發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明總體涉及單克隆抗體的晶形。更具體地，本發(fā)明涉及派姆單抗(pembrolizumab)和其結(jié)構(gòu)變體的晶體，包含此類抗體晶體的藥物組合物，和此類組合物在癌癥的治療中的用途。發(fā)明背景許多腫瘤產(chǎn)生導(dǎo)致針對腫瘤的內(nèi)源性免疫反應(yīng)的抗原。然而，此反應(yīng)通常是無效的，因?yàn)槟[瘤細(xì)胞可活化關(guān)鍵免疫檢查點(diǎn)，所述免疫檢查點(diǎn)引起局部化的免疫抑制。這些免疫檢查點(diǎn)之一是人類細(xì)胞表面受體pd-1(程序性死亡-1或程序性細(xì)胞死亡-1)，其為表達(dá)于活化的t細(xì)胞的表面上的抑制性信號傳導(dǎo)受體。通過結(jié)合其配體pd-l1或pd-l2之一的pd-1抑制性信號傳導(dǎo)的活化導(dǎo)致抑制針對腫瘤細(xì)胞的t細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。為了對抗此pd-1途徑介導(dǎo)的針對腫瘤的抗腫瘤免疫反應(yīng)的抑制，幾個公司正開發(fā)與人類pd-1結(jié)合且阻斷pd-1與其配體之間的相互作用的單克隆抗體(mab)。這些抗pd-1mab之一是派姆單抗(一種人源化igg4mab)，其在美國被批準(zhǔn)用于治療患有不可切除或轉(zhuǎn)移性的黑色素瘤并在伊匹單抗(如果brafv600突變?yōu)殛栃?，則braf抑制劑)后疾病進(jìn)展的患者。派姆單抗在治療許多其他癌癥適應(yīng)癥中的效力和安全性正在研究中。派姆單抗目前被配制用于靜脈內(nèi)(iv)輸注，且包含25mg/mlmab的派姆單抗凍干制劑和溶液制劑描述于wo2012/135408中。然而，經(jīng)設(shè)計(jì)以皮下施用的高濃度制劑可以是合意的替代物，這部分地由于其可使得患者能夠自我施用派姆單抗。治療性抗體傳統(tǒng)上以凍干形式或在溶液中制備。凍干形式可展現(xiàn)增強(qiáng)的長期穩(wěn)定性，但需要在使用前進(jìn)行重構(gòu)，這使得其對于自我施用而言不那么理想。溶液制劑無需重構(gòu)，但可遭受降低的穩(wěn)定性并在使用前通常需要冷藏。凍干制劑和溶液制劑可能均無法提供足夠高濃度以容許通過皮下施用的高劑量遞送，因?yàn)?.2ml是用于皮下施用的最大優(yōu)選體積(yang,m.x.等人,proc.nat’l.acad.sci.(usa)100:6934-1939(2003))。然而，抗體的高濃度溶液制劑(如果可獲得)也可易于脫離溶液，或可能太粘而無法在例如為皮下施用、具體地自我施用所需要的窄距針中遞送。實(shí)現(xiàn)高濃度抗體制劑的一種建議方法是制備具有抗體晶體的制劑，參見例如yang等人，同上；美國專利號7,833,525和wo2012/135035。制備抗體晶體的治療性抗體組合物的基本原理包括室溫下液體溶液中蛋白晶體的改善穩(wěn)定性、高抗體濃度溶液的降低的粘度和操縱結(jié)晶條件以針對期望的受控釋放性質(zhì)實(shí)現(xiàn)不同形態(tài)的能力(參見例如yang等人，同上和basu,s.k.等人，expertopin.biol.thera.4:301-317(2004))。據(jù)信抗體由于重鏈和輕鏈的柔性而尤其難以結(jié)晶。盡管最近30年已有許多完整抗體結(jié)晶的報導(dǎo)，但rcsb蛋白數(shù)據(jù)庫中僅儲存四種結(jié)構(gòu)，相比之下，儲存超過800種fabapo或復(fù)雜結(jié)構(gòu)。altuspharmaceuticals的研究者首次描述了使三種市售單克隆抗體：利妥昔單抗(rituximab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)和英利昔單抗(infliximab)結(jié)晶的結(jié)晶方法(wo02/072636)。其他公開的專利申請描述制備抗il-13mab(wo2005/121177)、抗tnfαmab(wo2008/057240)、抗骨硬化素mab(wo2012/135035)和抗il-23mab(wo2014/004436)的晶體的方法。盡管存在用于結(jié)晶抗體的方法的這些實(shí)例，但蛋白結(jié)晶領(lǐng)域通常認(rèn)為鑒定具體抗體的合適結(jié)晶條件仍然是經(jīng)驗(yàn)性操作，且不存在可應(yīng)用至具體目標(biāo)抗體來可靠預(yù)測何種結(jié)晶條件將產(chǎn)生該抗體的晶體的一般性規(guī)則。因此，存在對于制備派姆單抗的晶形的方法的需求。此類晶體可用于闡明派姆單抗的結(jié)構(gòu)(通過x射線衍射分析)和用于制備用于治療癌癥的改善的派姆單抗藥物組合物。發(fā)明概述本發(fā)明通過提供派姆單抗晶體和產(chǎn)生派姆單抗晶體的方法來滿足這些需要和更多需要。本發(fā)明方法的一個實(shí)施方案產(chǎn)生適于x射線衍射的晶體，且本發(fā)明人在本文中使用此類晶體將派姆單抗的三維結(jié)構(gòu)解析至2.3?分辨率。因此，在一個方面，本發(fā)明提供抗pd-1抗體的晶體。抗體是派姆單抗、派姆單抗變體或派姆單抗生物仿制藥中的抗體。在一個實(shí)施方案中，晶體包含抗體和溶劑。在一個實(shí)施方案中，晶體的長度在以下范圍中的任何之間：1微米至200微米、1微米至100微米、1微米至20微米、5微米至100微米、5微米至50微米或5微米至20微米。在一個實(shí)施方案中，抗體晶體的特征在于a=63.5?至78.9?、b=110.2?至112.2?、c=262.5?至306?、α=90°、β=90°、γ=90°的晶胞尺寸和p212121的空間群。在一個實(shí)施方案中，抗體晶體可將x射線衍射至3.5?或更高(即少于3.5?)的分辨率。在另一個方面，本發(fā)明提供產(chǎn)生抗pd-1單克隆抗體(mab)的晶體的方法，其中mab是派姆單抗、派姆單抗變體或派姆單抗生物仿制藥中的抗體。該方法包括：(a)在至少25℃且不大于50℃的溫度下使mab的溶液(抗體溶液)暴露于沉淀劑溶液持續(xù)足以形成晶體(結(jié)晶)的時間，和(b)收獲晶體。在一個實(shí)施方案中，暴露步驟在不大于約40℃至約45℃的溫度下實(shí)施。在一個實(shí)施方案中，該方法中所使用的沉淀劑溶液具有約4.0至5.0的ph且包含1.0m至2.5m磷酸二氫銨(adp)。在一個實(shí)施方案中，沉淀劑溶液還包含足夠量的緩沖劑以將沉淀劑溶液的ph調(diào)節(jié)至ph4.0至5.0。在一個實(shí)施方案中，緩沖劑是tris-hcl或磷酸氫二銨。在一個實(shí)施方案中，抗體溶液包含抗pd-1mab，其濃度為3mg/ml至100mg/ml、10mg/ml至90mg/ml、20mg/ml至80mg/ml、30mg/ml至70mg/ml、40mg/ml至60mg/ml或約50mg/ml。在一個實(shí)施方案中，將抗體實(shí)施3天、4天或5天中的至少任一者。在一個實(shí)施方案中，抗體溶液包含10mm組氨酸(ph5.6)。在一個實(shí)施方案中，抗體溶液進(jìn)一步包含聚山梨醇酯，其最大濃度為約0.01%。在一個實(shí)施方案中，暴露步驟包括實(shí)施選自以下的結(jié)晶技術(shù)：懸滴式蒸氣擴(kuò)散、坐滴式蒸氣擴(kuò)散、透析、微分批法和分批法。在一個實(shí)施方案中，暴露步驟包括混合等體積的抗體溶液和沉淀劑溶液以形成結(jié)晶混合物。在另一個方面，本發(fā)明提供使抗pd-1單克隆抗體(mab)自包含抗pd-1mab的溶液結(jié)晶的方法，其中抗體是派姆單抗、派姆單抗變體或派姆單抗生物仿制藥中的抗體。該方法包括：(a)合并抗pd-1mab溶液與沉淀劑溶液和抗pd-1mab的晶種以產(chǎn)生接種的結(jié)晶混合物；(b)在至少20℃且不大于40℃的溫度下孵育接種的結(jié)晶混合物；和(c)收獲晶體。在一個實(shí)施方案中，孵育溫度為約30℃且沉淀劑溶液包含選自以下的混合物：(1)20%聚乙二醇4000(peg4k)和20%異丙醇；(2)18%聚乙二醇10000(peg10k)、20%甘油、100mmtris-hcl(ph8.5)；和(3)2.0m磷酸二氫銨和100mmtris-hcl。在另一個實(shí)施方案中，孵育溫度為約22℃且沉淀劑溶液包含選自以下的混合物：(1)25%peg4k、100mmtris-hcl(ph8.5)和100mmcacl2和(2)1.26m硫酸銨、乙酸鈉(ph4.5)和0.2mnacl。在一些實(shí)施方案中，晶種來自抗pd-1mab的晶體的晶種儲備物，所述晶體通過在約30℃的溫度下在具有4.0至5.0的ph且包含1.0m至2.5madp的沉淀劑溶液中結(jié)晶來產(chǎn)生。在又另一個方面，本發(fā)明提供藥物組合物，其包含(a)抗pd-1抗體的晶體，其中抗體是派姆單抗、派姆單抗變體或派姆單抗生物仿制藥中的抗體，和(b)至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。在一個實(shí)施方案中，賦形劑實(shí)施至少一種選自包封晶體、包埋晶體和穩(wěn)定地維持晶體的功能。在一些實(shí)施方案中，組合物中晶體的平均長度為1微米至20微米、5微米至20微米、5微米至50微米或5微米至100微米。在一個實(shí)施方案中，組合物包含懸浮于液體介質(zhì)中的抗pd-1mab晶體。在一個實(shí)施方案中，組合物中的抗pd-1mab濃度為至少約50mg/ml且不大于約250mg/ml。在另一個實(shí)施方案中，組合物為固體，其通過將晶體的液體懸浮液脫水或凍干來制備。在一個實(shí)施方案中，在將液體或固體藥物組合物在室溫(例如20℃至25℃)下儲存至少一個月后存在抗pd-1mab的生物活性的至少95%、97%或99%。在另一個方面，本發(fā)明提供包含上述藥物組合物中的任一者的容器。該容器可以是單一劑量小瓶、多劑量小瓶、預(yù)填充的注射器或自注射裝置。