本發(fā)明涉及一種灰樹花提取物、制備方法及其應用，屬于保健品和中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
痛風病嚴重困擾人類生活，新西蘭、美國和中國的流行病學研究表明痛風病癥變得越來越普遍，發(fā)病率約為2％，并不斷升高。其中65歲及以上人群發(fā)生率最高，男性的發(fā)病率比女性發(fā)病率兩倍還高。痛風病是高尿酸血癥發(fā)展的結(jié)果，是由于體內(nèi)尿酸濃度高于血液溶解能力(>360μmol/L)，導致尿酸鈉晶體在軟組織、關(guān)節(jié)沉積，這些沉積結(jié)晶引起軟組織、關(guān)節(jié)和骨組織反復發(fā)炎性劇烈疼痛，嚴重降低患者生活質(zhì)量。
痛風病分為急性和慢性兩種。目前市場上針對急性痛風病治療藥物包括非甾體抗炎藥、秋水仙素、促腎上腺皮質(zhì)激素或類固醇，這些藥物主要是作用于炎癥因子，降低患者痛苦。對于慢性痛風病，管理血液尿酸水平是關(guān)鍵。目前，用來降低人體內(nèi)尿酸濃度的藥物主要有：別嘌呤醇、促尿酸排泄藥物以及利尿藥物，包括苯溴馬隆、尿酸酶、PEG改性的尿酸酶等，這些藥物因為對肝和腎代謝器官有較強副作用使得患有肝病和腎病的患者不能使用，同時這些藥物容易引發(fā)胃腸道和心血管病。這使得患有高血壓、充血性心力衰竭、胃炎/潰瘍或者腎功能不全的痛風患者服用上述藥物通常具有較高危險性。中藥療效好、副作用低，其優(yōu)勢逐漸顯現(xiàn)，因而在臨床上廣泛使用。因此，尋找具有降尿酸作用的中藥具有重要意義。
在我國民間，灰樹花有著悠久的采食歷史。公元二世紀的《太上靈寶芝草品》中配圖并記載灰樹花為：白玉芝，稱：“白玉芝生于方丈山中，其味辛，白蓋四重，下一重上有二枚生，并有3枚生上重，或生大石之上，黃沙之中，腐木之根，高樹之下，名山之陰，得而食之，仙矣。白虎守之?！蔽覈未年惾视裨凇毒V》也有記述灰樹花為食用菌，“味甘、平、無毒，可治痔瘡”。
灰樹花隸屬于擔子菌亞門，層菌綱，無革擔子菌亞綱，非褶菌目，多孔菌科，樹花屬。性甘、味平，具有益氣健脾，補虛扶正的功效，主治脾虛氣弱、體倦乏力、神疲懶言、飲食減少、腫瘤患者放療或化療后有上述癥狀者，但是目前尚無灰樹花針對治療高尿酸血癥、痛風病癥的相關(guān)報道。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的在于提供一種灰樹花提取物及其制備方法和應用，其中，制備方法使用資源豐富、價格便宜、環(huán)境友好的乙醇、水或者乙醇和水混合物作為溶劑，達到降低生產(chǎn)成本、避免有機溶劑污染的目的。具體包括以下步驟：
(1)將干燥的灰樹花子實體粉碎；
(2)將粉碎后的灰樹花子實體置于5-25倍重量的乙醇、水或者乙醇和水混合溶劑中，在40-100℃下提取2-6小時，用400目濾網(wǎng)過濾，分別收集濾液和濾渣；
(3)用與步驟(2)相同的條件重復提取所得濾渣中的營養(yǎng)物質(zhì)。
(4)將步驟(2)和(3)所得的濾液合并后減壓蒸餾濃縮至25-35mL；
(5)將步驟(4)所得的濃縮液凍干得到灰樹花提取物。
優(yōu)選的，上述步驟(2)中的提取過程為超聲提取，溫度最好為60℃，時間為3小時。
