一種前列腺素e1的合成方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物化合物的制備方法，具體涉及一種前列腺素 E1的制備方法。 技術(shù)背景
[0002] 前列腺素 E1，結(jié)構(gòu)如下：
[0004] 又名：前列地爾，化學(xué)名稱：（lR，2R，3R)-3-羥基-2-[(E)-(3S)-3-羥基-1-辛烯 基]-5-氧代環(huán)戊烷庚酸。
[0005] 前列腺素 E1來自于20碳脂肪酸，是人體內(nèi)存在的廣譜性物質(zhì)。其直接作用于血管 平滑肌，擴張血管和提高血流量，改善微循環(huán)的灌注；并具有抑制血小板聚集和血栓A2生 成，抑制動脈粥樣硬化脂質(zhì)斑塊形成及免疫復(fù)合物的形成；能擴張外周血管和冠狀血管，降 低外周血管阻力和血壓，防止血栓形成和保護血小板細胞，保護缺血心肌，縮小心肌梗死面 積，抗心力衰竭；并能擴張腎血管，增加腎血流量，清除非蛋白氮，調(diào)節(jié)水鈉平衡，具有利尿 和保護肝臟、腎臟、肺臟等臟器功能的作用。同時具有擴張陰莖動脈、松弛陰莖海綿體平滑 肌，加速陰莖動脈血流速的作用。1982年，來自英國的范恩博士以及來自瑞典的塞繆爾森博 士和伯格斯壯博士因發(fā)現(xiàn)并研究前列地爾而獲得諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎。
[0006] 近年來，由于前列腺素 E1的廣泛臨床應(yīng)用范圍，市場上對其的需求量逐年增加。 現(xiàn)在，國際上已有諸如日、德、美等國家實現(xiàn)前列腺素 E1原料藥的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，但在 產(chǎn)品純度及市場價格、運輸成本等方面很難滿足國內(nèi)藥品生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)訴求。與此同時， 國內(nèi)對前列腺素 E1原料藥的生產(chǎn)大多停留在實驗室規(guī)模生產(chǎn)階段，只有少部分能夠?qū)崿F(xiàn) 工業(yè)化生產(chǎn)，而其中一部分則是運用的純化學(xué)合成手段，他們生產(chǎn)的原料藥產(chǎn)品純度高，但 生產(chǎn)工藝復(fù)雜，生產(chǎn)周期長；再有就是在生產(chǎn)過程中會涉及到大量的有機溶劑的使用及廢 液的處理等環(huán)境諸多問題。剩下一部分生產(chǎn)企業(yè)則是利用大型生物反應(yīng)器在金屬鎳及哺乳 動物體內(nèi)的精囊中提取的生物酶聯(lián)合催化下進行連續(xù)生產(chǎn)，這種生產(chǎn)模式大大降低了該產(chǎn) 品的工藝復(fù)雜程度，同時也降低了有機試劑的使用量，但在其生產(chǎn)過程中大量的金屬鎳的 使用，增加了人體對該原料藥的致敏性風(fēng)險，同時也大大增加了生產(chǎn)成本。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是，提供一種簡單有效，且更為實用的前列腺素 E1原料藥生產(chǎn)工 藝，以達到降低原料成本，簡化生產(chǎn)工藝，縮短生產(chǎn)周期，降低外源致敏性物質(zhì)出現(xiàn)的風(fēng)險， 減少有機試劑排放的目的。
[0008] 本發(fā)明提供一種用羊精囊提取前列腺素 El的制備方法，所述方法步驟如下：
[0009] 步驟1、前列腺素濕酶的提?。?br>[0010] (1)取新鮮的羊精囊，除去脂肪、肌肉及結(jié)締組織；
[0011] (2)加入氯化鉀水溶液，浸泡；
[0012] (3)研磨成勻漿；
[0013] (4)離心得到清液，過濾，濾液調(diào)pH為4-6 ;
[0014] (5)離心得到的沉淀再次勻衆(zhòng)，離心得到清液，過濾，濾液調(diào)pH為4-6。
[0015] (6)混合步驟⑷和（5)得到的產(chǎn)物即為前列腺素濕酶；
[0016] 步驟2、酶促反應(yīng)：
[0017] (1)前列腺素濕酶中加入分散液，調(diào)pH至7-8,加入還原型谷胱甘肽、對苯二酸、二 高-γ -亞麻酸混合溶液，反應(yīng)；
[0018] (2)反應(yīng)液調(diào)pH至4-5,離心得到沉淀，沉淀加入有機溶劑；
[0019] (3)過濾，得到濾液，濾液回收有機溶劑得到濃縮液，加入緩沖液，調(diào)pH至8-9,加 入石油醚萃取，得到水層，調(diào)pH至3-4,用乙醚萃取，醚層干燥；
[0020] (4)干燥后的醚層經(jīng)過濾后，減壓蒸除溶劑，得前列地爾粗品。