在一個實(shí)施方案中，該容器包含單一劑量的約200mg至約250mg的抗pd-1mab，即派姆單抗、派姆單抗變體或派姆單抗生物仿制藥。在又另一個方面，本發(fā)明包括治療人類主體的癌癥的方法，其包括向患者施用治療有效量的上述藥物組合物中任一者。在一個實(shí)施方案中，該癌癥是實(shí)體瘤，例如，膀胱癌、乳腺癌、透明細(xì)胞腎癌、頭/頸鱗狀細(xì)胞癌、肺鱗狀細(xì)胞癌、惡性黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌(nsclc)、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌(sclc)或三陰性乳腺癌。在另一個實(shí)施方案中，該癌癥是血紅素(heme)惡性腫瘤，例如，急性成淋巴細(xì)胞性白血病(all)、急性骨髓性白血病(aml)、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(cll)、慢性骨髓性白血病(cml)、彌漫性大b細(xì)胞淋巴瘤(dlbcl)、ebv陽性dlbcl、原發(fā)性縱膈大b細(xì)胞淋巴瘤、富于t細(xì)胞/組織細(xì)胞型大b細(xì)胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(hl)、套細(xì)胞淋巴瘤(mcl)、多發(fā)性骨髓瘤(mm)、骨髓細(xì)胞白血病-1蛋白(mc1-1)、骨髓增生異常綜合征(mds)、非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)或小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤(sll)。在一個實(shí)施方案中，藥物組合物包含至少200mg/ml的派姆單抗且皮下施用。在一個實(shí)施方案中，在第一次施用藥物組合物前自主體移除的癌癥的組織切片對于pd-l1和pd-l2中的一者或兩者的表達(dá)測試為陽性。在一個實(shí)施方案中，組織切片中腫瘤細(xì)胞的至少50%通過免疫組織化學(xué)(ihc)測定經(jīng)測試對于pd-l1表達(dá)為陽性。附圖簡述本專利或申請文件含有至少一個有色附圖。在要求并支付必要費(fèi)用之后專利局可提供本專利或?qū)＠暾埞_的具有彩圖的拷貝。圖1顯示派姆單抗和本文所述的派姆單抗變體的輕鏈cdr序列的氨基酸序列(seqidno:1-3)。圖2顯示派姆單抗和本文所述的派姆單抗變體的重鏈cdr序列的氨基酸序列(seqidno:4-6)。圖3顯示派姆單抗的重鏈(圖3a)和輕鏈(圖3b)的氨基酸序列(分別為seqidno7和8)。圖4顯示派姆單抗結(jié)晶懸浮液內(nèi)晶體的顯微照片，所述晶體通過在30℃下使用2.0m磷酸二氫銨、100mmtris-hcl的沉淀劑溶液進(jìn)行蒸氣擴(kuò)散而獲得。100x放大率下的顯微照片在3天后使用sonicc成像系統(tǒng)而獲得，其中圖4a使用shg模式產(chǎn)生且圖4b使用uv-tpef模式產(chǎn)生。參見實(shí)施例1。圖5顯示派姆單抗結(jié)晶懸浮液內(nèi)晶體的顯微照片，所述晶體通過在30℃下使用2.0m磷酸二氫銨、100mmtris的沉淀劑溶液在0.02%聚山梨醇酯80存在(圖5a)或不存在(圖5b)下進(jìn)行自由界面擴(kuò)散而獲得。100×放大率下的顯微照片在2天后使用fluidigm自動化成像系統(tǒng)而獲得。參見實(shí)施例2。圖6顯示派姆單抗結(jié)晶懸浮液內(nèi)晶體的顯微照片，所述晶體通過在30℃下使用1.5m磷酸二氫銨、100mmtris-hcl的沉淀劑溶液進(jìn)行懸滴式蒸氣擴(kuò)散而獲得。100×放大率下的顯微照片在3天后使用nikonsmz1500stereo顯微鏡和nikones400照相機(jī)成像系統(tǒng)而獲得。參見實(shí)施例4。圖7顯示派姆單抗結(jié)晶懸浮液內(nèi)晶體的顯微照片，所述晶體通過在30℃下使用1.8m磷酸二氫銨、120mmtris-hcl的沉淀劑溶液進(jìn)行分批結(jié)晶而獲得。參見實(shí)施例5。100×放大率下的顯微照片在5天后使用nikonsmz1500stereo顯微鏡和nikones400照相機(jī)成像系統(tǒng)而獲得。雙側(cè)箭頭指示長度約20微米的晶體。圖8顯示派姆單抗三維結(jié)構(gòu)的帶狀圖，其通過在30℃下使用1.8m磷酸二氫銨、100mmtris-hcl作為沉淀劑的懸滴擴(kuò)散方法獲得的晶體的x射線衍射分析而解析。參見實(shí)施例7。帶狀圖在圖8a中以色彩顯示，其中兩條重鏈為黃色和青色，且兩條輕鏈為洋紅色(fab-1)和綠色(fab-2)，而相同帶狀圖在圖8b中以灰色色調(diào)顯示。圖9顯示派姆單抗結(jié)晶懸浮液內(nèi)晶體的顯微照片，所述晶體通過在30℃下使用1.9m磷酸二氫銨和0.09m磷酸氫銨作為沉淀劑的蒸氣擴(kuò)散而獲得。參見實(shí)施例8。70×放大率下的顯微照片在3天后使用rockimager系統(tǒng)(formulatrix,bedford,ma)而獲得，且雙側(cè)箭頭指示20微米的距離。圖10顯示通過如實(shí)施例13中所述的不同派姆單抗溶液的uplc-sec表征產(chǎn)生的圖，顯示于圖10a中的派姆單抗一直未結(jié)晶且顯示于圖10b中的派姆單抗從派姆單抗晶體溶解。詳述i.縮寫.在整個本發(fā)明的詳述和實(shí)施例中，將使用以下縮寫：adp磷酸二氫銨ahp磷酸氫銨cdr互補(bǔ)決定區(qū)cho中國倉鼠卵巢dfs無病存活fr框架區(qū)ihc免疫組織化學(xué)或免疫組織化學(xué)的ncbi國家生物技術(shù)信息中心nci國家癌癥研究所pd進(jìn)行性疾病pd-1程序性死亡1pd-l1程序性細(xì)胞死亡1配體1pd-l2程序性細(xì)胞死亡1配體2pfs無進(jìn)展存活pr部分反應(yīng)or總體反應(yīng)os總體存活q2w每兩周一個劑量q3w每三周一個劑量qd每天一個劑量recist實(shí)體瘤中的反應(yīng)評估標(biāo)準(zhǔn)sd穩(wěn)定疾病vh免疫球蛋白重鏈可變區(qū)vk免疫球蛋白κ輕鏈可變區(qū)。ii.定義為可更易于理解本發(fā)明，下文明確定義某些技術(shù)和科學(xué)術(shù)語。除非在此文件別處明確定義，否則本文所使用的所有其他技術(shù)和科學(xué)術(shù)語都具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常所理解的含義。如本文(包括隨附權(quán)利要求)所用，除非上下文明確指示，否則詞語的單數(shù)形式(例如“一(a)”、“一(an)”和“該(the)”)包括其相應(yīng)多個指示物?！凹s”在用于修飾數(shù)值定義的參數(shù)(例如，溶液中組分的濃度)時意味著該參數(shù)可變化高于或低于該參數(shù)的所述數(shù)值的多達(dá)10%。例如，包含約200mg/ml指定抗體的組合物可具有180mg/ml至220mg/ml的抗體。類似地，約30℃的溫度意指27℃至33℃的任一溫度?！笆┯谩焙汀爸委煛痹谄鋺?yīng)用至動物、人類、實(shí)驗(yàn)主體、細(xì)胞、組織、器官或生物流體時，是指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組合物與動物、人類、主體、細(xì)胞、組織、器官或生物流體接觸?！笆┯谩焙汀爸委煛笨芍咐缰委煼椒ā⑺幬飫恿W(xué)方法、診斷方法、研究方法和實(shí)驗(yàn)方法。細(xì)胞的處理涵蓋使試劑與細(xì)胞接觸，以及使試劑與流體接觸，其中該流體與細(xì)胞接觸?！笆┯谩焙汀爸委煛边€包括通過試劑、診斷劑、結(jié)合組合物或通過另一細(xì)胞對(例如)細(xì)胞的體外和離體處理。術(shù)語“主體”包括任何生物體，優(yōu)選動物，更優(yōu)選哺乳動物(例如，大鼠、小鼠、狗、貓、兔)，且最優(yōu)選人類。如本文所使用，術(shù)語“抗體”是指包括兩對相同的多肽鏈的四聚體，每一對均具有一個“輕”鏈(約25kda)和一個“重”鏈(約50-70kda)。每一鏈的氨基末端部分包括主要負(fù)責(zé)抗原識別的約100個至110個或更多氨基酸的可變區(qū)。重鏈的羧基末端部分定義主要負(fù)責(zé)效應(yīng)子功能的恒定區(qū)。每一輕鏈/重鏈對的可變區(qū)形成抗體結(jié)合位點(diǎn)。因此，一般而言，完整抗體具有兩個結(jié)合位點(diǎn)。除在雙功能或雙特異性抗體中，兩個結(jié)合位點(diǎn)通常是相同的。通常，重鏈和輕鏈中的每一者的可變區(qū)包含三個高變區(qū)，其也被稱為互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)，其位于相對保守的框架區(qū)(fr)內(nèi)。cdr通常通過框架區(qū)對齊，使得能夠結(jié)合至特異性表位。一般而言，從n-末端至c-末端，輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3和fr4(即cdrl1、cdrl2和cdrl3在輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中，而cdrh1、cdrh2和cdrh3在重鏈可變結(jié)構(gòu)域中)。氨基酸至每一結(jié)構(gòu)域的分配通常根據(jù)以下文獻(xiàn)的定義：sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,kabat,等人;nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.;第5版;nihpubl.no.91-3242(1991);kabat(1978)adv.prot.chem.32:1-75;kabat,等人,(1977)j.biol.chem.252:6609-6616;chothia,等人,(1987)jmol.biol.196:901-917或chothia,等人,(1989)nature342:878-883。