本發(fā)明涉及創(chuàng)新藥物匹諾塞林(Pinocembrin)的新藥理作用，以及匹諾塞林在制備預(yù)防、緩解和/或治療肺動(dòng)脈高壓及其并發(fā)癥產(chǎn)品中的用途，屬創(chuàng)新藥物技術(shù)領(lǐng)域。

技術(shù)背景

原發(fā)性肺動(dòng)脈高壓是一種較少見但卻非常嚴(yán)重的疾病。其發(fā)病人群年齡偏低，約75％患者集中于20-40歲年齡段，且有約15％患者年齡在20歲以下。目前針對(duì)肺動(dòng)脈高壓的發(fā)病原因仍沒有明確的結(jié)論，肺部小動(dòng)脈原發(fā)性增生病變導(dǎo)致血管閉塞可能是其發(fā)病的主要原因。

當(dāng)肺動(dòng)脈高壓發(fā)生時(shí)，病人表現(xiàn)出呼吸困難、心悸、胸痛、咳血、暈厥等癥狀，晚期會(huì)出現(xiàn)缺氧、右心肥大甚至右心衰竭癥狀，嚴(yán)重時(shí)會(huì)發(fā)生死亡。目前針對(duì)這一疾病的治療手段和藥物仍舊十分欠缺，預(yù)后情況很差，僅20％患者能夠得到較為有效的控制，多數(shù)病人在疾病確診后2-3年內(nèi)就可能死亡。目前臨床上治療肺動(dòng)脈高壓的一線藥物是波生坦，但其治療效果不盡人意。開發(fā)新的能夠有效治療肺動(dòng)脈高壓的藥物是一項(xiàng)十分重要和迫切的工作。

在本實(shí)驗(yàn)室前期工作中通過高通量篩選發(fā)現(xiàn)一種作用機(jī)制新穎的新型腦卒中治療藥物，通過結(jié)構(gòu)比較發(fā)現(xiàn)其是從傳統(tǒng)藥物蜂膠中分離得到的一種天然黃烷酮類化合物，名為匹諾塞林(經(jīng)中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì)正式命名為匹諾塞林，曾別稱生松素，喬松素)。匹諾塞林是蜂膠中含量最高的黃酮類化合物，自80年代起，國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)其抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎等方面藥理活性。篩選中心在整合靶點(diǎn)理論指導(dǎo)下，以網(wǎng)點(diǎn)式高通量藥物篩選新模式，發(fā)現(xiàn)了匹諾塞林防治腦缺血性疾病的新用途，并證明匹諾塞林對(duì)多種腦卒中動(dòng)物模型有顯著而突出的抗腦缺血作用，獲得了知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)，作為1.1類化學(xué)新藥進(jìn)入臨床研究。

目前針對(duì)匹諾塞林的研究主要集中在神經(jīng)保護(hù)方面。通過查閱文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)至今沒有文獻(xiàn)報(bào)道這一化合物在肺動(dòng)脈高壓治療方面的作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的可以通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)。采用一次性皮下注射野百合堿建立大鼠肺動(dòng)脈高壓模型，在模型建立一周后開始給藥，連續(xù)給予18天匹諾塞林。通過在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)觀察動(dòng)物死亡情況、心電圖變化、主動(dòng)脈壓力及肺動(dòng)脈壓力變化、各臟器指數(shù)變化、測(cè)定動(dòng)物血清酶、組織損傷情況及組織形態(tài)學(xué)變化，判定匹諾塞林對(duì)大鼠肺動(dòng)脈高壓的預(yù)防、緩解和治療作用。

