本發(fā)明涉及一種藥物載體的制備方法，尤其涉及一種聚合物囊泡的制備方法，屬于藥物載體技術領域。

背景技術：

癌癥是當今醫(yī)學界所面臨的重大難題之一，化學療法是癌癥綜合治療中不可缺少的重要手段，而傳統(tǒng)的化療方法存在毒副作用大、藥物生物利用率低、缺乏特異性識別等缺點，限制了其在癌癥治療中的應用與發(fā)展。

聚合物囊泡具有許多獨特的物理化學性質，在癌癥治療領域具有重大的應用價值。聚合物囊泡是由具有雙親性嵌段或接枝共聚物在水溶液中自組裝形成的一類具有雙層膜結構的聚集體，具有內容量大、穩(wěn)定性高、可負載親、疏水性藥物的優(yōu)點。利用聚合物囊泡作為抗癌藥物的運輸載體，可實現(xiàn)藥物在腫瘤部位的靶向釋放，有效地提高藥物的生物利用率，減少藥物的毒副作用。同時，由于聚合物囊泡的雙層膜結構與細胞膜具有良好的相容性，使其作為藥物載體既能保持藥物的生理活性，又可降低藥物的毒性和刺激性，從而達到低毒、高效、控釋的目的。

環(huán)糊精(cd)是由6-12個d-吡喃葡萄糖單元以α-1,4-糖苷鍵首尾相連形成的環(huán)狀低聚糖，具有良好的生物相容性、無毒和易于功能化等特點。由于連接d-吡喃葡萄糖單元的糖苷鍵不能自由旋轉，使環(huán)糊精分子具有略呈錐形的中空圓筒環(huán)狀結構，其外殼具有親水性，而內空腔由于受到c-h鍵的屏蔽作用形成了疏水區(qū)。利用其特殊的筒狀結構，環(huán)糊精與疏水性小分子、蛋白質、核酸等形成主-客體包合物，從而對客體分子起到保護、穩(wěn)定和增溶的作用，在藥物載體領域具有重要應用。殼聚糖(cs)是自然界中存在的唯一陽離子天然活性多糖，具有良好的生物相容性、生物可降解性、無毒等優(yōu)點，已被廣泛用于生物醫(yī)學領域。天然高分子作為藥物載體可以有效地延緩或控制藥物釋放，穩(wěn)定和保護藥物活性成分，促進藥物吸收，提高生物利用率。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種通過殼聚糖接枝環(huán)糊精與苯并咪唑聚己內酯之間的可逆的包結作用制備聚合物載藥囊泡的方法。

本發(fā)明中各個化合物的名稱縮寫如下：

殼聚糖接枝環(huán)糊精聚合物以cs-g-cd表示，苯并咪唑聚己內酯以bm-pcl表示，殼聚糖以cs表示，苯并咪唑以bm表示，聚己內酯以pcl表示，單-6-對甲苯磺酰-β-環(huán)糊精以6-ts-cd表示。

本發(fā)明解決上述技術問題的技術方案如下：

一種環(huán)糊精聚合物載藥囊泡的制備方法，包括如下步驟：

1)以殼聚糖接枝環(huán)糊精聚合物和苯并咪唑聚己內酯為原料，將cs-g-cd和bm-pcl分別溶于溶劑中，制得溶液；

2)將藥物加入到步驟1)中所得的bm-pcl溶液中攪拌溶解，后將所得的bm-pcl溶液在攪拌條件下以1～2滴/s的速度滴加到cs-g-cd溶液中，滴加完畢后繼續(xù)攪拌，后蒸餾水透析得到聚合物載藥囊泡溶液。

在上述技術方案的基礎上，本發(fā)明還可以做如下改進。

進一步，步驟2)中所述的藥物為5-氟尿嘧啶、阿霉素、布洛芬、萘普生、吲哚美辛、雙氯芬酸鈉中的一種。

進一步，步驟1)中溶解cs-g-cd的溶劑為冰乙酸水溶液，溶解bm-pcl的溶劑為dmf。

進一步，步驟1)中所得cs-g-cd和bm-pcl溶液的濃度為0.1～1.0mg/ml。

進一步，步驟2)中混合過程中控制cs-g-cd與bm-pcl的體積比為1：1～10：1。

進一步，步驟2)中繼續(xù)攪拌的時間為12～48h。

進一步，步驟2)中蒸餾水透析的時間為4～8小時。

進一步，步驟1)中所述的cs-g-cd由殼聚糖(cs)和單-6-對甲苯磺酰-β-環(huán)糊精(6-ts-cd)經接枝反應制得，步驟1)中所述的bm-pcl由苯并咪唑與己內酯經聚合反應制得。

本發(fā)明的有益效果是：

1)本發(fā)明的方法制備得到的聚合物囊泡對親、疏水性藥物的載藥能力強，載藥量可達37％以上，而現(xiàn)有技術報道的載藥量大多在10～20％，載藥量高的原因是囊泡的壁由β-cd和pcl形成，藥物可以負載到囊泡的空腔及β-cd中；

