本發(fā)明涉及一種貽貝蛋白復(fù)合醫(yī)用敷料的制備方法，，屬于醫(yī)用敷料制備領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

醫(yī)用敷料主要功能是覆蓋、保護(hù)破損皮膚，同時(shí)提供有助于傷口愈合的環(huán)境，傳統(tǒng)主要使用脫脂棉紗布、紗布條、棉球和棉膜等天然纖維性材料類敷料，可使傷口干燥，具備物理隔離功能；但存在與滲出物結(jié)痂，造成傷口粘連，換藥時(shí)引發(fā)疼痛及新的創(chuàng)傷，以及細(xì)菌滋生、保濕及止血性能不佳等問題。為此，學(xué)者們研究出了生物敷料，其能與傷口緊密貼合，保持傷口潤濕避免其干燥，可輔助局部使用的藥物及機(jī)體內(nèi)源性分子促進(jìn)傷口愈合。生物敷料通常應(yīng)具備以下要求：（1）保濕、吸濕性良好，能有效保留傷口滲液同時(shí)不形成積液；（2）傷口組織處粘連程度輕，不易與傷口滲液粘連成痂，減輕換藥時(shí)的疼痛及造成新生組織損傷；（3）抗菌、抑菌性較好，預(yù)防傷口感染；（4）生物相容性優(yōu)良，對人體無刺激，不會(huì)引起中毒、病變等。

目前的生物敷料根據(jù)用途以及材質(zhì)，可將其分為天然材料類、人工合成材料類和載藥類敷料。天然材料類包括海藻酸鹽敷料、殼聚糖敷料、動(dòng)物類敷料等，海藻酸鹽敷料具有吸濕性強(qiáng)、揭除容易、有助于血液凝固及傷口愈合等優(yōu)點(diǎn)，但是海藻酸鹽敷料需要一定的濕度才能發(fā)揮作用，所以它們不能用于干燥的傷口和被堅(jiān)硬的壞死組織所覆蓋的傷口，這是海藻酸鹽敷料的主要缺點(diǎn)。殼聚糖敷料具有良好的生物相容性和生物可降解性，還具有抗菌、消毒、無毒、止血、減少創(chuàng)面滲出和促進(jìn)創(chuàng)傷組織再生等優(yōu)點(diǎn)，其缺點(diǎn)是力學(xué)性能較差，抗水性能差等。動(dòng)物類敷料在結(jié)構(gòu)、黏附性及膠原含量上與人體皮膚組織比較接近，但是它的力學(xué)性能較差，容易分層，會(huì)影響自體皮膚移植，且病原微生物容易污染，不易儲(chǔ)存。合成材料類包括薄膜型敷料、水膠體類敷料、泡沫類敷料，薄膜型敷料透氣性、阻菌性及貼附性好，但是吸收性較差，水膠體類敷料膠體層吸收大量滲出物后會(huì)造成創(chuàng)面?zhèn)诘亩挝廴?，泡沫類敷料由于其具有多孔結(jié)構(gòu)，傷口組織易長入孔隙，造成脫膜困難，并常有泡沫碎屑遺留于傷口導(dǎo)致痂痕增多。載藥類敷料的缺點(diǎn)為不具備粘連性，需要增加輔料加以固定，并且使用后會(huì)有著色現(xiàn)象，也有可能會(huì)產(chǎn)生耐藥性，對其在臨床上的應(yīng)用也產(chǎn)生了一定的抑制作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題：針對目前殼聚糖敷料存在力學(xué)性能差、脆性大和抗水性差的問題，提供了一種用貽貝粘蛋白增強(qiáng)抗水性、細(xì)菌纖維素復(fù)合殼聚糖制備醫(yī)用敷料的方法，本發(fā)明首先從貽貝中提取粘性蛋白，再將殼聚糖與細(xì)菌纖維素混合溶脹后，與硫酸軟骨素混合即可得到醫(yī)用敷料，利用貽貝粘蛋白在水中可以粘附在任何基底上，足見貽貝粘蛋白抗水性之強(qiáng)，再用細(xì)菌纖維素增強(qiáng)殼聚糖敷料的強(qiáng)度和力學(xué)性能，本發(fā)明制備的醫(yī)用敷料能夠透過堅(jiān)硬的壞死組織進(jìn)入傷口內(nèi)部，使傷口快速愈合，作用于軟骨組織時(shí)，還能使促進(jìn)軟骨組織生長，具有保濕、透氣、吸收傷口滲出液等功效。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

（1）稱取200～300g貽貝肉，并用去離子水洗滌3～5遍后，置于燒杯中，再加入400～500mLpH為6.3～6.5的磷酸二氫鉀-磷酸氫二鉀緩沖溶液，攪拌3～5min后，轉(zhuǎn)移至組織粉碎機(jī)中粉碎20～30min，得到勻漿液，并對其進(jìn)行加熱至50～60℃，攪拌提取4～5h，停止加熱，并置于離心機(jī)，在4000～5000r/min下離心20～30min，收集上清液；

