隱窩中的未成熟腸細(xì)胞的增殖；這些細(xì)胞經(jīng)常在它們的頂細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有致病細(xì)菌。在尸體剖檢時(shí)，通過(guò)1.5-2.5μm長(zhǎng)的弧菌狀細(xì)菌的可視化(特別是在腸細(xì)胞中，但是也經(jīng)常在位于隱窩之間的固有層中的巨噬細(xì)胞內(nèi)，和在腸系膜淋巴結(jié)中)，可以證實(shí)組織學(xué)病變?yōu)閯谏暇?yáng)性的。所述細(xì)菌從腸細(xì)胞的清除導(dǎo)致有關(guān)的增殖性病變的消退，從而指示所述細(xì)菌對(duì)隱窩的直接局部作用(mcorist等人,developedandresolvinglesionsinporcineproliferativeenteropathy:possiblepathogeneticmechanisms,journalofcomparativepathology,115,1996,第35-45頁(yè))。在顯現(xiàn)疾病(即表現(xiàn)出腹瀉或異常的紅黑色焦油狀糞便，可能導(dǎo)致死亡)的動(dòng)物中和在僅顯現(xiàn)亞臨床感染(沒(méi)有表現(xiàn)出腹瀉或異常糞便)的動(dòng)物中，已經(jīng)使用pcr證實(shí)了胞內(nèi)勞森氏菌在這些病變中的存在。臨床病例經(jīng)常存在于生長(zhǎng)-育成(grower-finisher)階段；在某些較老的育成豬中，已經(jīng)記錄了急性出血形式。以前已經(jīng)研究了胞內(nèi)勞森氏菌血清陽(yáng)性豬與呈現(xiàn)臨床或亞臨床感染的豬的比例之間的關(guān)聯(lián)(vanderheijden,prevalenceofexposureandinfectionoflawsoniaintracellularisamongslaughter-agepigs.,resvetsci,2004年12月,77(3),第197-202頁(yè))?？雌饋?lái)，有些豬可以是攜帶者，即被感染但沒(méi)有呈現(xiàn)回腸炎的臨床征象。特別是在歐洲，被認(rèn)為沒(méi)有患病的動(dòng)物似乎具有亞臨床感染，如通過(guò)在屠宰時(shí)細(xì)菌在腸中的殘留所證實(shí)的。關(guān)于胞內(nèi)勞森氏菌細(xì)菌在無(wú)臨床疾病畜群中的存在的陽(yáng)性結(jié)果的一種解釋是，那些畜群具有在它們的育成組中移動(dòng)的胞內(nèi)勞森氏菌。僅僅在某些情形中，勞森氏菌感染導(dǎo)致臨床問(wèn)題，包括急性出血腸病變病例。在無(wú)臨床疾病畜群中，針對(duì)勞森氏菌感染的疫苗接種是罕見(jiàn)的。但是，由于已知亞臨床感染可能導(dǎo)致對(duì)豬的平均每日重量增加(adwg)的負(fù)面影響，所以一些生長(zhǎng)-育成農(nóng)場(chǎng)使用市場(chǎng)上的唯一商用的回腸炎疫苗，即enterisol?ileitis(可得自boehringeringelheim)，以抵抗腸中的局部感染。該疫苗含有活減毒的胞內(nèi)勞森氏菌細(xì)菌并且口服地施用。實(shí)際上，目前據(jù)信，腸的局部感染僅可以通過(guò)誘導(dǎo)局部免疫來(lái)抵抗。這對(duì)于呈現(xiàn)臨床疾病的動(dòng)物是不同的。已經(jīng)證實(shí)(wo2009/144088，轉(zhuǎn)讓給intervetinternationalbv)，通過(guò)全身接種非活疫苗可以成功地保護(hù)那些動(dòng)物。不受限于理論，據(jù)信其原因是，那些動(dòng)物具有將感染暴露于系統(tǒng)的嚴(yán)重胃腸病變，這可以解釋為什么全身性免疫應(yīng)答會(huì)幫助抵抗感染。