本申請是申請日為2012年3月28日、發(fā)明名稱為“含有前列腺素的脂肪乳劑”的中國申請?zhí)枮?01280015805.2的分案申請。
本發(fā)明涉及可通過靜脈注射給藥的含有前列腺素的脂肪乳劑、包含所述含有前列腺素的脂肪乳劑的注射劑、以及制備載藥注射器制劑(pre-filledsyringepreparation)的方法。本發(fā)明還涉及制備所述注射劑的方法。
背景技術(shù)：
以一種前列腺素e1(pge1)制劑的形式研發(fā)用于靜脈注射的脂肪乳劑，并且以“l(fā)ipleinjection”(mitsubishitanabepharmacorp.)、“paluxinj.”(taishopharmaceuticalco.,ltd.)等名稱在市場上銷售所述脂肪乳劑。
然而，由于作為活性成分的前列腺素e1容易分解，因此將所述前列腺素e1脂肪乳劑貯存于5℃或更低的避光環(huán)境中是必要的，并且其法律規(guī)定的有效期為1年，這比普通制劑的有效期短。這樣的制劑導(dǎo)致了在配送階段和臨床領(lǐng)域中藥品管理費用的增加。因此迫切期望開發(fā)具有長有效期的制劑。
為了增強(qiáng)所述前列腺素e1的穩(wěn)定性，目前已經(jīng)進(jìn)行了多種研究。
例如，人們發(fā)現(xiàn)通過使用經(jīng)純化的磷脂(參見專利文獻(xiàn)1)、通過實質(zhì)上不摻入高級脂肪酸(參見專利文獻(xiàn)2)等來提高前列腺素的穩(wěn)定性。然而，上述文獻(xiàn)中描述的方法不被認(rèn)為在提高前列腺素的穩(wěn)定性上帶來足夠的效果，并且一些例子中的脂肪乳劑甚至具有降低的乳劑穩(wěn)定性。因此需要延長制劑的有效期。
在專利文獻(xiàn)3中，報道了在特定的乳化劑/油比率下前列腺素的穩(wěn)定性提高。
同時，由于含有前列腺素e1的脂肪乳劑具有乳白色的外觀，因此難以發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)的夾雜(發(fā)生于安瓿開口上)、微生物的污染或出現(xiàn)在貯藏時生成的粗顆粒。因此，那些脂肪乳劑被認(rèn)為是在臨床領(lǐng)域中極難管理的制劑。
專利文獻(xiàn)3中描述的方法的確產(chǎn)生了提高前列腺素的穩(wěn)定性的效果。然而，人們發(fā)現(xiàn)由于過量存在的卵磷脂被水解，因此提高長期貯藏性的效果是不足的。同時，已知檸檬酸和特定的氨基酸為脂肪乳劑的穩(wěn)定劑(專利文獻(xiàn)4)。然而，盡管已知這些穩(wěn)定劑具有抑制脂肪乳劑變色的作用，但還未確定這些穩(wěn)定劑具有使裝在密封容器中的藥物穩(wěn)定的作用。特別地，由于ph已被調(diào)節(jié)至6.5-7.5，因此所述穩(wěn)定劑在這樣的ph下不能抑制前列腺素的分解。此外，由于檸檬酸容易導(dǎo)致破乳，因此就實現(xiàn)乳劑穩(wěn)定性而言，藥物必須在ph超過6.0的條件下乳化。
然而，已知隨著ph增大超過6.0，前列腺素的穩(wěn)定性快速降低。用專利文獻(xiàn)4所述的方法難以獲得具有高貯藏穩(wěn)定性的脂肪乳劑。
在這種情況下，需要開發(fā)在活性成分(前列腺素)的穩(wěn)定性、乳劑穩(wěn)定性和透明度方面優(yōu)異的含有前列腺素的脂肪乳劑。
現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)1：jp-b-8-18989
專利文獻(xiàn)2：jp-a-4-338333
專利文獻(xiàn)3：國際公開wo2009/93650
專利文獻(xiàn)4：jp-a-8-81360
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題
盡管專利文獻(xiàn)3中描述的方法的確產(chǎn)生了提高前列腺素穩(wěn)定性的效果，但發(fā)現(xiàn)由于過量存在的卵磷脂被水解，因此提高長期貯藏性的效果是不足的。同時還發(fā)現(xiàn)在所添加的卵磷脂的量較小的情況下，大部分的前列腺素以游離態(tài)形式存在于水相中，因此未充分實現(xiàn)藥效。
本發(fā)明的第一方面的第一目的是提高前列腺素的穩(wěn)定性并且提供具有優(yōu)異的乳劑穩(wěn)定性和長貯存期的脂肪乳劑。第二目的是提供具有高透明度的脂肪乳劑。第三目的是提供各自含有或包含含有前列腺素的脂肪乳劑的注射劑和載藥注射器，并且提供制備可被容易滅菌的注射劑的方法。
本發(fā)明的第二方面的第一目的是提高前列腺素的穩(wěn)定性并且提供具有優(yōu)異的乳劑穩(wěn)定性和長貯存期的脂肪乳劑。第二目的是提供具有高透明度的脂肪乳劑并且提供表現(xiàn)出高藥效的脂肪乳劑。第三目的是提供包含含有前列腺素的脂肪乳劑的注射劑，并且提供制備可被容易滅菌的注射劑的方法。
解決所述問題的手段
本發(fā)明包括以下方面。
[1]含有前列腺素的脂肪乳劑，所述脂肪乳劑為包含以下成分的脂肪乳劑：
前列腺素化合物，
油成分，
卵磷脂，
pka為4.0至6.0并且具有可解離基團(tuán)的水溶性酸或其鹽，和
水，
其中以質(zhì)量計，所述卵磷脂的含量為所述油成分的含量的0.15倍或更多，并且
所述脂肪乳劑的ph為4.5至6.0。
[2][1]的含有前列腺素的脂肪乳劑，
其中以0.01mmol/l至5mmol/l的量包含所述水溶性酸或其鹽。
[3][1]或[2]的含有前列腺素的脂肪乳劑，
其中所述水溶性酸為檸檬酸。
[4][1]至[3]中任一項的含有前列腺素的脂肪乳劑，
其中以質(zhì)量計，所述脂肪乳劑中的所述卵磷脂的含量為所述油成分的含量的0.3倍或更多。
[5][1]至[4]中任一項的含有前列腺素的脂肪乳劑，
其中所述脂肪乳劑中的所述油成分的含量為基于所述脂肪乳劑的0.01-5質(zhì)量％。
[6][1]至[5]中任一項的含有前列腺素的脂肪乳劑，其特征在于還包含高級脂肪酸，以質(zhì)量計，所述脂肪乳劑中的所述高級脂肪酸的含量為所述卵磷脂的含量的至多0.06倍。
[7][1]至[6]中任一項的含有前列腺素的脂肪乳劑，
其中所述前列腺素化合物為前列腺素e1。
[8]含有前列腺素的脂肪乳劑，所述脂肪乳劑為包含以下成分的脂肪乳劑：
前列腺素化合物，
油成分，
卵磷脂，和
水，
其中以質(zhì)量計，所述卵磷脂的含量為所述前列腺素化合物的含量的500-5000倍，
以質(zhì)量計，所述卵磷脂的含量為所述油成分的含量的0.3-10倍，并且
以質(zhì)量計，所述高級脂肪酸的含量為所述卵磷脂的含量的0.06倍或更少。
[9][8]的含有前列腺素的脂肪乳劑，
其中所述卵磷脂的含量為基于整個所述脂肪乳劑的0.4-2質(zhì)量％。
[10][8]或[9]的含有前列腺素的脂肪乳劑，
其中以游離態(tài)形式存在于水相中的所述前列腺素化合物部分占所述脂肪乳劑中的所述前列腺素化合物的10％或更少。
[11][8]至[10]中任一項的含有前列腺素的脂肪乳劑，
其中所述油成分的含量為基于整個所述脂肪乳劑的0.2-5質(zhì)量％。
