本發(fā)明屬于干眼治療技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于治療干眼的滴眼液。

背景技術(shù)：

干眼是眼科門診常見病與多發(fā)病。據(jù)schaumberg等在美國進行的大樣本干眼流行病學(xué)調(diào)查顯示：50歲以下的女性干眼患病率為5.7％，而超過75歲后患病率升高到9.8％，且女性的干眼癥狀較男性更為明顯，隨著教育程度越高，患病率越高；同樣的，年齡在50-54歲的男性干眼患病率為3.9％，超過80歲則患病率升高到7.67％，估計到2030年全美男性干眼患者將達到279萬人。而在我國，從石常宏等進行的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果來看，在納入的31124例患者中，干眼患病率為67.9％，女性(72.7％)高于男性(62.8％)，但小于25歲的研究對象男性干眼患病率高于女性。小于25歲年齡組干眼患病率為54.3％，25～45歲年齡組干眼患病率為65.9％，大于45歲年齡組干眼患病率為79.1％。隨著科技的發(fā)展，大量高科技產(chǎn)品在年輕一代中得到廣泛的普及，如手機、平板電腦等，大大增加了年輕人的用眼負(fù)擔(dān)，加上周圍環(huán)境的惡化及生活壓力的增加，干眼的患病率逐年提高，并出現(xiàn)明顯的年輕化。干眼可引起眼睛干澀感、異物感、視疲勞、視力下降等；嚴(yán)重干眼，可導(dǎo)致視力明顯下降，甚至失明。干眼患者在日常活動中，如讀書、工作、使用計算機、看電視、駕駛等行為都會受到影響。可以說，干眼嚴(yán)重地影響著人類的工作效率和生活質(zhì)量，已成為現(xiàn)代人不得不面臨和迫切需要解決的社會問題。

干眼的發(fā)病機制與炎癥、細胞凋亡、神經(jīng)調(diào)節(jié)異常、性激素失調(diào)等有關(guān)。炎癥在干眼發(fā)病機制中的重要性在近年研究中已得到充分證明。tnf-a，il-1β、mmp-9等炎癥因子與干眼患者眼表上皮細胞損害有關(guān)。干眼癥患者眼表和淚腺的炎癥主要與cd4⁺t淋巴細胞的大量浸潤和激活相關(guān)。干眼患者結(jié)膜杯狀細胞減少及鱗狀上皮化生與cd4⁺t細胞浸潤程度及ifn-γ表達量呈正相關(guān)。cd4⁺t細胞分泌的炎癥因子在干眼發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，如：干眼眼表th1細胞因子ifn-γ的上調(diào)導(dǎo)致了結(jié)膜上皮細胞的大量凋亡；ifn-γ/il-13比例上調(diào)導(dǎo)致了結(jié)膜杯狀細胞密度的下降；th17細胞因子il-17a的上調(diào)導(dǎo)致了角膜屏障功能的損害。臨床上干眼患者結(jié)膜上皮hlaclassii、icam-1、ccr5等炎癥標(biāo)志物的表達顯著增加。lam等最近還證實各類干眼患者中淚液的炎癥趨化因子il-8，mip-1α和rantes表達上調(diào)；cd11b⁺與cd11c⁺抗原提呈細胞均參與了干眼眼表炎癥過程；調(diào)節(jié)性t細胞在干眼發(fā)病中起著重要的作用。cd4⁺、cd25⁺t細胞與cd8⁺t細胞可抑制干眼病理性cd4+t淋巴細胞的增值。nk/nkt細胞可通過促進干眼th-17反應(yīng)而惡化角膜屏障功能；臨床研究證明給予抗炎癥治療，如皮質(zhì)類固醇激素、免疫抑制劑環(huán)孢霉素及fk506局部點眼可以有效緩解干眼的癥狀和體征。