但是，當(dāng)僅存在亞臨床感染(對(duì)應(yīng)于腸的微小局部感染)時(shí)，認(rèn)為需要局部免疫應(yīng)答(包括iga和細(xì)胞免疫)來(lái)抵抗感染。因此，需要局部地施用的包含活細(xì)菌的疫苗。這在mikeroof的論文中得到證實(shí)，所述論文稱作theresearchanddevelopmentofenterisol?ileitis，在europeanenterisol?ileitissymposium提出，2005年10月13-15日，西班牙巴塞羅那。其在第2頁(yè)，表1.1中指出，盡管全身性地施用的滅活疫苗可能誘導(dǎo)“體液/全身免疫”，但是它不能誘導(dǎo)“粘膜免疫”和“細(xì)胞介導(dǎo)的免疫”。后兩者通常已知是抵抗細(xì)胞內(nèi)病原體對(duì)腸的局部感染所必需的(ivanroitt,essentialimmunology,第七版,1991年,第206頁(yè)“thesecretoryimmunesystemprotectstheexternalmucosalsurfaces”,209“defenceisbycell-mediatedimmunity”和210“activatedmacrophageskillintracellularparasites”)。在mikeroof的2005年的論文中闡明，“尋找滅活的菌苗原型的早期研究證實(shí)…滅活的疫苗沒(méi)有提供針對(duì)…腸的定殖的保護(hù)性應(yīng)答”(第2頁(yè),左列，第二個(gè)完整段落)?；钜呙鏴nterisol?ileitis實(shí)際上與減少與感染有關(guān)的重量增加損失的聲明一起得到許可，并且被用于該目的。該疫苗的缺點(diǎn)是，它需要口服施用，這不是給豬接種疫苗的常規(guī)方式，并且人們必須中斷抗微生物劑在動(dòng)物中的應(yīng)用6天(因?yàn)榉駝t所述疫苗中的細(xì)菌可能被殺死)。另一個(gè)缺點(diǎn)是，所述疫苗沒(méi)有被許可用于減少細(xì)菌脫落。顯然，用于銷售核準(zhǔn)的數(shù)據(jù)沒(méi)有顯示細(xì)菌脫落的減少。新近的出版物(riber等人.vaccine33,2015,156-162)證實(shí)，enterisol?ileitis根本沒(méi)有提供針對(duì)感染后勞森氏菌細(xì)菌脫落的保護(hù)。這可能指示，動(dòng)物畜群中的胞內(nèi)勞森氏菌感染可能保持，盡管所有動(dòng)物被接種疫苗且重量增加問(wèn)題和臨床表現(xiàn)顯著減輕。本發(fā)明的目的本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種改進(jìn)的疫苗，其可以用于減少亞臨床上感染的豬的胞內(nèi)勞森氏菌細(xì)菌脫落。另一個(gè)目的是提供一種改進(jìn)的疫苗，其另外提供降低的與所述亞臨床感染有關(guān)的對(duì)adwg的負(fù)面影響。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了滿足本發(fā)明的主要目的，已經(jīng)設(shè)計(jì)了在上文
技術(shù)領(lǐng)域：