[12][8]至[11]中任一項的含有前列腺素的脂肪乳劑，其還包含pka為4.0至6.0并且具有可解離基團(tuán)的水溶性酸或其鹽。
[13][12]的含有前列腺素的脂肪乳劑，
其中所述脂肪乳劑中的所述水溶性酸或其鹽的含量為0.01mmol/l至5mmol/l。
[14][8]至[13]中任一項的含有前列腺素的脂肪乳劑，
其中所述脂肪乳劑的ph為4.5至6.0。
[15][1]至[14]中任一項的含有前列腺素的脂肪乳劑，
其中通過光散射法測得的所述脂肪乳劑的平均粒徑為30-150nm。
[16][1]至[15]中任一項的含有前列腺素的脂肪乳劑，
其中所述卵磷脂為包含磷脂酰膽堿的蛋黃卵磷脂，所述磷脂酰膽堿的量為98質(zhì)量％或更多。
[17][1]至[16]中任一項的含有前列腺素的脂肪乳劑，
其中所述油成分為大豆油。
[18][1]至[17]中任一項的含有前列腺素的脂肪乳劑，
其中所述含有前列腺素的脂肪乳劑為已通過過濾滅菌的含有前列腺素的脂肪乳劑。
[19]注射劑，其包含[1]至[18]中任一項的含有前列腺素的脂肪乳劑。
[20]載藥注射器制劑，其包含注射器，所述注射器裝有[1]至[18]中任一項的含有前列腺素的脂肪乳劑或[19]的注射劑。
[21]制備[19]或[20]的注射劑的方法，其包括通過過濾將[19]或[20]的含有前列腺素的脂肪乳劑滅菌的步驟。
發(fā)明效果
根據(jù)本發(fā)明，不僅極大地提高了前列腺素的穩(wěn)定性，而且提高了脂肪乳劑的乳劑穩(wěn)定性。此外，發(fā)現(xiàn)預(yù)料不到的粗顆粒減少的效果。也就是說，根據(jù)本發(fā)明，可提供可通過靜脈注射給藥并且與傳統(tǒng)產(chǎn)品相比具有極大改善的貯存期的含有前列腺素的脂肪乳劑、注射劑和載藥注射器制劑。由于該脂肪乳劑具有提高的透明度，因此能夠容易地發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)的夾雜，并且就臨床領(lǐng)域的藥品管理而言，所述制劑也是有效的。此外，可提供產(chǎn)生高藥效的含有前列腺素的脂肪乳劑。
本發(fā)明的實施方式
根據(jù)本發(fā)明第一方面的可靜脈給藥的含有前列腺素的脂肪乳劑為包含前列腺素化合物、油成分、卵磷脂、pka為4.0至6.0并且具有可解離基團(tuán)的水溶性酸或所述酸的鹽、和水的脂肪乳劑，并且其特征在于以質(zhì)量計，所述卵磷脂的含量為所述油成分的含量的0.15倍或更多，而且所述脂肪乳劑的ph為4.5至6.0。
通常廣泛認(rèn)為脂肪乳劑中脂肪酸的存在降低包含在所述脂肪乳劑中的前列腺素的穩(wěn)定性。然而，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了預(yù)料不到的效果，即通過使特定的水溶性酸存在于脂肪乳劑中，從而使所述脂肪乳劑中包含的前列腺素的穩(wěn)定性顯著提高。
根據(jù)本發(fā)明第二方面的含有前列腺素的脂肪乳劑為包含前列腺素化合物、油成分、卵磷脂和水的脂肪乳劑，并且其中以質(zhì)量計，所述卵磷脂的含量為所述前列腺素化合物的含量的500-5000倍，以質(zhì)量計，所述卵磷脂的含量為所述油成分的含量的0.3-10倍，并且以質(zhì)量計，所述高級脂肪酸的含量為所述卵磷脂的含量的0.06倍或更少。
根據(jù)本發(fā)明第二方面的含有前列腺素的脂肪乳劑可靜脈給藥，并且所述前列腺素化合物、油成分、卵磷脂和水的比例已被限定至特定的范圍。由于這些組分的比例在特定的范圍內(nèi)，因此可提供能夠滿足前列腺素的穩(wěn)定性、乳劑穩(wěn)定性、脂肪乳劑的透明度以及藥效的藥物制劑。
在本文中，表述“以質(zhì)量計，……倍”意指其量為所述組分質(zhì)量的多少倍。
<水溶性酸>
根據(jù)本發(fā)明第二方面的脂肪乳劑包含pka為4.0至6.0并且具有可解離基團(tuán)的水溶性酸或其鹽。
優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明第二方面的脂肪乳劑包含所述水溶性酸。
在本文中，酸解離常數(shù)pka為在25℃水中測定的值。在多官能團(tuán)酸(multifunctionalacid)的情況下，所述酸可為其中多個酸解離常數(shù)中的任一個為4.0至6.0的酸。
所述水溶性酸優(yōu)選為有機(jī)酸。更優(yōu)選為具有2-10個碳原子的羧酸。所述水溶性酸的具體實例包括乙酸(pka＝4.76)、丁酸(pka＝4.63)、苯甲酸(pka＝4.00)、檸檬酸(pka1＝3.15、pka2＝4.77、pka3＝6.40)、琥珀酸(pka1＝4.00、pka2＝5.24)、酒石酸(pka1＝3.2,pka2＝4.8)、苯二甲酸(pka1＝2.94、pka2＝5.41)、延胡索酸(pka1＝2.85、pka2＝4.10)、馬來酸(pka1＝1.75、pka2＝5.83)以及蘋果酸(pka1＝3.40、pka2＝5.13)。在這些酸中，優(yōu)選乙酸和檸檬酸。特別優(yōu)選檸檬酸。在本文中，酸解離常數(shù)pka的值為在25℃水中測定的值。在多官能團(tuán)酸的情況下，所述酸可為其中多個酸解離常數(shù)中的任一個在所述范圍的酸。
在本發(fā)明的脂肪乳劑中，可以合適的組合使用適當(dāng)量的氫氧化鈉、鹽酸、磷酸、磷酸鹽、檸檬酸和檸檬酸鹽作為ph調(diào)節(jié)劑，以調(diào)節(jié)ph至所述值。特別地，優(yōu)選添加檸檬酸/磷酸緩沖劑或檸檬酸緩沖劑作為ph調(diào)節(jié)劑，以使ph在貯藏過程中保持在優(yōu)選范圍內(nèi)的值。
多種此類水溶性酸可組合使用。
可以鹽的形式包含所述水溶性酸，或所述水溶性酸可構(gòu)成緩沖體系。鹽的種類沒有特別的限制，并且其實例包括堿金屬鹽或堿土金屬鹽。優(yōu)選鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽。
優(yōu)選地，包含在所述脂肪乳劑中的所述水溶性酸或其鹽的量為0.001mmol/l至50mmol/l。其含量更優(yōu)選為0.005mmol/l至10mmol/l，特別優(yōu)選0.01mmol/l至5mmol/l。通過調(diào)節(jié)其含量在所述范圍內(nèi)，從而充分實現(xiàn)了穩(wěn)定前列腺素的效果并且能夠保持乳劑穩(wěn)定性。因此所述范圍是優(yōu)選的。
<前列腺素化合物>
在構(gòu)成本發(fā)明的脂肪乳劑的成分中，所述前列腺素化合物的實例包括前列腺素e1(pge1)、前列腺素a2(pga2)、前列腺素d2(pgd2)、前列腺素e2(pge2)、前列腺素f1α(pgf1α)、前列腺素i2(pgi2)，以及它們的衍生物。在本發(fā)明的這些前列腺素化合物中，優(yōu)選在脂肪乳劑中需求很大的前列腺素e1(pge1)。在使用pge1的情況下，本發(fā)明特別有效。
多種前列腺素可組合使用。
