本發(fā)明涉及一種以磷脂和司盤為基質(zhì)，乙醇為溶劑，適用于小分子藥物的原位相變凝膠緩釋系統(tǒng)，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：：小分子藥物對人類健康具有突出的、不可替代的重要作用，其具有相對分子量小，物化性質(zhì)明確，結(jié)構(gòu)簡單，穩(wěn)定性好，價格便宜，無抗原性等優(yōu)點，但同時也存在一些問題。小分子藥物給藥后的血藥濃度存在明顯的峰值和谷值，使其毒副作用較大且藥效降低；對于慢性病，需要長期持續(xù)給藥，加重了患者的身體、心理和經(jīng)濟負擔。因此，通過緩釋制劑能夠使藥物緩慢地釋放，得到平穩(wěn)的血藥濃度，降低峰谷值是減毒增效，增加患者用藥依從性的關(guān)鍵。因此人們希望開發(fā)出一種可注射的小分子藥物的緩釋給藥系統(tǒng)。目前已上市的注射用緩釋給藥系統(tǒng)主要是plga（聚乳酸-羥基乙酸共聚物）微球。在諸多的小分子藥物緩釋制劑中，注射用利培酮緩釋微球是研究最為成功的品種之一。利培酮是治療精神病的藥物之一，長效利培酮微球注射液（long-actingrisperidonemicroshere，簡稱“利培酮微球”），商品名恒德（consta）由美國楊森公司研發(fā)生產(chǎn)，2003年在美國和歐洲相繼上市，2006年進入中國市場，可緩釋7周。綠葉制藥自行研發(fā)用于治療精神分裂癥的利培酮緩釋微球肌肉注射制劑（ly3004），已在172名美國患者中完成3項關(guān)鍵性的i期臨床試驗，僅需每兩周注射一次，使用方便。盡管plga微球具有較好的緩釋作用，但是其制備工藝復(fù)雜、載藥量低、制備過程中使用的有機溶劑在制劑中有殘留，另外其降解過程中產(chǎn)生的乳酸和羥基乙酸會引起注射部位ph值的下降，從而可能引起炎癥反應(yīng)。以上的缺點限制了plga微球的應(yīng)用。囊泡型磷脂凝膠（vpg）是一種半固體的磷脂分散系統(tǒng)，可以包封水溶性、脂溶性、兩親性的藥物。專利cn102697741a開發(fā)了一種奧沙利鉑囊泡型磷脂凝膠注射劑，由奧沙利鉑、大豆卵磷脂、膽固醇、peg和葡萄糖按特定的重量比制備而成，提高了制劑的穩(wěn)定性，但是，由結(jié)果可知，該制劑在延長藥物釋放時間和抑制突釋方面沒有明顯的優(yōu)勢，釋放時間較短。且其在儲存過程中易出現(xiàn)的沉降聚集等問題，影響制劑的穩(wěn)定性，不利于制劑的保存和運輸。本實驗室開發(fā)了一種以高濃度磷脂為主要基質(zhì)，并添加小部分植物油的原位相變凝膠緩釋制劑（cn102526753a），該磷脂凝膠制劑具有生物相容性好、緩釋作用顯著、體內(nèi)降解性好等優(yōu)點，應(yīng)用于蛋白多肽類藥物具有好的緩釋效果，如醋酸奧曲肽在大鼠、兔子和狗體內(nèi)可以平穩(wěn)緩釋一個月左右，藥物突釋很少，優(yōu)于市售的醋酸奧曲肽微球（mxwang,etal.pharmacokineticandpharmacodynamicstudyofaphospholipid-basedphaseseparationgelforonceamonthadministrationofoctreotide,journalofcontrolledrelease230(2016)45–56）；醋酸艾塞那肽磷脂凝膠幾乎沒有突釋，在大鼠體內(nèi)緩釋長達一個月，能夠保持20多天穩(wěn)定的降血糖效果（mhu,etal.long-actingphospholipidgelofexenatideforlong-termtherapyoftypeiidiabetes,pharmres33(2016):1318–1326）。該磷脂凝膠制劑應(yīng)用于包載部分水溶性小分子化學藥物時，也有較好的緩釋效果和較小的突釋，如鹽酸阿霉素、鹽酸溴泰君磷脂凝膠等能在動物體內(nèi)持續(xù)釋放半個多月（jwluo,etal.anovelinjectablephospholipidgelco-loadedwithdoxorubicinandbromotetrandrineforresistantbreastcancertreatmentbyintratumoralinjection,colloidsandsurfacesb:biointerfaces140(2016)538–547）。