[0021] 步驟3、純化：
[0022] (1) 200-300目硅膠活化后濕法裝柱。
[0023] (2)將前列地爾粗品用三氯甲烷溶解后加入硅膠柱中，加入三氯甲烷平衡，洗滌液 洗滌，洗脫液洗脫，收集流出液；
[0024] (3)蒸除溶劑，得一次純化品；
[0025] (4)將得到的一次純化品重復(fù)步（1)~（3)步驟的純化操作，得二次純化品。步驟 4、精制：
[0026] (1)將前列地爾二次純化品溶于乙酸乙酯中，過濾后，濾液析晶，過濾干燥得一次 重結(jié)晶廣品；
[0027] (2)在此用乙酸乙酯重結(jié)晶得到二次重結(jié)晶產(chǎn)品；
[0028] (3)二次重結(jié)晶產(chǎn)品干燥后得前列地爾精制產(chǎn)品。
[0029] 優(yōu)選的，本發(fā)明的前列腺素 E1的制備方法，步驟如下：
[0030] 步驟1、前列腺素濕酶的提取：
[0031] (1)取新鮮的羊精囊，除去多余脂肪、肌肉及結(jié)締組織，速凍冷藏保存。
[0032] (2)取冷凍的羊精囊置于濃度為0. 154mol/L的氯化鉀水溶液中（以完全沒過羊精 囊為準(zhǔn)），浸泡30~60min。
[0033] (3)將浸泡解凍后的羊精囊加入膠體磨中粉碎成勻漿。粉碎粒度在0.8mm左右的 勻漿。
[0034] (4)勻漿液于4000-4500r/min，溫度2-8°C，離心20min。將離心后的上清液過濾， 濾液用2mol/L枸櫞酸溶液調(diào)pH = 5. 0± 1. 0,離心得一次濕酶。
[0035] (5)將勻漿液離心后的沉淀再次勻漿得二次濕酶。
[0036] (7)將兩次所得濕酶混合、稱重，記錄濕酶質(zhì)量。
[0037] 步驟2、酶促反應(yīng)：
[0038] (1)將濕酶用磷酸鹽/EDTA-2Na混合液分散，用lmol/L氫氧化鉀溶液調(diào)pH至 7. 5±0. 5,加入磷酸鹽緩沖液溶解的還原型谷胱甘肽、對苯二酚、二高-γ-亞麻酸混合溶 液，通氧氣35-40°C反應(yīng)0. 5-1小時，反應(yīng)完畢冷卻至室溫。
[0039] (2)用稀鹽酸溶液調(diào)pH至4. 0±0. 5,離心后，濾除上清液，沉淀用2倍體積的丙酮 分散，放置12h。
[0040] (3)抽濾丙酮分散液，濾餅用丙酮洗滌，合并濾液及洗滌液。減壓蒸除溶劑（可 回收重復(fù)利用），向濃縮液中加入pH 8. 2的磷酸鹽緩沖液，并用氫氧化鉀溶液調(diào)pH至 8. 2±0. 5,再用石油醚脫脂。水層用枸櫞酸溶液調(diào)pH至3. 2±0. 5后，無水乙醚萃取。合并 醚層，用純化水洗滌，無水硫酸鈉干燥醚層8小時以上。
[0041] (4)干燥后的醚層經(jīng)過濾后，減壓蒸除溶劑，得前列地爾粗品。
[0042] 步驟3、純化：
[0043] (1)200-300目硅膠活化后濕法裝柱。
[0044] (2)將前列地爾粗品用三氯甲烷溶解后加入硅膠柱中，依次加入1倍柱體積的三 氯甲燒平衡，3倍柱體積的洗滌液洗滌和5倍柱體積洗脫液洗脫，待洗脫液走完1個柱體積 后開始收集流出液。
[0045] (3)將收集液減壓蒸除溶劑，得一次純化品。
[0046] (4)將得到的一次純化品重復(fù)步驟（1)~步驟（3)操作，得二次純化品。
[0047] 步驟4、精制：
[0048] (1)將前列地爾二次純化品按lg : 20ml比例溶于乙酸乙酯中，過濾后密封，室溫 下放置2~4h析出結(jié)晶，過濾所得結(jié)晶抽干后得一次重結(jié)晶產(chǎn)品。
[0049] (2)將一次重結(jié)晶產(chǎn)品按lg : 30ml比例溶于乙酸乙酯中，過濾后密封，室溫放置 2~4h析出結(jié)晶。過濾所得結(jié)晶用乙酸乙酯洗滌后抽干，得二次重結(jié)晶產(chǎn)品。
[0050] (3)將二次重結(jié)晶產(chǎn)品放入真空干燥箱內(nèi)，在室溫、-0· 09MPa下真空干燥4h，得前 列地爾精制廣品。
[0051] 在本發(fā)明的上述方法中，
[0052] 其中，步驟2、酶促反應(yīng)中，各組分重量百分組成如下：
[0053] 二高-γ-亞麻酸： 0.05%~0.15% 谷胱甘肽： 0.05%~0.15% 對苯二徽:： 0.001% ~0.010% 磷酸鹽/EDTA-2Na混合液： 59.81%~59.94% (密度按1 ·0計算） 濕 酶： 39.87% ~39.96%
[0054] 其中pH8. 2磷酸鹽緩沖液的制備如下：分別稱取磷酸氫二鉀44. 0g，磷酸二氫鉀 1. 5g，定容至 1000ml。
[0055] 其中磷酸鹽/EDTA-2Na混合液的制備如下：pH8. 2磷酸鹽緩沖液：0. 125mol/L乙 二胺四乙酸二鈉溶液（體積比）=9:1。