本發(fā)明的含有前列腺素的脂肪乳劑包含前列腺素化合物。具體地，本發(fā)明的每種脂肪乳劑中所述前列腺素化合物的含量優(yōu)選為0.00001-0.01質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.0001-0.005質(zhì)量％，甚至更優(yōu)選為0.0003-0.001質(zhì)量％。
在本發(fā)明的第二方面中，以游離態(tài)形式存在于水相中的前列腺素化合物部分占包含在所述脂肪乳劑中的前列腺素化合物的比例優(yōu)選為10％或更少，更優(yōu)選0.1-10％，甚至更優(yōu)選0.1-8％，特別優(yōu)選0.1-6％。已知在含有前列腺素的脂肪乳劑中，表現(xiàn)出藥效的前列腺素化合物被包含在脂肪顆粒中，并且因此防止了所述前列腺素化合物在肺部失活，并增強(qiáng)了對發(fā)炎部位的靶向性質(zhì)。因此，通過降低以游離態(tài)形式存在于水相中的前列腺素占所述脂肪乳劑中包含的全部前列腺素化合物的比例，可防止藥效降低。順便地，可通過透析或超濾來分離水相中的游離前列腺素。
<卵磷脂>
本發(fā)明的脂肪乳劑包含卵磷脂。
在本文中，所述卵磷脂為單獨的磷脂酰膽堿或為至少包含磷脂酰膽堿的混合物。
所述包含磷脂酰膽堿的混合物通常為除磷脂酰膽堿外還可包含磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、n-?；字Ｒ掖及贰⒘字８视?、磷脂酸、溶血磷脂酰膽堿、溶血磷脂酸、神經(jīng)鞘磷脂、神經(jīng)乙醇胺(sphingoethanolamine)等的混合物。
所述卵磷脂可為合成產(chǎn)品或來源于天然物質(zhì)的卵磷脂。其實例通常包括蛋黃卵磷脂(來源于蛋黃的卵磷脂；下文中同樣適用)、大豆卵磷脂、棉籽卵磷脂、油菜籽卵磷脂和玉米卵磷脂。本發(fā)明中使用的卵磷脂優(yōu)選為蛋黃卵磷脂和大豆卵磷脂。更優(yōu)選為蛋黃卵磷脂。優(yōu)選通過純化蛋黃卵磷脂而得到的純化蛋黃卵磷脂，并且更優(yōu)選高純度蛋黃卵磷脂。本發(fā)明中的卵磷脂優(yōu)選為蛋黃卵磷脂，其包含磷脂酰膽堿并且具有96％或更高的磷脂酰膽堿含量，并且更優(yōu)選為具有98質(zhì)量％或更高的磷脂酰膽堿含量的蛋黃卵磷脂。所述卵磷脂適用于通過靜脈注射給藥的脂肪乳劑中。
對于具有98質(zhì)量％或更高的磷脂酰膽堿含量的蛋黃卵磷脂，可使用iyakuhintenkabutsujiten2007(yakujinippoltd.)中列舉的名稱為“高純度蛋黃卵磷脂”的產(chǎn)品。具體地，其實例包括pc-98n(由q.p.corp.生產(chǎn))。
以質(zhì)量計，根據(jù)本發(fā)明第一方面的脂肪乳劑中的卵磷脂的含量優(yōu)選為前列腺素化合物的含量的100-20,000倍，更優(yōu)選500-10,000倍，特別優(yōu)選1,000-5,000倍。同時，基于所述脂肪乳劑，卵磷脂的含量期望為0.1質(zhì)量％或更高，優(yōu)選0.2質(zhì)量％或更高，更優(yōu)選0.3質(zhì)量％或更高，甚至更優(yōu)選0.5質(zhì)量％或更高，特別優(yōu)選1.2質(zhì)量％或更高。其含量優(yōu)選為3質(zhì)量％或更低，更優(yōu)選2質(zhì)量％或更低。當(dāng)卵磷脂的含量在該范圍內(nèi)時，乳劑穩(wěn)定性高，且所述脂肪乳劑的以游離態(tài)形式存在于水中的前列腺素的量少，從而產(chǎn)生高藥效。因此該卵磷脂含量范圍是優(yōu)選的。
根據(jù)本發(fā)明第二方面的脂肪乳劑的特征在于以質(zhì)量計，卵磷脂的含量為前列腺素化合物的含量的500-5,000倍。以質(zhì)量計，卵磷脂的含量優(yōu)選為前列腺素化合物的含量的1,000-5,000倍，特別優(yōu)選2,000-4,500倍。此外，本發(fā)明的脂肪乳劑中的卵磷脂的含量優(yōu)選為0.4-2質(zhì)量％，更優(yōu)選0.5-1.9質(zhì)量％，特別優(yōu)選0.6-1.8質(zhì)量％。當(dāng)卵磷脂的含量在該范圍內(nèi)時，可提高乳劑穩(wěn)定性，并且可降低以游離態(tài)形式存在于水中的前列腺素化合物占所述脂肪乳劑中全部前列腺素的比例，從而產(chǎn)生高藥效。因此該卵磷脂含量范圍是優(yōu)選的。
<油成分>
本發(fā)明的脂肪乳劑包含油成分。
作為本發(fā)明中使用的油成分，其優(yōu)選使用脂肪酸甘油酯(單甘油酯、二甘油酯、三甘油酯、以及其兩種或更多種的混合物)。
作為脂肪酸甘油酯，可使用中鏈脂肪酸甘油酯或長鏈脂肪酸甘油酯。
所述中鏈脂肪酸甘油酯是具有6-12個碳原子的脂肪酸與甘油的縮合物，并且其實例包括tcg-m(kokyualcoholkogyo)、crodamolgtcc(crodajapan)、coconardmk(kao)、coconardrk(kao)、sunfatmct-7(taiyokagaku)、deriosu(cognisjapan)、panasate(nipponoil&fats)、miglyol810(mitsubatrading)、miglyol812(mitsubatrading)、myritol318(cognisjapan)和panasate810(yukasangyo)。
所述長鏈脂肪酸甘油酯是具有14個或更多個碳原子的脂肪酸與甘油的縮合物，并且其實例包括大豆油、橄欖油、芝麻油、油菜籽油、花生油、葵花油、玉米油、紅花油和棉籽油。在這些長鏈脂肪酸甘油酯中，優(yōu)選大豆油、橄欖油和芝麻油。特別優(yōu)選大豆油。
這些脂肪酸甘油酯可在通過水蒸汽蒸餾等進(jìn)行進(jìn)一步純化后使用。
就使得容易保持乳劑穩(wěn)定性和透明度同時防止卵磷脂水解而言，根據(jù)本發(fā)明第一方面的脂肪乳劑中的油成分的含量優(yōu)選為基于所述脂肪乳劑的0.01-10質(zhì)量％，更優(yōu)選0.01-5質(zhì)量％，特別優(yōu)選0.01-2質(zhì)量％。同時，就進(jìn)一步減少產(chǎn)生的粗顆粒以達(dá)到所述脂肪乳劑可通過靜脈注射給藥的程度而言，所述油成分的含量優(yōu)選為基于所述脂肪乳劑的0.01-10質(zhì)量％，更優(yōu)選0.01-5質(zhì)量％，特別優(yōu)選2-5質(zhì)量％。
就使得容易保持乳劑穩(wěn)定性和透明度同時防止卵磷脂水解而言，根據(jù)本發(fā)明第二方面的脂肪乳劑中的油成分的含量期望地為基于所述脂肪乳劑的0.04-5質(zhì)量％，優(yōu)選0.1-5質(zhì)量％，更優(yōu)選0.2-5質(zhì)量％，甚至更優(yōu)選0.2-3質(zhì)量％，特別優(yōu)選0.2-2質(zhì)量％。同時，就進(jìn)一步減少產(chǎn)生的粗顆粒以達(dá)到所述脂肪乳劑可通過靜脈注射給藥的程度而言，所述油成分的含量優(yōu)選為基于所述脂肪乳劑的0.04-10質(zhì)量％，更優(yōu)選0.2-7質(zhì)量％，甚至更優(yōu)選0.2-5質(zhì)量％，特別優(yōu)選2-5質(zhì)量％。
<卵磷脂與油成分的質(zhì)量比>