但是，我們在研究中也發(fā)現(xiàn)，對于不少小分子化學藥物采用該類磷脂凝膠制劑包載，效果不夠理想，雖然也有一定的緩釋作用，但緩釋時間只能持續(xù)幾天，無法維持長時間的有效血藥濃度，且突釋情況比較嚴重。尤其對于脂溶性藥物，突釋很明顯，推測原因可能是因為磷脂為脂溶性成分，水溶性強的藥物包載其中很難擴散，其釋藥主要依靠磷脂的表面溶蝕，因此藥物釋放持續(xù)時間與磷脂載體在體內(nèi)注射部位的消除時間幾乎一致。但脂溶性藥物與磷脂相容性好，在磷脂載體中容易滲透、擴散而釋放，導(dǎo)致釋藥速率明顯加快，緩釋時間持續(xù)相對較短，突釋較多，對一些治療窗窄的藥物，可能會引起安全性問題。因此，對于小分子藥物，需要探尋一種適用范圍廣、突釋較小、緩釋時間長的藥物載體來解決其注射用長效緩釋問題。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供一種適用范圍廣，不但能使水溶性小分子藥物注射后長時間緩釋，也能適用于脂溶性小分子藥物的原位凝膠緩釋系統(tǒng)。該原位凝膠系統(tǒng)能夠顯著減少小分子藥物的突釋。在研究中意外地發(fā)現(xiàn)，高濃度的磷脂與司盤的混合物在乙醇中可形成流動的可注射液體，并且澄清透明。當該混合物注入水中時，能夠迅速地自發(fā)形成半固體的凝膠制劑。根據(jù)此性質(zhì)，發(fā)明人設(shè)想，將藥物溶解或分散在含磷脂和司盤的乙醇溶液中，注入體內(nèi)后，由于體內(nèi)水分的含量比較高，磷脂和司盤會在注射部位自發(fā)形成半固體的凝膠，同時隨著乙醇的滲出，該混合物進一步固化，成為藥物釋放的載體，有效控制藥物的釋放。根據(jù)上述的意外發(fā)現(xiàn)，發(fā)明人由此以2,4-二硝基苯酚為模型藥物，制備了含30%司盤80和45%磷脂的乙醇溶液，給大鼠皮下注射0.5ml后，藥物可平穩(wěn)釋放10天以上。在相同的給藥劑量下，cmax原藥≈54.48μg/ml，cmax高濃度磷脂凝膠（按照專利cn102526753a制備）≈30.28μg/ml，cmax司盤磷脂凝膠≈14.86μg/ml，且原藥組只能釋放24h。毒性實驗結(jié)果表明，磷脂司盤凝膠能有效降低2,4-二硝基苯酚的毒副作用。因而，對于2,4-二硝基苯酚這類治療窗窄的藥物，該類制劑能有效地降低其毒副作用。根據(jù)上述創(chuàng)造性的研究，我們驚奇地發(fā)現(xiàn)磷脂司盤凝膠緩釋制劑能夠明顯地減少小分子藥物突釋并延長釋放時間。我們認為我們制備的新型凝膠緩釋系統(tǒng)可減少突釋并能緩釋更長時間。因此，我們選擇達比加群酯和依匹哌唑為模型藥物進行了進一步的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)達比加群酯和依匹哌唑凝膠制劑一直處于較平穩(wěn)的釋放狀態(tài)，幾乎沒有突釋現(xiàn)象。司盤是一種親水親油平衡值（hlb值）較低的非離子型表面活性劑，具有較好的疏水性和安全性。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在處方中加入部分司盤，該凝膠制劑遇水后，即刻固化。一方面可以縮短磷脂凝膠的固化時間；另一方面，在體內(nèi)外釋放試驗中對小分子化學藥物具有很好的緩釋效果。從而拓展了該類磷脂凝膠制劑的應(yīng)用，對小分子藥物的緩釋應(yīng)用提供了可能。另外，該類磷脂凝膠對于水溶性小分子藥物，仍然具有很好的緩釋效果，如鹽酸阿霉素。本發(fā)明的目的之一，是提供一種適用于小分子藥物的原位凝膠緩釋系統(tǒng)。本發(fā)明的目的之一，是提供一種能顯著減少脂溶性小分子藥物突釋的原位凝膠緩釋系統(tǒng)。本發(fā)明的目的之一，是提供一種包含磷脂、司盤、乙醇溶液的組合物。本發(fā)明的目的之一，是提供一種包含磷脂、司盤、乙醇溶液制備成的高濃度磷脂司盤緩釋制劑，即本發(fā)明所述的原位注射相變凝膠緩釋系統(tǒng)或原位注射相變凝膠緩釋制劑。