2013年，中華醫(yī)學(xué)會眼科學(xué)分會角膜病學(xué)組達成了干眼臨床診療專家共識，在干眼的定義、流行病學(xué)及危險因素、分類、檢查和診斷、治療等方面建立了規(guī)范。對于中重度干眼，建議糖皮質(zhì)激素、非甾體類抗炎藥及免疫抑制劑治療。其中，免疫抑制治療是干眼治療的關(guān)鍵之一。目前，臨床上常用的免疫抑制劑主要是0.05％環(huán)孢霉素a滴眼液(cyclosporin)及0.05％他克莫司滴眼液(fk506)，兩種藥物在臨床應(yīng)用中均顯示出較好的療效。經(jīng)過環(huán)孢霉素a局部治療6個月后，炎癥相關(guān)標(biāo)志物(如il-1、tnf-α等)表達均顯著下降。0.05％環(huán)孢素a治療3個月后，患者眼表癥狀和體征顯著減輕，淚液中il-4、il-5、il-17a、tnfa、ifn-γ的炎癥因子顯著降低。環(huán)孢霉素a局部治療可有效抑制干眼結(jié)膜cd4⁺t細胞的浸潤與結(jié)膜上皮細胞凋亡、杯狀細胞丟失。干燥綜合征患者使用0.03％他克莫司點眼能夠提高淚膜穩(wěn)定性，維持正常眼表狀態(tài)。動物實驗表明，0.025％的fk506局部點眼能抑制小鼠nf-κb信號通路激活，減輕干眼的眼表體征。0.02％他克莫司局部點眼能顯著提高干眼模型的小狗的淚液分泌量。然而，環(huán)孢霉素a及fk506親脂性強，在水中幾乎不溶，國內(nèi)外大多將其制成各種植物油滴眼液。這些油性滴眼劑滴入眼后，對眼睛有強刺激性，患者通常不能耐受，偶有過敏現(xiàn)象發(fā)生，且藥物遇淚液立即析出，使得眼內(nèi)生物利用度很低。為了提高兩種藥物的眼用生物利用度，已有研究將其制備成微乳、膠束、脂質(zhì)體、聚ε己內(nèi)酯納米粒、殼聚糖納米粒等。以上工藝可有效地增加難溶性藥物或水不溶性藥物的載藥量。尤其是乳化技術(shù)，可以減少局部應(yīng)用的刺激性，且由于乳滴的分散度大，藥物吸收快，生物利用度可有效提高。即便如此，與水溶性藥物相比，脂溶性滴眼液的先天不足在目前仍無法完全克服。全球約有10多億人口經(jīng)受著干眼的困擾，有著巨大的干眼病治療需求，因此，篩選干眼新型眼表免疫抑制，尤其是水溶性較好的眼用免疫抑制劑極為緊迫。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種用于治療干眼的滴眼液。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種用于治療干眼的滴眼液，ph為5.0～7.0，其有效成分為5-羥基-1-beta-d-呋喃糖基-1h-咪唑-5-羧酰胺(又名：咪唑立賓)，具體有如下重量體積百分比的組分組成：

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述ph值調(diào)節(jié)劑為磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硼酸、硼砂、醋酸、醋酸鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、酒石酸、酒石酸鈉、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、鹽酸和磷酸中的至少一種，其目的是使滴眼液的酸堿度與淚液的酸堿度相等或接近，以減少滴眼液的刺激性，并使藥物穩(wěn)定，藥效提高。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述等滲劑為氯化鈉、氯化鉀、硼酸、硼砂、硫酸鈉、硫酸鉀、硝酸鈉、硝酸鉀、醋酸鈉、甘露醇、甘油、丙二醇或葡萄糖中的至少一種。等滲劑的作用是為了使滴眼液的滲透壓與淚液的滲透壓相等或接近，以減輕滴眼液的刺激性，提高藥效。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述抑菌劑為苯扎氯銨、苯扎溴銨、醋酸氯己定、葡萄糖氯己定、三氯叔丁醇、苯氧乙醇、羥苯甲酯、羥苯乙酯和羥苯丙酯中的至少一種。適量抑菌劑可以使得所述滴眼液不易被細菌感染，保證了產(chǎn)品的安全。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述穩(wěn)定劑為亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硝酸鈉、硫代硫酸鈉、抗壞血酸、硫脲、抗壞血酸硬脂酸酯、二丁基甲酚、半胱氨酸、生育酚乙酸酯、二氯異氰、乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸鈣鈉、二巰基丙醇、甘油、甘露醇和丁基化羥基苯甲醚中的至少一種。穩(wěn)定劑的作用是為了增加滴眼液的穩(wěn)定性，提高藥效。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述增粘劑為玻璃酸鈉、羧甲基纖維素鈉、甲級纖維素、聚乙二醇、聚乙烯醇、卡波姆和聚維酮中的至少一種。增粘劑的作用是為了增加滴眼液的粘稠度，延長藥物在眼表的存留時間，提高有效藥物濃度。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述增溶劑為聚山梨酯類、聚氧乙烯蓖麻油甘油醚、聚氧乙烯脂肪酸酯類、聚氧乙烯脂肪醇醚類和泊洛沙姆中的至少一種。增溶劑的作用是為了增加藥物的溶解度。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明的滴眼液的局部治療可保護干眼小鼠角膜上皮屏障功能，恢復(fù)結(jié)膜杯狀細胞數(shù)量，并有較好的抗炎及免疫抑制效果。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例10的角膜ogd熒光染色結(jié)果圖。