部分中描述的藥物組合物，其中該組合物包含非活胞內(nèi)勞森氏菌抗原和藥學(xué)上可接受的載體，且適合用于全身施用。令人驚奇地，盡管全身性地施用的非活勞森氏菌抗原(諸如在wo2009/144088中描述的不同類型的非活勞森氏菌抗原)通常被理解為不能誘導(dǎo)iga和細(xì)胞免疫，更不要提影響腸中的局部免疫應(yīng)答，但是發(fā)現(xiàn)這樣的組合物可以減少亞臨床上感染的豬中的胞內(nèi)勞森氏菌脫落，基本上或甚至完全地阻止所述脫落的發(fā)生。其原因不明。所述新組合物相對(duì)于本領(lǐng)域已知的活疫苗的優(yōu)點(diǎn)是明顯的：所述新組合物可以全身性地(例如肌肉內(nèi)地或真皮內(nèi)地)施用，且由于它僅包含非活勞森氏菌抗原，所以不需要中斷抗微生物劑應(yīng)用。定義疫苗是保護(hù)免于病原性微生物的疫苗接種后感染的組成物，即，典型地通過(guò)例如經(jīng)由抗體干擾接種疫苗的宿主中的微生物本身，預(yù)防或減輕所述微生物的感染或由所述感染引起的病癥的組成物。疫苗接種因而預(yù)防感染或至少降低感染的水平，和/或預(yù)防由該感染引起的病癥或至少降低所述病癥的水平。野生型細(xì)菌的非活抗原是要引起針對(duì)它的免疫學(xué)應(yīng)答的除了活細(xì)菌本身以外的任意物質(zhì)或化合物，作為該免疫應(yīng)答的結(jié)果，使得相應(yīng)的毒性細(xì)菌或一種或多種其毒力因子將會(huì)被宿主的免疫系統(tǒng)識(shí)別，并且至少部分地被中和。野生型細(xì)菌的非活抗原的典型例子是殺死的全細(xì)胞細(xì)菌、細(xì)菌的亞單位諸如表面表達(dá)的蛋白和毒素。后兩者可以是或者不是重組地表達(dá)。對(duì)于胞內(nèi)勞森氏菌，幾種類型的非活抗原是本領(lǐng)域已知的，且例如從wo2009/144088(殺死的全細(xì)胞)、w02005/070958(亞單位)和wo97/20050(殺死的全細(xì)胞)已知。藥學(xué)上可接受的載體是生物相容的介質(zhì)，即在施用以后不在受試動(dòng)物中誘導(dǎo)顯著不良反應(yīng)的介質(zhì)，其能夠在疫苗施用以后將抗原呈遞給受試動(dòng)物的免疫系統(tǒng)。這樣的載體可以是含有水和/或任意其它生物相容的溶劑的液體，但是還可以是固體諸如通常用于得到冷凍干燥的疫苗(基于糖和/或蛋白)。胞內(nèi)勞森氏菌的亞臨床感染是幾乎或完全無(wú)癥狀(沒(méi)有征象或征狀)的感染，尤其是沒(méi)有表現(xiàn)出腹瀉或異常糞便。亞臨床上感染的動(dòng)物因而是腸細(xì)菌胞內(nèi)勞森氏菌的無(wú)癥狀攜帶者，但是可能與減少的重量增加有關(guān)。通過(guò)糞便或腸(后者是在屠宰以后)的微生物培養(yǎng)、或dna技術(shù)諸如其聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，鑒別亞臨床感染的存在?？乖娜硎┯檬侵福┯盟隹乖?，使得它到達(dá)身體的循環(huán)系統(tǒng)(該系統(tǒng)包含心血管和淋巴系統(tǒng))，從而影響身體整體，而不是特定部位諸如胃腸道。全身施用可以如下進(jìn)行：例如將抗原施用進(jìn)肌肉組織中(肌肉內(nèi))、真皮中(真皮內(nèi))、皮膚下面(皮下)、粘膜層下面(粘膜下)和靜脈中(靜脈內(nèi))。豬的育成階段是其中豬是在約10周齡(具有大約25-30kg的重量)至約28周齡(具有約110-130kg的重量)之間的階段。育成階段是總生長(zhǎng)期(即斷奶(大約3周齡)至28周齡(即大多數(shù)豬被屠宰時(shí)的年齡)之間的階段)的一部分。包含殺死的全細(xì)胞細(xì)菌作為抗原的組合物包含從殺死的活全細(xì)胞細(xì)菌的衍生出的抗原。這并不排除：細(xì)菌細(xì)胞在殺死過(guò)程中至少部分地破裂，或殺死的全細(xì)胞的提取物或勻漿物實(shí)際上作為抗原提供在本發(fā)明意義上的“包含殺死的全細(xì)胞細(xì)菌的疫苗”中。殺死的全細(xì)胞胞內(nèi)勞森氏菌細(xì)菌例如從wo2009/144088和wo97/20050已知。實(shí)施方案在第一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法用于預(yù)防細(xì)菌脫落。