在根據(jù)本發(fā)明第一方面的脂肪乳劑中，就抑制粒徑隨時間推移的改變以及實現(xiàn)乳劑穩(wěn)定性而言，以質(zhì)量計，所述卵磷脂的含量優(yōu)選為所述油成分的含量的0.15-50倍，更優(yōu)選0.5-20倍，特別優(yōu)選0.7-10倍，最優(yōu)選0.7-6倍。同時，就進(jìn)一步減少產(chǎn)生的粗顆粒以達(dá)到所述脂肪乳劑可通過靜脈注射給藥的程度而言，以質(zhì)量計，所述卵磷脂的含量優(yōu)選為所述油成分的含量的0.15-50倍，更優(yōu)選0.2-10倍，特別優(yōu)選0.3-1倍，最優(yōu)選0.3-0.7倍。
根據(jù)本發(fā)明第二方面的脂肪乳劑的特征在于以質(zhì)量計，所述卵磷脂的含量為所述油成分的含量的0.3-10倍。以質(zhì)量計，所述卵磷脂與所述油成分的質(zhì)量比更優(yōu)選為0.7-8倍，特別優(yōu)選1-5倍。當(dāng)卵磷脂的含量在此范圍內(nèi)時，可抑制所述卵磷脂的水解，并且所述脂肪乳劑具有高的乳劑穩(wěn)定性，并且以游離態(tài)形式存在于水中的前列腺素的量降低，從而產(chǎn)生高藥效。因此該卵磷脂含量范圍是優(yōu)選的。同時，就進(jìn)一步減少產(chǎn)生的粗顆粒以達(dá)到所述脂肪乳劑可通過靜脈注射給藥的程度而言，所述油成分的含量優(yōu)選為基于所述脂肪乳劑的0.3-10質(zhì)量％，更優(yōu)選0.3-1質(zhì)量％，特別優(yōu)選0.3-0.7質(zhì)量％。
<高級脂肪酸>
為了提高乳劑穩(wěn)定性的目的，可將高級脂肪酸加入到本發(fā)明的脂肪乳劑中。
所述高級脂肪酸為具有10個或更多個碳原子的脂肪酸，并且可為飽和脂肪酸或不飽和脂肪酸。在本發(fā)明中，所述高級脂肪酸起到用于提高所述脂肪乳劑的乳劑穩(wěn)定性的乳化助劑的作用。用于本發(fā)明的高級脂肪酸的實例包括油酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸和亞麻酸。特別優(yōu)選油酸。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的脂肪乳劑優(yōu)選包含高級脂肪酸，并且以質(zhì)量計，所述高級脂肪酸的含量為所述卵磷脂的含量的0.06倍或更少。以質(zhì)量計，所述高級脂肪酸的含量優(yōu)選為所述卵磷脂的含量的0.0001-0.06倍，更優(yōu)選0.0001-0.03倍，特別優(yōu)選0.0001-0.01倍。最優(yōu)選實質(zhì)上不添加高級脂肪酸。
在根據(jù)本發(fā)明第二方面的脂肪乳劑中，為了提高乳劑穩(wěn)定性的目的可加入高級脂肪酸。然而，以質(zhì)量計，其含量為所述卵磷脂的含量的0.06倍或更少，優(yōu)選0.0001-0.06倍。在高級脂肪酸的質(zhì)量比超過0.06的情況下，盡管乳劑穩(wěn)定性提高，但前列腺素的穩(wěn)定性降低。也就是說，不可能獲得延長的貯存期。
就抑制前列腺素分解而言，所述高級脂肪酸與所述卵磷脂的質(zhì)量比更優(yōu)選為0.0001-0.03，特別優(yōu)選0.0001-0.01。最優(yōu)選實質(zhì)上不添加高級脂肪酸。
在本文中，表述“實質(zhì)上不添加高級脂肪酸”意指不特意加入任何高級脂肪酸。例如，通過油成分或磷脂分解而產(chǎn)生的游離高級脂肪酸以及偶然混入并包含的游離高級脂肪酸是排除在外的。
<乳化劑和分散劑>
在本發(fā)明的脂肪乳劑中，為了提高乳劑穩(wěn)定性的目的還可添加乳化劑或分散劑。
所述乳化劑的實例包括泊洛沙姆(聚氧乙烯/聚氧丙烯共聚物)、聚乙二醇35蓖麻油、聚乙二醇40氫化蓖麻油、聚乙二醇60氫化蓖麻油、聚氧乙烯失水山梨醇單月桂酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇單棕櫚酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇單硬脂酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇三硬脂酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯、12-羥基硬脂酸/聚氧乙烯酯、d-α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯、失水山梨醇/脂肪酸酯和倍半油酸山梨坦。
所述分散劑的實例包括人血清白蛋白、精制明膠、聚乙烯吡咯烷酮、熊脫氧膽酸、熊脫氧膽酸鹽、脫氧膽酸和脫氧膽酸鹽。
只要這些添加劑不影響所述脂肪乳劑的穩(wěn)定性，對這些乳化劑和分散劑的添加量沒有特別的限制。然而，在添加乳化劑或分散劑的情況下，以質(zhì)量計，其量通常為所述油成分的量的0.1倍或更高，并且以質(zhì)量計，其量優(yōu)選為20倍或更少，更優(yōu)選10倍或更少，甚至更優(yōu)選5倍或更少。
<其他成分>
本發(fā)明的脂肪乳劑可視需要包含等滲劑(如甘油、葡萄糖或氯化鈉)、抗氧劑(如抗壞血酸及其鹽、二丁基羥基茴香醚、二丁基羥基甲苯、α-生育酚或d-山梨醇)以及ph調(diào)節(jié)劑(氫氧化鈉、鹽酸或磷酸)。
<脂肪乳劑的粒徑>
本發(fā)明的每種脂肪乳劑(乳化后立即獲得)通過動態(tài)光散射法測得的平均粒徑優(yōu)選為30-150nm，更優(yōu)選30-120nm，特別優(yōu)選30-100nm。通過調(diào)節(jié)所述脂肪乳劑使其具有在上述范圍內(nèi)的粒徑，從而提高了所述脂肪乳劑的透明度，并且因此使發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)的夾雜或微生物的污染變得容易。因此，在臨床領(lǐng)域，可容易地發(fā)現(xiàn)其中已經(jīng)出現(xiàn)涉及其用途的問題的任何制劑。此外，由于所述脂肪乳劑可通過過濾滅菌，因此就減少分解產(chǎn)物而言，所述粒徑范圍也是優(yōu)選的。在將本發(fā)明的脂肪乳劑通過過濾滅菌的情況中，只要所述脂肪乳劑的粒徑在所述范圍內(nèi)，則所述脂肪乳劑可通過過濾介質(zhì)以通過過濾滅菌而不堵塞所述過濾介質(zhì)。
可通過使用以下所述的任意乳化劑并且通過控制處理壓力和處理次數(shù)來得到所述粒徑。
可用市售粒度分布分析儀等測量所述脂肪乳劑的粒徑。已知用于分析粒度分布的方法為光顯微術(shù)、共聚焦激光顯微術(shù)、電子顯微鏡術(shù)、原子力顯微鏡檢查、靜態(tài)光散射法、激光衍射法、動態(tài)光散射法、離心法、電脈沖計數(shù)法、色譜法、超聲波衰減法等。根據(jù)各原理的設(shè)備在市場上有售。
就粒徑范圍以及容易測量而言，用于本發(fā)明中的粒徑測量的方法優(yōu)選光散射法，更優(yōu)選動態(tài)光散射法或激光衍射法。應(yīng)用動態(tài)光散射法的市售測量裝置的實例包括nanotracupa(nikkisoco.,ltd.)、動態(tài)光散射型粒度分布分析儀lb-550(horibaltd.)以及用于稠密系統(tǒng)(thicksystem)的粒度分析儀fpar-1000(otsukaelectronicsco.,ltd.)。