圖2為本發(fā)明實施例10的結(jié)膜杯狀細胞pas染色結(jié)果圖。

圖3為本發(fā)明實施例10的結(jié)膜cd4⁺t細胞染色結(jié)果圖。

圖4為本發(fā)明實施例10的real-timepcr結(jié)果圖。

具體實施方式

以下通過具體實施方式結(jié)合附圖對本發(fā)明的技術(shù)方案進行進一步的說明和描述。

實施例1

配方：

制備工藝：

1、精密稱取1.00g咪唑立賓、苯扎氯銨0.03g、氯化鈉8.30g、0.1mol/l鹽酸30ml，加200ml注射用水溶解，攪拌均勻后，用注射用水定容至1000ml，得藥液。

2、將上述溶液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾1次，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾2次。

3、藥液檢驗合格后，在a級環(huán)境下，灌裝5.0ml上述藥液至5ml單劑量包裝塑料容器中，封口，即得成品。

實施例2

配方：

制備工藝：

1、精密稱取1.00g咪唑立賓，加入300ml注射用水使之溶解，得溶液①備用。

2、精密稱取醋酸氯己定0.05g，、7.20g磷酸二氫鈉、0.95g磷酸氫二鈉、4.79g氯化鈉，加200ml注射用水溶解后，將其進行攪拌混合均勻，得溶液②備用。

3、將溶液①和溶液②進行混合，攪拌均勻后，用注射用水定容至1000ml，得藥液。

4、將上述藥液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾1次，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾2次。

5、藥液檢驗合格后，在a級環(huán)境下，灌裝5.0ml上述藥液至5ml單劑量包裝塑料容器中，封口，即得成品。

實施例3

配方：

制備工藝：

1、精密稱取1.00g咪唑立賓、0.03g苯扎溴銨、6.40g磷酸二氫鈉、1.89g磷酸氫二鈉、4.72g氯化鈉、0.10g乙二胺四乙酸二鈉，加200ml注射用水溶解，攪拌均勻后，用注射用水定容至1000ml，得藥液。

2、將上述配制的藥液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾1次，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾1次。

3、過濾后的藥液，采用熱壓滅菌法，于121℃下滅菌8分鐘，冷卻。

4、藥液檢驗合格后，在a級環(huán)境下，灌裝5.0ml上述藥液至5ml單劑量包裝塑料容器中，封口，即得成品。

實施例4

配方：

制備工藝：

1、精密稱取1.00g咪唑立賓、0.10g葡萄糖氯己定、19.10g硼酸、13.00g甘油，加200ml注射用水溶解，將其進行攪拌混合，用注射用水定容至1000ml，得藥液。

2、將上述藥液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾1次，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾2次。

3、藥液檢驗合格后，在a級環(huán)境下，灌裝5.0ml上述藥液至5ml單劑量包裝塑料容器中，封口，即得成品。

實施例5

配方：

制備工藝：

1、精密稱取1.00g咪唑立賓、0.03g苯扎氯銨、7.20g磷酸二氫鈉、0.95g磷酸氫二鈉、14.0g甘油、0.10g乙二胺四乙酸二鈉，加200ml注射用水溶解，將其進行攪拌混合，用注射用水定容至1000ml，得藥液。

2、將上述配制的藥液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾1次，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾1次；

