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技術(shù)特征:

1.從血液中提取富血小板血漿并制備其凍干粉的方法,其包括以下步驟:

(a)使采集的全血置于含有抗凝劑的容器中,使血液和抗凝劑充分混勻;

(b)使混有抗凝劑的血液置于離心管中,進行第一次離心,使血液基本上分成三層;

(c)將最上層和大部分的中間層抽出并轉(zhuǎn)移到新的離心管中,混合均勻,進行第二次離心;

(d)棄掉離心管上層的血漿,利用剩余的血漿使沉淀的血小板重新懸浮,即得富血小板血漿;

(e)向該富血小板血漿中添加凍干賦形劑,冷凍干燥,即得。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法,其特征在于以下任一項或多項:

步驟(a)中所述全血是新鮮的全血;

步驟(a)中所述全血是受試個體例如患者或者健康志愿者的全血;

步驟(a)中抗凝劑選自乙二胺四乙酸及其鹽(例如乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸二鉀、乙二胺四乙酸鈣鈉)、枸櫞酸鈉、枸櫞酸葡萄糖溶液、或其組合;

乙二胺四乙酸或其鹽的典型用量是每0.5~1.5mg用于1ml血液抗凝,例如每0.75~1.25mg用于1ml血液抗凝,可以是干粉直接涂在抗凝管內(nèi)壁,亦可以是配制成適宜濃度的溶液(例如濃度為1~2%)涂在抗凝管內(nèi)壁待干燥后使用;

枸櫞酸鈉的典型用量是每3~5mg用于1ml血液抗凝,可以是干粉直接涂在抗凝管內(nèi)壁,亦可以是配制成適宜濃度的溶液(例如濃度為3~5%)涂在抗凝管內(nèi)壁待干燥后使用;

枸櫞酸葡萄糖溶液的一個典型配方包含:枸櫞酸0.48g、枸櫞酸鈉1.32g、葡萄糖1.47g、加水至100ml,每1ml血液抗凝通常使用該枸櫞酸葡萄糖溶液0.15~0.2ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法,其特征在于以下任一項或多項:

步驟(a)中所述容器可以是離心管或是采血袋等。如果是離心管并且該離心管容量適合直接離心,則所述步驟(b)中不需要另置于離心管中,而可以直接進行離心;

步驟(a)中還包括在使血液和抗凝劑混均后取適量(例如少于500ul,例如約100ul)用于測定其中血液中血小板的數(shù)量,以便用于后續(xù)的過程比照、監(jiān)控;

步驟(b)中經(jīng)第一次離心后是達到使血液基本上分成三層的程度;

最上層是含血小板的血漿層,中間一層是血塊黃層(Buffy Coat層,其中含有血小板和白細胞),最底層的是紅細胞層;

步驟(b)中離心的轉(zhuǎn)速為2000rpm~3000rpm,例如2200rpm~2800rpm,例如2300rpm~2500rpm,例如約2400rpm;

步驟(b)中離心的時間為1-10min,例如2-8min,例如3-5min,例如約4min;

步驟(b)中離心的轉(zhuǎn)速為2300rpm~2500rpm,時間為3-5min;

步驟(b)中離心的轉(zhuǎn)速為2400rpm,時間為4min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法,其特征在于以下任一項或多項:

步驟(c)中,所述大部分的中間層是指盡量將中間層全部吸出但避免抽取紅細胞;

步驟(c)中離心的轉(zhuǎn)速為1000rpm~2000rpm,例如1200rpm~1800rpm,例如1400rpm~1600rpm,例如約1500rpm;

步驟(c)中離心的時間為10-30min,例如15-25min,例如18-22min,例如約20min;

步驟(c)中離心的轉(zhuǎn)速為1400rpm~1600rpm,時間為18-22min;

步驟(c)中離心的轉(zhuǎn)速為1500rpm,時間為20min;

步驟(c)中所得上層和大部分中間層經(jīng)混勻后,其中血小板的濃度是分離前全血中血小板濃度的1-5倍,例如1.5~4倍,例如2~3倍;

步驟(c)中所得上層和大部分中間層經(jīng)混勻后,其中血小板的濃度是分離前全血中血小板濃度的2.5-3.5倍,例如2.6~3.1倍;

步驟(c)中還包括在使抽取的最上層和中間層混合均勻后,取適量(例如少于500ul,例如約100ul)用于測定其中的血小板的數(shù)量,以便用于后續(xù)的過程比照、監(jiān)控。