本發(fā)明的目的之一，是提供一種緩釋效果好，有效減少藥物突釋，高濃度磷脂含量、易于注射的含有生物活性成分的磷脂司盤緩釋制劑。適用于本發(fā)明的磷脂司盤緩釋制劑中的司盤，包括但不限于司盤80、司盤85、司盤60、司盤40、司盤20中一種或多種的組合。在具體的實施方案中，本發(fā)明優(yōu)選司盤80。適用于本發(fā)明的高濃度磷脂司盤緩釋制劑中的磷脂，包括但不限于天然磷脂、半合成磷脂、合成磷脂中一種或多種的組合。所述天然磷脂，包括但不限于蛋黃卵磷脂、大豆磷脂或其組合等。所述半合成磷脂，包括但不限于氫化蛋黃卵磷脂、氫化大豆磷脂或其組合等。所述合成磷脂，包括但不限于二棕酰磷脂酰乙醇胺、二棕酰磷脂酸、二棕酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿中的一種或多種的組合等。在具體的實施方案中，本發(fā)明優(yōu)選大豆磷脂s100。在具體的實施方案中，本發(fā)明所述的磷脂緩釋制劑，基于制劑的總重量計，其中磷脂含量，為約40%~60%（g/g），司盤用量小于40%（g/g）。適用于制備本發(fā)明所述的磷脂緩釋制劑的藥物活性成分，可以是水溶性分子、脂溶性分子或兩親性分子，包括但不限于抗癌藥類、抗炎藥類、止痛藥類、抗感染藥類、抗糖尿病藥類、抗免疫力藥類、抗高血壓藥類、抗癲癇類、抗抑郁藥類、抗精神病藥類、抗肥胖藥類、尿路病類、強心藥類。適用于本發(fā)明的藥物活性成分包括但不限于以下：2,4-二硝基苯酚、達比加群酯、阿司匹林、利多格雷、噻氯匹定、氯吡格雷、肝素、洛吉肝素、洛莫肝素、華法林、雙香豆素、茶堿、氨茶堿、膽茶堿、沙丁胺醇、克倫特羅、特布他林、異丙托溴銨、色氨酸鈉、酮替芬、丙戊酸鈉、卡馬西平、苯妥英鈉、乙琥胺、撲米酮、水合氯醛、佐匹克隆、扎來普隆、苯巴比妥、異戊巴比妥、硫噴妥鈉、地西泮、奧沙西泮、氯硝西泮、硝西泮、三唑侖、阿普唑侖、艾司唑侖、格列吡嗪、地爾硫卓、曲馬多、嗎啡、哌替啶、芬太尼、美沙酮、噴他佐辛、丁丙嗎啡、可待因、納洛酮、雙氯芬酸、雙氯芬酸鈉、異丁司特、氨溴索、羥考酮、氯丙嗪、三氟拉嗪、氟奮乃靜、氟奮乃靜葵酸酯、氟奮乃靜庚酸酯、奮乃靜庚酸酯、奮乃靜、硫利達嗪、氯普噻噸、三氟噻噸癸酸酯、氯哌噻噸、氟哌啶醇、氟哌啶醇葵酸酯、哌普嗪棕櫚酸酯、三氟哌啶醇、哌迷清、三氯丙嗪、甲硫達嗪、氟司必林、氟哌利多、氯氮平、洛沙平、氯噻平、奧氮平、喹硫平、舒必利、舒托必利、硫必利、泰必利、五氟利多、利培酮、嗎啉酮、氧哌丁、克羅麥克朗、利血平、丙米嗪、阿米替林、馬普替林、氯丙咪嗪、米安舍林、舍曲林、氟西汀、氟伏沙明、西酞普蘭、嗎氯貝胺、曲唑酮、碳酸鋰、托特羅定、左旋多巴、齊拉西酮，左乙拉西坦、瑞替加濱、吡侖帕奈、布瓦西坦、艾司利卡西平、奧卡西平、度洛西汀、帕羅西汀、沃替西汀、去甲文拉法辛、艾司西酞普蘭、阿戈美拉汀、瑞波西汀、卡利拉嗪、帕利哌酮、普拉克索、雷沙吉蘭、羅匹尼羅、奧匹卡朋、沙芬酰胺、阿法骨化醇、艾地骨化醇、依達拉奉、阿立哌唑、依匹哌唑、卡比多巴、芐絲肼、司來吉蘭、金剛烷胺、美金剛、溴隱亭、苯海索、加蘭他敏、石杉堿甲、卡巴拉汀、占諾美林、胞磷膽堿、吡拉西坦、吡硫醇、文拉法辛、安非他酮、氟伐他汀鈉、格列齊特、二甲雙胍、阿昔洛韋、苯扎貝特、非諾貝特、吉非羅齊、環(huán)丙貝特、煙酸、別嘌醇、丙戊酸鎂、長春胺、異丙嗪、苯海拉明、曲吡那敏、氯苯那敏、布克力嗪、苯茚胺、賽庚啶、羥嗪、塞克利嗪、美克利嗪、西替利嗪、氯雷他定、乙氟利嗪、甲硝唑、氯馬斯汀、氮唑斯汀、阿伐斯汀、咪唑斯汀、阿司咪唑、非尼拉敏、溴苯那敏、托普帕敏、吡咯他敏、曲譜利啶、奈福泮、吲達帕胺、坦洛新、依美斯汀、奧昔布寧、丁咯地爾、坦索羅辛、普萘洛爾、美托洛爾、納多洛爾、吲哚洛爾、阿替洛爾、阿普洛爾、醋丁洛爾、比索洛爾、倍他洛爾、拉貝洛爾、卡拉洛爾、哌唑嗪、卡托普利、依那普利、苯那普利、福辛普利、西拉普利、群多普利、阿拉普利、地拉普利、培哚普利、喹那普利、硝苯地平、氨氯地平、左旋氨氯地平、尼莫地平、尼卡地平、非洛地平、西拉地平、尼索地平、伊拉地平、維拉帕米、氯沙坦、纈沙坦、替米沙坦、厄貝沙坦、坎地沙坦、波沙坦、特拉唑嗪、多沙唑嗪、可樂定、莫索尼定、利舍平、胍乙啶、硝普鈉、肼屈嗪、米諾地爾、吡那地爾、尼可