3、過濾后的藥液，采用熱壓滅菌法，于121℃下滅菌8分鐘，冷卻。

4、藥液檢驗合格后，在a級環(huán)境下，灌裝5.0ml上述藥液至5ml單劑量包裝塑料容器中，封口，即得成品。

實施例6

配方：

制備工藝：

1、精密稱取0.10g玻璃酸鈉，加200ml注射用水，溶脹、放置、過夜，并于每1h進行攪拌5min。

2、精密稱取1.00g咪唑立賓、0.03g苯扎氯銨、7.20g磷酸二氫鈉、0.95g磷酸氫二鈉、4.79g氯化鈉、0.10g乙二胺四乙酸二鈉，加200ml注射用水溶解，將其進行攪拌，混合均勻后，加入步驟1所得玻璃酸鈉溶液，攪拌混合，然后用注射用水定容至1000ml，得藥液。

3、將上述藥液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾1次，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾2次。

4、藥液檢驗合格后，在a級環(huán)境下，灌裝5.0ml上述藥液至5ml單劑量包裝塑料容器中，封口，即得成品。

實施例7

配方：

制備工藝：

1、精密稱取0.10g玻璃酸鈉，加入200ml注射用水，放置溶脹12h，并每1h攪拌5min。

2、精密稱取0.03g苯扎氯銨和0.10g乙二胺四乙酸二鈉，加入300ml注射用水，攪拌溶解均勻，然后精密稱取6.40g磷酸二氫鈉、1.90g磷酸氫二鈉和氯化鈉4.70g加入到上述所得溶液中，攪拌均勻。

3、精密稱取1.00g咪唑立賓，加入到步驟2所得混合溶液中，溶解過程可適當(dāng)加熱，攪拌溶解，若加熱需冷卻至室溫。

4、將步驟3所得溶液加入到步驟1所得已溶解的玻璃酸鈉溶液中，攪拌混合均勻，然后用注射用水定容至1000ml，得藥液。

5、將藥液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾一次，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾兩次。

6、藥液檢驗合格后，在a級環(huán)境下，灌裝藥液5.0ml至5ml已滅菌單劑量包裝塑料瓶中，封口，即得成品。

實施例8

配方：

制備工藝：

1、精密稱取0.10g玻璃酸鈉，加入200ml注射用水，放置溶脹12h，并每1h攪拌5min。

2、精密稱取5.00g苯扎溴銨和5.00g亞硫酸鈉，加入500ml注射用水，攪拌溶解均勻，然后精密稱取6.40g磷酸二氫鈉、1.90g磷酸氫二鈉和氯化鈉4.70g加入到上述所得溶液中，攪拌均勻。

3、精密稱取1.00g咪唑立賓，加入到步驟2所得混合溶液中，溶解過程可適當(dāng)加熱，攪拌溶解，若加熱需冷卻至室溫。

4、將步驟3所得溶液加入到步驟1所得已溶解的玻璃酸鈉溶液中，攪拌混合均勻，然后用注射用水定容至1000ml，得藥液。

5、將藥液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾1次，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾2次。

6、藥液檢驗合格后，在a級環(huán)境下，灌裝藥液5.0ml至5ml已滅菌單劑量包裝塑料瓶中，封口，即得成品。

實施例9

配方：

制備工藝：

1、精密稱取0.10g玻璃酸鈉，加入200ml注射用水，放置溶脹12h，并每1h攪拌5min。

2、精密稱取6.40g磷酸二氫鈉、1.90g磷酸氫二鈉加入300ml注射用水中，攪拌均勻。

3、精密稱取1.00g咪唑立賓和氯化鈉4.70g置乳缽中研細，加入30ml聚山梨酯80充分研勻。將精密稱取的0.03g苯扎氯銨和0.10g乙二胺四乙酸二鈉溶于300ml注射用水中，加熱攪拌，保持水溫70～80℃，再把乳缽中的咪唑立賓等完全轉(zhuǎn)入到上述水溶液中，邊加邊充分?jǐn)嚢瑁偌幼⑸溆盟?00ml，待冷卻至室溫后應(yīng)澄清。

4、將步驟2所得溶液滴加到步驟2所得溶液中，再緩慢加入已溶解的玻璃酸鈉溶液，攪拌混合均勻，然后用注射用水定容至1000ml，得藥液。

5、將藥液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾一次，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾兩次。

