本發(fā)明屬于衛(wèi)生用品領(lǐng)域，具體涉及一種含有乳酸菌的發(fā)酵上清的的濕巾及其專用濕巾液。
背景技術(shù)：
濕巾是選用濕強(qiáng)柔纖高滲透性基材，經(jīng)折疊、加濕、包裝制成的一次性清潔衛(wèi)生用品，因其具有清潔、保濕皮膚的基本功能以及便于攜帶等特點(diǎn)成為人們?nèi)粘Ｉ钪斜夭豢缮俚那鍧嵱闷?。以前多用于如民航、酒店、餐館、展會等商務(wù)及接待場所，近幾年來隨著人們生活水平的提高，濕巾的個人消費(fèi)量逐漸增多，主要應(yīng)用于旅行、旅游等戶外用水不方便的場合，還有家庭嬰幼兒的清潔護(hù)理等。近年來濕巾的產(chǎn)量有較快的增長，目前國內(nèi)市場上有上百個品牌的濕巾產(chǎn)品，年消費(fèi)量約500-600噸。濕巾一般由兩部分組成：濕巾本體和吸收在所述濕巾本體內(nèi)的濕巾液。濕巾本體一般為濕強(qiáng)紙或無紡布。目前市場上大部分濕巾使用的為無紡布。
乳酸菌(lactic acid bacteria，LAB)是一類能夠分解糖類以產(chǎn)生乳酸為主要代謝產(chǎn)物的細(xì)菌的通稱，其在自然界分布極為廣泛，具有豐富的物種多樣性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何使?jié)窠砭哂辛己玫那鍧嵭Ч揖哂幸志墓δ堋?/p>
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了一種濕巾液。
本發(fā)明所提供的濕巾液，可包括a1)或a2)或a3)或a4)：
a1)乳酸菌的發(fā)酵上清；
a2)所述乳酸菌的發(fā)酵物；
a3)所述乳酸菌的發(fā)酵上清的提取物；
a4)所述乳酸菌的發(fā)酵物的提取物。
上述濕巾液中，所述乳酸菌的發(fā)酵物為包括所述乳酸菌的發(fā)酵上清和菌體在內(nèi)的整個發(fā)酵后體系。
上述濕巾液中，所述乳酸菌可為乳酸球菌屬的乳酸菌，具體可為乳酸球菌屬乳酸亞種的菌種。所述乳酸球菌屬乳酸亞種的菌種具體可為菌株J-2或菌株C-10。
上述濕巾液中，所述乳酸菌可為乳桿菌屬的乳酸菌，具體可為鼠乳桿菌的菌種或干酪乳桿菌干酪亞種的菌種。所述鼠乳桿菌的菌種具體可為菌株6-2。所述干酪乳桿菌干酪亞種的菌種具體可為菌株3-3。
上述濕巾液中，所述乳桿菌屬的乳酸菌可為植物乳桿菌。所述植物乳桿菌具體可為菌株N-1或B16植物乳桿菌。
上述濕巾液中，所述植物乳桿菌具體可為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)Rs0228，該菌株已于2016年08月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號)，保藏編號為CGMCC No.12881。
所述菌株N-1、所述B16植物乳桿菌、所述菌株6-2、所述菌株3-3、所述菌株J-2和所述菌株C-10均記載于如下文獻(xiàn)中：四川地區(qū)自然發(fā)酵泡菜中乳酸菌的生物特性研究.周光燕.2006.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文.