地爾、烏拉地爾、吡貝地爾、沙克太寧、依那吉侖、瑞米吉侖、氫氯噻嗪、芐氟噻嗪、氫氟噻嗪、環(huán)戊噻嗪、姜黃素、他克林、阿米三嗪、鉑類配位物、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、硫嘌呤、硫鳥嘌呤、羥基脲、阿糖胞苷、依維莫司、他克莫司、阿昔莫司、西羅莫司、替加氟、噴司他丁、吉西他濱、環(huán)磷酰胺、白消安、卡莫司汀、達卡巴嗪、長春堿、長春新堿、長春瑞濱、長春地辛、紫杉醇、多西他賽、卡巴他賽、喜樹堿、羥喜樹堿、替尼泊苷、依托泊苷、伊立替康、托普替康、三尖杉酯堿、高三尖杉酯堿、多柔比星、吡柔比星、阿柔比星、伊達比星、表柔比星、柔紅霉素、放線菌素d、普卡霉素、克拉霉素、米托蒽醌、布洛芬、對乙酰氨基酚、舒林酸、非諾洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、美洛昔康、吡羅昔康、尼美舒利、羅非昔布、塞來昔布、秋水仙堿、丙磺舒、磺吡酮、苯溴馬隆、保泰松、甲芬那酸、氯芬那酸、萘普生、吲哚美辛、依托度酸、水楊酸鎂、水楊酸膽堿、水楊酰胺、雙水楊酯、二氟尼柳、腎上腺皮質(zhì)激素、雌激素、雄激素、他莫昔芬、雷洛昔芬、氯米芬、甲睪酮、丙酸睪酮、苯乙酸睪酮、甲羥孕酮、甲地孕酮、氯地孕酮、乙酸羥孕酮、氫化可的松、可的松、潑尼松、潑尼松龍、甲潑尼龍、地塞米松、倍他米松、氟他胺、維a酸、伊馬替尼、吉非替尼、埃羅替尼、沙利度胺、雷利度胺、丙卡巴肼、苯丁酸氮芥、美法侖或上述藥物的藥學上可接受的鹽的一種或多種組合。優(yōu)選脂溶性藥物。進一步的，上述化學藥物藥學上可接受的鹽形式包括但不限于鹽酸鹽、硫酸鹽、醋酸鹽、水楊酸鹽、磺酸鹽、枸櫞酸鹽等多種藥學上可用的鹽形式。本發(fā)明所述的磷脂司盤緩釋制劑，以重量份計，包含藥物活性成分0.01~20份，磷脂含量30~60份，司盤含量10~40份、乙醇溶液7~30份。進一步地，按照重量百分比計，磷脂占所述磷脂司盤緩釋制劑含量的40%~60%，司盤占所述磷脂司盤緩釋制劑含量小于40%。其中，所述乙醇溶液包括乙醇-水溶液、乙醇-生理鹽水溶液、乙醇-磷酸鹽緩沖液溶液、乙醇碳酸鹽緩沖溶液、乙醇-琥珀酸鹽緩沖溶液、乙醇-枸櫞酸鹽緩沖溶液、乙醇-乳酸鹽緩沖溶液等，其中乙醇的濃度可以是70%~100%（v/v）。本發(fā)明所述的磷脂司盤緩釋制劑可加入抗氧化劑、防腐劑、ph調(diào)節(jié)劑等藥劑學上使用的常規(guī)賦形劑。本發(fā)明的以磷脂司盤為基質(zhì)的原位注射相變凝膠緩釋系統(tǒng)是一種新穎的劑型，藥物活性成分可以溶解在磷脂司盤-乙醇溶液中，成為流動性良好的液體，注入體內(nèi)后，磷脂和司盤能夠立即形成包裹藥物活性成分的半固體凝膠，具有良好的緩釋效果。藥物活性成分也可以以微粒形式分散在磷脂司盤-乙醇溶液中，只要能保持制劑通針性即可?？梢詫⑺幬锘钚猿煞趾涂瞻椎牧字颈P基質(zhì)分別保存，臨用前溶解或分散均勻后給藥。本發(fā)明的另一個目的，提供了一種制備磷脂司盤凝膠緩釋系統(tǒng)，即磷脂司盤緩釋制劑的方法。本發(fā)明的制備方法，包括下述步驟：（1）取藥物活性成分溶于適量的乙醇溶液中，微孔濾膜過濾除菌，形成藥物溶液；（2）在無菌條件下取注射級磷脂和司盤與步驟（1）的藥物溶液混合，攪拌使磷脂完全溶解，靜置片刻以除去制劑中的氣泡，分裝，密封，即得。由于有些藥物活性成分溶解度較差，為得到分散均一的制劑，在另一具體實施方案中，本發(fā)明還提供了另一種磷脂司盤緩釋制劑的制備方法，包括下述步驟：（1）在無菌的條件下，取藥物活性成分通過藥劑學上常見的結(jié)晶或粉碎方式，制備藥物微粒。（2）在無菌條件下取處方量磷脂、司盤與乙醇溶液混合，攪拌使完全溶解；（3）在無菌條件下將步驟（1）的藥物微粒與步驟（2）中制備的載體溶液混合均勻，靜置片刻以除去制劑中的氣泡，分裝，密封，即得。在具體的實施方案中，所述微孔濾膜優(yōu)選0.22μm微孔濾膜。本發(fā)明所述的原位注射相變凝膠緩釋制劑可以用于注射給藥，優(yōu)選皮下給藥；也可以用于外用給藥等其他給藥形式。本發(fā)明所述的原位注射相變凝膠緩釋制劑也可以用于修復(fù)和擴充軟和/或硬組織。