如本文所使用，磷酸二氫銨(nh4h2po4)或adp與單堿式磷酸銨、磷酸一銨和磷酸二氫銨(prim-ammoniumphosphate)同義。如本文所使用，磷酸氫銨((nh4)2hpo4)或ahp與二堿式磷酸銨、磷酸氫二銨(diammoniumhydrogenphosphate)和磷酸氫二銨(di-ammoniumhydrogenphosphate)同義。術(shù)語“癌癥”、“癌性”或“惡性”是指或描述哺乳動物中特征通常在于不受控的細(xì)胞生長的生理學(xué)病況。癌癥的實(shí)例包括但不限于癌、淋巴瘤、白血病、胚細(xì)胞瘤和肉瘤。此類癌癥的更具體實(shí)例包括鱗狀細(xì)胞癌、骨髓瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、急性骨髓性白血病(aml)、多發(fā)性骨髓瘤、胃腸(道)癌癥、腎癌、卵巢癌、肝癌、成淋巴細(xì)胞性白血病、淋巴細(xì)胞性白血病、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、前列腺癌、甲狀腺癌、黑色素瘤、軟骨肉瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、胰臟癌、多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮頸癌、腦癌、胃癌、膀胱癌、肝細(xì)胞瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌和頭頸癌?？筛鶕?jù)本發(fā)明治療的尤其優(yōu)選癌癥包括特征在于在測試組織樣品中pd-l1和pd-l2中的一者或兩者的表達(dá)升高的那些。“濃度”在參考本發(fā)明的結(jié)晶抗體懸浮液使用時是指存在于給定宏觀單位體積的溶液中的抗體(例如，派姆單抗)的量。術(shù)語濃度以其慣常意義使用，盡管與傳統(tǒng)溶液相比，懸浮液具有固有異質(zhì)性。結(jié)晶懸浮液中抗體的濃度等于其中抗體不呈晶形的等效樣品的濃度?！氨Ｊ匦揎椀淖凅w”或“保守取代”是指氨基酸取代為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知且通?？稍诓桓淖兯梅肿拥纳锘钚缘那闆r下進(jìn)行，甚至在多肽的必需區(qū)中。此類示例性取代優(yōu)選根據(jù)下表1中所述的那些進(jìn)行：表1示例性保守氨基酸取代原始?xì)埢Ｊ厝〈鷄la(a)gly;serarg(r)lys,hisasn(n)gln;hisasp(d)glu;asncys(c)ser;alagln(q)asnglu(e)asp;glngly(g)alahis(h)asn;glnile(i)leu;valleu(l)ile;vallys(k)arg;hismet(m)leu;ile;tyrphe(f)tyr;met;leupro(p)alaser(s)thrthr(t)sertrp(w)tyr;phetyr(y)trp;pheval(v)ile;leu如整個說明書和權(quán)利要求中所用，“基本上由…組成(consistsessentiallyof)”和變型(諸如“基本上由…組成”(“consistessentiallyof”或“consistingessentiallyof”))指示包括任何所述的要素或要素組，且任選包括具有與所述要素類似或不同的性質(zhì)且不會顯著改變指定劑量方案、方法或組合物的基本或新穎性質(zhì)的其他要素。作為非限制性實(shí)例，基本上由抗體晶體和特定藥學(xué)上可接受的賦形劑組成的藥物組合物也可包括一種或多種不會顯著影響藥物組合物的性質(zhì)的其他賦形劑。如本文所使用，“抗pd-1mab晶體”或“結(jié)晶抗pd-1mab”是指含有以在三維中周期性地重復(fù)的晶格結(jié)構(gòu)排列的抗體的晶體。相反，例如，諸如通過凍干溶解于溶液中的mab產(chǎn)生的固體非晶形形式的mab并不展現(xiàn)結(jié)晶抗體形式特有的光學(xué)性質(zhì)(諸如折射率和雙折射)。如本文所使用，且關(guān)于基于透析的結(jié)晶方法，“透析溶液”是指針對其透析派姆單抗溶液(“抗體溶液”)以驅(qū)動形成本發(fā)明結(jié)晶抗體的溶液?！氨Ａ粑铩笔侵竿肝龊蟮目贵w溶液，其可包括抗體的晶體，收獲所述晶體?？贵w溶液/保留物在透析膜的一側(cè)上，且透析溶液在相對側(cè)上。術(shù)語“微米(micron和micrometer)”在本文中可互換使用且各自意指1米的1/1000000。如本文所使用，“單克隆抗體”或“mab”或“mab”是指實(shí)質(zhì)上均質(zhì)的抗體的群體，即構(gòu)成該群體的抗體分子的氨基酸序列相同，除了可以少量存在的可能天然存在的突變。相反，常規(guī)(多克隆)抗體制劑通常包括許多在其可變結(jié)構(gòu)域、具體而言其cdr中具有不同氨基酸序列的不同抗體，所述cdr通常對于不同表位是特異性的。修飾詞“單克隆”指示抗體的特征在于從實(shí)質(zhì)上同質(zhì)的抗體群體獲得，且不應(yīng)理解為需要通過任一具體方法來產(chǎn)生該抗體。例如，待根據(jù)本發(fā)明使用的單克隆抗體可通過由kohler等人.(1975)nature256:495首次描述的雜交瘤方法來制備，或可通過重組dna方法來制備(參見例如美國專利號4,816,567)。也可使用描述于例如clackson等人(1991)nature352:624-628和marks等人(1991)j.mol.biol.222:581-597中的技術(shù)從噬菌體抗體文庫分離“單克隆抗體”。還參見presta(2005)j.allergyclin.immunol.116:731。如本文所使用，“pd-l1”或“pd-l2”表達(dá)意指在細(xì)胞表面上指定pd-l蛋白或在細(xì)胞或組織內(nèi)指定pd-lmrna的任何可檢測表達(dá)水平。可在腫瘤組織切片的ihc測定中利用診斷性pd-l抗體或通過流式細(xì)胞術(shù)檢測pd-l蛋白表達(dá)?；蛘撸墒褂锰禺愋越Y(jié)合至期望pd-l靶標(biāo)(例如，pd-l1或pd-l2)的結(jié)合劑(例如，抗體片段、親和體等)通過pet成像檢測腫瘤細(xì)胞的pd-l蛋白表達(dá)。用于檢測和測量pd-lmrna表達(dá)的技術(shù)包括rt-pcr和實(shí)時定量rt-pcr。已描述用于在腫瘤組織切片的ihc測定中對pd-l1蛋白表達(dá)進(jìn)行定量的幾種方法。參見例如thompson,r.h.,等人,pnas101(49);17174-17179(2004);thompson,r.h.等人,cancerres.66:3381-3385(2006);gadiot,j.,等人,cancer117:2192-2201(2011);taube,j.m.等人,scitranslmed4,127ra37(2012);和toplian,s.l.等人,neweng.jmed.366(26):2443-2454(2012)。一種方法采用針對pd-l1表達(dá)陽性或陰性的簡單二進(jìn)制終點(diǎn)，其中陽性結(jié)果在展現(xiàn)細(xì)胞-表面膜染色的組織學(xué)證據(jù)的腫瘤細(xì)胞的百分比方面進(jìn)行定義。對于pd-l1表達(dá)為總腫瘤細(xì)胞的至少1%且優(yōu)選5%，將腫瘤組織切片視為陽性。在另一方法中，在腫瘤細(xì)胞中以及在主要包含淋巴細(xì)胞的浸潤免疫細(xì)胞中對腫瘤組織切片中的pd-l1表達(dá)進(jìn)行定量。展現(xiàn)膜染色的腫瘤細(xì)胞和浸潤免疫細(xì)胞的百分比單獨(dú)定量為<5%、5%至9%，且然后以10%增量至最多100%。對于腫瘤細(xì)胞，如果評分<5%評分，則pd-l1表達(dá)被視為陰性，且如果評分≥5%，則視為陽性。免疫浸潤液中的pd-l1表達(dá)被報告為被稱為調(diào)節(jié)的炎癥評分(ais)的半定量測量，其通過膜染色細(xì)胞的百分比乘以浸潤液強(qiáng)度來確定，其被分級為無(0)、輕度(1的評分，淋巴細(xì)胞稀疏)、中等(2的評分，通過淋巴細(xì)胞組織細(xì)胞聚集物的腫瘤的病灶浸潤)或嚴(yán)重(3的評分，彌漫浸潤)。如果ais≥5，則將腫瘤組織切片視為通過免疫浸潤物的pd-l1表達(dá)陽性?？蓪d-lmrna表達(dá)水平與通常用于定量rt-pcr中的一種或多種參考基因(諸如泛素c)的mrna表達(dá)水平進(jìn)行比較。在一些實(shí)施方案中，基于與適當(dāng)對照的pd-l1表達(dá)(蛋白和/或mrna)水平的比較，將惡性細(xì)胞和/或腫瘤內(nèi)浸潤免疫細(xì)胞的pd-l1表達(dá)(蛋白和/或mrna)的水平確定為“過表達(dá)”或“升高”。例如，對照pd-l1蛋白或mrna表達(dá)水平可以是在相同類型的非惡性細(xì)胞中或在來自匹配正常組織的切片中進(jìn)行定量的水平。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，如果腫瘤樣品中的pd-l1蛋白(和/或pd-l1mrna)比對照多至少10%、20%或30%，則確定該樣品中的pd-l1表達(dá)升高。如本文所使用的“派姆單抗”意指(a)具有描述于whodruginformation,vol.27,no.2，第161至162頁(2013)中的結(jié)構(gòu)且由mercksharp&dohmecorp.(msd)(控制msd或由msd控制的公司)或其權(quán)利繼承者(個體和共同地，“msd”)制造的或代表該公司或其權(quán)利繼承者制造的igg4單克隆抗體。