上述濕巾液中，所述乳酸菌的發(fā)酵物的制備方法可為：發(fā)酵培養(yǎng)所述乳酸菌，得到乳酸菌的發(fā)酵物。所述發(fā)酵的起始時刻，所述乳酸菌的初始菌濃度可為6×105cfu/mL。所述發(fā)酵培養(yǎng)的條件：30℃振蕩培養(yǎng)24-72h(24h、48h或72h)。所述振蕩培養(yǎng)的參數(shù)具體可為搖速220rpm，旋轉(zhuǎn)半徑50mm。
上述濕巾液中，所述乳酸菌的發(fā)酵上清的制備方法可為：取所述乳酸菌的發(fā)酵物，除菌，收集上清液，得到乳酸菌的發(fā)酵上清。所述收集上清液的實(shí)現(xiàn)方法為4000rpm離心10min。所述除菌的方法為過濾除菌(過濾孔徑可為0.45mm)。
上述濕巾液中，所述發(fā)酵培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基可用任何適合培養(yǎng)乳酸菌的培養(yǎng)基。
上述濕巾液中，所述發(fā)酵培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基具體可含有9.00～11.00g/L蛋白胨、9.00～11.00g/L牛肉膏、4.50～5.50g/L酵母膏、1.80～2.20g/L檸檬酸氫二銨、18.00～22.00g/L葡萄糖、0.90～1.10mL/L吐溫-80、1.80～2.20g/L磷酸氫二鉀、0.52～0.64g/L硫酸錳和0.25～0.31g/L硫酸鎂。
所述發(fā)酵培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基具體可為含有9.00～11.00g/L蛋白胨、9.00～11.00g/L牛肉膏、4.50～5.50g/L酵母膏、1.80～2.20g/L檸檬酸氫二銨、18.00～22.00g/L葡萄糖、0.90～1.10mL/L吐溫-80、1.80～2.20g/L磷酸氫二鉀、0.52～0.64g/L硫酸錳和0.25～0.31g/L硫酸鎂的水溶液，pH值為6.2-6.6。
所述發(fā)酵培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基具體可為含有10.00g/L蛋白胨、10.00g/L牛肉膏、5.00g/L酵母膏、2.00g/L檸檬酸氫二銨、20.00g/L葡萄糖、1mL/L吐溫-80、2.00g/L磷酸氫二鉀、0.58g/L硫酸錳和0.28g/L硫酸鎂的水溶液，pH值為6.4。
上述任一所述濕巾液主要可由如下質(zhì)量份的原料組成：20.00～30.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、0.03～0.05質(zhì)量份透明質(zhì)酸鈉、0.50～2.00質(zhì)量份甘油、0.05～0.20質(zhì)量份無患子提取物和0.05～0.20質(zhì)量份香精。
上述任一濕巾液具體可由如下質(zhì)量份的原料組成：20.00～30.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、0.03～0.05質(zhì)量份透明質(zhì)酸鈉、0.50～2.00質(zhì)量份甘油、0.05～0.20質(zhì)量份無患子提取物、0.05～0.20質(zhì)量份香精和67.00～80.00質(zhì)量份水。
上述任一所述濕巾液具體可由20.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、0.03質(zhì)量份透明質(zhì)酸鈉、0.50質(zhì)量份甘油、0.05質(zhì)量份無患子提取物、0.05質(zhì)量份香精和79.37質(zhì)量份水組成。
上述任一所述濕巾液具體可由25.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、0.04質(zhì)量份透明質(zhì)酸鈉、1.25質(zhì)量份甘油、0.10質(zhì)量份無患子提取物、0.10質(zhì)量份香精和73.51質(zhì)量份水組成。
上述任一所述濕巾液具體可由30.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、0.05質(zhì)量份透明質(zhì)酸鈉、2.00質(zhì)量份甘油、0.20質(zhì)量份無患子提取物、0.20質(zhì)量份香精和67.55質(zhì)量份水組成。