本發(fā)明的特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)在于，本發(fā)明研發(fā)的藥物匹諾塞林作為具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的化學(xué)藥，該化合物具有物質(zhì)來源可靠、生產(chǎn)成本較低、作用機(jī)制新穎、市場(chǎng)前景好等特點(diǎn)，而且前期研究工作基礎(chǔ)扎實(shí)、藥物療效確切，降低了后續(xù)開發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。另外，匹諾塞林作為來源于天然產(chǎn)物具有廣泛活性的單體化合物，具有舒張肺動(dòng)脈血管、降低肺動(dòng)脈壓力、保護(hù)肺動(dòng)脈高壓所致的肺血管損傷、恢復(fù)肺組織功能、修復(fù)心臟和肝臟等器官損傷、顯著降低肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物的死亡率、預(yù)防和治療肺動(dòng)脈高壓疾病的藥理作用；具有減輕組織器官水腫，減少組織器官損傷，改善組織器官功能，防治右心室肥厚的作用，可應(yīng)用于制備預(yù)防、緩解和/或治療肺動(dòng)脈高壓及其導(dǎo)致的慢性阻塞性肺氣腫、慢性肺源性心臟病、右心衰竭、肝功能損傷等并發(fā)癥的產(chǎn)品。

本發(fā)明的另一方面，涉及一種用于預(yù)防和/或治療肺動(dòng)脈高壓及其并發(fā)癥的藥物組合物，其含有預(yù)防、緩解和/或治療有效量的匹諾塞林，以及任選的藥學(xué)可接受的載體和/或輔料。

在本發(fā)明中，根據(jù)施用途徑，所述匹諾塞林藥物組合物可呈選自如下劑型：溶液、混懸液、凍干粉針、乳劑、丸劑、膠囊、粉末、控制釋放或持續(xù)釋放制劑。

本發(fā)明的匹諾塞林藥物組合物可以用已知的方法配制，使用幾種途徑對(duì)受試者施用，包括但不限于腸胃外、經(jīng)口、局部、皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、靜脈、鼻內(nèi)途徑。

本發(fā)明中匹諾塞林可通過已知方法制備得到。

本發(fā)明的匹諾塞林藥物組合物任選的可以通過任何常規(guī)方法用一種或多種藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑來配制。因此，匹諾塞林和它藥學(xué)可接受的衍生物可特別配制為例如吸入或吹入(通過口或鼻)或經(jīng)口、含化、腸胃外或直腸給藥。

匹諾塞林的藥物組合物也可以采用溶液、混懸液、乳劑、丸劑、膠囊、粉末、控制釋放或持續(xù)釋放制劑。這些制劑將含有治療有效量的匹諾塞林，優(yōu)選為純化形式，以及適量的載體，以提供對(duì)患者適當(dāng)給藥的形式。

在本發(fā)明中，所述純化形式的匹諾塞林是指基本上純的匹諾塞林，尤其是純度大于80％，優(yōu)選的大于85％，特別優(yōu)選的大于90％，甚至更優(yōu)選的大于95％的匹諾塞林。所述純化形式的匹諾塞林純度范圍可以是例如80-98％。

所述的產(chǎn)品包括藥品、食品、保健品。

附圖說明

圖1.匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠體重的影響。

圖2.匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠心電圖的改善作用。A-正常，B-模型，C-波生坦，D-法舒地爾，E-匹諾塞林(30mg/kg)。

圖3.匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠主動(dòng)脈壓力的影響。A-主動(dòng)脈收縮壓，B-主動(dòng)脈舒張壓，C-大鼠心率。

圖4.匹諾塞林降低肺動(dòng)脈高壓大鼠右心室收縮壓。圖5、匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠臟器指數(shù)的影響。A-肺臟，B-心臟，C-肝臟。

圖5.匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠臟器指數(shù)的影響。A-肺臟，B-心臟，C-肝臟。

圖6.匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠右心室肥厚的抑制作用。

圖7.匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠血清中各種酶活性的抑制作用。A-天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)，B-乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)，C-谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase，ALT)。

圖8.匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠血清中NT-proBNP含量的抑制作用。

圖9.匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺組織中ET-1含量的抑制作用。

圖10.組織病理切片(HE染色)觀察匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠右心室保護(hù)作用。A-正常，B-模型，C-波生坦，D-法舒地爾，E-匹諾塞林(30mg/kg)。