特別地，本發(fā)明中的脂肪乳劑的粒徑是用fpar-1000測得的值。具體地，把通過contin法獲得的散射強(qiáng)度分布的中間粒徑作為所述粒徑。
<脂肪乳劑的ph>
本發(fā)明的每種脂肪乳劑的ph優(yōu)選為4.5-6.0，更優(yōu)選4.8-5.8，特別優(yōu)選5.0-5.5。通過調(diào)節(jié)其ph至所述范圍內(nèi)，能夠進(jìn)一步增強(qiáng)前列腺素的穩(wěn)定性。在其ph低于4.5的情況下，不僅前列腺素具有降低的穩(wěn)定性，而且在有些情況下所述脂肪乳劑具有降低的乳劑穩(wěn)定性。另一方面，在其ph超過6.0的情況下，前列腺素的穩(wěn)定性隨著ph增加而降低。
順便說明，在25℃下測量氫離子當(dāng)量濃度指數(shù)ph的值。
<制備脂肪乳劑的方法>
例如，本發(fā)明的脂肪乳劑可通過視需要向前列腺素化合物、油成分和卵磷脂的混合物中添加水來制備。盡管對制備本發(fā)明的脂肪乳劑的方法沒有特別限制，但特別優(yōu)選的方法為以下述的方式組合使用兩種或更多種乳化劑，所述方式例如：將所述混合物使用常規(guī)乳化劑乳化(在乳化過程中利用剪切例如攪拌器、葉輪、均勻混合器或連續(xù)流動式剪切裝置)，并將得到的乳劑通過高壓勻漿器。通過使用高壓勻漿器，可將乳化顆粒轉(zhuǎn)化為甚至更細(xì)微的液滴。
所述高壓勻漿器的實例包括具有室(具有供待處理液體的固定通道)的室式高壓勻漿器以及具有均質(zhì)閥(homogenizingvalve)的均質(zhì)閥式高壓勻漿器。在這些勻漿器中，均質(zhì)閥式高壓勻漿器廣泛用于制備特別是食品、化妝品等的乳化領(lǐng)域，因為所述供待處理液體的通道的寬度可被容易調(diào)節(jié)，并且因此可在大范圍內(nèi)任意設(shè)定操作期間的壓力和流速。與此相反，室式高壓勻漿器在需要超高壓的應(yīng)用中使用，因為其中容易構(gòu)建用于升高壓力的機(jī)制，但操作的自由度低。
所述室式高壓勻漿器的實例包括microfluidizer(microfluidicscorp.)、nanomizer(yoshidakikaico.,ltd.)和ultimizer(suginomachineltd.)。
所述均質(zhì)閥式高壓勻漿器的實例包括gaulin型勻漿器(pvainc.)、rannie型勻漿器(rannieinc.)、高壓勻漿器(nirosoavis.p.a.)、勻漿器(sanwaengineeringltd.)、高壓勻漿器(izumifoodmachineryco.,ltd.)以及超高壓勻漿器(ikacompany)。
使用高壓勻漿器的分散過程被認(rèn)為是歸因于當(dāng)液體在高速下通過非常窄(小)的間隙時產(chǎn)生的高剪切力。所述剪切力的大小與壓力大致成比例。也就是說，壓力越高，則剪切力越高，即施加于在液體中分散的顆粒的分散力。然而，由于高速流動的液體的動能大部分轉(zhuǎn)化為熱，因此隨著壓力增加，液體的溫度升高。因此有些情況下，由于升高的溫度，分散液體的組分變質(zhì)并且顆粒的復(fù)凝聚(re-agglomeration)加速。因此，盡管高壓勻漿器具有最佳壓力點，但認(rèn)為該最佳點取決于待分散的物質(zhì)以及目標(biāo)粒徑而變化。在本發(fā)明中，優(yōu)選在50mpa或更高，更優(yōu)選50-250mpa，甚至更優(yōu)選100-250mpa的勻漿器壓力下進(jìn)行處理。通過在該范圍內(nèi)的高壓條件下進(jìn)行分散過程，可調(diào)節(jié)乳劑以使其具有所述粒徑。因此所述壓力范圍是優(yōu)選的。優(yōu)選地，在穿過所述室后，應(yīng)將所述乳劑30s內(nèi)，優(yōu)選3s內(nèi)通過穿過任意冷卻器進(jìn)行冷卻。
用于獲得微細(xì)乳化顆粒的另一有效方法為使用超聲波勻漿器。具體地，已知的方法為使用常規(guī)乳化劑乳化混合物(在乳化過程中使用如上所述的剪切)，然后以15-40khz的頻率向乳劑傳送超聲波。大功率超聲波勻漿器的實例包括超聲波勻漿器us-1200t、rus-1200t和mus-1200t(均由nihonseikikaishaltd.制造)以及超聲波處理器uip2000、uip-4000、uip-8000和uip-16000(均由hielschergmbh制造)。通過在以下條件下使用這些大功率超聲波傳送器中的任一種，所述混合物可被精細(xì)地乳化：25khz或更低、優(yōu)選15-20khz的頻率，以及分散部分中100w/cm2或更高、優(yōu)選120w/cm2的能量密度。
超聲波勻漿器可與上述的超高壓勻漿器組合使用。也就是說，通過使用常規(guī)乳化劑乳化混合物(在乳化過程中使用剪切)，然后將得到的乳劑用超高壓勻漿器進(jìn)行分散處理，提高了用超高壓勻漿器的分散效率，并且可減少回數(shù)(numberofpasses)。此外，減少了粗顆粒，使得獲得高品質(zhì)乳劑成為可能。此外，通過在用超高壓勻漿器乳化后進(jìn)一步進(jìn)行超聲處理，可減少粗顆粒。也可以任意期望的順序重復(fù)進(jìn)行這些步驟，例如交替進(jìn)行超高壓下的分散過程和超聲處理。
<制劑的形式>
本發(fā)明還涉及包含含有前列腺素的脂肪乳劑的注射劑。
只要制劑適合用作注射劑，對于包含脂肪乳劑的該制劑的形式?jīng)]有限制。其具體實例包括裝入容器(如安瓿、小瓶、載藥注射器和袋)中的制劑。
可就待裝入的含有前列腺素的脂肪乳劑的量以及使用方便而言適當(dāng)?shù)剡x擇此類容器的容量、材料以及形狀。優(yōu)選減少占用空間的氣體，或在填充過程中進(jìn)行氮氣置換，因為由此進(jìn)一步提高穩(wěn)定性。
此外，優(yōu)選那些容器的內(nèi)表面已用硅涂層(silicoating)等處理。
在那些制劑中，安瓿制劑或載藥注射器制劑是優(yōu)選的。更優(yōu)選的為載藥注射器制劑。
本發(fā)明還涉及載藥注射器制劑，其中所述注射器已裝有含有前列腺素的脂肪乳劑或注射劑。
載藥注射器制劑為這樣的注射器，其中已裝有使用量的具有使用時濃度的制劑，以避免制備時稀釋中的錯誤或者服用錯的藥物的錯誤，或者防止由于安裝使用(installmentuse)或由于貯存的細(xì)菌污染、活性降低等。就降低感染的風(fēng)險以及提高醫(yī)務(wù)人員的勞動生產(chǎn)力而言，這樣的載藥注射器制劑也是優(yōu)選的。
對于用于所述注射劑和所述載藥注射器制劑的注射器沒有特別限制，并且通常已知的注射器可為適合的。