派姆單抗的每一輕鏈均包含顯示于圖1中的三個cdr序列(seqidno:1作為cdrl1，seqidno:2作為cdrl2且seqidno:3作為cdrl3)，且派姆單抗的每一重鏈均包含顯示于圖2中的cdr序列(seqidno:4作為cdrh1，seqidno:5作為cdrh2且seqidno:6作為cdrh3)。派姆單抗的全長重鏈和輕鏈包含顯示于圖3中的重鏈和輕鏈序列(分別seqidno:7和seqidno:8)。派姆單抗生物仿制藥意指由除msd以外的實(shí)體制造且由任一國家的管理機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)作為派姆單抗生物仿制藥出售的生物產(chǎn)品。在一個實(shí)施方案中，派姆單抗生物仿制藥包含派姆單抗變體作為原料藥。在一個實(shí)施方案中，派姆單抗生物仿制藥具有與派姆單抗相同的氨基酸序列。如本文所使用，“派姆單抗變體”意指包含與派姆單抗的重鏈和輕鏈序列(分別seqidno:7和8)相同的重鏈和輕鏈序列的單克隆抗體，除了具有在位于輕鏈cdr外部的位置處的三個、兩個或一個保守氨基酸取代和具有位于重鏈cdr外部的六個、五個、四個、三個、兩個或一個保守氨基酸取代(例如，變體位置位于框架區(qū)或恒定區(qū)中)。換言之，派姆單抗和派姆單抗變體包含相同cdr序列，但由于在其全長輕鏈和重鏈序列中在分別不超過三個或六個其他位置處具有保守氨基酸取代而彼此不同。派姆單抗變體在以下性質(zhì)方面實(shí)質(zhì)上與派姆單抗相同：與pd-1的結(jié)合親和力和阻斷pd-l1和pd-l2中的每一者與pd-1結(jié)合的能力?！俺恋韯笔鞘苟嚯?諸如抗體)在濃溶液中的溶解度降低的化合物。在分批結(jié)晶方法中，沉淀劑包括于“沉淀劑溶液”中，并在大量透析方法中，沉淀劑包括于“透析溶液”中。沉淀劑通過在多肽分子周圍形成能量上不利的沉淀劑耗盡層而誘導(dǎo)結(jié)晶。為了最小化此耗盡層的相對量，多肽形成締合物，且最終形成晶體。此過程描述于weber(1991)advancesinproteinchemistry41:1中。各種沉淀劑是本領(lǐng)域已知的且包括：硫酸銨、乙醇、異丙醇、1,2丙二醇、3-乙基-2,4戊二醇；和許多聚二醇，諸如聚乙二醇(例如peg300和peg400)。除沉淀劑以外，有時將其他材料添加至多肽沉淀劑溶液中。這些包括用于調(diào)節(jié)溶液的ph(和因此肽上的表面電荷)的緩沖劑(諸如tris或hepes)和用于降低多肽的溶解度的鹽(諸如氯化鈉、氯化鋰和檸檬酸鈉)。如本文所使用，術(shù)語“治療有效量”或“有效量”是指抗pd-1抗體當(dāng)單獨(dú)或與另一治療劑組合施用于細(xì)胞、組織或主體時可有效治療癌癥的量。當(dāng)應(yīng)用至單獨(dú)施用的抗pd-1抗體時，治療有效量是指該單獨(dú)成分。當(dāng)應(yīng)用至組合時，無論組合、連續(xù)或同時施用，治療有效量均是指引起治療性效應(yīng)的抗pd-1抗體和其他治療劑的組合量。“組織切片”是指單一部分或單片組織樣品，例如，從正常組織或腫瘤的樣品切下的組織薄片。如本文所使用，“治療(treat或treating)”癌癥意指向具有癌癥或診斷患有癌癥的主體施用本發(fā)明的藥物組合物，以實(shí)現(xiàn)至少一種陽性治療效果，諸如例如，減少癌細(xì)胞數(shù)量，減小腫瘤大小，降低癌細(xì)胞浸潤至外周器官中的速率，或降低腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤生長的速率?？梢栽S多方式測量癌癥的陽性治療效果(參見w.a.weber,j.nucl.med.50:1s-10s(2009))。例如，關(guān)于腫瘤生長抑制，根據(jù)nci標(biāo)準(zhǔn)，≦42%的t/c是抗腫瘤活性的最低水平。<10%的t/c被視為高抗腫瘤活性水平，其中t/c(%)=治療的中值腫瘤體積/對照的中值腫瘤體積×100。在一些實(shí)施方案中，通過本發(fā)明的組合實(shí)現(xiàn)的治療為pr、cr、or、pfs、dfs和os中的任一者。pfs也稱作“腫瘤進(jìn)展時間”，其指示在治療期間和之后癌癥不再生長的時間長度，且包括患者已經(jīng)歷cr或pr的時間量，以及患者已經(jīng)歷sd的時間量。dfs是指在治療期間和之后患者保持無疾病的時間長度。os是指與原始(naive)或未治療的個體或患者相比預(yù)期壽命的延長。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，對本發(fā)明組合的反應(yīng)是pr、cr、pfs、dfs、or或os中的任一者，其使用recist1.1反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)來評價。可有效治療癌癥患者的針對本發(fā)明組合的治療方案可根據(jù)因素諸如患者的疾病狀態(tài)、年齡和重量和療法在主體中引發(fā)抗癌反應(yīng)的能力而變化。盡管本發(fā)明方面中的任一者的實(shí)施方案可能不會在每一主體中有效實(shí)現(xiàn)陽性治療效果，但應(yīng)當(dāng)在統(tǒng)計(jì)顯著量的主體中實(shí)現(xiàn)，如通過本領(lǐng)域已知的任一統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)(諸如student氏t檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)、根據(jù)mann和whitney的u-檢驗(yàn)、kruskal-wallis檢驗(yàn)(h檢驗(yàn))、jonckheere-terpstra檢驗(yàn)和wilcoxon檢驗(yàn))來確定。如本文所使用，“tris”(2-氨基-2-羥基甲基-丙烷-1,3-二醇)與tris、tris堿、三羥甲基氨基甲烷(trizma)、trisamine、tham、氨基丁三醇(tromethamine)、緩血酸胺(trometamol)、三羥甲基氨基甲烷(tromethane)和氨丁三醇(trisaminol)同義?！澳[瘤”在其應(yīng)用至被診斷患有或懷疑患有癌癥的主體時是指具有任一大小的惡性或潛在惡性贅生物或組織塊，且包括原發(fā)性腫瘤和繼發(fā)性贅生物。實(shí)體瘤是通常不含囊腫或液體區(qū)域的組織的異常生長或塊。不同類型的實(shí)體瘤針對形成其的細(xì)胞類型來命名。實(shí)體瘤的實(shí)例是肉瘤、癌和淋巴瘤。白血病(血液癌)通常不會形成實(shí)體瘤(nationalcancerinstitute,dictionaryofcancerterms)。“腫瘤負(fù)荷”也稱為“腫瘤載量”，是指分布于整個體內(nèi)的腫瘤物質(zhì)的總量。腫瘤負(fù)荷是指整個體內(nèi)的癌癥細(xì)胞總量或腫瘤的總大小，包括淋巴結(jié)和骨髓。腫瘤負(fù)荷可通過本領(lǐng)域已知的各種方法來測定，諸如例如當(dāng)腫瘤從主體移除時例如使用卡尺、或當(dāng)在體內(nèi)時使用成像技術(shù)(例如超音波、骨掃描、計(jì)算機(jī)斷層掃描(ct)或磁共振成像(mri)掃描)測量其尺寸。術(shù)語“腫瘤大小”是指腫瘤的總大小，其可測量為腫瘤的長度和寬度。腫瘤大小可通過本領(lǐng)域已知的各種方法來測定，諸如例如當(dāng)腫瘤從個體移除時例如使用卡尺、或當(dāng)在體內(nèi)時使用成像技術(shù)(例如骨掃描、超音波、ct或mri掃描)測量其尺寸。iii.抗體結(jié)晶本發(fā)明部分地基于用于派姆單抗的結(jié)晶條件的鑒定。結(jié)晶條件包含以下的獨(dú)特組合：(1)沉淀劑溶液，其包含高鹽濃度(即，在1.0m至2.5m或1.5m至2.0m的adp)且具有酸性ph(即，以下4.0至5.0、4.2至4.8、4.4至4.6或4.5中的任一者的ph)；和(2)高溫(即，至少25℃且至多50℃)。在一個實(shí)施方案中，可通過在沉淀劑溶液中包含緩沖劑將ph維持在所需范圍內(nèi)。合適的緩沖劑包括例如tris-hcl、磷酸氫銨、組氨酸和氫氧化銨。優(yōu)選針對待實(shí)施結(jié)晶的溫度來確定沉淀劑溶液的ph，在一個實(shí)施方案中，該溫度為27℃至約30℃的溫度。本發(fā)明的結(jié)晶條件與幾種結(jié)晶技術(shù)相容，且能夠根據(jù)比3.5a衍射分辨率更差的晶體的預(yù)期用途（包括不同的衍射特性），產(chǎn)生具有各種長度(包括1微米至20微米和5微米至100微米)的抗pd-1mab的晶形以及具有低分辨率(例如，3.5?)或高分辨率(例如，2.3?)的晶體。已知各種蛋白結(jié)晶方法。giege等人.(1994)actacrystallogr.d50:339;mcpherson(1990)eur.j.biochem.189:1。此類技術(shù)包括懸滴式蒸氣擴(kuò)散(mcpherson(1976)j.biol.chem.251:6300)、坐滴式蒸氣擴(kuò)散、微分批法和透析。懸滴和坐滴式蒸氣擴(kuò)散需要允許含有純化蛋白、緩沖劑和沉淀劑的小滴與含有較高濃度的類似緩沖劑和沉淀劑的較大貯器進(jìn)行平衡。最初，蛋白溶液的小滴含有不足以結(jié)晶的濃度的沉淀劑，但在水從液滴蒸發(fā)并轉(zhuǎn)移至貯器時，沉淀劑濃度增加至結(jié)晶最佳的水平。由于系統(tǒng)處于平衡中，所以維持這些最佳條件直至結(jié)晶完成。懸滴方法與坐滴方法的不同在于蛋白溶液滴在系統(tǒng)內(nèi)的垂直定向。在微分批方法中，將多肽與沉淀劑混合以實(shí)現(xiàn)過飽和，且密封器皿，并放在一旁直至晶體出現(xiàn)。在透析方法中，多肽保留于與含有沉淀劑的溶液接觸的透析膜的一側(cè)?？缒て胶庠黾映恋韯舛?，由此使得多肽達(dá)到過飽和水平。使用這些技術(shù)中的一些來制備本發(fā)明的派姆單抗晶體，如實(shí)施例1至7中更詳細(xì)描述。高通量實(shí)例最適于篩選以優(yōu)化沉淀劑溶液，而非用于大規(guī)模晶體產(chǎn)生。