上述任一所述濕巾液的制備方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
上述任一所述濕巾液的制備方法可包括將20.00～30.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、0.03～0.05質(zhì)量份透明質(zhì)酸鈉、0.50～2.00質(zhì)量份甘油、0.05～0.20質(zhì)量份無患子提取物、0.05～0.20質(zhì)量份香精和67.00～80.00質(zhì)量份水混合的步驟。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了一種濕巾。
本發(fā)明所提供的濕巾，包括濕巾本體和吸收在所述濕巾本體內(nèi)的上述任一所述的濕巾液。
上述濕巾中，所述濕巾本體可為無紡布、濕強(qiáng)紙或設(shè)置有吸水材料的載體。
上述任一所述乳酸菌在制備濕巾液或濕巾中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
上文中，透明質(zhì)酸鈉為式(Ⅰ)所示的化合物。甘油為式(Ⅱ)所示的化合物。海藻糖為式(Ⅲ)所示的化合物。透明質(zhì)酸鈉具體可為山東天晟生物科技有限公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為9067-32-7。甘油具體可為印尼綠寶油脂集團(tuán)公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為1357。海藻糖具體可為日本林原公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為99-20-7。
上文中，無患子提取物具體可為昆明仟草生物科技有限公司的產(chǎn)品。
上文中，無患子提取物可為無患子果皮提取物。
上文中，無患子提取物可為無患子醇提物。所述醇具體可為乙醇。
所述無患子醇提物的制備方法可包括如下步驟：以無患子果皮為原料，依次進(jìn)行乙醇回流提取、水沉并去雜、醇沉并去雜和干燥。
所述“乙醇回流提取”具體可為采用乙醇水溶液進(jìn)行回流提取。所述乙醇水溶液具體可為78-82％(體積百分比)的乙醇水溶液。所述“乙醇回流提取”中，乙醇水溶液與原料的質(zhì)量配比可為(7.9-8.1)：1。所述“乙醇回流提取”的時間具體可為2h±10min。為了增加產(chǎn)率，可多次重復(fù)提取，再將回流液混合。所述重復(fù)提取的次數(shù)具體可為3次。
所述制備方法中，具體可將所述“乙醇回流提取”得到的回流液過濾，收集上清液進(jìn)行濃縮，然后將得到的濃縮液(濃縮液1)進(jìn)行所述“水沉”。
所述“水沉”中，所述濃縮液1與水的體積配比為1:3。
所述“水沉”的具體條件參數(shù)為：先攪拌5h，再靜置6h。
所述制備方法中，具體可將所述“水沉”得到的溶液過濾，收集上清液進(jìn)行濃縮，然后將得到的濃縮液(濃縮液2)進(jìn)行所述“醇沉”。
所述“醇沉”中，所述濃縮液2與水的體積配比為1:2。
所述“醇沉”的具體條件參數(shù)為：先攪拌5min，再靜置2-4h。
所述制備方法中，具體可將所述“醇沉”得到的溶液過濾，收集上清液進(jìn)行脫色，然后得到脫色后的溶液。
所述制備方法中，具體可將所述“脫色后的溶液”濃縮，然后依次進(jìn)行干燥、粉碎。
所述干燥的具體條件參數(shù)為：75℃條件下干燥至恒重。
所述粉碎的具體條件參數(shù)為：篩網(wǎng)目數(shù)100目。
獲得無患子的醇提物的步驟具體可如下：
(1)將無患子(Sap indusmukorossi Gaerth.)的果皮進(jìn)行粉碎(篩網(wǎng)目數(shù)：10目)，得到粒度小于1.0cm的原料。
(2)完成步驟(1)后，取原料，加入(8±0.1)質(zhì)量倍量78-82％(體積百分比)的乙醇水溶液進(jìn)行回流提取，提取分別進(jìn)行三次，每次提取時間為2h±10min，分別得到回流液1、回流液2和回流液3。
(3)完成步驟(2)后，取回流液1、回流液2或回流液3，過濾，收集上清液進(jìn)行濃縮(目的為回收乙醇)，然后將濃縮液進(jìn)行合并，得到溶液1。