盡管全身施用，顯示本疫苗甚至能夠在超過(guò)90%、甚至高達(dá)99%的動(dòng)物中預(yù)防感染。鑒于以下事實(shí)，這是非常驚人的：活疫苗enterisol?ileitis(其可以在腸中誘導(dǎo)局部免疫應(yīng)答，且因而，應(yīng)當(dāng)經(jīng)調(diào)整用于抵抗腸中的亞臨床感染)甚至都不能僅僅減少勞森氏菌細(xì)菌的脫落。在下一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法另外用于減少與胞內(nèi)勞森氏菌的亞臨床感染有關(guān)的對(duì)所述豬的平均每日重量增加(adwg)的負(fù)面影響。顯示本疫苗能夠積極地影響亞臨床上受影響的豬的adwg。對(duì)于任何豬飼養(yǎng)者而言，這是一個(gè)非常重要的參數(shù)，即使是只有重量增加的小的正差異。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述疫苗僅施用一次。已經(jīng)顯示所述疫苗的單次施用是有效的。第二劑疫苗(通常在第一劑以后2-4周施用)可能改善免疫應(yīng)答的水平。在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)所述豬是3-10日齡時(shí)，施用所述疫苗。通過(guò)在該幼齡給豬接種疫苗，可以提供早期保護(hù)，即在斷奶后立即保護(hù)。在仍另一個(gè)實(shí)施方案中，所述非活胞內(nèi)勞森氏菌抗原包含碳水化合物，其在活胞內(nèi)勞森氏菌細(xì)菌中與這些細(xì)菌的外細(xì)胞膜結(jié)合。已經(jīng)顯示這些碳水化合物能夠和升高特異性的抗-胞內(nèi)勞森氏菌免疫應(yīng)答(參見(jiàn)wo2009/144088)。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，所述非活胞內(nèi)勞森氏菌抗原是從包含殺死的胞內(nèi)勞森氏菌細(xì)菌的組合物純化出的抗原。通過(guò)純化，可以從實(shí)際抗原除去非特異性的細(xì)菌物質(zhì)，例如以便減少任何位點(diǎn)反應(yīng)(如果存在的話)。在一個(gè)實(shí)際實(shí)施方案中，所述非活胞內(nèi)勞森氏菌抗原是殺死的全細(xì)胞胞內(nèi)勞森氏菌。實(shí)施例研究1研究1的設(shè)計(jì)所述研究在具有胞內(nèi)勞森氏菌(li)感染的荷蘭畜群中，在較老齡的育成豬和繁殖小母豬中進(jìn)行。所述研究遵循隨機(jī)化的、對(duì)照的和盲法的設(shè)計(jì)。將158只3-10日齡的小豬(它們中的大多數(shù)是3-5日齡)在窩內(nèi)隨機(jī)分配至試驗(yàn)或?qū)φ战M。在接收時(shí)給試驗(yàn)組中的小豬接種在水包油乳劑中的滅活的勞森氏菌菌苗疫苗(參見(jiàn)wo2009/144088，實(shí)施例3)，并在三周后再次接種。對(duì)照組中的小豬在同日接受安慰劑注射(沒(méi)有抗原的乳劑)。在研究動(dòng)物中不允許對(duì)li有效的抗生素組藥物治療(例如泰樂(lè)菌素、林可霉素、硫姆林、四環(huán)素)。斷奶以后，即在幼仔和育成階段中，將試驗(yàn)和對(duì)照組的小豬保持在一起。此外，在幼仔和育肥階段中，將非實(shí)驗(yàn)豬圈養(yǎng)在相同房間中，但是在與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不同的圍欄中。在每次疫苗接種以后4小時(shí)、1天、3天、1周和2周，針對(duì)局部和全身反應(yīng)常規(guī)地檢查小豬。