（2）將上述上清液加入到燒杯中，并置于冰水浴中，控制溫度在3～5℃，再加入20～30g氯化銨，攪拌10～20min，待氯化銨全部溶解后，靜置2～3h，再置于離心機(jī)中，在1000～1200r/min下離心20～30min，收集沉淀，得到貽貝蛋白，備用；

（3）稱取10～20g殼聚糖加入到三口燒瓶中，并將燒瓶置于水浴鍋中，升溫至70～80℃，再加入100～200mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為36%醋酸溶液，攪拌10～20min，待殼聚糖全部溶解后，再加入8～12g細(xì)菌纖維素，攪拌溶脹1～2h后，得到混合液；

（4）按重量份數(shù)計(jì)，稱取30～40份步驟（2）備用的貽貝蛋白、40～50份上述混合液、2～3份硫酸軟骨素和3～5份羧甲基纖維素，加入到燒杯中，攪拌混合5～10min后，倒入模具中，在-45～-35℃下冷凍干燥24～26h，即可得到貽貝蛋白復(fù)合醫(yī)用敷料。

本發(fā)明的應(yīng)用方法：本發(fā)明制備的醫(yī)用敷料可用于治愈燒傷、燙傷、手術(shù)切口等多種皮膚類創(chuàng)傷，使用前先用醫(yī)用酒精將創(chuàng)傷周圍皮膚擦干，再選用比創(chuàng)面大5～8cm的本發(fā)明的醫(yī)用敷料覆蓋傷口，之后再用無菌紗布包扎，更換時(shí)間根據(jù)創(chuàng)面滲出液而定，滲出液多，敷料吸收飽和應(yīng)及時(shí)更換，滲出液少，可隔1～2天更換即可。

本發(fā)明與其他方法相比，有益技術(shù)效果是：

（1）本發(fā)明制備的醫(yī)用敷料能夠透過堅(jiān)硬的壞死組織進(jìn)入傷口內(nèi)部，使傷口快速愈合，作用于軟骨組織時(shí)，還能使促進(jìn)軟骨組織生長，具有保濕、透氣、吸收傷口滲出液等功效；

（2）本發(fā)明操作簡單，原料價(jià)廉易得。

具體實(shí)施方式

首先稱取200～300g貽貝肉，并用去離子水洗滌3～5遍后，置于燒杯中，再加入400～500mLpH為6.3～6.5的磷酸二氫鉀-磷酸氫二鉀緩沖溶液，攪拌3～5min后，轉(zhuǎn)移至組織粉碎機(jī)中粉碎20～30min，得到勻漿液，并對其進(jìn)行加熱至50～60℃，攪拌提取4～5h，停止加熱，并置于離心機(jī)，在4000～5000r/min下離心20～30min，收集上清液；將上述上清液加入到燒杯中，并置于冰水浴中，控制溫度在3～5℃，再加入20～30g氯化銨，攪拌10～20min，待氯化銨全部溶解后，靜置2～3h，再置于離心機(jī)中，在1000～1200r/min下離心20～30min，收集沉淀，得到貽貝蛋白，備用；稱取10～20g殼聚糖加入到三口燒瓶中，并將燒瓶置于水浴鍋中，升溫至70～80℃，再加入100～200mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為36%醋酸溶液，攪拌10～20min，待殼聚糖全部溶解后，再加入8～12g細(xì)菌纖維素，攪拌溶脹1～2h后，得到混合液；按重量份數(shù)計(jì)，稱取30～40份備用的貽貝蛋白、40～50份上述混合液、2～3份硫酸軟骨素和3～5份羧甲基纖維素，加入到燒杯中，攪拌混合5～10min后，倒入模具中，在-45～-35℃下冷凍干燥24～26h，即可得到貽貝蛋白復(fù)合醫(yī)用敷料。

實(shí)例1

首先稱取200g貽貝肉，并用去離子水洗滌3遍后，置于燒杯中，再加入400mLpH為6.3的磷酸二氫鉀-磷酸氫二鉀緩沖溶液，攪拌3min后，轉(zhuǎn)移至組織粉碎機(jī)中粉碎20min，得到勻漿液，并對其進(jìn)行加熱至50℃，攪拌提取4h，停止加熱，并置于離心機(jī)，在4000r/min下離心20min，收集上清液；將上述上清液加入到燒杯中，并置于冰水浴中，控制溫度在3℃，再加入20g氯化銨，攪拌10min，待氯化銨全部溶解后，靜置2h，再置于離心機(jī)中，在1000r/min下離心20min，收集沉淀，得到貽貝蛋白，備用；稱取10g殼聚糖加入到三口燒瓶中，并將燒瓶置于水浴鍋中，升溫至70℃，再加入100mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為36%醋酸溶液，攪拌10min，待殼聚糖全部溶解后，再加入8g細(xì)菌纖維素，攪拌溶脹1h后，得到混合液；按重量份數(shù)計(jì)，稱取30份備用的貽貝蛋白、40份上述混合液、2份硫酸軟骨素和3份羧甲基纖維素，加入到燒杯中，攪拌混合5min后，倒入模具中，在-45℃下冷凍干燥24h，即可得到貽貝蛋白復(fù)合醫(yī)用敷料。