本發(fā)明結(jié)晶方法中所使用的抗pd-1mab溶液將具有3至100mg/ml的抗體濃度并在約10mm組氨酸的緩沖液(約5.5的ph)中方便地提供。關(guān)于例如用于治療用途的抗pd-1mab晶體的大規(guī)模產(chǎn)生，實(shí)施例5和9-11概述了分批結(jié)晶方案。在一個實(shí)施方案中，使派姆單抗從溶液結(jié)晶的分批法包括制備在1.8m至2.5madp中包含至少10mg/ml派姆單抗且具有約4.4至4.6的ph的結(jié)晶混合物。在一個實(shí)施方案中，結(jié)晶混合物進(jìn)一步包含選自3%1,5二-氨基戊烷二鹽酸鹽；3%異丙醇和4%丙二醇的添加劑?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的方法(諸如離心、透析和各種過濾方法，包括中空纖維切向流過濾)從分批結(jié)晶混合物收獲晶體。可通過各種方法分析抗pd-1mab晶體來檢查或表征其物理性質(zhì)，諸如晶體大小、形狀、表面形態(tài)、總表面積和孔隙度。此類分析技術(shù)包括例如電子衍射和固態(tài)核磁共振(ssnmr)、光學(xué)顯微術(shù)、透射電子顯微術(shù)、掃描電子顯微術(shù)、原子力顯微術(shù)和各種光散射技術(shù)。呈本發(fā)明晶體形式的抗pd-1mab的生物活性和/或生物物理性質(zhì)可通過將抗體晶體“再溶解”或溶解于適于期望分析技術(shù)的緩沖液中來分析。例如，可通過elisa、大小排阻色譜、sdspage和動態(tài)光散射中的一種或多種分析溶解的抗pd-1mab。本文的本發(fā)明人考慮本文所述的結(jié)晶條件將可用于分批結(jié)晶技術(shù)來制備派姆單抗和結(jié)構(gòu)上類似的抗pd-1mab(即派姆單抗變體和派姆單抗生物仿制藥)的結(jié)晶懸浮液。由于使用高結(jié)晶溫度(至少25℃且至多50℃)，本發(fā)明人考慮使用這些條件產(chǎn)生的結(jié)晶懸浮液和包含此類晶體的藥物組合物可在室溫下儲存至少一個月的時段且抗pd-1mab的生物活性或穩(wěn)定性極少改變或不發(fā)生改變。已從根據(jù)本發(fā)明制備的抗體晶體溶解的抗pd-1mab(派姆單抗、派姆單抗變體或派姆單抗生物仿制藥)應(yīng)使結(jié)晶前起始材料的性質(zhì)保持在可接受容限內(nèi)。各種功能參數(shù)的可接受容限可基于預(yù)期用途而變化，但關(guān)于結(jié)合親和力或生物活性，可包括保留最初(非結(jié)晶)親和力或活性的至少80%、至少90%或至少95%。例如，可使用描述于實(shí)施例12中的方法測量抗pd-1mab阻斷pd-l1結(jié)合至pd-1的能力。如本文實(shí)施例11至12中所述，從溶解派姆單抗晶體獲得的派姆單抗和尚未結(jié)晶的派姆單抗的生物活性和生物物理性質(zhì)使用elisa和大小排阻色譜來比較且被確定為實(shí)質(zhì)上類似的。這些結(jié)果支持包含派姆單抗晶體的藥物組合物用于治療性治療人類主體的用途。iv.藥物組合物為了制備藥物組合物，將本發(fā)明的抗pd-1mab晶體或從此類晶體溶解的抗pd-1mab與至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑混合。參見例如remington'spharmaceuticalsciences和u.s.pharmacopeia:nationalformulary,mackpublishingcompany,easton,pa(1984)。不要求用于本發(fā)明藥物組合物中的抗pd-1mab晶體具有任何具體衍射質(zhì)量，只要抗體的生物活性和穩(wěn)定性維持在期望范圍內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，在結(jié)晶期間或之后將賦形劑直接添加至結(jié)晶液體。在其他實(shí)施方案中，首先從液體收獲晶體，通過懸浮于穩(wěn)定溶液中來洗滌，從穩(wěn)定溶液收獲且然后將其懸浮于包含賦形劑的液體溶液中。組合物的液體可以是任一藥學(xué)上可接受的介質(zhì)，且可包括例如水溶液和油包水混合物?？赏ㄟ^例如通過使氮、空氣或惰性氣體流在晶體上方穿過、通過空氣干燥、真空干燥或凍干來干燥包含晶體和期望賦形劑的液體懸浮液來制備固體形式的晶體藥物組合物。最終產(chǎn)品中的水分含量通常將少于10重量%、7重量%、5重量%或3重量%。呈液體懸浮液或呈干燥固體的包含已從派姆單抗晶體溶解的派姆單抗的藥物組合物可通過以下來制備：將期望量的晶體添加至藥學(xué)上可接受的溶解緩沖液中，并在4℃下孵育直至晶體溶解。在一個實(shí)施方案中，溶解緩沖液包含10mm組氨酸(ph5.6)、0.02%聚山梨醇酯80和至多4%蔗糖w/v。在一個實(shí)施方案中，所得組合物中的任何微粒均在施用之前通過例如離心或過濾去除。v.治療方法可由臨床醫(yī)師例如使用本領(lǐng)域已知或懷疑可影響治療或預(yù)測可影響治療的參數(shù)或因素確定用于治療具體患者的具體癌癥的本發(fā)明藥物組合物的適當(dāng)劑量。例如，醫(yī)師可選擇用略少于最佳劑量或批準(zhǔn)劑量的劑量來起始治療，且然后以小增量增加劑量直至相對于任何負(fù)面的副作用實(shí)現(xiàn)期望或最佳效應(yīng)。在一個實(shí)施方案中，組合物的劑量和施用途徑將提供對派姆單抗抗體的中值暴露，其與由200mgq2w或q3w的劑量的未結(jié)晶派姆單抗提供的中值暴露實(shí)質(zhì)上類似。技術(shù)人員從結(jié)合本領(lǐng)域常識的本文所含的教導(dǎo)將明白本發(fā)明的這些和其他方面(包括下文列出的示例性特定實(shí)施方案)。vi.本發(fā)明的示例性特定實(shí)施方案1.抗pd-1單克隆抗體(mab)的晶體，其中所述mab是派姆單抗、派姆單抗變體或派姆單抗生物仿制藥中的抗體。2.實(shí)施方案1的晶體，其中所述晶體的特征在于具有選自以下的范圍內(nèi)的長度：1微米至200微米、1微米至100微米、1微米至20微米、5微米至100微米、5微米至50微米、5微米至40微米、5微米至30微米、5微米至20微米、5微米至10微米、10微米至100微米、10微米至50微米和10微米至20微米。3.實(shí)施方案3的晶體，其中所述晶體的特征在于具有5微米至10微米、5微米至20微米或5微米至40微米的長度。4.實(shí)施方案2的晶體，其中所述晶體的特征在于具有50微米至100微米的長度。5.實(shí)施方案1至4中任一項(xiàng)的晶體，其特征在于a=63.5?至78.9?、b=110.2?至112.2?、c=262.5?至306?、α=90°、β=90°、γ=90°的晶胞尺寸和p212121的空間群。6.上述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的晶體，其能夠?qū)射線衍射至選自以下的分辨率：2.3?至3.5?、2.3?至3.0?、2.3?至2.75?、2.3?至2.5?和2.3?。7.上述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的晶體，其被懸浮于包含相同抗pd-1mab的其他晶體的液體介質(zhì)中。8.上述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的晶體，其中所述抗pd-1mab是派姆單抗。9.產(chǎn)生抗pd-1單克隆抗體(mab)的晶體的方法，其中所述mab是派姆單抗、派姆單抗變體或派姆單抗生物仿制藥中的抗體，且所述方法包括在為至少25℃且不大于50℃、45℃、40℃或37℃的溫度下使包含所述抗pd-1mab的溶液暴露于沉淀劑溶液持續(xù)足以形成晶體的時間，其中所述沉淀劑溶液具有4.0至5.0的ph且包含1.0m至2.5m磷酸二氫銨。10.實(shí)施方案9的方法，其中所述暴露步驟包括混合所述抗體溶液和所述沉淀劑溶液以形成結(jié)晶混合物并將結(jié)晶方法應(yīng)用至所述混合物。11.實(shí)施方案10的方法，其中所述結(jié)晶方法選自以下：懸滴式蒸氣擴(kuò)散、坐滴式蒸氣擴(kuò)散和分批法。12.實(shí)施方案11的方法，其中所述結(jié)晶方法是分批方法且所述方法進(jìn)一步包括用所述抗pd-1mab的晶體對所述結(jié)晶混合物接種。13.實(shí)施方案9至12中任一項(xiàng)的方法，其中所述結(jié)晶混合物中的抗體濃度為約10mg/ml或約20mg/ml。14.實(shí)施方案9的方法，其中所述暴露步驟包括使用30kd分子量截留膜針對所述沉淀劑溶液透析所述抗體溶液。15.實(shí)施方案9至14中任一項(xiàng)的方法，其中所述抗體溶液包含所述抗pd-1mab，其濃度為2mg/ml至200mg/ml、3mg/ml至100mg/ml、10mg/ml至90mg/ml、20mg/ml至80mg/ml、30mg/ml至70mg/ml、40mg/ml至60mg/ml或約50mg/ml。16.實(shí)施方案9至15中任一項(xiàng)的方法，其中所述沉淀劑溶液具有選自以下的ph：4.2至4.8、4.4至4.6和4.5。17.實(shí)施方案9至16中任一項(xiàng)的方法，其中所述沉淀劑溶液進(jìn)一步包含緩沖劑。18.實(shí)施方案17的方法，其中所述緩沖劑是tris-hcl、磷酸氫銨、氫氧化銨或組氨酸。19.實(shí)施方案9至18中任一項(xiàng)的方法，其中所述沉淀劑溶液基本上由1.5m至2.0m磷酸二氫銨和100mm至120mmtris-hcl組成。20.實(shí)施方案9至17中任一項(xiàng)的方法，其中所述沉淀劑溶液包含磷酸二氫銨和磷酸氫銨的混合物。21.實(shí)施方案20的方法，其中所述沉淀劑溶液基本上由1.9m磷酸二氫銨和0.09m磷酸氫銨組成。22.實(shí)施方案9至21中任一項(xiàng)的方法，其中所述暴露步驟是在約30℃的溫度下實(shí)施至少3天、4天或5天。23.