本發(fā)明通過創(chuàng)造性的研究，以磷脂司盤和乙醇溶液等作為主要原料，采用小分子化學藥物如2,4-二硝基苯酚、達比加群酯、依匹哌唑等為模型藥物，通過簡單攪拌的方式制備成磷脂司盤緩釋制劑。所得制劑流動性良好，容易注射給藥，動物體內(nèi)實驗證明其具有良好的緩釋效果。通過考察磷脂司盤緩釋制劑對注射部位的刺激性，其結(jié)果顯示該制劑具有較好的生物相容性，對給藥部位的刺激性較小。因此本發(fā)明可以普遍實現(xiàn)小分子藥物緩釋的同時，很好地解決了現(xiàn)有的小分子藥物原位凝膠制劑突釋性強的問題，具有良好的應(yīng)用前景。本發(fā)明的優(yōu)點磷脂司盤緩釋制劑含有能夠與水完全互溶的少量乙醇溶液，注射入體內(nèi)后，磷脂和司盤混合物能夠立即固化，乙醇能夠快速地擴散到體液，使凝膠制劑進一步固化，成為藥物緩釋的載體，控制藥物的釋放。動物體內(nèi)實驗證明該制劑確實具有良好的緩釋效果，突釋效應(yīng)較小甚至沒有突釋。磷脂司盤緩釋制劑具有流動性好、易于注射給藥等優(yōu)點。另外還可以根據(jù)所要包載藥物的溶解性選擇合適的溶劑或溶劑組合來溶解藥物，以制得均勻透明的穩(wěn)定制劑。藥物也可以微粒形式均勻分散在制劑當中。此外，磷脂司盤緩釋制劑中不含有水分或水分含量較低，且制劑中含有乙醇，可以有效抑制微生物的生長，有利于制劑的儲存，從而擴大了磷脂司盤制劑的應(yīng)用范圍。附圖說明圖1為磷脂司盤緩釋制劑形成凝膠的過程圖。圖2為2，4-二硝基苯酚的磷脂司盤緩釋制劑（dnp-lc-gel）的體外釋放曲線。圖3為2，4-二硝基苯酚的磷脂司盤緩釋制劑、高濃度磷脂緩釋制劑和溶液組的藥時曲線。圖4為皮下注射2，4-二硝基苯酚的磷脂司盤緩釋制劑的藥時曲線。圖5為2，4-二硝基苯酚的磷脂司盤緩釋制劑的毒性試驗。圖6為達比加群酯的磷脂司盤緩釋制劑、高濃度磷脂緩釋制劑和溶液組的藥時曲線。圖7為達比加群酯的磷脂司盤緩釋制劑局部刺激性試驗。圖8為依匹哌唑的磷脂司盤緩釋制劑和f127緩釋制劑的藥時曲線。具體實施方式以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，但絕不是本發(fā)明范圍的限制。下面參考實施例進一步詳細闡述本發(fā)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解，本發(fā)明并不限于這些實施例以及使用的制備方法。而且，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的描述可以對本發(fā)明進行等同替換、組合、改良或修飾，但這些都將包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。實施例1取2，4-二硝基苯酚50mg，溶于2.0g的85%（v/v）乙醇-ph7.6磷酸緩沖液中，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾得到藥物溶液，然后在無菌條件下，加入注射級的大豆磷脂s1004.5g和司盤803.5g，無菌條件下磁力攪拌約1h，至s100完全溶解，得到含有大量氣泡的液體，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得。實施例2取達比加群酯200mg，溶于1.0g的無水乙醇中，得到藥物溶液，0.22μm微孔濾膜過濾，然后在無菌條件下，加入注射級的蛋黃卵磷脂e805.0g、司盤804.0g，無菌條件下磁力攪拌約1h，至s100完全溶解，得到含有大量氣泡的液體，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得。實施例3在無菌條件下，取適量的依匹哌唑于研缽中研磨粉碎，得到依匹哌唑粉末。取無水乙醇1.5g，司盤804.0g和注射級的大豆磷脂s1004.5g，無菌條件下磁力攪拌約1h，至s100完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色液體。在無菌條件下取依匹哌唑粉末200mg與上述液體混合均勻，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得。