圖11.組織病理切片(Masson染色)觀察匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺部組織、肺部血管保護(hù)作用。A-正常，B-模型，C-波生坦，D-法舒地爾，E-匹諾塞林(30mg/kg)。

圖12.組織病理切片(HE染色)觀察匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈主干血管壁增厚的治療作用。A-正常，B-模型，C-波生坦，D-法舒地爾，E-匹諾塞林(30mg/kg)。

圖13.匹諾塞林體外舒張肺動(dòng)脈血管的作用。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合本發(fā)明進(jìn)一步說明匹諾塞林在體內(nèi)對(duì)預(yù)防、緩解和/或治療抗肺動(dòng)脈高壓及其并發(fā)癥的藥理作用與藥物用途。

下述實(shí)施例更詳細(xì)地舉例說明本發(fā)明，并不是對(duì)本發(fā)明的任何限制。

實(shí)施例1：大鼠肺動(dòng)脈高壓模型的建立。

野百合堿是從野百合種子中提取的一種吡咯烷生物堿，它在大鼠體內(nèi)被肝臟的混合功能氧化酶轉(zhuǎn)化為野百合吡咯，野百合吡咯損傷肺血管內(nèi)皮細(xì)胞，從而引起肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行性增殖，導(dǎo)致肺動(dòng)脈壓進(jìn)行性增高，造成大鼠肺動(dòng)脈高壓模型。在模型建立一周后開始給藥，連續(xù)給予18天匹諾塞林。本實(shí)施例通過觀察大鼠心電圖，測(cè)定大鼠主動(dòng)脈壓力及肺動(dòng)脈壓力(右心室壓力)，測(cè)定實(shí)驗(yàn)大鼠各臟器指數(shù)、右心室增厚程度、血清酶及肺動(dòng)脈高壓標(biāo)志物、組織炎癥因子以及組織形態(tài)學(xué)變化，判定匹諾塞林對(duì)大鼠肺動(dòng)脈高壓的保護(hù)作用及在制備預(yù)防和治療肺動(dòng)脈高壓及其并發(fā)癥產(chǎn)品中的用途。

實(shí)施例動(dòng)物選用SD大鼠75只，體重170-190g，隨機(jī)分成5組，每組15只：正常對(duì)照組、肺動(dòng)脈高壓模型對(duì)照組、陽性藥波生坦(30mg/kg，灌胃給藥)組、陽性藥法舒地爾(10mg/kg，腹腔注射給藥)組、匹諾塞林(30mg/kg，腹腔注射給藥)組。在實(shí)驗(yàn)開始除正常組給予等劑量生理鹽水，其它動(dòng)物一次性皮下注射給予50mg/kg野百合堿制備大鼠肺動(dòng)脈高壓模型。造模后第7天開始給藥，連續(xù)給予18天，每天一次，且每天監(jiān)測(cè)大鼠體重變化，繪制體重曲線(附圖1)，在第18天統(tǒng)計(jì)各組大鼠的死亡情況(附表1)。

表1.匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠生存率的影響。

末次給藥后各組大鼠均禁食過夜，于第二天戊巴比妥鈉50mg/kg麻醉，前后肢皮下插入針狀電極記錄II導(dǎo)聯(lián)心電圖，觀察S波加深及R波倒置情況。通過左頸動(dòng)脈插管和右頸靜脈插管分別測(cè)量大鼠主動(dòng)脈壓力和肺動(dòng)脈壓力(右心室壓力)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，腹主動(dòng)脈取血用于各指標(biāo)檢測(cè)，取心、肺、肝稱重，計(jì)算臟器指數(shù)。部分心臟、肺、肺動(dòng)脈用于病理檢測(cè)。