使抗pd-1單克隆抗體(mab)從包含所述抗pd-1mab的溶液結(jié)晶的方法，其中所述抗體是派姆單抗、派姆單抗變體或派姆單抗生物仿制藥中的抗體且所述方法包括：(a)合并所述抗pd-1mab溶液與沉淀劑溶液和所述抗pd-1mab的晶種以產(chǎn)生接種的結(jié)晶混合物；(b)在至少20℃且不大于40℃的溫度下孵育所述接種的結(jié)晶混合物；和(c)收獲晶體。24.實(shí)施方案23的方法，其中所述孵育溫度為約30℃且所述沉淀劑溶液包含選自以下的混合物：(1)20%聚乙二醇4000(peg4k)和20%異丙醇；(2)18%聚乙二醇10000(peg10k)、20%甘油、100mmtris-hcl(ph8.5)；和(3)2.0m磷酸二氫銨和100mmtris-hcl。25.實(shí)施方案23的方法，其中所述孵育溫度為約22℃且所述沉淀劑溶液包含選自以下的混合物：(1)25%peg4k、100mmtris-hcl(ph8.5)和100mmcacl2和(2)1.26m硫酸銨、乙酸鈉(ph4.5)和0.2mnacl。26.實(shí)施方案23至25中任一項(xiàng)的方法，其中所述晶種來自通過實(shí)施方案9至22中任一項(xiàng)的方法產(chǎn)生的所述抗pd-1mab的晶體的晶種儲備物。27.實(shí)施方案9至26中任一項(xiàng)的方法，其中所述抗pd-1mab是派姆單抗。28.抗pd-1mab晶體，其通過實(shí)施方案9至27中任一項(xiàng)的方法產(chǎn)生。29.藥物組合物，其包含(a)抗pd-1單克隆抗體(mab)的晶體，其中所述抗體是派姆單抗、派姆單抗變體或派姆單抗生物仿制藥中的抗體；和(b)至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。30.實(shí)施方案29的組合物，其中所述賦形劑實(shí)施選自包封所述晶體、包埋所述晶體和穩(wěn)定維持所述晶體的至少一種功能。31.實(shí)施方案29或30的組合物，其中所述抗pd-1mab晶體中的每一者均為實(shí)施方案1至8或27中任一項(xiàng)的晶體。32.實(shí)施方案29至31中任一項(xiàng)的組合物，其為液體。33.實(shí)施方案29至31中任一項(xiàng)的組合物，其為固體。34.實(shí)施方案29至32中任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物中的抗pd-1mab濃度為至少50mg/ml、至少100mg/ml、至少200mg/ml或至少250mg/ml。35.實(shí)施方案29至34中任一項(xiàng)的組合物，其中在將所述組合物在20℃至25℃下儲存至少一個月之后存在所述抗pd-1mab的生物活性的至少95%。36.治療人類主體的癌癥的方法，其包括向所述患者施用治療有效量的實(shí)施方案29至35中任一項(xiàng)的藥物組合物。37.實(shí)施方案36的方法，其中所述癌癥是膀胱癌、乳腺癌、透明細(xì)胞腎癌、頭/頸鱗狀細(xì)胞癌、肺鱗狀細(xì)胞癌、惡性黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌(nsclc)、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌(sclc)、三陰性乳腺癌、急性成淋巴細(xì)胞性白血病(all)、急性骨髓性白血病(aml)、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(cll)、慢性骨髓性白血病(cml)、彌漫性大b細(xì)胞淋巴瘤(dlbcl)、ebv陽性dlbcl、原發(fā)性縱膈大b細(xì)胞淋巴瘤、富于t細(xì)胞/組織細(xì)胞型大b細(xì)胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(hl)、套細(xì)胞淋巴瘤(mcl)、多發(fā)性骨髓瘤(mm)、骨髓細(xì)胞白血病-1蛋白(mcl-1)、骨髓增生異常綜合征(mds)、非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)或小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤(sll)。38.實(shí)施方案36或37的方法，其中所述藥物組合物包含至少200mg/ml的所述mab且皮下施用。39.實(shí)施36至38中任一項(xiàng)的方法，其中所述癌癥是實(shí)體瘤，并在第一次施用所述藥物組合物之前從所述主體移除的所述癌癥的組織切片對于pd-l1和pd-l2中的一者或兩者的表達(dá)測試為陽性。40.實(shí)施方案39的方法，其中所述組織切片中所述腫瘤細(xì)胞的至少50%通過免疫組織化學(xué)(ihc)分析對于pd-l1表達(dá)測試為陽性。參考以下實(shí)施例可最好地理解本發(fā)明的寬范圍，所述實(shí)施例并非意欲將本發(fā)明限于特定實(shí)施方案。本文所述的特定實(shí)施方案僅以實(shí)例的方式提供，且本發(fā)明應(yīng)受到隨附權(quán)利要求以及此類權(quán)利要求所賦予的等效方案的全部范圍的限制。實(shí)施例實(shí)施例1：派姆單抗的滴式蒸氣擴(kuò)散結(jié)晶篩選在10mm組氨酸(ph5.6)中制備34mg/ml全長派姆單抗的溶液。在來自hamptonresearch(alisoviejo,ca,usa)的mrc96孔結(jié)晶板中實(shí)施的坐滴式蒸氣擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)及來自rigakucorporation(seattle,wa,usa)和jenabioscience(jena,de,usa)的四種市售高通量篩選中篩選此溶液。每一篩選均由96種獨(dú)特溶液組成，其概述于下表2中。表2.篩選溶液的概述制造商篩選名稱/目錄號溶液組成rigakucorp.wizardclassic1&2/eb-w12-b96種獨(dú)特條件，主要基于peg、醇和高鹽rigakucorp.wizardcryo1&2/eb-c12-b96種獨(dú)特條件，主要基于peg、醇和高鹽jenabiosciencesjbscreenclassichts1/cs-201l96種獨(dú)特條件，主要基于pegjenabiosciencesjbscreenclassichts1/cs-202l96種獨(dú)特條件，主要基于高鹽對于每一篩選實(shí)驗(yàn)，將派姆單抗溶液(0.2μl)與篩選溶液(0.2μl)混合，并使用來自douglasinstruments,inc.(hungerford,berkshire,uk)的oryx結(jié)晶機(jī)器人將其在板孔中在80μl篩選溶液上分層。針對每一篩選溶液在4℃、18℃和30℃中的每一者下實(shí)施實(shí)驗(yàn)；因此，總共測試1,152種不同結(jié)晶條件。顯微鏡監(jiān)測板孔隨時間的晶體形成。3天后僅在以下測試條件之一下觀察到晶體：30℃，利用jena2(鹽)#91(100mmtris-hcl,ph8.5,2.0m磷酸二氫銨)。使用來自formulatrix(bedford,ma,usa)的sonicc成像系統(tǒng)顯現(xiàn)晶體。sonicc系統(tǒng)具有兩種成像方法：二次諧波產(chǎn)生(secondharmonicgeneration，shg)，其探測結(jié)晶度，和紫外線雙光子激發(fā)熒光(ultraviolettwo-photonexcitedfluorescence，uv-tpef)，其對于蛋白性樣品是特異性的。觀察到晶體的圖像顯示于圖4a(shg)和圖4b(uv-tpef)中。實(shí)施例2：派姆單抗的自由界面擴(kuò)散結(jié)晶篩選基于僅在實(shí)施例1中在30℃下形成的晶體，選擇此溫度使用自由界面擴(kuò)散技術(shù)進(jìn)一步研究用于派姆單抗的篩選條件。在10mm組氨酸(ph5.6)中且在具有或沒有0.02%聚山梨醇酯80下制備具有34mg/ml派姆單抗的抗體溶液，并在來自fluidigmcorporation(southsanfrancisco,ca,usa)的topaz芯片和結(jié)晶器中利用與實(shí)施例1中使用的相同篩選溶液進(jìn)行篩選。在30℃下孵育芯片并使用fluidigm自動化成像系統(tǒng)用顯微鏡進(jìn)行監(jiān)測。僅在jena2(jenabioscience)#91溶液(100mmtris,ph8.5,2.0m磷酸二氫銨)下再次觀察到晶體。來自兩種不同派姆單抗溶液的觀察到的晶體的圖像顯示于圖5a(具有0.02%聚山梨醇酯80的抗體溶液)和圖5b(沒有聚山梨醇酯80的抗體溶液)中。實(shí)施例3：派姆單抗的微晶種基質(zhì)篩選本實(shí)施例研究派姆單抗可從接種預(yù)存在的派姆單抗晶體的溶液結(jié)晶的條件。篩選的沉淀劑溶液是實(shí)施例1中所述的相同四種市售篩選物。從在實(shí)施例1中通過合并1μl派姆單抗晶體懸浮液和99μl的1.8madp、100mmtris-hcl的穩(wěn)定溶液(通過混合適當(dāng)量的2.5madp和1mtris-hcl(ph8.5)的儲備溶液制備)產(chǎn)生的晶體懸浮液(2.0madp、100mmtris-hcl中的派姆單抗晶體)制備派姆單抗晶體的晶種儲備物。在10mm組氨酸(ph5.6)中制備34mg/ml派姆單抗的抗體溶液。在mrc96孔結(jié)晶板(hamptonresearch)中實(shí)施坐滴式蒸氣擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)。對于每一篩選實(shí)驗(yàn)，將派姆單抗溶液(0.3μl)與篩選溶液(0.3μl)和0.1μl晶種儲備物混合并使用oryx結(jié)晶機(jī)器人在板孔中在80μl篩選溶液上分層。針對每一篩選溶液在22℃和30℃中的每一者下實(shí)施實(shí)驗(yàn)；因此，總共測試768種結(jié)晶條件。