按照上述方法制得的灰樹花提取物，含有粗蛋白、粗脂肪、多糖、甘露醇、海藻糖、蘋果酸、麥角甾醇、肽類、甾醇類、核苷類、氨基酸、有機酸、維生素及無機元素，其中，麥角甾醇含量為0.17-0.29％，多糖含量為8-35％，蛋白含量為17-35％。
利用方法制得的灰樹花提取物進行小鼠體內(nèi)降尿酸試驗，結(jié)果表明用灰樹花提取物連續(xù)灌胃7天，可將高尿酸小鼠的血液尿酸濃度降低到低于正常小鼠尿酸水平。
因此，本發(fā)明的另一目的是提供一種灰樹花提取物在制備降低血液尿酸水平、改善高尿酸血癥、改善痛風病癥的藥物、保健品或輔助藥劑中的應用。
本發(fā)明的另一目的是提供一種治療痛風病的藥物，其特征在于，該藥物中含有灰樹花提取物。
本發(fā)明的有益效果在于：
1、本發(fā)明所述灰樹花提取物的制備工藝簡單，成本低；
2、本發(fā)明采用乙醇、水或者乙醇和水的混合溶劑作為溶劑提取灰樹花，不存在有機溶劑污染或殘留的問題，安全環(huán)保；
3、本發(fā)明灰樹花提取物具有顯著的降尿酸作用，能夠用于制備緩解痛風病癥的藥物，為改善目前痛風病藥物副作用大的現(xiàn)象提供了新的方向。
【附圖說明】
圖1：各組小鼠血清中尿酸濃度
【具體實施方式】
以下結(jié)合實施例來進一步解釋本發(fā)明，但實施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。
實施例1
(1)、灰樹花乙醇提取物的制備
取灰樹花子實體100g，使用粉碎機粉碎后加入錐形瓶中，并加入1L乙醇，將混合物在60℃下水浴提取3小時后使用400目濾網(wǎng)過濾。提取實驗重復一次，將所得濾液合并后減壓蒸餾濃縮至25mL，凍干得到灰樹花乙醇提取物5.22g，產(chǎn)率為5.22％。
(2)、灰樹花提取物中各組分含量測定
多糖測定：采用硫酸-苯酚法測得上述灰樹花乙醇提取物中多糖含量為8％。
蛋白測定：使用考馬斯亮藍染色法(Bradford法)測得上述灰樹花乙醇提取物中蛋白含量為17％。
麥角甾醇測定：采用HPLC法測定麥角甾醇含量，其中，甲醇為流動相，流速為1.3mL/min，檢測波長為282nm，柱溫為29℃，測得上述灰樹花乙醇提取物中麥角甾醇含量為0.29％。
實施例2
(1)、灰樹花水提取物的制備
取灰樹花子實體100g，使用粉碎機粉碎后加入錐形瓶中，并加入1.5L乙醇，將混合物在95℃下水浴提取4小時后使用400目濾網(wǎng)過濾。提取實驗重復一次，將所得濾液合并后減壓蒸餾濃縮至300mL，凍干得到灰樹花乙醇提取物5.60g，產(chǎn)率為5.60％。
(2)、灰樹花提取物中各組分含量測定
多糖測定：采用硫酸-苯酚法測得上述灰樹花水提取物中多糖含量為27％。
蛋白測定：使用考馬斯亮藍染色法(Bradford法)測得上述灰樹花水提取物中蛋白含量為31％。
麥角甾醇測定：采用HPLC法測定麥角甾醇含量，其中，甲醇為流動相，流速為1.3mL/min，檢測波長為282nm，柱溫為29℃，測得上述灰樹花乙醇提取物中麥角甾醇含量為0.17％。
實施例3
取灰樹花子實體100g，使用粉碎機粉碎后加入錐形瓶中，并加入500mL蒸餾水，將混合物在100℃下煎煮提取2小時后使用400目濾網(wǎng)過濾。提取實驗重復一次，將所得濾液合并后減壓蒸餾濃縮至35mL，凍干得到灰樹花水提取物9.5g，產(chǎn)率為9.5％。