6、在a級生產(chǎn)環(huán)境下，灌裝藥液5.0ml至5ml已滅菌單劑量包裝塑料瓶中，封口，即得滴眼液成品。

以上實施例中處方均以1000ml為例，實際工業(yè)生產(chǎn)中可參考處方比例相應(yīng)增加配制量。

實施例10眼部療效評價

0.1％咪唑立賓滴眼液對干眼小鼠的治療作用

實驗方法：

1建立小鼠干眼模型：10-12周齡的雌性c57bl/6小鼠皮下注射東莨菪堿0.5mg/0.2ml，每天4次，并飼養(yǎng)于干燥環(huán)境內(nèi)5天(rh＝30±3；t＝23-25℃)；正常對照組飼養(yǎng)于正常環(huán)境中(rh：60％-80％；t：23-25℃)。

2咪唑立賓滴眼液制備：干眼治療組采用實施例1的操作方法制備0.1％咪唑立賓滴眼液。

點眼方式：使用上述滴眼液進行點眼治療，每天4次，點雙眼。

評價指標(biāo)與操作方法：

1角膜ogd熒光染色：處死小鼠，用移液槍將0.5μloregongreen-dextran(ogd)滴入小鼠下結(jié)膜囊內(nèi)，手動瞬目，1分鐘后用1ml生理鹽水沖洗結(jié)膜囊，活體熒光顯微鏡下觀察并拍攝角膜上皮熒光染色情況。

2結(jié)膜杯狀細胞pas染色：小鼠全眼球(含結(jié)膜囊)石蠟標(biāo)本切成5um薄片，利用過碘酸-希夫(pas)試劑染色，觀察結(jié)膜杯狀細胞形態(tài)和數(shù)量。

3結(jié)膜cd4⁺t細胞染色：冰凍切片用丙酮在-20℃下固定10分鐘，0.2％triton-x的pbs破膜10分鐘，0.3％h2o2消除內(nèi)源性過氧化物酶。用20％正常的山羊血清阻滯45分鐘。一抗cd4常溫下孵育1小時。在充分洗(滌)后，用生物素(酰)化的第二抗體孵育30分鐘。最后應(yīng)用vectastaineliteabc試劑盒顯色并染核。

4real-timepcr：

按下列組分配制pcr反應(yīng)液：

三步法pcr擴增標(biāo)準(zhǔn)程序：

stage1：預(yù)變性循環(huán)數(shù)：195℃，30sec.

stage2：pcr反應(yīng)循環(huán)數(shù)：4095℃，5sec.60℃，34sec.

stage3：溶解曲線

運用相對ct法分析基因的相對表達量，具體采用以下公式計算得出，即其中，-δδct＝-(δct，q-δct，cb)，δct，q＝ct，x-ct，r，δct，cb＝ct，cb-ct，r，這里的r＝參照基因，cb＝校準(zhǔn)值，x＝目標(biāo)基因；循環(huán)閾值(c)通過初級信號(熒光)來確定。

實驗結(jié)果與結(jié)論：

1角膜ogd熒光染色結(jié)果顯示，與干眼組相比，0.1％咪唑立賓治療組角膜點狀染色數(shù)量明顯減少，未見片狀染色。結(jié)果說明：0.1％咪唑立賓局部點眼治療可顯著減輕角膜上皮損傷，具有保護角膜上皮屏障的效果。(如圖1所示)

2結(jié)膜杯狀細胞pas染色結(jié)果顯示，與干眼組相比，0.1％咪唑立賓治療組結(jié)膜杯狀細胞數(shù)量顯著增加。結(jié)果說明：0.1％咪唑立賓局部點眼治療可顯著恢復(fù)杯狀細胞數(shù)量，保證黏蛋白分泌量。(如圖2所示)

3結(jié)膜cd4⁺t細胞染色結(jié)果顯示，與干眼組相比，0.1％咪唑立賓治療組棕黃色細胞比例明顯減少。對兩組的cd4⁺t細胞數(shù)進行統(tǒng)計學(xué)分析顯示，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果說明：0.1％咪唑立賓局部點眼治療可顯著減輕結(jié)膜cd4⁺t細胞浸潤，具有明顯的抗炎效果。(如圖3所示)

4real-timepcr結(jié)果顯示，與干眼組相比，0.1％咪唑立賓治療組結(jié)膜炎癥因子tnf-α、il-1β、ifn-γ和il-13表達明顯減少，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果說明：0.1％咪唑立賓局部點眼治療具有較好的抗炎及免疫抑制作用。(如圖4所示)

以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，故不能依此限定本發(fā)明實施的范圍，即依本發(fā)明專利范圍及說明書內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆應(yīng)仍屬本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。