用顯微鏡監(jiān)測板孔隨時間推移的晶體，并在1周后從顯示于下表3中的5種條件中顯微鏡觀察到晶體。晶體通過sonicc(uv陽性)的顯現(xiàn)證實(shí)觀察到的晶體的內(nèi)容物為蛋白。表3.在接種后產(chǎn)生派姆單抗晶體的滴式蒸氣擴(kuò)散條件。溫度篩選溶液30℃20%peg4k,20%異丙醇30℃18%peg10k,20%甘油,100mmtris,ph8.5,100mmnacl30℃100mmtris,ph8.5,2.m磷酸二氫銨22℃25%peg4k,100mmtris,100mmcacl222℃1.26m硫酸銨,乙酸鹽,ph4.5/0.2mnacl實(shí)施例4：在adp/tris-hcl中蒸氣擴(kuò)散結(jié)晶的優(yōu)化。為了鑒定適于制備衍射質(zhì)量晶體的最佳a(bǔ)dp濃度和ph條件，實(shí)施以下篩選實(shí)驗(yàn)，所述實(shí)驗(yàn)檢查ph在8.8至9.4之間變化的100mmtris-hcl和濃度在1.60m至1.74m之間變化的adp的混合物。相對于在vdx24孔(6×4陣列)結(jié)晶板(hamptonresearch)中使用optimatrixmakertm液體處理系統(tǒng)(rigakucorp.,seattle,wa,usa)設(shè)計(jì)的慣常優(yōu)化篩選，在懸滴式蒸氣擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)中設(shè)置派姆單抗(34mg/ml,10mm組氨酸，ph5.6)。對于每一篩選實(shí)驗(yàn)，將由1.0μl蛋白+1.0μl篩選溶液組成的懸滴置于22mm蓋玻片的下側(cè)上并置于含有1ml篩選溶液的孔上，使得100mmtris-hcl組分的ph在垂直的4個孔中變化且adp濃度在水平的6個孔上變化。在30℃下孵育該板并隨時間用顯微鏡監(jiān)測。圖6顯示在3天后在100mmtris-hcl(ph8.0)、1.5madp篩選溶液中觀察到的晶體的顯微照片。實(shí)施例5：在adp/tris-hcl中派姆單抗的分批結(jié)晶。通過在22℃下將10μl50mg/ml派姆單抗溶液(10mm組氨酸，ph5.6)與50μl120mmtris-hcl(ph8.5)、1.8madp合并來制備結(jié)晶混合物。將此結(jié)晶混合物置于放置于vdx板(hamptonresearch)的孔內(nèi)側(cè)的micro-bridge(hamptonresearch)中。該孔含有1ml100mmtris-hcl(ph8.5)、1440mmadp。使用22mm玻璃蓋玻片密封該孔并將板在30℃下孵育5天。所得結(jié)晶懸浮液的顯微照片顯示于圖7中。觀察到在約5微米至至少約20微米范圍內(nèi)的晶體大小。實(shí)施例6：用于優(yōu)化蒸氣擴(kuò)散結(jié)晶條件的添加劑篩選。在10mm組氨酸(ph5.6)中制備34mg/ml派姆單抗的溶液。在坐滴式蒸氣擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)中針對使用additivescreenhttm試劑盒(hamptonresearch)制備的96種沉淀劑溶液篩選此派姆單抗溶液。此試劑盒含有96種不同的添加劑溶液。對于每一添加劑，將80μl含有72μl1.74mmadp、100mmtris-hcl(ph9.0)的沉淀劑溶液和8.0μl添加劑溶液添加至mrc96孔結(jié)晶板的孔中。將派姆單抗溶液(0.2μl)與孔溶液(0.2μl)混合并使用oryx結(jié)晶機(jī)器人(douglasinstruments)在80μl孔溶液上分層。密封該板并在30℃下孵育并隨時間用顯微鏡監(jiān)測。在3天至7天后觀察到晶體。1周后，在含有以下添加劑之一的tris、adp沉淀劑溶液中觀察到晶體：(a)3%1,5二-氨基戊烷二鹽酸鹽、(b)3%異丙醇或(c)4%丙二醇。然而，在其他93種沉淀劑溶液中的任一者下沒有觀察到晶體，表明那些溶液中的添加劑阻礙晶體成核或生長。實(shí)施例7：派姆單抗晶體的x射線衍射分析。使用懸滴技術(shù)在30℃下生長全長派姆單抗的衍射質(zhì)量晶體。將派姆單抗于10mm組氨酸(ph5.6)(1μl)中的34mg/ml溶液與1.8m磷酸二氫銨、100mmtris-hcl(ph8.0)(1μl)合并。在7至60天后收獲晶體，并使用于1.5m硫酸銨、0.2mnacl中的飽和(100%)蔗糖溶液或于1.5m硫酸銨、0.2mnacl中的35%乙二醇進(jìn)行低溫保護(hù)。在id-17(argonnenationallaboratory,argonne,ill.,usa)處使用同步加速器輻射收集x射線衍射數(shù)據(jù)，并使用autoproc(vonrheinc.等人,actacryst.d67:293-302(2011))處理并按比例縮放。從蔗糖保護(hù)的晶體獲得最好數(shù)據(jù)集，且延伸至2.28埃(?)?；?4個數(shù)據(jù)集，派姆單抗的晶體屬于a=63.5至78.9?、b=110.2至112.2?、c=262.5至306?且α=β=γ=90°的p212121系統(tǒng)。使用如phaser中所執(zhí)行的分子替代程序從x射線衍射數(shù)據(jù)解析派姆單抗結(jié)構(gòu)(mccoya.j.等人,j.appl.cryst.40:658-674(2007)))。使用抗il-23p19mab的fab的結(jié)構(gòu)和igg4fc結(jié)構(gòu)(pdb條目4c54,daviesa.m.等人,j.mol.biol.:426(3):630-644(2014))(其中去除糖和水)作為搜索模型。最初用refmac(murshudovg.n.等人,actacrystall.d53:240-25(1997))且隨后用autobuster(bricogneg,等人buster2.11.5.[internet].cambridge2011)實(shí)施精修。在coot(emsleyp,等人,actacryst.d66:486-501(2010))中建立模型。最終模型含有全抗體(兩條輕鏈和兩條重鏈、兩條7殘基糖鏈)、5個硫酸根離子和來自低溫保護(hù)劑溶液的3個蔗糖分子和480個水分子。說明于圖8中的派姆單抗結(jié)構(gòu)是約140?寬和120?長的四聚體。fc結(jié)構(gòu)域在兩條鏈上在ch2結(jié)構(gòu)域在asn297處糖基化。實(shí)施例8：在磷酸銨混合物中的蒸氣擴(kuò)散結(jié)晶。本實(shí)施例研究沉淀劑溶液中除tris-hcl以外的緩沖劑的用途。在坐滴式蒸氣擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)中使用96種不同磷酸二氫銨/磷酸氫二銨混合物的篩選基質(zhì)篩選派姆單抗溶液(34mg/ml抗體，10mm組氨酸，ph5.6)，其中單堿式組分與二堿式組分的比率變化，但總磷酸鹽濃度保持恒定為1.99m。使用oryx結(jié)晶機(jī)器人(douglasinstrumentsltd)，在mrc-296孔結(jié)晶板(hamptonresearch)的孔中將由0.25μl派姆單抗溶液+0.75μl篩選溶液組成的液滴分配于80μl相同篩選溶液上方。在30℃下孵育該板并使用rockimager1000系統(tǒng)(formulatrix,bedford,ma)監(jiān)測。從1至56天觀察晶體。在3天后在1.9madp、0.09mahp沉淀劑溶液中觀察到的晶體的顯微照片顯示于圖9中。實(shí)施例9：在tris/adp中派姆單抗的分批結(jié)晶(1ml規(guī)模)。通過在4℃下合并167μl派姆單抗溶液(47mg/ml,10mm組氨酸，ph5.5)和833μl沉淀劑溶液(120mmtris-hcl,ph8.4，和1.9madp)在1.5ml微量離心管中制備抗體混合物。將含有抗體混合物的管在30℃下孵育5天。實(shí)施例10：在tris/adp中派姆單抗的分批透析結(jié)晶。在30℃下在dispodialyzer?中使用30kd分子量截留膜(spectrumlaboratories,inc.,ranchodominguez,causa)針對20ml100mmtris-hcl(ph8.4)、1.9m磷酸二氫銨將200微升派姆單抗溶液(47mg/ml抗體，10mm組氨酸，ph5.5)透析5天。如實(shí)施例11中所述收獲結(jié)晶懸浮液。實(shí)施例11：從結(jié)晶懸浮液制備派姆單抗溶液。使用adp/tris-hcl作為沉淀劑通過合并來自各種蒸氣擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)的許多液滴獲得結(jié)晶懸浮液的210μl等分試樣，且其含有總共約400mg派姆單抗晶體。在室溫下在fischer牌微量離心機(jī)中以5000rpm將等分試樣離心5分鐘。通過抽吸去除上清液(母液)并將沉淀(派姆單抗晶體)再懸浮于300μl穩(wěn)定溶液(100mmtris-hcl,ph8.4,1.9madp)中。在室溫下將所得懸浮液在微量離心機(jī)中以5,000rpm離心5分鐘。通過抽吸去除上清液(洗滌)并將所得沉淀(派姆單抗晶體)再懸浮于500μl溶解緩沖液(10mm組氨酸，ph5.5)中并在4℃下孵育30分鐘。通過在4℃下在微量離心機(jī)中以5,000rpm離心5分鐘使所得派姆單抗溶液澄清。使用澄清的派姆單抗溶液用于實(shí)施例12和13中所述的表征研究。實(shí)施例12和13.從派姆單抗晶體溶解的派姆單抗的表征。使用elisa和大小排阻色譜(sec)表征以下樣品。樣品1：200μl起始派姆單抗溶液(10mm組氨酸中的40mg/ml抗體，ph5.6)；樣品2：500μl溶解的派姆單抗(從如實(shí)施例11中所述的派姆單抗結(jié)晶懸浮液獲得的再溶解晶體)；和樣品3：500μl10mm組氨酸(ph5.6)(緩沖液對照)在競爭性結(jié)合elisa中測量樣品1和2中派姆單抗的生物活性，所述競爭性結(jié)合elisa測量派姆單抗超過pd-l1并結(jié)合至固定于elisa板上的pd-1受體分子的能力。