有機(jī)溶劑； (3) 過(guò)濾，得到濾液，濾液回收有機(jī)溶劑得到濃縮液，加入緩沖液，調(diào)抑至8-9,加入石 油酸萃取，得到水層，調(diào)抑至3-4,用乙酸萃取，酸層干燥； (4) 干燥后的酸層經(jīng)過(guò)濾后，減壓蒸除溶劑，得前列地爾粗品； 步驟3、純化： (1) 200-300目硅膠活化后濕法裝柱； (2) 將前列地爾粗品用Ξ氯甲燒溶解后加入硅膠柱中，加入Ξ氯甲燒平衡，洗涂液洗 涂，洗脫液洗脫，收集流出液； (3) 蒸除溶劑，得一次純化品； (4) 將得到的一次純化品重復(fù)步（1)~（3)步驟的純化操作，得二次純化品，步驟4、精 制： (1) 將前列地爾二次純化品溶于乙酸乙醋中，過(guò)濾后，濾液析晶，過(guò)濾干燥得一次重結(jié) 晶廣品； (2) 在此用乙酸乙醋重結(jié)晶得到二次重結(jié)晶產(chǎn)品； (3) 二次重結(jié)晶產(chǎn)品干燥后得前列地爾精制產(chǎn)品。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟如下： 步驟1、前列腺素濕酶的提?。? (1) 取新鮮的羊精囊，除去多余脂肪、肌肉及結(jié)締組織，速凍冷藏保存， (2) 取冷凍的羊精囊置于濃度為0. 154mol/L的氯化鐘水溶液中浸泡30~60min， (3) 將浸泡解凍后的羊精囊加入膠體磨中粉碎成勻漿，粉碎粒度在0. 8mm左右的勻漿， (4) 勻漿液于4000-4500r/min，溫度2-8°C，離屯、20min，將離屯、后的上清液過(guò)濾，濾液 用2mol/L構(gòu)祿酸溶液調(diào)抑=5. 0± 1. 0,離屯、得一次濕酶， (5) 將勻漿液離屯、后的沉淀再次勻漿得二次濕酶， (7) 將兩次所得濕酶混合、稱重，記錄濕酶質(zhì)量， 步驟2、酶促反應(yīng)： (1)將濕酶用憐酸鹽/邸TA-2化混合液分散，用Imol/L氨氧化鐘溶液調(diào)抑至 7. 5 + 0. 5,加入憐酸鹽緩沖液溶解的還原型谷脫甘膚、對(duì)苯二酪、二高-丫-亞麻酸混合溶 液，通氧氣35-40°C反應(yīng)0. 5-1小時(shí)，反應(yīng)完畢冷卻至室溫， (2) 用稀鹽酸溶液調(diào)抑至4. 0 + 0. 5,離屯、后，濾除上清液，沉淀用2倍體積的丙酬分 散，放置1化， (3) 抽濾丙酬分散液，濾餅用丙酬洗涂，合并濾液及洗涂液，減壓蒸除溶劑，向濃縮液中 加入抑8. 2的憐酸鹽緩沖液，并用氨氧化鐘溶液調(diào)抑至8. 2 + 0. 5,再用石油酸脫脂，水層 用構(gòu)祿酸溶液調(diào)抑至3. 2±0. 5后，無(wú)水乙酸萃取，合并酸層，用純化水洗涂，無(wú)水硫酸鋼干 燥酸層8小時(shí)W上， (4) 干燥后的酸層經(jīng)過(guò)濾后，減壓蒸除溶劑，得前列地爾粗品， 步驟3、純化： (1) 200-300目硅膠活化后濕法裝柱， (2) 將前列地爾粗品用Ξ氯甲燒溶解后加入硅膠柱中，依次加入1倍柱體積的Ξ氯甲 燒平衡，3倍柱體積的洗涂液洗涂和5倍柱體積洗脫液洗脫，待洗脫液走完1個(gè)柱體積后開 始收集流出液， (3) 將收集液減壓蒸除溶劑，得一次純化品， (4) 將得到的一次純化品重復(fù)步驟（1)~步驟（3)操作，得二次純化品， 步驟4、精制： (1) 將前列地爾二次純化品按Ig: 