本發(fā)明的應(yīng)用方法：將待改良的土地表面的雜草去除后，將土壤改良劑與水按質(zhì)量比為1：400進(jìn)行稀釋，然后均勻噴灑在土地表面，控制土壤改良劑用量為40kg/畝，待2天后進(jìn)行翻鋤，再隔7天后再次噴灑質(zhì)量比為1：400加水稀釋后的土壤改良劑溶液，土壤改良劑用量不變，噴灑完畢后再次翻鋤一次即可。經(jīng)本發(fā)明土壤改良劑改良后的土壤容重降低了15%，總孔隙度提高了18%，N、P、K元素含量均增加了10%，土壤的保水保肥能力顯著提高。

實(shí)例2

首先稱取250g貽貝肉，并用去離子水洗滌4遍后，置于燒杯中，再加入450mLpH為6.4的磷酸二氫鉀-磷酸氫二鉀緩沖溶液，攪拌4min后，轉(zhuǎn)移至組織粉碎機(jī)中粉碎25min，得到勻漿液，并對其進(jìn)行加熱至55℃，攪拌提取4h，停止加熱，并置于離心機(jī)，在4500r/min下離心25min，收集上清液；將上述上清液加入到燒杯中，并置于冰水浴中，控制溫度在4℃，再加入25g氯化銨，攪拌15min，待氯化銨全部溶解后，靜置2h，再置于離心機(jī)中，在1100r/min下離心25min，收集沉淀，得到貽貝蛋白，備用；稱取15g殼聚糖加入到三口燒瓶中，并將燒瓶置于水浴鍋中，升溫至75℃，再加入150mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為36%醋酸溶液，攪拌15min，待殼聚糖全部溶解后，再加入10g細(xì)菌纖維素，攪拌溶脹2h后，得到混合液；按重量份數(shù)計(jì)，稱取35份備用的貽貝蛋白、45份上述混合液、2份硫酸軟骨素和4份羧甲基纖維素，加入到燒杯中，攪拌混合8min后，倒入模具中，在-40℃下冷凍干燥25h，即可得到貽貝蛋白復(fù)合醫(yī)用敷料。

本發(fā)明的應(yīng)用方法：將待改良的土地表面的雜草去除后，將土壤改良劑與水按質(zhì)量比為1：450進(jìn)行稀釋，然后均勻噴灑在土地表面，控制土壤改良劑用量為45kg/畝，待2.5天后進(jìn)行翻鋤，再隔7.5天后再次噴灑質(zhì)量比為1：450加水稀釋后的土壤改良劑溶液，土壤改良劑用量不變，噴灑完畢后再次翻鋤一次即可。經(jīng)本發(fā)明土壤改良劑改良后的土壤容重降低了16%，總孔隙度提高了19%，N、P、K元素含量均增加了18%，土壤的保水保肥能力顯著提高。

實(shí)例3

首先稱取300g貽貝肉，并用去離子水洗滌5遍后，置于燒杯中，再加入500mLpH為6.5的磷酸二氫鉀-磷酸氫二鉀緩沖溶液，攪拌5min后，轉(zhuǎn)移至組織粉碎機(jī)中粉碎30min，得到勻漿液，并對其進(jìn)行加熱至60℃，攪拌提取5h，停止加熱，并置于離心機(jī)，在5000r/min下離心30min，收集上清液；將上述上清液加入到燒杯中，并置于冰水浴中，控制溫度在5℃，再加入30g氯化銨，攪拌20min，待氯化銨全部溶解后，靜置3h，再置于離心機(jī)中，在1200r/min下離心30min，收集沉淀，得到貽貝蛋白，備用；稱取20g殼聚糖加入到三口燒瓶中，并將燒瓶置于水浴鍋中，升溫至80℃，再加入200mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為36%醋酸溶液，攪拌20min，待殼聚糖全部溶解后，再加入12g細(xì)菌纖維素，攪拌溶脹2h后，得到混合液；按重量份數(shù)計(jì)，稱取40份備用的貽貝蛋白、50份上述混合液、3份硫酸軟骨素和5份羧甲基纖維素，加入到燒杯中，攪拌混合10min后，倒入模具中，在-35℃下冷凍干燥26h，即可得到貽貝蛋白復(fù)合醫(yī)用敷料。

本發(fā)明的應(yīng)用方法：將待改良的土地表面的雜草去除后，將土壤改良劑與水按質(zhì)量比為1：500進(jìn)行稀釋，然后均勻噴灑在土地表面，控制土壤改良劑用量為50kg/畝，待3天后進(jìn)行翻鋤，再隔8天后再次噴灑質(zhì)量比為1：500加水稀釋后的土壤改良劑溶液，土壤改良劑用量不變，噴灑完畢后再次翻鋤一次即可。經(jīng)本發(fā)明土壤改良劑改良后的土壤容重降低了18%，總孔隙度提高了20%，N、P、K元素含量均增加了15%，土壤的保水保肥能力顯著提高。