實(shí)施例2：匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠心電圖的改善作用。

上述各組大鼠于末次給藥后均禁食過夜，于第二天戊巴比妥鈉50mg/kg麻醉，前后肢皮下插入針狀電極，記錄大鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖，觀察心電圖S波加深情況和R波倒置情況。結(jié)果顯示(附圖2)，正常大鼠心電圖呈正常狀態(tài)，注射野百合堿造模后引起大鼠心電圖電軸右偏致R波倒置及S波加深，出現(xiàn)右心功能不全改變。波生坦、法舒地爾兩個(gè)陽性藥物，能夠明顯改善野百合堿引起的大鼠心電圖變化，匹諾塞林能夠在一定程度上改善野百合堿引起的大鼠心電變化，改善右心衰竭癥狀，說明匹諾塞林對(duì)野百合堿所致肺動(dòng)脈高壓引起的右心功能損傷具有良好的改善作用。

實(shí)施例3：匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠主動(dòng)脈壓力及心率的影響

沿正中線剪開大鼠頸部皮膚，鈍性分離頸部肌肉，在氣管斜下方仔細(xì)分離出左頸總動(dòng)脈。結(jié)扎遠(yuǎn)心端，近心端用止血鉗暫時(shí)止血，做一v形切口，將預(yù)先充滿肝素生理鹽水的PE導(dǎo)管插入頸動(dòng)脈中，并用縫合線固定，此時(shí)松開止血鉗，使血流暢通，觀察頸動(dòng)脈壓力，即主動(dòng)脈收縮壓、舒張壓及心率。結(jié)果顯示(附圖3)，由于肺動(dòng)脈高壓導(dǎo)致心功能不全，因此導(dǎo)致主動(dòng)脈壓力代償性升高。給予陽性藥波生坦，對(duì)這一現(xiàn)象改善較少；另一陽性藥法舒地爾能夠明顯降低主動(dòng)脈壓力的升高。給予匹諾塞林同樣降低肺動(dòng)脈高壓所導(dǎo)致的主動(dòng)脈壓力增高，但以上三種藥物對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠的心率變化影響并不明顯。

實(shí)施例4：匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈壓力(右心室內(nèi)壓)的降低作用。

由于大鼠肺動(dòng)脈壓與右心室收縮壓基本一致，且肺動(dòng)脈壓較難測(cè)量，因此本實(shí)施例用右心室內(nèi)壓代替肺動(dòng)脈壓來進(jìn)行藥效評(píng)價(jià)。首先沿大鼠右肩剪開皮膚，暴露右頸靜脈。然后鈍性分離，仔細(xì)分離出右頸靜脈，結(jié)扎遠(yuǎn)心端后做v形切口，將預(yù)先充滿肝素生理鹽水的彎頭PE導(dǎo)管插入靜脈中，用縫合線將導(dǎo)管與血管稍作固定以減少出血。將導(dǎo)管緩慢推進(jìn)，沿上腔靜脈插入至右心室中，注意避免插入腋靜脈、右心房及下腔靜脈中。調(diào)整導(dǎo)管頭部角度，當(dāng)出現(xiàn)穩(wěn)定的右心室壓力波形后觀察并記錄右心室壓力。結(jié)果顯示(附圖4)，野百合堿造模后大鼠右心室壓力顯著升高，陽性藥波生坦和法舒地爾可以顯著降低肺動(dòng)脈高壓大鼠的右心室壓力，匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠右心室壓力的降低作用也十分顯著。

實(shí)施例5：匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠臟器指數(shù)的改善作用。

壓力檢測(cè)完畢后，開大鼠腹腔胸腔，分離并剪下肺、心、肝，用生理鹽水洗凈余血后，濾紙將多余液體吸干，稱量各臟器重量，與體重相比計(jì)算臟器指數(shù)。結(jié)果顯示(附圖5)，野百合堿造成大鼠肺動(dòng)脈高壓模型后，大鼠的肺臟、心臟及肝臟重量明顯增加，臟器指數(shù)升高。陽性藥物波生坦對(duì)于心臟和肺臟的水腫具有較好的改善作用，而對(duì)于肝臟水腫沒有明顯作用；另一陽性藥法舒地爾對(duì)心臟和肝臟臟器指數(shù)增高具有一定的治療作用，而對(duì)肺臟的作用并不明顯；匹諾塞林對(duì)肺臟、心臟及肝臟的臟器指數(shù)增高均具有很好的治療作用。

