本發(fā)明涉及一種新型二丁氧苯基-甲磺酰胺類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽作為調(diào)節(jié)雌激素相關(guān)受體ERR-alpha（Estrogen-related receptor alpha，ERR-alpha或ERRα）調(diào)節(jié)劑及其藥物組合及其在制備預(yù)防和/或治療乳腺癌、前列腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、宮頸癌或子宮內(nèi)膜癌等腫瘤的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
ERRα于1988年由Giguere等克隆鑒定。作為孤兒核受體（Orphan nuclear receptor），ERRα內(nèi)源性配體一直未被發(fā)現(xiàn)。ERRα在體內(nèi)廣泛表達(dá)，從心肌、消化道、大腦、骨骼肌、棕色脂肪以及乳腺癌、卵巢癌等惡性腫瘤等均能檢出。ERRα與雌激素受體α（ERα）具有較高的同源性：DNA結(jié)合域（DNA binding domain, DBD）氨基酸相似性68%，配體結(jié)合域（Ligand binding domain, LBD）相似性33%。與雌激素受體ERα不同，ERRα不能與雌激素結(jié)合，但可與ERα競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合雌激素反應(yīng)元件（Estrogen response elemnt, ERE）,識(shí)別序列為AGGTCAnnn TGACCT；而ERRα也能以單體或二聚體的形式結(jié)合一類I型類固醇生成因子反應(yīng)元件TnAAGGTCA，也稱為雌激素相關(guān)受體反應(yīng)元件（ERR response element, ERRE），表明ERRα與ERα在識(shí)別DNA時(shí)有交叉重疊。
最近的研究提示，除了參與ER信號(hào)通路，ERRα在細(xì)胞能量代謝、線粒體氧化和生物合成等有重要生理作用，其功能的發(fā)揮影響著組織器官的發(fā)育、細(xì)胞的衰老、腫瘤的發(fā)生和發(fā)展等。
腫瘤生物學(xué)基礎(chǔ)研究表明，孤兒核受體—雌激素相關(guān)受體α（ERRα）能促進(jìn)激素依賴/非依賴的乳腺癌的生長(zhǎng)、侵襲，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖、內(nèi)皮微管形成及腫瘤血管新生，意味著靶向ERRα的藥物兼具抗乳腺癌的效應(yīng)，為乳腺癌分子靶向治療提供新策略。
近年來(lái)，研究揭示ERRα與雌激素相關(guān)的乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌和宮頸癌等雌激素依賴性腫瘤密切相關(guān)，更有研究表明眾多非雌激素依賴性腫瘤如前列腺癌、胃腺癌和結(jié)直腸癌等的發(fā)生發(fā)展和臨床預(yù)后也與ERRα的表達(dá)相關(guān)。臨床研究證實(shí)，ERRα在乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌及前列腺癌等腫瘤中表達(dá)顯著上調(diào)，是一個(gè)預(yù)后不良的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因子。通過(guò)上調(diào)/下調(diào)ERRα表達(dá)或使用ERRα抑制劑，可以有效抑制缺氧基因的轉(zhuǎn)錄活性，從而降低體內(nèi)實(shí)體瘤的血管生成與增長(zhǎng)。這些研究表明，ERRα可能是多種腫瘤潛在的治療靶點(diǎn)。ERRα反向激動(dòng)劑XCT790抑制了多種腫瘤細(xì)胞的增殖及血管新生。ERRα反向激動(dòng)劑SR16388有效抑制了裸鼠荷瘤模型中前列腺癌的增長(zhǎng)。這些研究表明，靶向ERRα的調(diào)節(jié)劑有可能作為臨床上有效的抗腫瘤藥物。
綜上所述，雌激素相關(guān)受體ERRα可作為多種腫瘤的新型治療靶點(diǎn)，基于雌激素相關(guān)受體ERRα開發(fā)出來(lái)的小分子調(diào)節(jié)劑，極有可能成為治療相關(guān)疾病腫瘤的新藥物分子。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
1、本發(fā)明的目的在于提供一類具有如下式I 結(jié)構(gòu)的雌激素相關(guān)受體ERR-alpha調(diào)節(jié)劑或其藥學(xué)上可接受的鹽。
2、本發(fā)明的又一目的在于提供式I結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
3、本發(fā)明的再一目的在于提供式I所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備預(yù)防和/或治療腫瘤疾病的藥物中的應(yīng)用。優(yōu)選地，所述腫瘤疾病為乳腺癌、前列腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、宮頸癌或子宮內(nèi)膜癌等腫瘤。
4、一種藥物組合物，包括治療有效量的權(quán)利要求1所述的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的要求組合物，其特征是，該藥物組合物進(jìn)一步含有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
6、根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征是，所述的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分占總重量比50%~99.5%。
具體實(shí)施方式
下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)和具體的介紹，以更好的理解本發(fā)明，但下述實(shí)施例并不限制本發(fā)明范圍，以下將詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明式I化合物的生物活性及藥理學(xué)評(píng)價(jià)。