使用上述樣品的連續(xù)稀釋液在恒定濃度的pd-l1存在的情況下生成劑量反應(yīng)曲線。使用四參數(shù)邏輯曲線擬合分析程序確定每一樣品的ec50值(展現(xiàn)最大結(jié)合的50%的派姆單抗?jié)舛?。通過在softmax?pro6軟件(moleculardevices,sunnyvale,ca)中應(yīng)用劑量反應(yīng)曲線的并行線分析來計(jì)算相對功效。以下顯示相對于樣品1以幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差和95%置信區(qū)間作為幾何平均功效報告的樣品2的競爭性結(jié)合功效。樣品名稱幾何平均值%rp(n=4)%gsdlcl(95%)ucl(95%)樣品11001086115樣品2961478118這些結(jié)果指示，在競爭性結(jié)合elisa中，一直未結(jié)晶的派姆單抗和從結(jié)晶派姆單抗懸浮液收獲的派姆單抗晶體溶解的派姆單抗具有相當(dāng)?shù)纳锘钚浴Ｔ诃h(huán)境溫度(25℃)下在watersacquityuplc?系統(tǒng)上使用up-sec測定(其采用watersbeh2000柱(waterscorp.,milford,ma,usa;p/n:186005225))實(shí)施sec表征。取樣器的溫度控制為4℃。使用100mm磷酸鈉、100mmnacl(ph7.0)作為流動相以0.5ml/min的流速實(shí)施分離。運(yùn)行時間為5分鐘，其中a214作為建議的檢測波長，且還收集a280。樣品1和2中的每一者的分離圖分別顯示于圖10a和圖10b中。本文引用的所有參考文獻(xiàn)都通過引用并入，其并入程度如同每一個別出版物、數(shù)據(jù)庫條目(例如，genbank序列或geneid條目)、專利申請或?qū)＠唧w且個別地指示通過引用并入一樣。通過引用并入的專用闡述(如果存在)包括在說明書內(nèi)并不以任何方式減弱通過引用并入的此一般闡述。本文中參考文獻(xiàn)的引用并非意欲承認(rèn)該參考文獻(xiàn)是相關(guān)現(xiàn)有技術(shù)，也不意欲構(gòu)成對該參考文獻(xiàn)的內(nèi)容或出版日期的任何承認(rèn)。表4提供序列表中序列的簡單描述。表4序列標(biāo)識符seqidno:描述1派姆單抗輕鏈cdr12派姆單抗輕鏈cdr23派姆單抗輕鏈cdr34派姆單抗重鏈cdr15派姆單抗重鏈cdr26派姆單抗重鏈cdr37派姆單抗重鏈8派姆單抗輕鏈序列表<110>reichert,paulprosise,winifredw.scapin,giovannayang,xiaoyukashi,rameshstrickland,corey<120>抗人類pd-1單克隆抗體的晶體<130>24029<140>62/121867<141>2015-02-27<160>8<170>patentinversion3.5<210>1<211>15<212>prt<213>人工<220><223>抗體輕鏈cdr<400>1argalaserlysglyvalserthrserglytyrsertyrleuhis151015<210>2<211>7<212>prt<213>人工<220><223>抗體輕鏈cdr<400>2leualasertyrleugluser15<210>3<211>9<212>prt<213>人工<220><223>抗體輕鏈cdr<400>3glnhisserargaspleuproleuthr15<210>4<211>5<212>prt<213>人工<220><223>抗體重鏈cdr<400>4asntyrtyrmettyr15<210>5<211>17<212>prt<213>人工<220><223>抗體重鏈cdr<400>5glyileasnproserasnglyglythrasnpheasnglulysphelys151015asn<210>6<211>11<212>prt<213>人工<220><223>抗體重鏈cdr<400>6argasptyrargpheaspmetglypheasptyr1510<210>7<211>447<212>prt<213>人工序列<220><223>人源化抗體重鏈<400>7glnvalglnleuvalglnserglyvalgluvallyslysproglyala151015servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrasntyr202530tyrmettyrtrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet354045glyglyileasnproserasnglyglythrasnpheasnglulysphe505560lysasnargvalthrleuthrthraspserserthrthrthralatyr65707580metgluleulysserleuglnpheaspaspthralavaltyrtyrcys859095alaargargasptyrargpheaspmetglypheasptyrtrpglygln100105110glythrthrvalthrvalserseralaserthrlysglyproserval115120125pheproleualaprocysserargserthrsergluserthralaala130135140leuglycysleuvallysasptyrpheprogluprovalthrvalser145150155160trpasnserglyalaleuthrserglyvalhisthrpheproalaval165170175leuglnserserglyleutyrserleuserservalvalthrvalpro180185190serserserleuglythrlysthrtyrthrcysasnvalasphislys195200205proserasnthrlysvalasplysargvalgluserlystyrglypro210215220procysproprocysproalaproglupheleuglyglyproserval225230235240pheleupheproprolysprolysaspthrleumetileserargthr245250255progluvalthrcysvalvalvalaspvalserglngluaspproglu260265270valglnpheasntrptyrvalaspglyvalgluvalhisasnalalys275280285thrlysproargglugluglnpheasnserthrtyrargvalvalser290295300valleuthrvalleuhisglnasptrpleuasnglylysglutyrlys305310315320cyslysvalserasnlysglyleuproserserileglulysthrile325330335serlysalalysglyglnproarggluproglnvaltyrthrleupro340345350proserglngluglumetthrlysasnglnvalserleuthrcysleu355360365vallysglyphetyrproseraspilealavalglutrpgluserasn370375380glyglnprogluasnasntyrlysthrthrproprovalleuaspser385390395400aspglyserphepheleutyrserargleuthrvalasplysserarg405410415trpglngluglyasnvalphesercysservalmethisglualaleu420425430hisasnhistyrthrglnlysserleuserleuserleuglylys435440445<210>8<211>218<212>prt<213>人工序列<220><223>人源化輕鏈<400>8gluilevalleuthrglnserproalathrleuserleuserprogly151015gluargalathrleusercysargalaserlysglyvalserthrser202530glytyrsertyrleuhistrptyrglnglnlysproglyglnalapro354045argleuleuiletyrleualasertyrleugluserglyvalproala505560argpheserglyserglyserglythraspphethrleuthrileser65707580serleugluprogluaspphealavaltyrtyrcysglnhisserarg859095aspleuproleuthrpheglyglyglythrlysvalgluilelysarg100105110thrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspglugln115120125leulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphetyr130135140proargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnser145150155160glyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspserthr165170175tyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglulys180185190hislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserserpro195200205valthrlysserpheasnargglyglucys210215當(dāng)前第1頁12