依照本發(fā)明的注射器可由注射器筒、墊圈等構(gòu)成。所述注射器筒優(yōu)選為圓柱體，其中一端的開口(底端開口)已配有墊圈，并且所述圓柱體在另一端(前端開口)具有排出口，通過該排出口，通過推動所述墊圈排出所述含有前列腺素的脂肪乳劑。使用前，所述排出口通常配有蓋子，這樣可用所述蓋子和所述墊圈保留所述藥物制劑。柱塞桿可已連接至所述墊圈?？筛鶕?jù)所要裝的藥物制劑(含有前列腺素的脂肪乳劑)的體積適當(dāng)?shù)卮_定從所述注射器筒的底端至蓋子端的距離以及所述注射器筒的內(nèi)徑。
用于本發(fā)明的注射器筒和柱塞桿的材料的實例包括常規(guī)塑料或玻璃。所述塑料的實例包括聚烯烴(如聚乙烯和聚丙烯)以及環(huán)狀聚烯烴(cyclicpolyolefins)?？筛鶕?jù)臨床上使用的所述制劑的量適當(dāng)?shù)卮_定容量。其具體實例包括具有1-20ml容量的注射器。
根據(jù)需要，由玻璃或塑料制成的注射器筒可用硅酮等通過烘烤或施加涂層液進(jìn)行處理，從而降低墊圈的滑動阻力以促進(jìn)所述墊圈在所述注射器筒內(nèi)運動。就便于連接至注射器針頭或血管導(dǎo)管而言，已形成排出口的前端開口優(yōu)選應(yīng)具有對應(yīng)于欲與之連接的裝置的形狀的路厄端(luretip)形狀。
對于本發(fā)明使用的蓋子沒有特別限制。然而，用彈性體(如橡膠或熱塑性彈性體)制成的蓋子是優(yōu)選的。所述墊圈可優(yōu)選具有用于連接至柱塞桿的工具(如螺紋元件)?？蓪⒅麠U和墊圈模塑以相互結(jié)合。
當(dāng)給藥該制劑時，可使用作為注射劑的本發(fā)明的脂肪乳劑并進(jìn)行靜脈注射，或可通過用輸液(如生理鹽水)適當(dāng)稀釋后滴注給藥。
用于滅菌所述脂肪乳劑的方法的實例包括高壓蒸汽滅菌和過濾滅菌。就抑制脂肪乳劑在滅菌過程中經(jīng)歷藥物分解或破乳而言，所述脂肪乳劑優(yōu)選通過過濾滅菌。在制備所述脂肪乳劑前將液體成分本身通過過濾滅菌或?qū)⒁后w成分和/或固體成分的溶液通過過濾滅菌也是優(yōu)選的。
本發(fā)明還涉及制備所述注射劑的方法，所述方法包括通過過濾將所述含有前列腺素的脂肪乳劑滅菌的步驟。
通常，可在已制備含有前列腺素的脂肪乳劑后進(jìn)行過濾滅菌。
在過濾滅菌中優(yōu)選使用孔徑為0.01-0.22μm的過濾介質(zhì)。更優(yōu)選孔徑為0.1-0.22μm的用于過濾滅菌的過濾介質(zhì)。市售的過濾介質(zhì)可用于過濾滅菌。所述用于過濾滅菌的過濾介質(zhì)的具體實例包括sartopore2和sartobran(sartoriusstedimjapan)、durapore(milliporejapan)、fluorodyneii、supor、fluorodyneex、ultiporn66和posidyne(palljapan)。
當(dāng)進(jìn)行過濾滅菌時，可使用壓濾器施加壓差，并且所述壓差優(yōu)選為0.01mpa至1mpa，更優(yōu)選0.05mpa至0.3mpa。本文中的術(shù)語“壓差”意指過濾中上游側(cè)(內(nèi)側(cè))和下游側(cè)(外側(cè))的壓力差。通常，所述下游側(cè)的壓力為大氣壓。
這些條件可根據(jù)所使用的前列腺素化合物、油成分和卵磷脂的濃度，可包含的添加劑的種類和濃度等進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪x擇。
實施例
在下文中參考實施例對本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的解釋，但是本發(fā)明不應(yīng)被解釋為僅限于以下實施例。
在說明書中，除非有另外說明，“％”表示“質(zhì)量％”。
實施例1-1
將前列腺素e1(前列地爾(alprostadil)，由daiichifinechemicalco.,ltd.生產(chǎn))以10mg/ml的濃度溶于乙醇。將其42μl部分(就前列腺素e1而言為420μg)與0.252g大豆油(由kanedaco.,ltd.生產(chǎn))和0.504g高純度蛋黃卵磷脂pc-98n(由q.p.corp.生產(chǎn))混合。通過將根據(jù)日本藥典的濃縮甘油(由kaocorp.生產(chǎn))與純凈水混合單獨得到的2.5質(zhì)量％的甘油水溶液加入上述混合物中(其加入量使得總量為60ml)，并且攪拌所得的混合物。將混合物用均相攪拌器(15,000rpm，12分鐘)處理以將所述成分大致分散，并且進(jìn)一步用室式高壓勻漿機(jī)處理以使混合物乳化。將檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液加入乳劑中以使最終濃度為0.5mm，并調(diào)節(jié)乳劑的ph至5.0。從而制得分散液1-1。
實施例1-2至1-11，比較例1-1、1-2和1-4以及參比例1-3
依照表1-1中所示的配方，以與實施例1-1相同的方式制備分散液1-2至1-15。順便地，比較例1-1、1-2和1-4以及參比例1-3中的鹽酸的量為添加以得到如該表中所示的ph值的酸的量。
比較例1-4；對應(yīng)于現(xiàn)有藥物
除了依照表1-1中所示的配方制備分散液1-16外，進(jìn)行如實施例1-1中的相同操作。順便地，以這樣的方式使用油酸：預(yù)先將給定量的酸溶解于大豆油中，并且乳化，之后用氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph至5.3。
對脂肪乳劑的評價
<粒徑測量>
在乳化后，立即將表1-1中所示的實施例和比較例中制備的分散液(脂肪乳劑)各自用純凈水稀釋10-100倍。將用光散射粒度分布分析儀(fpar-1000，由otsukaelectronicsco.,ltd.生產(chǎn))通過contin法得到的散射強(qiáng)度分布的中間粒徑記錄為粒徑。
<ph>
用小型ph計(由horiba生產(chǎn))各自檢查表1-1中所示的實施例和比較例中制備的分散液在未稀釋狀態(tài)的ph。測量值被記錄為ph。
<粒徑變化>
從分散液1-1至1-11和1-13至1-16中各自取出2ml部分，并引入硅化小瓶(silicoatedvial，cs-10，由fujiglassco.,ltd.生產(chǎn))中，將該瓶裝備橡膠塞，并用鋁密封。將這些分散液在40℃下貯存14天，然后進(jìn)行如上所述的粒徑測量。根據(jù)下述標(biāo)準(zhǔn)評價與制備后立即測量的粒徑所產(chǎn)生的變化，并且其結(jié)果在表1-1中顯示。
a：未觀察到粒徑增長。
b：粒徑增長為10nm或更少。
c：粒徑增長為大于10nm但小于20nm。
d：粒徑增長為20nm或更大。
實施例1-12至1-20和比較例1-5至1-7
<pge1保留的評價>
從分散液1-1至1-7、1-10和1-11以及比較分散液1-13、1-14和1-16中各自取出2ml部分，并引入硅化小瓶(cs-10，由fujiglassco.,ltd.生產(chǎn))中，將該瓶裝備橡膠塞，并用鋁密封。將這些分散液在40℃下貯存7天或14天，并且然后通過高效液相色譜法檢測前列腺素e1的量。在該定量分析檢測中，1-萘酚被用作內(nèi)標(biāo)。使用以下等式計算pge1保留(％)。其結(jié)果在表1-2中顯示。