5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法,其特征在于以下任一項或多項:

步驟(d)中,所述棄掉離心管上層的血漿是指棄掉離心管上層至少2/4的血漿;在步驟(d)中,所述棄掉離心管上層的血漿是指棄掉離心管上層至少3/4的血漿;

步驟(d)中,棄掉離心管上層的血漿后,可以利用下部剩下的(約2/4,或者更優(yōu)選的約1/4)血漿重新使沉淀下來的血小板懸??;

步驟(d)所得富血小板血漿(PRP)中血小板的濃度是分離前全血中血小板濃度的5-10倍,例如6~8倍,例如6~7倍,例如6.1~6.8倍;

步驟(d)所得富血小板血漿(PRP)中血小板的濃度是分離前全血中血小板濃度的8-10倍,例如8.8~9.2倍;

步驟(d)中還包括在獲得富血小板血漿(PRP)后,取適量(例如少于500ul,例如約100ul)用于測定其中的血小板的數(shù)量;

在所述抗凝劑中還補充添加了氯化鎂和酒石酸鉀鈉兩種試劑,以其用于每1ml血液抗凝計兩種試劑用量分別是50μg和100μg;

所述兩種試劑是在配制抗凝劑時添加到抗凝劑溶液中的;

步驟(d)所得富血小板血漿中包含1~3×109/ml濃度的血小板;例如其中包含1.5~2.5×109/ml濃度的血小板;

所述凍干賦形劑選自甘露醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、山梨醇、麥芽糖、右旋糖苷及其組合;凍干賦形劑是以水溶液的形式與所述富血小板血漿混合的;所述凍干賦形劑是以水溶液的形式與所述富血小板血漿混合的,在混合液中凍干賦形劑的濃度為0.5~2.5%,例如0.5~1.5%;

步驟(e)中,使所述富血小板血漿與凍干賦形劑水溶液以1:0.5~2.5的體積比(例如1:0.5~1.5的體積比,例如1:0.6~1.2的體積比)混合均勻,再進行冷凍干燥;

所述凍干賦形劑是海藻糖或麥芽糖;

所述凍干賦形劑是海藻糖或麥芽糖,并且隨該凍干賦形劑還一起添加了乙酸鈉;所述乙酸鈉在富血小板血漿與凍干賦形劑的混合液中的濃度為0.01~0.05%,例如0.01~0.02%。

6.一種包含富血小板血漿的凍干粉,其中包括富血小板血漿、凍干賦形劑。

7.根據(jù)權(quán)利要求6的凍干粉,其特征在于以下任一項或多項:

其中所述凍干賦形劑選自甘露醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、山梨醇、麥芽糖、右旋糖苷及其組合;所述凍干賦形劑是以水溶液的形式與所述富血小板血漿混合的;所述凍干賦形劑是以水溶液的形式與所述富血小板血漿混合的,在混合液中凍干賦形劑的濃度為0.5~2.5%,例如0.5~1.5%;

所述富血小板血漿與凍干賦形劑水溶液以1:0.5~2.5的體積比(例如1:0.5~1.5的體積比,例如1:0.6~1.2的體積比)混合均勻,再進行冷凍干燥;

所述凍干賦形劑是海藻糖或麥芽糖;

所述凍干賦形劑是海藻糖或麥芽糖,并且隨該凍干賦形劑還一起添加了乙酸鈉;所述乙酸鈉在富血小板血漿與凍干賦形劑的混合液中的濃度為0.01~0.05%,例如0.01~0.02%;

其基本上是由權(quán)利要求1-5任一項所述的方法獲得的;或者其如本發(fā)明說明書第二方面任一實施方案所述。

8.富血小板血漿PRP在制備健康產(chǎn)品中的用途,所述的健康產(chǎn)品應(yīng)用于骨科、口腔科、頜面外科、運動醫(yī)學以及美容醫(yī)學。

9.根據(jù)權(quán)利要求8的用途,其特征在于:其中所述富血小板血漿中包含1~3×109/ml濃度的血小板;所述富血小板血漿中包含1.5~2.5×109/ml濃度的血小板;和/或,所述健康產(chǎn)品是凍干粉。

10.根據(jù)權(quán)利要求8的用途,所述凍干粉基本上是由權(quán)利要求1-5任一項所述的方法獲得的;或者其如本發(fā)明說明書第三方面任一實施方案所述。

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