(4)完成步驟(3)后，取溶液1，按體積比為1:3加入水，進(jìn)行水沉(攪拌時間5h，水沉?xí)r間6h；雜質(zhì)形成沉淀通過后續(xù)的過濾去除)，然后進(jìn)行過濾，收集上清液進(jìn)行濃縮，得到溶液2。
(5)完成步驟(4)后，取溶液2，按體積比為1:2加入水，進(jìn)行醇沉(攪拌時間5min，醇沉?xí)r間2-4h；雜質(zhì)形成沉淀通過后續(xù)的過濾去除)，然后進(jìn)行過濾，收集上清液進(jìn)行脫色，得到溶液3。
(6)完成步驟(5)后，取溶液3，先進(jìn)行濃縮(目的為回收乙醇)和干燥(在75℃條件下干燥至恒重)，然后粉碎(篩網(wǎng)目數(shù)：100目)，最后混合均勻，獲得無患子的醇提物。
實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明所提供的濕巾和濕巾液均具有良好的抑菌效果，具有重要的應(yīng)用價值。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。
MRS培養(yǎng)基：將蛋白胨10.00g、牛肉膏10.00g、酵母膏5.00g、檸檬酸氫二銨2.00g、葡萄糖20.00g、吐溫-80 1mL、磷酸氫二鉀2.00g、硫酸錳0.58g和硫酸鎂0.28g溶于1L蒸餾水，調(diào)節(jié)pH值至6.4。
固體培養(yǎng)基：將胰蛋白胨5.0g、淀粉2.5g、瓊脂15.0g和葡萄糖1.0g溶于1L蒸餾水，調(diào)節(jié)pH值至5.5。
固體平板：用固體培養(yǎng)基制成固體平板。
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC No.6538和白色念珠菌(Monilia albican)ATCC No.10231均保藏于美國模式培養(yǎng)物集存庫(簡稱ATCC，地址：American Type Culture Collection(ATCC)10801University Boulevard Manassas，VA 20110USA)，公眾可從美國模式培養(yǎng)物集存庫獲得該菌株。金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC No.6538在下文中簡稱為金黃色葡萄球菌。白色念珠菌(Monilia albican)ATCC No.10231在下文中簡稱為白色念珠菌。
無患子提取物為昆明仟草生物科技有限公司的產(chǎn)品。透明質(zhì)酸鈉為式(Ⅰ)所示的化合物。甘油為式(Ⅱ)所示的化合物。海藻糖為式(Ⅲ)所示的化合物。透明質(zhì)酸鈉為山東天晟生物科技有限公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為9067-32-7。甘油為印尼綠寶油脂集團(tuán)公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為1357。海藻糖為日本林原公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為99-20-7。
下述實(shí)施例中的菌株N-1、B16植物乳桿菌、菌株6-2、菌株3-3、菌株J-2和菌株C-10均記載于如下文獻(xiàn)中：四川地區(qū)自然發(fā)酵泡菜中乳酸菌的生物特性研究.周光燕.2006.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文.
實(shí)施例1、乳酸菌的分離與鑒定
一、菌的分離
1、樣品的采集
采集女性(均為對試驗(yàn)內(nèi)容知情同意的志愿者)的陰道分泌物作為樣品，共10份。
2、菌的分離
(1)取樣品，用無菌水稀釋至10倍體積，得到樣品稀釋液。取1mL樣品稀釋液，攪拌接種于30-40℃的固體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24-72h。
(2)完成步驟(1)后，挑選單菌落，點(diǎn)接接種于含1.6％(質(zhì)量百分比)溴甲酚紫的雙層的固體平板上，37℃培養(yǎng)24-72h。
(3)完成步驟(2)后，挑選產(chǎn)生黃色色素的單菌落，劃線接種于含1.6％(質(zhì)量百分比)溴甲酚紫的雙層的固體平板上，37℃培養(yǎng)。