經(jīng)檢測，本實施例得到的灰樹花提取物中，多糖含量為21％、蛋白質(zhì)含量為23％、麥角甾醇含量為0.18％，其檢測方法同實施例1。
實施例4
取灰樹花子實體100g，使用粉碎機粉碎后加入錐形瓶中，并加入2.5L蒸餾水，將混合物在60℃下超聲提取6小時后使用400目濾網(wǎng)過濾。提取實驗重復一次，將所得濾液合并后減壓蒸餾濃縮至25mL，凍干得到灰樹花水提取物10.5g，產(chǎn)率為10.5％。
經(jīng)檢測，本實施例得到的灰樹花提取物中，多糖含量為35％、蛋白質(zhì)含量為35％、麥角甾醇含量為0.26％，其檢測方法同實施例1。
實施例5
取灰樹花子實體100g，使用粉碎機粉碎后加入錐形瓶中，并加入2.0L蒸餾水，將混合物在90℃下水浴提取5小時后使用400目濾網(wǎng)過濾。提取實驗重復一次，將所得濾液合并后減壓蒸餾濃縮至30mL，凍干得到灰樹花水提取物8.7g，產(chǎn)率為8.7％。
經(jīng)檢測，本實施例得到的灰樹花提取物中，多糖含量為27％、蛋白質(zhì)含量為24％、麥角甾醇含量為0.20％，其檢測方法同實施例1。
四、灰樹花提取物降尿酸實驗
取50只雄性SPF昆明小鼠(20±2g)，隨機分為5組：正常對照組、高尿酸血癥模型對照組、陽性對照組、實驗組1、實驗組2。除正常對照組腹腔注射和灌胃純水外，其他組按照100mg/kg/d的劑量腹腔注射氧嗪酸鉀鹽，同時灌胃600mg/kg/d劑量的次黃嘌呤造模。造模前一個小時禁食不禁水，造模后1小時，陽性對照組灌胃5mg/kg/d劑量的別嘌呤醇(AL)，實驗組1灌胃100mg/kg/d劑量的實施例1制得的灰樹花乙醇提取物，實驗組2灌胃100mg/kg/d劑量的實施例4制得的灰樹花水提取物，正常對照組和高尿酸血癥模型對照組則灌胃相同體積的純水，連續(xù)7天。第7天灌胃給藥1小時后，麻醉摘眼球取血，使用離心機在3500r/min速度下離心10min分離得到血清，檢測血清中尿酸濃度。
結(jié)果如圖1所示(*和**表示與正常對照組相比，差異顯著分別為P<0.05和P<0.01；#和##表示與模型對照組相比，差異顯著分別為P<0.05和P<0.01；Δ和ΔΔ表示與陽性對照組相比，差異顯著分別為P<0.05和P<0.01)。
由圖1可知，與正常對照組相比，模型對照組血清尿酸水平達到386.8μmol/L，高于正常對照組326.1μmol/L，差異顯著性為P<0.05，這表明高尿酸血癥小鼠模型造模成功。與模型組相比，陽性對照藥別嘌呤醇成功地使高尿酸小鼠血清尿酸水平從386.8μmol/L降到230.6μmol/L，差異顯著性為P<0.01，這進一步說明高尿酸血癥小鼠模型造模成功。實施例1制得的灰樹花乙醇提取物使高尿酸小鼠血清尿酸水平從386.8μmol/L降為206.3μmol/L，這與模型對照組相比差異顯著性為P<0.01，成功地降低了高尿酸小鼠的血清尿酸水平。實施例4制得的灰樹花水提取物使高尿酸小鼠血清尿酸水平從386.8μmol/L降為152.5μmol/L，這與模型對照組相比差異顯著性為P<0.01，成功地降低了高尿酸小鼠的血清尿酸水平。
上述結(jié)果說明，本發(fā)明灰樹花提取物具有良好的降尿酸效果，其降尿酸效果可以使高尿酸模型組血液尿酸濃度降至低于正常小鼠尿酸水平。另外，灰樹花作為藥食同源的真菌，對人身體無損傷，它的提取物可以用于制備降尿酸、改善痛風的藥物、保健品或輔助藥劑中。