在預(yù)期暴露于場(chǎng)地感染(filedinfection)的階段中，以1周或2周間隔從所有豬采集糞便樣品。每個(gè)治療組，將10只動(dòng)物的糞便樣品合并和針對(duì)li細(xì)菌的存在通過(guò)qpcr(此后也稱為“pcr”)進(jìn)行分析。如果合并的糞便樣品指示細(xì)菌的存在，那么單個(gè)地分析來(lái)自該集合的原始樣品。一旦第一個(gè)樣品變成陽(yáng)性，就試驗(yàn)各個(gè)糞便樣品。在第一次疫苗接種時(shí)，第一次疫苗接種以后10、16和21-23周，將所有動(dòng)物稱重。研究1的結(jié)果在研究過(guò)程中，如在糞便上的pcr數(shù)據(jù)證實(shí)的，勞森氏菌感染在畜群中傳播(參見(jiàn)下文)。由于除了對(duì)照組中的一只動(dòng)物以外，所有動(dòng)物都不具有任何臨床征狀，該組受向(野生型)細(xì)菌的場(chǎng)地暴露引起的亞臨床感染影響。糞便中的細(xì)菌負(fù)載在表1中給出了平均pcr-結(jié)果，在表2中給出了陽(yáng)性動(dòng)物的數(shù)目和li-dna的平均濃度。從第13周開始，在許多對(duì)照動(dòng)物中，發(fā)現(xiàn)了來(lái)自li的dna。具有陽(yáng)性糞便樣品的對(duì)照動(dòng)物的百分比從第一次疫苗接種以后12周時(shí)的0經(jīng)由在第13-15周時(shí)的2-8%逐漸增加至在第16-18周時(shí)的約18%，此后它在第20周以后下降至0%。表1：糞便中l(wèi)i的脫落(qpcr)在試驗(yàn)(疫苗)組中，僅在一個(gè)收集日，在單只動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)了單個(gè)pcr陽(yáng)性糞便樣品(72只豬中的1只是陽(yáng)性的，即1.4%)。在對(duì)照組中，75只動(dòng)物中的31只具有至少一個(gè)pcr陽(yáng)性糞便樣品(41.3%)。所述組之間的差異是統(tǒng)計(jì)上顯著的(fisher氏精確檢驗(yàn):p-值<0.001)。表2：具有l(wèi)i陽(yáng)性樣品的動(dòng)物的數(shù)目(和百分比)和陽(yáng)性糞便樣品中l(wèi)i的平均濃度，按疫苗接種組和第一次疫苗接種以后的周數(shù)。體重增加體重和平均每日重量增加總結(jié)在下面表3和4中。認(rèn)為adwg是一個(gè)有關(guān)的參數(shù)，其經(jīng)常用于測(cè)量勞森氏菌疫苗的效力。但是，該參數(shù)是非特異性的，因?yàn)樗軒追N不同條件(繼發(fā)感染、氣候、飼養(yǎng)等)影響。在25克/天的adwg差異得到統(tǒng)計(jì)顯著(p<0.05)值的初步計(jì)算樣品大小需要是每組約300只動(dòng)物。由于效率原因，使實(shí)際上使用的組要小得多。在該初步研究中，組大小僅為78和80只動(dòng)物。所以即使adwg的差異是約25克/天，估計(jì)得到的p值在任何情況下都大于0.05。表3：平均體重(kg,±sd)，按疫苗接種組和階段對(duì)照疫苗接收(3-10天)1.4±0.3(n=76)1.5±0.3(n=80)在轉(zhuǎn)至育成時(shí)(10周)27.7±4.8(n=74)28.5±4.1(n=73)第三次稱重(±16周齡)64.0±9.2(n=73)65.6±9.1(n=71)最后一次稱重(18-24周齡)89.4±16.8(n=72)92.3±17.0(n=71)如預(yù)期的，在育成階段中平均每日重量增加的治療組對(duì)比(參見(jiàn)下文)沒(méi)有導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)上顯著的差異(p-值0.2042)。