20ml比例溶于乙酸乙醋中，過(guò)濾后密封，室溫下放 置2~地析出結(jié)晶，過(guò)濾所得結(jié)晶抽干后得一次重結(jié)晶產(chǎn)品， (2) 將一次重結(jié)晶產(chǎn)品按Ig: 30ml比例溶于乙酸乙醋中，過(guò)濾后密封，室溫放置2~ 地析出結(jié)晶，過(guò)濾所得結(jié)晶用乙酸乙醋洗涂后抽干，得二次重結(jié)晶產(chǎn)品， (3) 將二次重結(jié)晶產(chǎn)品放入真空干燥箱內(nèi)，在室溫、-0. 09MPa下真空干燥地，得前列地 爾精制廣品。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中，步驟2、酶促反應(yīng)中，各組分重 量組成如下： 二高-γ-亞麻酸： 0.05% ~0.150/。 谷脫甘化： 0.05%~0.15% 對(duì)苯二齡： 0.001%~0,010〇/〇 憐酸鹽化DTA-2Na混合液： 59.81%~59.94〇/〇 (密度按1.0計(jì)算） 濕 酶:： 39.87% ~39.96% 其中P冊(cè).2憐酸鹽緩沖液的制備如下：分別稱取憐酸氨二鐘44.Og，憐酸二氨鐘1. 5邑， 定容至1000ml， 其中憐酸鹽/邸TA-2化混合液的制備如下：p冊(cè).2憐酸鹽緩沖液：0. 125mol/L乙二胺 四乙酸二鋼溶液（體積比）=9:1。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中，步驟3的純化中，各組分的組成 如下： 洗涂液氯甲燒：甲醇（體積比）=98:2 洗脫液氯甲燒：甲醇（體積比）=96:4。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟如下： Α、取0. 154mol/L氯化鐘溶液浸泡過(guò)的羊精囊，利用膠體磨粉碎至0. 8mm左右的勻漿， 勻漿液離屯、后，取上清液調(diào)抑=5. 0± 1. 0,離屯、得濕酶， B、 將憐酸鹽緩沖液分散的濕酶，調(diào)抑至7. 5 + 0. 5,加入憐酸鹽緩沖液溶解的還原型谷 脫甘膚、對(duì)苯二酪、二高-丫 -亞麻酸混合溶液，35-40°C反應(yīng)0. 5-1小時(shí)，調(diào)抑至4. 0 + 0. 5， 離屯、后濾除上清液，沉淀用丙酬分散，抽濾分散液，濾餅用丙酬洗涂，合并濾液及洗涂液， 減壓蒸除溶劑，水層調(diào)抑至8. 2 + 0. 5,用石油酸脫脂后，調(diào)抑至3. 2 + 0. 5,用無(wú)水乙酸萃 取，合并酸層，用純化水洗涂，并干燥8小時(shí)W上，干燥后的酸層經(jīng)過(guò)濾后，減壓蒸除溶劑， 得前列地爾粗品， C、 將前列地爾粗品加入硅膠柱中，待洗脫液走完1個(gè)柱體積后開始收集流出液，將收 集液減壓蒸除溶劑，得一次純化品，將得到的一次純化品重復(fù)上述步驟，得二次純化品， D、將前列地爾二次純化品溶于乙酸乙醋中，過(guò)濾后室溫下放置，待析出結(jié)晶后過(guò)濾，所 得結(jié)晶抽干后得一次重結(jié)晶產(chǎn)品，將一次重結(jié)晶產(chǎn)品溶于乙酸乙醋中，過(guò)濾后室溫放置，待 析出結(jié)晶后過(guò)濾，所得結(jié)晶用乙酸乙醋洗涂并抽干，得二次重結(jié)晶產(chǎn)品，將二次重結(jié)晶產(chǎn)品 放入真空干燥箱內(nèi)，真空干燥得前列地爾精制產(chǎn)品。