實施例4取茶堿100mg，溶于3.0g的80%（v/v）乙醇-ph7.6磷酸緩沖液中，得到藥物溶液，0.22μm微孔濾膜過濾，然后在無菌條件下，加入注射級的氫化蛋黃磷脂4.0g、司盤80和司盤20各1.0g，無菌條件下磁力攪拌約1h，至氫化蛋黃磷脂完全溶解，得到含有大量氣泡的液體，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得。實施例5取地塞米松10.0mg，溶于0.7g的無水乙醇中，得到藥物溶液，0.22μm微孔濾膜過濾，然后在無菌條件下，加入注射級的二棕酰磷脂酰乙醇胺6.0g、司盤202.3g和司盤601.0g，無菌條件下磁力攪拌約1h，至二棕酰磷脂酰乙醇胺完全溶解，得到含有大量氣泡的液體，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得。實施例6取阿司匹林100mg，溶于2.0g的80%（v/v）乙醇-ph7.6磷酸緩沖液中，得到藥物溶液，0.22μm微孔濾膜過濾，然后在無菌條件下，加入注射級的蛋黃卵磷脂e804.0g和司盤203.9g，無菌條件下磁力攪拌約1h，至e80完全溶解，得到含有大量氣泡的液體，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得。實施例7取西咪替丁200mg，溶于2.8g的90%（v/v）乙醇-ph7.6磷酸緩沖液中，得到藥物溶液，0.22μm微孔濾膜過濾，然后在無菌條件下，加入注射級的大豆磷脂s1006.0g和司盤201.0g，無菌條件下磁力攪拌約1h，至s100完全溶解，得到含有大量氣泡的液體，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得。實施例8取鹽酸多奈哌齊40mg，溶于2.5g的70%（v/v）乙醇-水中，得到藥物溶液，0.22μm微孔濾膜過濾，然后在無菌條件下，加入注射級的大豆磷脂s1006.0g、司盤801.0g和司盤400.5g，無菌條件下磁力攪拌約0.5h，至s100完全溶解，得到含有大量氣泡的液體，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得。實施例9在無菌條件下，取適量的利培酮于研缽中研磨粉碎，得到利培酮粉末。取無水乙醇溶液2.0g和司盤203.5g，大豆磷脂s1004.5g，無菌條件下磁力攪拌約0.5h，至s100完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色液體。在無菌條件下取利培酮粉末150mg與上述液體混合均勻，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得。實施例10取卡托普利200mg，溶于1.5g90%（v/v）乙醇-水溶液中，得到藥物溶液，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，在無菌條件下加入注射級蛋黃卵磷脂e805.5g和司盤853.0g，無菌條件下磁力攪拌約0.5h，至e80完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色液體，靜置至氣泡完全消失，分裝，密封，即得。實施例11取地西泮100mg，溶于2.0g的75%（v/v）乙醇-水中，得到藥物溶液，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，在無菌條件下加入注射級蛋黃卵磷脂e805.5g和司盤202.5g，無菌條件下磁力攪拌約0.5h，至e80完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色液體，靜止至氣泡完全消失，分裝，密封，即得。實施例12取異丙嗪80mg，溶于2.0g的70%（v/v）乙醇-水中，得到藥物溶液，0.22μm微孔濾膜過濾，在無菌條件下加入大豆磷脂s1005.5g和司盤803.5g，無菌條件下磁力攪拌約0.5h，至s100完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色液體，靜止至氣泡完全消失，分裝，密封，即得。