如果針對(duì)基線值校正，接種疫苗的組顯示在育成階段中比對(duì)照組高出平均21.4克/天的每日重量增加，其中90%置信區(qū)間在低6.4克/天到高49.2克/天的范圍內(nèi)。21.4克/天的平均差異本身是adwg的實(shí)質(zhì)差異。兩個(gè)組的平均每日重量增加的最小二乘法平均值(lsm)是881克/天(對(duì)于接種疫苗的組)和860克/天(對(duì)于對(duì)照組)。這些lsm確實(shí)符合通過(guò)ancova進(jìn)行的組對(duì)比，但是稍微不同于來(lái)自表3的普通平均值，因?yàn)樗鼈冡槍?duì)組之間的協(xié)變量‘在疫苗接種時(shí)的重量’的小差異進(jìn)行了校正。表4：按克計(jì)的平均每日重量增加平均值*,按疫苗接種組和階段*:針對(duì)在接收時(shí)的窩、批和重量調(diào)整過(guò)的平均adwg±平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差(sem)和90%置信區(qū)間。對(duì)總平均每日重量增加的治療效應(yīng)的p-值是0.2804。如果針對(duì)基線值校正，接種疫苗的組表現(xiàn)出比對(duì)照組高12.5g/天的平均每日重量增加。該估計(jì)的90%置信區(qū)間范圍為從在接種疫苗的組中比在對(duì)照組中低6.6g/天的生長(zhǎng)到在接種疫苗的組中比在對(duì)照組中高31.5g/天的生長(zhǎng)。研究2研究2的設(shè)計(jì)該研究的目的是評(píng)估在場(chǎng)地條件下，在育成豬中，與在第一研究中使用的相同疫苗，但是作為一次注射疫苗(oneshotvaccine)的效力。所述研究作為隨機(jī)化的、盲法的、鹽水對(duì)照的臨床效力試驗(yàn)進(jìn)行。將約750只3-4-周齡小豬在窩內(nèi)隨機(jī)地分配至試驗(yàn)組或?qū)φ战M。給試驗(yàn)組中的小豬在肌肉內(nèi)接種2ml疫苗一次，并且給對(duì)照組的小豬注射2ml鹽水。在10(±1)周齡時(shí)，將648只研究小豬(來(lái)自每個(gè)處理組324只)運(yùn)輸至育成農(nóng)場(chǎng)。此后，將對(duì)照豬圈養(yǎng)在相同單元中與接種疫苗的豬分開的圍欄中(8個(gè)圍欄的8-11只動(dòng)物/處理組/單元)直到屠宰(在25周齡時(shí))。評(píng)估的第一個(gè)參數(shù)是在不同稱重之間的豬的平均每日重量增加(adwg)：在接收時(shí)，轉(zhuǎn)移至育成農(nóng)場(chǎng)以后和即將屠宰之前。評(píng)估的第二個(gè)參數(shù)是勞森氏菌脫落：轉(zhuǎn)移至育成農(nóng)場(chǎng)以后，在15和20周齡和即將屠宰之前。研究2的結(jié)果在該第二個(gè)研究中，如在糞便上的pcr數(shù)據(jù)證實(shí)的，勞森氏菌感染在畜群中傳播。只有對(duì)照組中的一只動(dòng)物具有輕微的臨床征狀(證實(shí)了是勞森氏菌感染的結(jié)果，如尸檢以后確定的)。因而可以證實(shí)，該組受向(野生型)細(xì)菌的場(chǎng)地暴露引起的亞臨床感染影響。在表5中指出了對(duì)adwg的影響?？梢钥闯觯谟鬃须A段中的平均每日重量增加在試驗(yàn)組中為319克/天，且在對(duì)照組中為307克/天。在幼仔階段中的平均每日重量增加(adwg)的差異在對(duì)照和試驗(yàn)組之間是顯著不同的(anova:p=0.0203)。在育成階段中的adwg和總adwg在試驗(yàn)組中也較高。盡管對(duì)照和試驗(yàn)組之間7克/天的差異是商業(yè)上相關(guān)的(導(dǎo)致大約1.4kg的最終重量的差異)，它們不是統(tǒng)計(jì)上顯著的。