pge1保留(％)＝[(一段時間后的pge1濃度)/(初始pge1濃度)]×100
[表2]
表1-2
如表1-1中的實施例所示，已添加有檸檬酸的分散液1-1至1-11和1-16隨時間推移經(jīng)歷了在可接受范圍內(nèi)的粒徑增長或沒有粒徑的增長，并且發(fā)現(xiàn)這些分散液為穩(wěn)定的乳劑。另一方面，在其中已使用了具有低pka的酸(25℃下乳酸的pka為3.79)的分散液1-12至1-15中，觀察到粒徑的增長并且未實現(xiàn)長期穩(wěn)定性。
此外，如表1-2中的實施例所示，發(fā)現(xiàn)添加有檸檬酸的分散液1-1至1-7、1-10和1-11產(chǎn)生了預(yù)料不到的前列腺素本身穩(wěn)定性提高的效果。從與對應(yīng)于現(xiàn)有藥物的分散液1-16的對比中可推測，實施例中的那些分散液的貯存期至少為現(xiàn)有藥物的貯存期的3倍。另一方面，其中使用具有低pka的鹽酸的分散液1-13和1-14在貯存初期比對應(yīng)于現(xiàn)有藥物的分散液1-16具有更高的前列腺素保留，但發(fā)現(xiàn)在14天后前列腺素保留表現(xiàn)出大幅降低。
此外，如表1-1所示，本發(fā)明的分散液1-1至1-11各自具有150nm或更小的粒徑，并且表現(xiàn)為半透明的狀態(tài)。因此，本發(fā)明的含有前列腺素的脂肪乳劑不僅具有延長的貯存期，而且由于它們的高透明度而被預(yù)期有助于涉及包含雜質(zhì)等的藥品管理。
<對于稀釋液的粗顆粒的目測評價>
以適當(dāng)?shù)牧繌姆稚⒁?-1、1-7、1-10以及1-11中各自取樣，并且將其置于5ml小瓶(無色且透明)中，并且用純凈水稀釋1-6次。將每個小瓶置于熒光燈和位于離所述燈1m或更遠(yuǎn)的距離的裸眼之間，并且從小瓶的側(cè)面目測檢查稀釋液。在該檢查中，依照以下關(guān)于在液體中觀察到的目測可辨認(rèn)顆粒的程度的標(biāo)準(zhǔn)對稀釋液的粗顆粒進(jìn)行目測評價。其結(jié)果在表1-3中顯示。
d：清楚觀察到沉淀。
c：觀察到少量細(xì)微顆粒。
b：僅略微觀察到細(xì)微顆粒。
a：無目測可辨認(rèn)顆粒。
<安瓿制劑和載藥注射器穩(wěn)定性評價>
將分散液1-10在40℃下貯存7天，并且以與實施例1-19中所述相同的方式檢查pge1保留，除了容器被表1-4中所示的容器替換之外。所得到的結(jié)果在表1-4中顯示。
<分散液的滅菌>
從分散液1-10中取出10ml部分，并引入硅化小瓶(cs-10，由fujiglassco.,ltd.生產(chǎn))中，將該瓶裝備橡膠塞，并用鋁密封。使用高壓滅菌器(高壓滅菌器sp200；yamatoscientificco.,ltd.)，在使小瓶在121℃下保持1分鐘的條件下進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。檢查液體的外觀，并且作為結(jié)果，觀察到油滴的分離。
將500毫升的分散液1-10進(jìn)行過濾滅菌，其中sartopore2(直徑，47mm；孔徑，0.2μm；sartoriusstedimjapan)被用作用于滅菌的過濾介質(zhì)，并且用壓濾器施加0.2mpa的壓差。全部分散液可通過過濾滅菌而不導(dǎo)致阻塞。以如上所述的相同方式檢查經(jīng)滅菌的分散液的外觀、粒徑、ph和pge1含量。作為結(jié)果，未觀察到與過濾前測定的狀態(tài)或值的明顯變化。
實施例2-1
將前列腺素e1(前列地爾，由daiichifinechemicalco.,ltd.生產(chǎn))以10mg/ml的濃度溶于乙醇。將其42μl部分(就前列腺素e1而言為420μg)與0.252g大豆油(由kanedaco.,ltd.生產(chǎn))和0.504g高純度蛋黃卵磷脂pc-98n(由q.p.corp.生產(chǎn))混合。通過將根據(jù)日本藥典的濃縮甘油(由kaocorp.生產(chǎn))與純凈水混合單獨得到的2.5質(zhì)量％的甘油水溶液加入上述混合物中(其加入量使得總量為60ml)，并且攪拌所得的混合物。將混合物用均相攪拌器(15,000rpm，12分鐘)處理以將所述成分大致分散，并且進(jìn)一步用室式高壓勻漿器處理以使混合物乳化。將檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液加入乳劑以使最終濃度為0.5mm，并調(diào)節(jié)乳劑的ph至5.0。從而制得分散液2-1。
實施例2-2至2-10、參比例2-1和2-2以及比較例2-3和2-4
依照表1中所示的配方，以與實施例2-1相同的方式獲得分散液2-2至2-14。順便地，實施例2-8以及比較例2-3和2-4中的鹽酸的量為添加以得到如該表中所示的ph值的酸的量。
比較例2-5
除了如表2-1所示改變大豆油和高純蛋黃卵磷脂的量外，進(jìn)行與實施例2-1中所述的相同操作，添加油酸，并且以基于所述分散液的0.24％的量乳化，并且用氫氧化鈉代替檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液來調(diào)節(jié)ph至5.3。從而得到分散液2-15。順便地，分散液2-15為對應(yīng)現(xiàn)有藥物的分散液。
對脂肪乳劑的評價
<粒徑測量>
在乳化后，立即將表2-1中所示的實施例和比較例中制備的分散液(脂肪乳劑)各自用純凈水稀釋10-100倍。將用光散射粒度分布分析儀(fpar-1000，由otsukaelectronicsco.,ltd.生產(chǎn))通過contin法得到的散射強(qiáng)度分布的所述中間粒徑記錄為粒徑。
<ph>
用小型ph計(由horiba生產(chǎn))各自檢查表2-1中所示的實施例和比較例中制備的分散液在未稀釋狀態(tài)的ph。測量值被記錄為ph。
<耐貯性測試>
從如表2-1所示的實施例和比較例中制備的分散液中各自取出2ml部分，并且引入硅化小瓶(cs-10，由fujiglassco.,ltd.生產(chǎn))中。將該小瓶配備橡膠塞，并用鋁密封。將這些分散液在40℃下貯存7天或14天，然后進(jìn)行下列測試。
<pge1保留的評價>
通過高效液相色譜法檢查處于剛制備好的狀態(tài)的分散液和已在40℃下貯存7天或14天的分散液的前列腺素e1的量。在該定量分析檢查中，1-萘酚被用作內(nèi)標(biāo)。使用以下等式計算pge1保留。
pge1保留(％)＝[(一段時間后的pge1濃度)/(初始pge1濃度)]×100
<游離脂肪酸含量增長的測定>