實施例13取阿柔比星70mg，溶于2.0g的80%（v/v）乙醇-水中，得到藥物溶液，0.22μm微孔濾膜過濾，在無菌條件下加入蛋黃卵磷脂e805.5g和司盤802.5g，無菌條件下磁力攪拌約0.5h，至e80完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色液體，靜止至氣泡完全消失，分裝，密封，即得。實施例14取卡莫司汀90mg，溶于2.5g的80%（v/v）乙醇-水中，得到藥物溶液，0.22μm微孔濾膜過濾，在無菌條件下加入大豆磷脂s1005.5g和司盤802.0g，無菌條件下磁力攪拌約0.5h，至s100完全溶解，得到含有大量氣泡的乳黃色液體，靜止至氣泡完全消失，分裝，密封，即得。實驗例1按照實施例1的制備方法進行下列試驗，將實施例1處方中的司盤換成二油酸甘油酯（試驗例1），吐溫（試驗例2）和乙酸異丁酸蔗糖酯（試驗例3）。同時設(shè)計原藥溶液組（試驗例4，將50mg藥物溶解于10ml磷酸鹽緩沖液（ph=7.6），制備與實施例1相同濃度的溶液）。將200~220g的sd大鼠隨機分為五組，每組6只，按照2,4-二硝基苯酚12.5mg/kg的劑量皮下注射給藥（實施例1，試驗例1，試驗例2，試驗例3和試驗例4），在預(yù)定的時間點，通過大鼠眼眶取血，置于肝素鈉抗凝的試管中，樣品經(jīng)處理后，lc-ms/ms進樣檢測血藥濃度，結(jié)果如下表所示：結(jié)果：從上表中可以看出，磷脂凝膠中加入司盤優(yōu)于其他表面活性劑，可以有效地抑制2，4-二硝基苯酚的突釋作用。實驗例2按照實施例1的制備方法進行下列試驗，將實施例1處方中的乙醇換成丙二醇（試驗例1）和甘油（試驗例2）?？疾熘苿┑耐庥^并通過黏度儀測定黏度。結(jié)果如下表：結(jié)果：由于乙醇對磷脂溶解量最大，其他兩種溶劑溶解度不高，過夜攪拌不能溶解，制得制劑黏度大于300cp，甚至呈半固體，無法注射?？梢姡谙嗤娜軇┯昧織l件下，乙醇具有優(yōu)于其他溶劑的溶解性能，能較好地溶解配方中的組分，易于注射給藥。實驗例3制備不同比例的磷脂司盤80緩釋制劑，進行局部刺激性實驗，考察無水乙醇的用量對注射部位的刺激性，包括紅腫、潰爛等現(xiàn)象。結(jié)果如下表：結(jié)果：當制劑中無水乙醇的含量低于30%時，制劑對給藥部位的刺激性較小。理論上用含有一定量水分的乙醇溶液代替無水乙醇，其毒性應(yīng)該更低。實驗例4（1）磷脂司盤凝膠相變過程將實施例1的產(chǎn)品注入水中，結(jié)果見圖1，磷脂司盤凝膠從乳黃色透明液體變成球狀半固體狀態(tài)，說明磷脂司盤凝膠乙醇擴散后會發(fā)生相變過程。（2）體外釋放結(jié)果將實施例1的產(chǎn)品和溶液組(實驗例1中試驗例4)分別裝在透析袋中，然后放置在50mlpbs緩沖溶液中（ph=7.4），在恒溫振蕩器（37°c，100rmp）中進行體外釋放試驗。在設(shè)定時間點取出5ml的緩沖液，并加入等體積的新鮮pbs緩沖液，計算2,4-二硝基苯酚的累計釋放率。結(jié)果見圖2，磷脂司盤凝膠組具有抑制突釋的特性。（3）體內(nèi)藥動學結(jié)果將實施例1的產(chǎn)品注射到雄性sd大鼠皮下，定時取血，采用高效液相色譜-質(zhì)譜法（lc-ms/ms）測定血漿中2,4-二硝基苯酚的含量，考察其緩釋效果。將200~220g的sd大鼠隨機分為三組，溶液組(實驗例1中試驗例4)、磷脂司盤凝膠組（實施例1）、高濃度磷脂凝膠組（按照專利cn102526753a制備），每組6只，按照12.5mg/kg的劑量皮下注射給藥，在預(yù)定的時間點，通過大鼠眼眶取血，置于肝素鈉抗凝的試管中，樣品經(jīng)處理后，lc-ms/ms進樣檢測血藥濃度，高濃度磷脂凝膠緩釋制劑（專利cn102526753a）的處方如下：各組制劑的藥動學參數(shù)如下：結(jié)果顯示，磷脂司盤凝膠的緩釋能力明顯高于高濃度磷脂凝膠和溶液，主要表現(xiàn)為cmax降低，t1/2延長。如圖3和圖4所示：包載小分子藥物dnp的高濃度磷脂原位相變凝膠緩釋制劑突釋較為嚴重，緩釋效果不好，而本發(fā)明的磷脂司盤凝膠制劑能夠明顯地改善小分子藥物的突釋情況，緩釋效果較好。