表5：平均每日重量增加(g/天)，按疫苗接種組和階段對(duì)照組試驗(yàn)組幼仔307a319b育成764c771d總計(jì)633e640fab混合模型ancova,p=0.0203cd混合模型ancova,p=0.6356ef混合模型ancova,p=0.4229。關(guān)于勞森氏菌脫落，顯示在研究第6周，所有糞便樣品都是胞內(nèi)勞森氏菌陰性的。在第11周，7個(gè)來(lái)自對(duì)照組的樣品(19%)是陽(yáng)性的，且試驗(yàn)組中的樣品沒(méi)有陽(yáng)性的。在第16周，7個(gè)來(lái)自對(duì)照組的樣品(19%)是陽(yáng)性的，且試驗(yàn)組中的一個(gè)樣品是陽(yáng)性的。在第21周，所有動(dòng)物再次都是陰性的。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組在研究過(guò)程中具有pcr勞森氏菌陽(yáng)性糞便樣品(對(duì)于1或2個(gè)連續(xù)周)的圍欄的數(shù)目顯著更低(fisher精確檢驗(yàn)，p<0.001)。研究3研究3的設(shè)計(jì)該研究的主要目的是，進(jìn)一步評(píng)估在場(chǎng)地條件下，在以前研究中使用的疫苗在一劑或兩劑疫苗接種方案以后對(duì)細(xì)菌脫落的效力。根據(jù)隨機(jī)化的和盲法的設(shè)計(jì)，對(duì)在它的畜群中具有勞森氏菌感染的個(gè)體農(nóng)場(chǎng)進(jìn)行所述研究。將健康的3-10日齡哺乳期小豬在窩內(nèi)隨機(jī)分配至兩個(gè)試驗(yàn)組或?qū)φ战M之一(320只動(dòng)物/組)。在3-10日齡給一個(gè)試驗(yàn)組(2x1ml)中的小豬接種1ml疫苗，并在21天后重復(fù)該疫苗接種。在24-31日齡給另一試驗(yàn)組(1x2ml)的小豬接種2ml疫苗。在3-10日齡和21天后給對(duì)照組中的小豬注射1ml鹽水。在第6、8、10、12周和此后每周取糞便樣品用于勞森氏菌pcr，直到所述豬在23周齡時(shí)被屠宰。研究3的結(jié)果在該第二個(gè)研究中，勞森氏菌感染在畜群中傳播，如通過(guò)糞便的pcr數(shù)據(jù)所證實(shí)的。沒(méi)有動(dòng)物具有勞森氏菌感染的臨床征狀。因而，所述組受向(野生型)細(xì)菌的場(chǎng)地暴露引起的亞臨床感染影響。關(guān)于勞森氏菌脫落，在對(duì)照組的小豬批次之間發(fā)現(xiàn)了陽(yáng)性糞便樣品出現(xiàn)的大差異：在第一個(gè)小豬批次中，在育成階段晚期(第18和19周)發(fā)現(xiàn)了陽(yáng)性對(duì)照樣品，在第二個(gè)批次中，僅在第21周發(fā)現(xiàn)了陽(yáng)性樣品，和在第三個(gè)批次中，在第21周發(fā)現(xiàn)了一個(gè)陽(yáng)性樣品。但是，在第四個(gè)批次中，從第17周以后檢測(cè)到陽(yáng)性樣品，而在第五個(gè)批次中，在第14周已發(fā)現(xiàn)了陽(yáng)性樣品?？傊?，從第14周以后50%的對(duì)照產(chǎn)生了一個(gè)或多個(gè)陽(yáng)性樣品，來(lái)自2x1ml組的2個(gè)(6%)和1x2ml組的4個(gè)(12%)是陽(yáng)性的。與對(duì)照組相比，在研究過(guò)程中具有pcr勞森氏菌陽(yáng)性糞便樣品(對(duì)于1或2個(gè)連續(xù)周)的動(dòng)物的數(shù)目在1x2ml組(fisher氏精確檢驗(yàn)，p<0.0001)和2x1ml組(fisher氏精確檢驗(yàn)，p=0.0002)中顯著更低。當(dāng)前第1頁(yè)12