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟如下： 步驟1、前列腺素酶的提?。? (1) 新鮮冷凍羊精囊用0. 154mol/L氯化鐘溶液浸泡60min， (2) 將羊精囊用膠體磨粉碎至0. 8mm左右， (3) 勻漿液離屯、后，取上清液調(diào)抑=5. 4,離屯、得一次濕酶， (4) 將勻漿液離屯、后的沉淀再次勻漿得二次濕酶， (5) 將兩次所得濕酶混合、稱重，記錄濕酶質(zhì)量， 步驟2、酶促反應(yīng)： 各組分按重量百分比的組成如下： 二高-γ-亞麻酸： 0.脫％ 谷脫甘膚； 0.08% 對(duì)苯二酷： 0.0的％ 鱗酸鹽/EDTA-2Na溜合液： 巧.907% 濕 酶； 39.93% (1) 將濕酶用憐酸鹽/邸TA-2化混合液分散，調(diào)抑至7. 8,加入憐酸鹽緩沖液溶解的還 原型谷脫甘膚、對(duì)苯二酪、二高-丫-亞麻酸混合溶液參與反應(yīng)， (2) 調(diào)抑至4. 3,離屯、后濾除上清液，沉淀用丙酬分散， (3) 抽濾分散液，濾餅用丙酬洗涂，合并濾液及洗涂液，減壓蒸除溶劑，水層調(diào)抑至 8. 2,用石油酸脫脂后，調(diào)抑至3. 2,用無(wú)水乙酸萃取，合并酸層，用純化水洗涂，并干燥8小 時(shí)W上， (4) 干燥后的酸層經(jīng)過(guò)濾后，減壓蒸除溶劑，得前列地爾粗品， 步驟3、純化： 各組分的組成如下： 洗涂液氯甲燒：甲醇（體積比）=98:2 洗脫液氯甲燒：甲醇（體積比）=96:4 (1) 將前列地爾粗品加入硅膠柱中，待洗脫液走完1個(gè)柱體積后開始收集流出液， (2) 將收集液減壓蒸除溶劑，得一次純化品， (3) 將得到的一次純化品重復(fù)上述步驟，得二次純化品， 步驟4、精制： (1) 將前列地爾二次純化品溶于乙酸乙醋中，過(guò)濾后室溫下放置，待析出結(jié)晶后過(guò)濾， 所得結(jié)晶抽干后得一次重結(jié)晶產(chǎn)品， (2) 將一次重結(jié)晶產(chǎn)品溶于乙酸乙醋中，過(guò)濾后室溫放置，待析出結(jié)晶后過(guò)濾，所得結(jié) 晶用乙酸乙醋洗涂并抽干，得二次重結(jié)晶產(chǎn)品， (3) 將二次重結(jié)晶產(chǎn)品放入真空干燥箱內(nèi)，真空干燥得前列地爾精制產(chǎn)品。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種前列腺素E1的制備方法，所述方法步驟如下：步驟1、從羊精囊中提取前列腺素濕酶步驟2、前列腺素濕酶進(jìn)行酶促反應(yīng)得到前列腺素E1粗品步驟3、粗品過(guò)柱純化步驟4、重結(jié)晶精制。
【IPC分類】C12P31/00, C07C405/00
【公開號(hào)】CN105316384
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510823186
【發(fā)明人】葛存慧, 龐睿, 吳貴海, 王晴, 任仲輝, 季偉鑫, 秦瑋瑩, 孫海波, 李生翀, 宋春娜, 張凱, 白宇
【申請(qǐng)人】哈藥集團(tuán)生物工程有限公司
【公開日】2016年2月10日
【申請(qǐng)日】2015年11月23日...