實(shí)施例6：匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠右心室肥厚的改善作用。

測(cè)量心臟重量后，沿心耳下緣將整個(gè)心房部分剪下，留下心室。沿室間隔邊緣將右心室壁剪下，稱量右心室壁重量，計(jì)算右心室壁與整個(gè)左心室及室間隔的重量比值，以此評(píng)價(jià)右心室肥厚程度。結(jié)果顯示(附圖6)，陽性藥波生坦能夠明顯改善肺動(dòng)脈高壓所致的右心室肥厚，法舒地爾有一定的改善作用，匹諾塞林降低肺動(dòng)脈高壓大鼠右心室壁肥厚、改善心功能的作用十分明顯。

實(shí)施例7：匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠血清中ALT、AST及LDH含量的改善作用。

大鼠壓力檢測(cè)后，開腹腔進(jìn)行腹主動(dòng)脈取血，室溫凝聚，離心分離血清，利用東芝全自動(dòng)生化儀測(cè)定血清中所含表征心肌損傷情況的天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)，以及表征肝臟損傷情況的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase，ALT)。結(jié)果顯示(附圖7)，肺動(dòng)脈高壓模型組的大鼠血清的心肌損傷標(biāo)志酶AST和LDH以及肝臟損傷標(biāo)志酶ALT顯著升高(P<0.05)。血清中AST、LDH或ALT活性間接反映了心肌或肝臟的損傷程度，當(dāng)心肌細(xì)胞或肝臟細(xì)胞受損時(shí)，細(xì)胞膜通透性增加，細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外漏而致血中AST、LDH、ALT升高。給予匹諾塞林可以明顯減少心肌損傷及肝臟損傷標(biāo)志酶的漏出，降低其在血清中的含量，表明匹諾塞林對(duì)于肺動(dòng)脈高壓所引起的心肌損傷和肝臟損傷具有保護(hù)作用，改善心功能和肝功能。

實(shí)施例8：匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠血清中NT-proBNP含量的改善作用。

同實(shí)施例7獲得血清，利用ELISA的方法檢測(cè)血清中NT-proBNP的含量。B型腦鈉肽前體(proBNP)是心臟為彌補(bǔ)收縮無力而增大時(shí)，心壁被拉伸時(shí)由心臟釋放到血液中的化學(xué)物質(zhì)。也就是說proBNP的釋放水平與心肌負(fù)擔(dān)水平有直接相關(guān)性，在肺動(dòng)脈高壓中，由于右心室負(fù)擔(dān)加重，室壁肥厚，患者血液中的proBNP含量相應(yīng)增加。當(dāng)proBNP從心臟釋放到血液中，proBNP就會(huì)分割成為NT-proBNP和BNP。目前普遍認(rèn)為，NT-proBNP更加穩(wěn)定，易于追蹤，使用簡(jiǎn)便高效，因此其已成為更靈敏、更廣泛使用的表征肺動(dòng)脈高壓的指標(biāo)。

本實(shí)施例利用酶聯(lián)免疫吸附法來檢測(cè)肺動(dòng)脈高壓大鼠血清中NT-proBNP的含量，具體步驟為：往包被抗NT-proBNP抗體的微孔板中依次加入樣品血清或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗NT-proBNP抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色；TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下最終轉(zhuǎn)化成黃色，顏色的深淺和樣品中的NT-proBNP呈正相關(guān)；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，計(jì)算血清中該物質(zhì)濃度。結(jié)果顯示(附圖8)，肺動(dòng)脈高壓模型動(dòng)物血清中NT-proBNP含量明顯增高，給予匹諾塞林可以在一定程度上減少proBNP的釋放，證明匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓具有防治作用。