（3）毒性結(jié)果將不同藥物劑量實施例1的產(chǎn)品（b）和溶液組(實驗例1中試驗例4)的藥物溶液（a）注射到雄性sd大鼠皮下，觀察并記錄大鼠的死亡情況。結(jié)果如圖5所示，該類凝膠制劑能夠明顯地降低其副作用，這是由于該制劑具有很好的緩釋和抑制突釋的能力，與溶液組相比，該制劑能夠明顯地降低dnp在體內(nèi)的血藥濃度，從而提高其安全性。實驗例5（1）體內(nèi)藥動學結(jié)果將實施例2的產(chǎn)品注射到雄性sd大鼠皮下，定時取血，采用高效液相色譜-質(zhì)譜法（lc-ms/ms）測定血漿中達比加群酯的含量，考察其緩釋效果。將200~220g的sd大鼠隨機分為三組，每組6只，按照溶液組（11.4mg/kg，將200mg達比加群酯溶解于10ml磷酸鹽緩沖液（ph=7.6），制備與實施例2相同濃度的溶液）、磷脂司盤80凝膠組（80mg/kg）（實施例2）、高濃度磷脂凝膠組（80mg/kg，按照專利cn102526753a制備，將實驗例4中高濃度磷脂凝膠組的dnp換成200mg達比加群酯）的劑量皮下注射給藥，在預(yù)定的時間點，通過大鼠眼眶取血，置于肝素鈉抗凝的試管中，樣品經(jīng)處理后，lc-ms/ms進樣檢測血藥濃度，結(jié)果顯示，磷脂司盤80凝膠組的緩釋能力明顯高于高濃度磷脂凝膠和溶液組，主要表現(xiàn)為t1/2延長，達比加群酯能維持較高的有效血藥濃度。如圖6示：包載小分子藥物達比加群酯的高濃度磷脂原位相變凝膠緩釋效果不好，而本發(fā)明的磷脂司盤凝膠制劑能夠明顯的改善小分子藥物的突釋情況，緩釋效果較好。各組制劑的藥動學參數(shù)如下：（2）局部刺激性實驗將實施例2的產(chǎn)品注射到雄性sd大鼠皮下，在第1天、14天和21天時，處死大鼠，取皮膚組織做he染色。圖7結(jié)果表明該凝膠制劑刺激性小，生物相容性好。實驗例6將實施例3的產(chǎn)品注射到雄性sd大鼠皮下，定時取血，采用高效液相色譜-質(zhì)譜法（lc-ms/ms）測定血漿中依匹哌唑的含量，與文獻報道有顯著緩釋效果的f127溫敏凝膠（linz,,etal.novelthermo-sensitivehydrogelsystemwithpaclitaxelnanocrystals:highdrug-loading,sustaineddrugreleaseandextendedlocalretentionguaranteeingbetterefficacyandlowertoxicity,journalofcontrolledrelease28(2014)161–70）進行比較。f127溫敏凝膠的處方如下：將200~220g的sd大鼠隨機分為兩組，每組6只，按照磷脂司盤80凝膠組（50mg/kg）和20%f127溫敏凝膠（50mg/kg）的劑量皮下注射給藥，在預(yù)定的時間點，通過大鼠眼眶取血，置于肝素鈉抗凝的試管中，樣品經(jīng)處理后，lc-ms/ms進樣檢測血藥濃度，結(jié)果顯示，磷脂司盤80凝膠組的緩釋能力明顯高于f127溫敏凝膠，主要表現(xiàn)為t1/2延長，依匹哌唑能維持較高的有效血藥濃度。如圖8所示，雖然f127溫敏凝膠可以持續(xù)緩釋100余小時，但很快代謝，突釋較明顯；而本發(fā)明的磷脂司盤凝膠制劑幾乎沒有藥物的突釋，緩釋效果較好，可以持續(xù)緩釋25天。實驗例7磷脂司盤緩釋制劑對其他小分子藥物的緩釋特性。采用動物體內(nèi)實驗考察其他小分子藥物抑制突釋的效果。將下表中藥物按照實施例1處方量及制備方法制備制劑，得到的其他小分子藥物的磷脂司盤緩釋制劑和原藥溶液（每種藥物視具體溶解性而定，用注射用水、乙醇或dmso配置）注射到雄性sd大鼠皮下，定時取血，采用高效液相色譜-質(zhì)譜法（lc-ms/ms）測定血漿中各其他小分子藥物的cmax，考察其抑制突釋的效果。結(jié)果如下表所示結(jié)果表明，本發(fā)明的磷脂司盤凝膠制劑能夠明顯地改善小分子藥物的突釋情況。綜上所述，磷脂司盤原位相變凝膠可以顯著地抑制小分子藥物突釋，延長緩釋時間，降低小分子藥物的毒性，并且具有良好的生物相容性。當前第1頁12當前第1頁12