(4)完成步驟(3)后，挑選產(chǎn)生黃色色素的單菌落，接種于MRS培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24-72h。
(5)完成步驟(4)后，革蘭氏染色涂片鏡檢。
革蘭氏染色涂片鏡檢陽性、過氧化氫陰性、含溴甲酚紫平板上形成黃色菌落的菌株初步判定為乳酸菌。按照上述分離方法，從10份樣品中分離到了7株乳酸菌，依次命名為菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4、菌株N5、菌株N6和菌株N7。
二、乳酸菌的鑒定
參考文獻(xiàn)(陳強(qiáng)，2004；胡清華，2002)中記載的方法，測定菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4、菌株N5、菌株N6和菌株N7的生理生化特征。生理生化試驗(yàn)均設(shè)置重復(fù)、陰性對照和陽性對照。根據(jù)測定結(jié)果，與《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》(R.E.布坎南，N.E吉本斯，1984)、《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》(東秀株，蔡妙英，2001)、《Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology》(Peter H.A.Sneath，1984)和《乳酸菌分類鑒定及實(shí)驗(yàn)方法》(凌代文，東秀珠1999)對照進(jìn)行判別。
菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4和菌株N5均無芽抱，革蘭氏陽性，過氧化氫酶陰性，明膠液化試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、聯(lián)苯胺試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)中反應(yīng)陰性，pH4.5生長，因此菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4和菌株N5均鑒定為乳桿菌屬的乳桿菌。菌株N1、菌株N2和菌株N3的糖發(fā)酵結(jié)果與《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》和《乳酸菌分類鑒定及實(shí)驗(yàn)方法》中的植物乳桿菌描述一致，菌株N1為植物乳桿菌，菌株N2具體為菌株N-1，菌株N3具體為B16植物乳桿菌。
菌株N4能利用甘露醇、乳糖、棉籽糖、鼠李糖、七葉苷、海藻糖、纖維二糖、阿拉伯糖、麥芽糖、葡萄糖、山梨醇發(fā)酵產(chǎn)酸、不發(fā)酵核糖、木糖、葡萄糖酸鹽產(chǎn)酸，精氨酸不產(chǎn)氨，15℃不生長，所以菌株N4鑒定為鼠乳桿菌，具體為菌株6-2。
菌株N5的糖發(fā)酵結(jié)果與《乳酸菌分類鑒定及實(shí)驗(yàn)方法》中描述一致，因此，將菌株N5鑒定為干酪乳桿菌干酪亞種，具體為菌株3-3。
菌株N6和菌株N7的生理生化特征如下：在10℃生長，45℃不生長，4％NaCl生長，葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，革蘭氏染色陽性的球形或卵球形細(xì)菌，在過氧化氫酶陰性，明膠液化試驗(yàn)、聯(lián)苯胺試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)中反應(yīng)陰性，因此菌株N6和菌株N7鑒定為乳酸球菌屬的乳酸菌。菌株N6能利用甘露醇、乳糖、核糖、麥芽糖、葡萄糖、山梨醇發(fā)酵產(chǎn)酸，不利用棉籽糖、鼠李糖、海藻糖、木糖、甘油、淀粉發(fā)酵產(chǎn)酸、精氨酸水解，符合《乳酸菌分類鑒定及實(shí)驗(yàn)方法》的描述，將菌株N6鑒定為乳酸球菌屬乳酸亞種，具體為菌株J-2。菌株N7能夠發(fā)酵利用乳糖、海藻糖、核糖、麥芽糖、葡萄糖產(chǎn)酸，不利用棉籽糖、阿拉伯糖、山梨醇、木糖產(chǎn)酸，能從精氨酸產(chǎn)氨，并且能夠水解精氨酸，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，在pH9.2、pH9.6的培養(yǎng)基中生長，符合《乳酸菌分類鑒定及實(shí)驗(yàn)方法》的描述，將菌株N7鑒定為乳酸球菌屬乳酸亞種，具體為菌株C-10。