2)可實現(xiàn)藥物的可控釋放；

3)具有空心結構，粒徑在100～200nm之間，囊泡的大小可以根據(jù)cs-g-cd和bm-pcl兩種聚合物的比例調節(jié)；

4)制備工藝簡單，易于操作和實現(xiàn)。

附圖說明

圖1為本發(fā)明合成聚合物載藥囊泡的過程示意圖；

圖2為本發(fā)明所得聚合物載藥囊泡的透射電鏡圖片；

圖3為實施例1的聚合物載藥囊泡緩釋曲線(實施例1所得載藥聚合物囊泡藥物釋放曲線)。

具體實施方式

以下結合實例對本發(fā)明的原理和特征進行描述，所舉實例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。

本發(fā)明實施例中所使用的原料cs-g-cd的制備方法如下：

1)將β-環(huán)糊精(β-cd)(20～40g)溶于蒸餾水中，配成濃度為0.1～0.3mol/l的溶液，用恒壓滴液漏斗向其中緩慢滴加5～15ml濃度為8～10mol/l的氫氧化鈉溶液，將反應體系置于0℃冰水浴中；

2)取對甲苯磺酰氯5～8g，溶于15～20ml乙腈，然后逐滴加入步驟1)中所得的體系中，反應2～4h，得到單-6-對甲苯磺酰-β-環(huán)糊精(6-ots-cd)；

3)將殼聚糖(cs)1～5g溶于80～200ml體積比為1％～5％的冰乙酸溶液中，然后向其中加入含6-ots-cd(1～5g)的40～100ml的n,n-二甲基甲酰胺(dmf)溶液，抽真空，通n2保護，將體系置于90～120℃油浴中回流反應10～15h，得到殼聚糖接枝環(huán)糊精共聚物(cs-g-cd)。

本發(fā)明實施例中所使用的原料bm-pcl的制備方法如下：

將單體己內酯5～8g溶于適量的甲苯中，然后加入單體摩爾量0.1％～0.5％的催化劑辛酸亞錫，0.1～0.5g的引發(fā)劑2-溴乙醇，抽真空、通氮氣循環(huán)三次，將體系置于110～130℃油浴中，磁力攪拌下反應24～30h，得到聚己內酯(pcl)。將pcl2～5g和苯并咪唑10～20g溶于20～40mldmf溶液中，加入0.5～2.0gn,n-二異丙基乙胺，抽真空、通氮氣循環(huán)三次，將體系置于60～90℃油浴中，磁力攪拌下反應24～30h，得到苯并咪唑聚己內酯(bm-pcl)。

其中載藥量按照下式計算：載藥量＝載入囊泡的藥物質量/(聚合物囊泡質量+藥物質量)×100％。

實施例1：

一種環(huán)糊精聚合物載藥囊泡的制備方法，包括如下步驟：

1)將cs-g-cd溶于10ml的1％(v/v)的冰乙酸溶液(ph＝3)中配成濃度為1mg/ml的溶液，將bm-pcl溶于10ml的dmf中制得濃度為0.1mg/ml的溶液；

2)將6.7mg的阿霉素加入到bm-pcl溶液中攪拌溶解，后在攪拌條件下以1-2滴/s的速度滴加到cs-g-cd溶液中，滴加完畢后繼續(xù)攪拌24h，蒸餾水中透析6小時，得聚合物載藥囊泡，載藥量為37.8％。

實施例2：

一種環(huán)糊精聚合物載藥囊泡的制備方法，包括如下步驟：

1)將cs-g-cd溶于20ml的1％(v/v)的冰乙酸溶液(ph＝3)中配成濃度為0.1mg/ml的溶液，將bm-pcl溶于5ml的dmf中制得濃度為0.1mg/ml的溶液；

2)將1.7mg的萘普生加入到bm-pcl溶液中攪拌溶解，后在攪拌條件下以1-2滴/s的速度滴加到cs-g-cd溶液中混合，滴加完畢后繼續(xù)攪拌48h，蒸餾水中透析4小時，得聚合物載藥囊泡，載藥量為39.8％。

實施例3：

一種環(huán)糊精聚合物載藥囊泡的制備方法，包括如下步驟：

1)將cs-g-cd溶于50ml的1％(v/v)的冰乙酸溶液中配成濃度為0.1mg/ml的溶液，將bm-pcl溶于5ml的dmf中制得濃度為0.5mg/ml的溶液；

2)將10.3mg的吲哚美辛加入到bm-pcl溶液中攪拌溶解，后在攪拌條件下以1-2滴/s的速度滴加到cs-g-cd溶液中混合，滴加完畢后繼續(xù)攪拌12h，蒸餾水中透析8小時，得聚合物載藥囊泡，載藥量為37.1％。

為了驗證本發(fā)明所得聚合物載藥囊泡的藥物控釋和緩釋效果，我們進行了藥物的控釋和緩釋效果的測試，具體結果如圖3所示：

由圖2、圖3中我們可以看到，囊泡粒徑為100nm左右，未負載到聚合物囊泡內的藥物2小時內釋放100％，而負載到聚合物囊泡的藥物在48小時內累積釋放量只有68％。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內。