實(shí)施例1使用報(bào)告基因測(cè)試式I化合物對(duì)ERR-alpha的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性
本實(shí)施例闡明了本發(fā)明涉及的式I化合物可以有效地抑制人胚腎細(xì)胞HEK-293中ERR-alpha所調(diào)控的報(bào)告基因的表達(dá)，說(shuō)明本發(fā)明所涉及的式I化合物有效地調(diào)控了ERR-alpha的功能。報(bào)告基因測(cè)試技術(shù)是本領(lǐng)域工作人員熟悉的技術(shù)。
我們利用GAL4融合受體激活法測(cè)試式I化合物對(duì)ERRs轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性。GAL4融合受體激活法是基于哺乳動(dòng)物細(xì)胞單雜交原理，即把受體LBD與酵母轉(zhuǎn)錄因子DBD構(gòu)建成融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒，使受體的LBD充當(dāng)活化域( Activation domain ,AD )。當(dāng)把GAL4融合受體質(zhì)粒與GAL4DNA反應(yīng)元件( UAS )驅(qū)動(dòng)的報(bào)告基因質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染細(xì)胞時(shí)，在受體激動(dòng)劑的作用下，GAL4融合受體將結(jié)合到5×UAS上，驅(qū)動(dòng)報(bào)告基因的表達(dá)。而在受體反向激動(dòng)劑或拮抗劑的作用下，GAL4融合受體與5×UAS的結(jié)合減少，將抑制報(bào)告基因的表達(dá)。
在本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)中，我們將Gal4-ERR-alpha質(zhì)粒與表達(dá)5×UAS并偶聯(lián)了螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因的質(zhì)粒(以β-gal表達(dá)質(zhì)粒作為內(nèi)參)瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染進(jìn)入哺乳動(dòng)物HEK-293細(xì)胞中，加入不同濃度的式I化合物作用24h，檢測(cè)熒光素酶和β-gal的活性變化。
1、轉(zhuǎn)染：接種HEK-293細(xì)胞于6cm培養(yǎng)皿中，6 .0×104/皿，培養(yǎng)液為10％FBS DMEM，使其生長(zhǎng)狀態(tài)良好。37℃5％CO2培養(yǎng)24小時(shí)之后，將每孔6×103的細(xì)胞接種于96孔Costar細(xì)胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)過(guò)夜。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到70％時(shí)，取50mL的無(wú)血清培養(yǎng)液(DMEM)于1.5mL的離心管中，然后加2mL的轉(zhuǎn)染試劑3000Transfection Reagent，用手輕彈幾次，混合之后室溫放置5min。按重組質(zhì)粒與3000Transfection Reagent以1:5的比例混勻，取20pmol重組質(zhì)粒( pGal4-ERRs LBD、p5×UAS-Luc及pβ-gal )加到DMEM中，輕柔混合。將無(wú)血清DMEM稀釋好的重組質(zhì)粒再與DMEM稀釋的3000Transfection Reagent的混合物輕彈混勻，室溫放置20min以便形成DNA/lipofectamine的復(fù)合物。將孵育好的DNA/lipofectamine的復(fù)合物逐滴加入到含有細(xì)胞和培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中去，來(lái)回輕柔地?fù)u晃細(xì)胞培養(yǎng)皿使細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率提高，將培養(yǎng)皿放入37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6小時(shí)，換新鮮培養(yǎng)液( 減少脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性)。再次消化細(xì)胞，以1×104/孔的細(xì)胞接種于96孔Costar細(xì)胞培養(yǎng)板中。
2、加入式I化合物及陽(yáng)性藥XCT790：轉(zhuǎn)染8h后，加入式I化合物到96孔板中。將陽(yáng)性對(duì)照XCT790和式I化合物稀釋至10×目標(biāo)濃度加入96孔Costar細(xì)胞培養(yǎng)板，體積為10μl，繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)每個(gè)濃度3復(fù)孔，培養(yǎng)24小時(shí)后，棄去培養(yǎng)板中培養(yǎng)液，加入細(xì)胞裂解液100μl，各取50μl分別用MD多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行螢火蟲熒光素酶及β-半乳糖苷酶的活性測(cè)定，以相對(duì)熒光素酶活性(螢火蟲熒光素酶活性/β-半乳糖苷酶活性的比值)計(jì)算式I化合物對(duì)ERR-alpha的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明涉及的式I化合物可以劑量依賴性地抑制ERRα的轉(zhuǎn)錄激活，(IC50＝1.60±0.02μM )，與陽(yáng)性對(duì)照XCT790趨勢(shì)一致( IC50＝0 .32±0 .02μM )。
以上所述實(shí)施例，描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利為準(zhǔn)。