實(shí)施例2、濕巾的制備
一、發(fā)酵上清的制備
1、取菌株N，接種至MRS培養(yǎng)基(乳酸菌的初始菌濃度為6×105cfu/mL)，30℃振蕩(搖速為220rpm，旋轉(zhuǎn)半徑為50mm)培養(yǎng)24h，收集整個培養(yǎng)體系，命名為體系1。
2、完成步驟1后，取體系1，按體積比為1:9接種至MRS培養(yǎng)基，30℃振蕩(搖速為220rpm，旋轉(zhuǎn)半徑為50mm)培養(yǎng)24h，收集整個培養(yǎng)體系，命名為體系2。
3、完成步驟2后，取體系2，4000rpm離心10min，收集上清液。將上清液過濾除菌(過濾孔徑為0.45mm)，即獲得菌株N1的發(fā)酵上清。
按照上述方法，將菌株N1分別替換為菌株N2、菌株N3、菌株N4、菌株N5、菌株N6和菌株N7，其它步驟均不變，得到菌株N2的發(fā)酵上清、菌株N3的發(fā)酵上清、菌株N4的發(fā)酵上清、菌株N5的發(fā)酵上清、菌株N6的發(fā)酵上清和菌株N7的發(fā)酵上清。
二、濕巾液的制備
按照表2的配比，將水、菌株的發(fā)酵上清、透明質(zhì)酸鈉、甘油、無患子提取物和海藻糖混合，獲得表2所示的濕巾液。
表2不同濕巾液的原料組成(g)
三、濕巾的制備
將無紡布在室溫下浸泡在濕巾液A1中2-4h，然后取出無紡布，密封無菌包裝，得到濕巾A1。
按照上述步驟，將濕巾液A1分別替換為濕巾液A2、濕巾液A3、濕巾液B1、濕巾液B2、濕巾液B3、濕巾液C1、濕巾液C2、濕巾液C3、濕巾液D1、濕巾液D2、濕巾液D3、濕巾液E1、濕巾液E2、濕巾液E3、濕巾液F1、濕巾液F2、濕巾液F3、濕巾液G1、濕巾液G2、濕巾液G3或濕巾液K，得到濕巾A2、濕巾A3、濕巾B1、濕巾B2、濕巾B3、濕巾C1、濕巾C2、濕巾C3、濕巾D1、濕巾D2、濕巾D3、濕巾E1、濕巾E2、濕巾E3、濕巾F1、濕巾F2、濕巾F3、濕巾G1、濕巾G2、濕巾G3和濕巾K。
實(shí)施例3、實(shí)施例2制備的濕巾和濕巾液的抑菌效果
一、實(shí)施例2制備的濕巾的抑菌試驗(yàn)
參照《GB15979-2002一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》附錄C《產(chǎn)品殺菌性能、抑菌性能與穩(wěn)定性測試方法》對待測濕巾進(jìn)行殺菌率試驗(yàn)，作用時間為5min。待測濕巾為濕巾A1、濕巾A2、濕巾A3、濕巾B1、濕巾B2、濕巾B3、濕巾C1、濕巾C2、濕巾C3、濕巾D1、濕巾D2、濕巾D3、濕巾E1、濕巾E2、濕巾E3、濕巾F1、濕巾F2、濕巾F3、濕巾G1、濕巾G2、濕巾G3或濕巾K。待測菌為金黃色葡萄球菌或白色念珠菌。殺菌率試驗(yàn)重復(fù)三次。
殺菌率試驗(yàn)結(jié)果見表3。
表3
結(jié)果表明，濕巾A1、濕巾A2、濕巾A3、濕巾B1、濕巾B2、濕巾B3、濕巾C1、濕巾C2、濕巾C3、濕巾D1、濕巾D2、濕巾D3、濕巾E1、濕巾E2、濕巾E3、濕巾F1、濕巾F2、濕巾F3、濕巾G1、濕巾G2和濕巾G3均對待測菌有抑菌效果，抑菌效果依次為：(濕巾A1、濕巾A2或濕巾A3)>(濕巾B1、濕巾B2、濕巾B3、濕巾C1、濕巾C2或濕巾C3)>(濕巾D1、濕巾D2、濕巾D3、濕巾E1、濕巾E2或濕巾E3)>(濕巾F1、濕巾F2、濕巾F3、濕巾G1、濕巾G2或濕巾G3)。濕巾K對待測菌無抑菌效果?？梢?，本發(fā)明提供的濕巾A1、濕巾A2、濕巾A3、濕巾B1、濕巾B2、濕巾B3、濕巾C1、濕巾C2、濕巾C3、濕巾D1、濕巾D2、濕巾D3、濕巾E1、濕巾E2、濕巾E3、濕巾F1、濕巾F2、濕巾F3、濕巾G1、濕巾G2和濕巾G3均具有良好抑菌效果。
二、實(shí)施例2制備的濕巾液的抑菌試驗(yàn)
參照《GB15979-2002一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》附錄C《產(chǎn)品殺菌性能、抑菌性能與穩(wěn)定性測試方法》對待測濕巾液進(jìn)行殺菌率試驗(yàn)，作用時間為5min。待測濕巾液為濕巾液A1、濕巾液A2、濕巾液A3、濕巾液B1、濕巾液B2、濕巾液B3、濕巾液C1、濕巾液C2、濕巾液C3、濕巾液D1、濕巾液D2、濕巾液D3、濕巾液E1、濕巾液E2、濕巾液E3、濕巾液F1、濕巾液F2、濕巾液F3、濕巾液G1、濕巾液G2、濕巾液G3或濕巾液K。待測菌為金黃色葡萄球菌或白色念珠菌。殺菌率試驗(yàn)重復(fù)三次。