實(shí)施例9：匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺組織中ET-1含量的改善作用。

給予大鼠野百合堿會(huì)導(dǎo)致肺動(dòng)脈內(nèi)皮受損，此時(shí)受損的內(nèi)皮大量釋放內(nèi)皮素1(Endothelium，ET-1)。隨著肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生發(fā)展，肺組織中聚集大量ET-1，使肺部血管進(jìn)一步收縮，導(dǎo)致疾病加重。因此ET-1成為判斷肺動(dòng)脈高壓疾病嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)。取肺動(dòng)脈高壓大鼠新鮮肺組織，按0.1g組織加入1mL PBS，對(duì)其進(jìn)行勻漿，通過反復(fù)凍融2次達(dá)到使組織細(xì)胞破裂的目的。14000g低溫離心20分鐘，取上清，得到肺組織勻漿液，對(duì)其中ET-1含量用ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)。

具體步驟為：往包被抗ET-1抗體的微孔板中依次加入肺組織勻漿樣品或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗ET-1抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色；TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下最終轉(zhuǎn)化成黃色，顏色的深淺和樣品中的ET-1呈正相關(guān)；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，計(jì)算組織中該物質(zhì)濃度。結(jié)果顯示(附圖9)，肺動(dòng)脈高壓模型大鼠肺組織中ET-1含量顯著升高，給予匹諾塞林可以顯著降低肺部ET-1含量，證明匹諾塞林可以有效防治肺動(dòng)脈高壓。

實(shí)施例10：病理組織學(xué)觀察匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠心臟、肺臟及肺動(dòng)脈的保護(hù)作用。

取心臟中下1/3處的部分心肌，用4％的多聚甲醛固定，石蠟包埋后連續(xù)切片，HE染色，光鏡下觀察右心室壁病理改變，CCD記錄圖像。結(jié)果顯示(附圖10)，肺動(dòng)脈高壓發(fā)生時(shí)，右心室負(fù)荷加重導(dǎo)致右心室壁肥厚，心肌橫切面顯示心肌細(xì)胞排列致密，細(xì)胞肥大。給予匹諾塞林后，改善心肌細(xì)胞肥大現(xiàn)象。

取大鼠肺臟左肺上葉，用生理鹽水將余血沖洗干凈，用4％的多聚甲醛固定，石蠟包埋后連續(xù)切片，Masson染色，光鏡下觀察肺部組織中肺泡及肺血管病理改變，CCD記錄圖像。結(jié)果顯示(附圖11)，肺動(dòng)脈高壓發(fā)生時(shí)，肺泡間隙水腫、間質(zhì)增厚、充血，肺部小血管肌化、血管壁增厚。給予匹諾塞林后，改善肺部損傷情況。

取大鼠肺動(dòng)脈主干，小心將其與心臟、肺臟及氣管分開。用4％的多聚甲醛固定，石蠟包埋后連續(xù)切片，HE染色，光鏡下觀察肺動(dòng)脈主干血管壁增厚情況，CCD記錄圖像。結(jié)果顯示(附圖12)，肺動(dòng)脈高壓發(fā)生時(shí)，由于血管內(nèi)皮脫落，造成肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖，管壁變厚。給予匹諾塞林后，逆轉(zhuǎn)肺動(dòng)脈血管增厚情況。

實(shí)施例11：匹諾塞林體外舒張肺動(dòng)脈血管作用。

取兩個(gè)培養(yǎng)皿，倒入少量配制好的K-H液，通入95％O₂和5％CO₂混合氣預(yù)飽和，并將培養(yǎng)皿置于冰上預(yù)冷。斷頭處死大鼠，迅速取出心肺，置于其中一個(gè)培養(yǎng)皿，輕輕搖動(dòng)，去除血液殘留后置于第二個(gè)培養(yǎng)皿中。小心剪去多余組織后，將心肺同針成三角形固定在帶硅膠的平皿中，完全撐開后暴露肺動(dòng)脈主干及左右分支，將分支血管剪成長(zhǎng)度約為3mm的肺動(dòng)脈環(huán)。