取出1ml部分的分散液并引入20ml小瓶中。向其中加入5ml液體混合物，所述液體混合物為2-丙醇/庚烷/0.5m硫酸＝40/10/1(以體積計)。攪拌所述液體并混合在一起。在10分鐘之后，向其中加入3ml庚烷和3ml純凈水，并且將所述成分通過顛倒混合在一起。將得到的混合物放置15分鐘，然后取出3ml上層液體并且引入10ml小瓶中。向其中加入1ml液體混合物，所述液體混合物為0.02質(zhì)量％尼羅藍(lán)水溶液/乙醇＝1/9(以體積計)。將所述液體攪拌并混合在一起。將得到的液體混合物用0.02m氫氧化鈉滴定，并且使用以下等式計算游離脂肪酸的量。將所述脂肪酸的量轉(zhuǎn)化為油酸的濃度以計算基于整個脂肪乳劑的含量(以質(zhì)量％計)。未經(jīng)歷在40℃下貯存14天的分散液與經(jīng)歷所述貯存的分散液的濃度(以質(zhì)量％計)差如表2-1所示。
順便地，15mmol/l的油酸庚烷溶液被用作參比溶液，并且v表示所滴定的量。
游離脂肪酸的量(meq/l)＝[v(樣品)]/[v(參比溶液)]×15
未經(jīng)過貯存的實施例2-1至2-10、參比例2-1和2-2以及比較例2-3和2-4的分散液各自具有低于檢出限(n.d.)的游離脂肪酸含量，而未經(jīng)過貯存的比較例2-5的分散液具有對應(yīng)于已添加的油酸的量的游離脂肪酸含量。
實施例2-11與2-12和比較例2-6
<游離前列腺素含量的測定>
分別將40ml部分的分散液2-1與2-6和比較分散液2-11各自引入小瓶中，并且向其中添加0.2mlph為5.0的0.1m檸檬酸緩沖液。將透析管spectra/por2(分級分子量(fractionalmolecularweight)，12-14k)用純凈水水化，并將2.5質(zhì)量％的甘油水溶液以每20g所述分散液1ml的量裝入所述透析管中。將該管浸入所述分散液中，并且在100rpm和室溫下實施攪拌24小時。
通過hplc測定透析前和透析后的所述分散液中的前列腺素e1濃度，并且從通過透析的濃度變化計算水相中的游離pge1的濃度。得到的結(jié)果如表2所示。
<血壓降低測試>
向12周齡的自發(fā)性高血壓大鼠給藥仲丁硫巴比妥(inactin)以使大鼠麻醉。麻醉后，將大鼠固定在溫板上，并且將插管插于其股動脈中。將該部位用紗線縫合。將股動脈插管連接至壓力傳感器，并且開始連續(xù)監(jiān)測每5秒的平均血壓。
在血壓開始穩(wěn)定后，通過股動脈插管各自給藥分散液2-1與2-6和比較分散液2-11，并且檢測血壓變化。測量給藥前測量的血壓在給藥各分散液后降低的最大量。得到的結(jié)果如表2所示。
[表6]
表2-2
如表2-1給出的結(jié)果所示，其中磷脂與油成分的質(zhì)量比(表2-1中的a/b)大于10的分散液2-12和2-14在40℃下貯存2周后明顯具有減少的前列腺素e1保留。這些分散液具有隨時間推移產(chǎn)生的游離脂肪酸的量大的問題；因此認(rèn)為過量存在的卵磷脂已經(jīng)歷水解。因此認(rèn)為，隨著貯存穩(wěn)定性測試的時期變長，不僅前列腺素的穩(wěn)定性降低，而且脂肪乳劑在乳化狀態(tài)方面的分散穩(wěn)定性降低。
如表2給出的結(jié)果所示，其中卵磷脂的含量少于0.4質(zhì)量％的分散液2-11包含大量以游離態(tài)形式存在于所述相中的前列腺素e1。分散液2-11在降低血壓中效果較差，并且表現(xiàn)出降低的藥效。這被認(rèn)為是由于包含前列腺素e1的脂肪乳劑僅當(dāng)前列腺素以分散膠體的形式存在于油顆粒中時表現(xiàn)出高藥效。
另一方面，本發(fā)明的脂肪乳劑(分散液2-1至2-10)給出其中游離前列腺素的含量低并且貯存后前列腺素保留高的結(jié)果。這些結(jié)果表明，這些脂肪乳劑的穩(wěn)定性是對應(yīng)于現(xiàn)有藥物的分散液2-15的穩(wěn)定性的3倍或更多，并且所述脂肪乳劑預(yù)期獲得極大的貯存期的延長。此外，本發(fā)明的脂肪乳劑明顯具有高的乳劑穩(wěn)定性并且產(chǎn)生的游離脂肪酸的量降低。另外，分散液2-1至2-10各自為具有150nm或更小的粒徑的分散液，并且為半透明的。因此，容易檢測在所述分散液中的雜質(zhì)夾雜。
<對于稀釋液的目測評價>
以適當(dāng)?shù)牧繉Ψ稚⒁?-1、2-7、2-9以及2-10各自取樣，并且將其置于5ml小瓶中(無色且透明)中，并且用純凈水稀釋1-6次。將每個小瓶置于熒光燈和位于離所述燈1m或更遠(yuǎn)的距離的裸眼之間，并且從小瓶的側(cè)面目測檢查稀釋液。在該檢查中，依照以下關(guān)于在液體中觀察到的目測可辨認(rèn)顆粒的程度的標(biāo)準(zhǔn)對稀釋液進(jìn)行評價。得到的結(jié)果在表2-3中顯示。
d：清楚觀察到沉淀。
c：觀察到少量細(xì)微顆粒。
b：僅略微觀察到細(xì)微顆粒。
a：無目測可辨認(rèn)顆粒。
<安瓿制劑和載藥注射器制劑穩(wěn)定性評價>
實施例2-17至2-21
將分散液2-9在40℃下貯存7天，并且以與實施例2-9中所述相同的方式檢查pge1保留，除了待填充的容器被表2-4中所示的容器替換之外。所得到的結(jié)果在表2-4中顯示。
<分散液的滅菌>
從分散液2-9中取出10ml部分，并引入硅化小瓶(cs-10，由fujiglassco.,ltd.生產(chǎn))中，將該瓶裝備橡膠塞，并用鋁密封。使用高壓滅菌器(高壓滅菌器sp200；yamatoscientificco.,ltd.)，在使小瓶在121℃下保持1分鐘的條件下進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。檢查液體的外觀，并且作為結(jié)果，觀察到油滴的分離。
將500毫升的分散液2-9進(jìn)行過濾滅菌，其中sartopore2(直徑，47mm；孔徑，0.2μm；sartoriusstedimjapan)被用作用于滅菌的過濾介質(zhì)，并且用壓濾器施加0.2mpa的壓差。全部分散液可通過過濾滅菌而不導(dǎo)致阻塞。以如上所述的相同方式檢查經(jīng)滅菌的分散液的外觀、粒徑、ph和pge1含量。作為結(jié)果，未觀察到與過濾前測定的狀態(tài)或值的明顯變化。
工業(yè)適用性
也就是說，根據(jù)本發(fā)明，可提供可通過靜脈注射給藥并且與傳統(tǒng)產(chǎn)品相比具有極大改善的貯存期的含有前列腺素的脂肪乳劑、注射劑以及載藥注射器制劑。此外，由于該脂肪乳劑具有提高的透明度，因此能夠容易地發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)的夾雜，并且所述脂肪乳劑也可為在臨床領(lǐng)域的藥品管理方面有效的制劑。而且，可提供獲得高藥效的含有前列腺素的脂肪乳劑。
盡管本發(fā)明已詳細(xì)描述并且參考其具體實施方式，但本領(lǐng)域技術(shù)人員明顯能夠在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的情況下進(jìn)行多種改變和修改。
本申請基于2011年3月31日提交的日本專利申請(申請?zhí)枺?011-080876)、2011年3月31日提交的日本專利申請(申請?zhí)枺?011-080877)、2011年9月6日提交的日本專利申請(申請?zhí)枺?011-194203)以及2011年9月6日提交的日本專利申請(申請?zhí)枺?011-194204)，其內(nèi)容援引加入本文。