殺菌率試驗(yàn)結(jié)果見表3。
表3
結(jié)果表明，濕巾液A1、濕巾液A2、濕巾液A3、濕巾液B1、濕巾液B2、濕巾液B3、濕巾液C1、濕巾液C2、濕巾液C3、濕巾液D1、濕巾液D2、濕巾液D3、濕巾液E1、濕巾液E2、濕巾液E3、濕巾液F1、濕巾液F2、濕巾液F3、濕巾液G1、濕巾液G2和濕巾液G3均對待測菌有抑菌效果，抑菌效果依次為：(濕巾液A1、濕巾液A2或濕巾液A3)>(濕巾液B1、濕巾液B2、濕巾液B3、濕巾液C1、濕巾液C2或濕巾液C3)>(濕巾液D1、濕巾液D2、濕巾液D3、濕巾液E1、濕巾液E2或濕巾液E3)>(濕巾液F1、濕巾液F2、濕巾液F3、濕巾液G1、濕巾液G2或濕巾液G3)。濕巾液K對待測菌無抑菌效果。可見，本發(fā)明提供的濕巾液A1、濕巾液A2、濕巾液A3、濕巾液B1、濕巾液B2、濕巾液B3、濕巾液C1、濕巾液C2、濕巾液C3、濕巾液D1、濕巾液D2、濕巾液D3、濕巾液E1、濕巾液E2、濕巾液E3、濕巾液F1、濕巾液F2、濕巾液F3、濕巾液G1、濕巾液G2和濕巾液G3均具有良好抑菌效果。
按照上述實(shí)施例2的制備方法，將無患子提取物替換為無患子的醇提物，制備相應(yīng)的濕巾液，然后將該濕巾液按照實(shí)施例3的方法進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，該濕巾液的抑菌效果與濕巾液A1、濕巾液A2、濕巾液A3、濕巾液B1、濕巾液B2、濕巾液B3、濕巾液C1、濕巾液C2、濕巾液C3、濕巾液D1、濕巾液D2、濕巾液D3、濕巾液E1、濕巾液E2、濕巾液E3、濕巾液F1、濕巾液F2、濕巾液F3、濕巾液G1、濕巾液G2或濕巾液G3相比，無顯著差異。按照上述實(shí)施例2的制備方法，將無患子提取物替換為無患子的醇提物，制備相應(yīng)的濕巾，然后將該濕巾按照實(shí)施例3的方法進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，該濕巾的抑菌效果與濕巾A1、濕巾A2、濕巾A3、濕巾B1、濕巾B2、濕巾B3、濕巾C1、濕巾C2、濕巾C3、濕巾D1、濕巾D2、濕巾D3、濕巾E1、濕巾E2、濕巾E3、濕巾F1、濕巾F2、濕巾F3、濕巾G1、濕巾G2或濕巾G3相比，無顯著差異。獲得無患子的醇提物的步驟具體可如下：
(1)將市售的無患子(Sap indusmukorossi Gaerth.)的果皮進(jìn)行粉碎(篩網(wǎng)目數(shù)：10目)，得到粒度小于1.0cm的原料。
(2)完成步驟(1)后，取原料，加入(8±0.1)質(zhì)量倍量78-82％(體積百分比)的乙醇水溶液進(jìn)行回流提取，提取分別進(jìn)行三次，每次提取時間為2h±10min，分別得到回流液1、回流液2和回流液3。
(3)完成步驟(2)后，取回流液1、回流液2或回流液3，過濾，收集上清液進(jìn)行濃縮(目的為回收乙醇)，然后將濃縮液進(jìn)行合并，得到溶液1。
(4)完成步驟(3)后，取溶液1，按體積比為1:3加入水，進(jìn)行水沉(攪拌時間5h，水沉?xí)r間6h；雜質(zhì)形成沉淀通過后續(xù)的過濾去除)，然后進(jìn)行過濾，收集上清液進(jìn)行濃縮，得到溶液2。
(5)完成步驟(4)后，取溶液2，按體積比為1:2加入水，進(jìn)行醇沉(攪拌時間5min，醇沉?xí)r間2-4h；雜質(zhì)形成沉淀通過后續(xù)的過濾去除)，然后進(jìn)行過濾，收集上清液進(jìn)行脫色，得到溶液3。
(6)完成步驟(5)后，取溶液3，先進(jìn)行濃縮(目的為回收乙醇)和干燥(在75℃條件下干燥至恒重)，然后粉碎(篩網(wǎng)目數(shù)：100目)，最后混合均勻，獲得無患子的醇提物。
實(shí)施例1分離純化得到的菌株N1已于2016年08月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號)，保藏編號為CGMCC No.12881。菌株N1的全稱為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)Rs0228CGMCC No.12881。