小心用兩個(gè)不銹鋼三角環(huán)插入到血管環(huán)中，將一端固定于浴槽底部，另一端連于張力換能器，浴槽中加入8mL KH液，維持37℃，充入95％O₂和5％CO₂的混合氣體。血管張力由MP100A記錄。調(diào)節(jié)初始張力為0.7g，并不斷調(diào)節(jié)一維位移微調(diào)器，使血管環(huán)張力穩(wěn)定在初始張力附近，穩(wěn)定1h，期間每隔30min換一次K-H液。隨后給予兩次高鉀K-H(60mmol·L^-1KCl)液刺激收縮。升高0.7g以上的血管環(huán)可用。血管活性評(píng)價(jià)后，用普通KH液將其平衡至基礎(chǔ)值，隨后用60mM高鉀KH液預(yù)收縮血管，約20min后達(dá)到平臺(tái)，濃度累積加入匹諾塞林(0.3μM-100μM)，加藥間隔為5min，觀察其對(duì)血管舒張作用。結(jié)果顯示(附圖13)，加入匹諾塞林后，高鉀預(yù)收縮的離體肺動(dòng)脈血管明顯舒張，證明匹諾塞林具有舒張肺動(dòng)脈的作用。

整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與肺動(dòng)脈高壓模型組比較，在肺動(dòng)脈高壓發(fā)病早期給予匹諾塞林(30mg/kg)能夠明顯改善肺動(dòng)脈高壓發(fā)病過程中的體重降低現(xiàn)象，降低肺動(dòng)脈高壓的動(dòng)物死亡率，改善肺動(dòng)脈高壓大鼠的心電圖，證明其能夠減輕肺動(dòng)脈高壓造成的心臟損傷。給予匹諾塞林后，肺動(dòng)脈高壓大鼠的右心室收縮壓明顯降低，即肺動(dòng)脈壓力降低，并且對(duì)代償性的主動(dòng)脈壓力升高具有良好的控制作用。給予匹諾塞林能夠降低肺動(dòng)脈高壓引起的血清AST、LDH和ALT的升高，保護(hù)動(dòng)物心臟和肝臟，使組織損傷降低，肺、心、肝臟器指數(shù)也明顯降低。匹諾塞林對(duì)肺動(dòng)脈高壓所引起的右心室肥厚也有明顯的抑制作用，右心室指數(shù)明顯降低，改善心功能。另外給予大鼠匹諾塞林對(duì)肺組織中的ET-1和血清中的NT-proBNP也起到明顯的降低作用，說明其改善受損心肺功能。

綜上所述，匹諾塞林具有預(yù)防、緩解和/或治療肺動(dòng)脈高壓的作用；顯著降低肺動(dòng)脈高壓的動(dòng)物死亡率；改善心電圖，降低肺動(dòng)脈壓和主動(dòng)壓；減輕臟器水腫，降低心臟和肝臟損傷；改善右心室肥厚癥狀，有效對(duì)抗肺動(dòng)脈高壓造成的右心衰竭。匹諾塞林為天然產(chǎn)物中的單體，且目前已實(shí)現(xiàn)全合成，具有毒性低、合成工藝簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)；具有很好的應(yīng)用與開發(fā)前景，是一種治療肺動(dòng)脈高壓及其并發(fā)癥的理想的新型的小分子化合物，可應(yīng)用于制備預(yù)防、緩解和/或治療肺動(dòng)脈高壓及其導(dǎo)致的慢性阻塞性肺氣腫、慢性肺源性心臟病、心力衰竭、肝功能損傷等并發(fā)癥的產(chǎn)品。