本發(fā)明涉及亞麻酸與抗癌藥物的前藥、前藥制備方法、前藥的低密度脂蛋白組合物、組合物制備方法及其在腫瘤治療中的應(yīng)用，屬于抗癌藥物的制備及應(yīng)用領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

癌癥(cancer)是影響中國居民健康的主要慢性病之一，已成為中國居民的第一死因。并且，隨著人口老齡化等因素的加劇，腫瘤的發(fā)病及死亡率仍然呈上升趨勢。根據(jù)國際癌癥研究署預(yù)測，如不采取有效措施，中國癌癥發(fā)病數(shù)和死亡數(shù)到2020年將上升至400萬人和300萬人，2030年將上升至500萬人和350萬人。

化療是腫瘤治療的最常用方式，但由于化療藥物對腫瘤組織不具有靶向選擇性，會出現(xiàn)明顯的全身毒副作用。因此提高化療藥物的治療效果，減輕化療所引起的毒副作用是當(dāng)今腫瘤研究中亟待解決的問題。

亞麻酸是一種n-3類多不飽和脂肪酸，和體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的代謝有密切關(guān)系，能夠減少心腦血管發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，且具有一定的抗腫瘤活性。

低密度脂蛋白是體內(nèi)膽固醇運(yùn)輸?shù)闹饕d體，腫瘤細(xì)胞由于快速增值需要大量的膽固醇來構(gòu)建細(xì)胞膜，因此多數(shù)腫瘤細(xì)胞表面低密度脂蛋白受體高表達(dá)，藥物的低密度脂蛋白組合物可以實(shí)現(xiàn)對腫瘤的靶向治療。

因此，將亞麻酸與抗癌藥物共價(jià)連接形成共價(jià)前藥，并通過一定的制劑制備手段包載于低密度脂蛋白中形成組合物，有利于提高抗癌藥物治療效果，減輕毒副作用，降低癌癥的治療成本和風(fēng)險(xiǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種亞麻酸與抗癌藥物的前藥及其制備方法，該前藥通過亞麻酸上的羧基與抗癌藥物的羥基、氨基等基團(tuán)在一定的催化條件下反應(yīng)得到，且該前藥能夠降低抗癌藥物的毒副作用。

本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是提供一種前藥的低密度脂蛋白組合物及其制備方法，該組合物可以靶向作用于腫瘤組織，提高腫瘤治療效果，減輕化療藥物的毒副作用。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

本發(fā)明首先公開了一種亞麻酸與抗癌藥物的前藥，該前藥通過亞麻酸上的羧基與抗癌藥物的羥基、氨基等基團(tuán)在一定的催化條件下反應(yīng)得到。亞麻酸包括α-亞麻酸或γ-亞麻酸；抗癌藥物包括：紫杉醇、多西紫杉醇、阿霉素、多柔比星、順鉑、喜樹堿、10-羥基喜樹堿、9-羥基喜樹堿、7-乙基-10-羥基喜樹堿sn-38、拓?fù)涮婵?、伊立替康、長春堿、長春新堿、長春地辛、長春氟寧、長春西汀、吉西他濱、多肽類抗腫瘤藥物(如戈舍瑞林、曲普瑞林)、氨基喹唑啉類抗腫瘤藥物(如吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼)、或腫瘤壞死因子等，優(yōu)選紫杉醇和多西紫杉醇。

本發(fā)明進(jìn)一步公布了亞麻酸與抗癌藥物的前藥的制備方法，該方法的步驟如下：

(1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將抗腫瘤藥物溶解于溶劑中，加入催化劑和脫水劑，攪拌下，再加入亞麻酸，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)；

(2)取上述反應(yīng)所得物料，加入乙醚，過濾除沉淀，濾液依次用5％鹽酸、水及氯化鈉飽和水溶液各洗三遍，收集有機(jī)相，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋蒸干燥，通過硅膠色譜柱分離得到前藥。

其中，上述方法中溶劑是指二氯甲烷、氯仿、n，n-二甲基甲酰胺或二氧六環(huán)中的一種或其混合溶液；催化劑為二甲氨基吡啶；脫水劑是指二環(huán)己基碳二酰亞胺、1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亞胺或二異丙基碳二亞胺中的一種或其混合物，反應(yīng)時(shí)間為2-24小時(shí)?？鼓[瘤藥物：亞麻酸的摩爾比為1：0.1-10；催化劑與亞麻酸的摩爾比為1∶0.1-10，優(yōu)選1:1；脫水劑與亞麻酸摩爾比為1∶0.1-10，優(yōu)選1:2。

優(yōu)選的在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將紫杉醇溶解于一定量二氯甲烷中，加入催化劑二甲氨基吡啶和脫水劑二環(huán)己基碳二酰亞胺，攪拌下，再加入α-亞麻酸，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)。取上述反應(yīng)所得物料，加入乙醚，過濾除去沉淀，濾液依次用5％鹽酸、水和氯化鈉飽和的水溶液各洗三遍，收集有機(jī)相，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋蒸干燥，通過硅膠色譜柱分離得到前藥。

本發(fā)明進(jìn)一步公布了前藥的低密度脂蛋白組合物，該組合物可通過乳化超聲法或高壓乳勻法中的任意一種制備。其中乳化超聲法步驟如下：

(1)稱取適量低密度脂蛋白親脂成分及前體藥物，加入少量有機(jī)溶劑助溶，加熱至50-80℃熔融，作為油相備用。

(2)稱取適量低密度脂蛋白功能多肽和磷脂及輔助的兩親性材料，加入適量注射用生理鹽水，加熱至50-80℃，作為水相備用。

(3)在400-800r/min的磁力攪拌下，將水相趁熱滴加到有機(jī)溶劑揮盡的油相中，滴加完畢后，攪拌5-20min，制備成o/w型初乳。

(4)將制備好的初乳迅速用探頭式超聲波細(xì)胞粉碎儀超聲分散，功率80-300w，時(shí)間3-10min。

(5)冰水浴冷卻5-30min使制劑固化，過0.22μm微孔濾膜得所需組合物。

其中高壓乳勻法步驟如下：

(1)稱取適量低密度脂蛋白親脂成分及前體藥物，加入少量有機(jī)溶劑助溶，加熱至50-80℃熔融，作為油相備用。

(2)稱取適量低密度脂蛋白功能多肽和磷脂及輔助的兩親性材料，加入適量注射用生理鹽水，加熱至50-80℃，作為水相備用。

(3)在400-800r/min的磁力攪拌下，將水相趁熱滴加到有機(jī)溶劑揮盡的油相中，滴加完畢后，攪拌5-20min，制備成o/w型初乳。

(4)將制備好的初乳使用高壓均質(zhì)機(jī)分散。

(5)冰水浴冷卻5-30min使制劑固化，過0.22μm微孔濾膜得所需組合物。

上述制劑制備中兩親性材料選自：天然磷脂、半合成磷脂、合成磷脂、磷脂的聚乙二醇共軛物、聚乙二醇15羥基硬脂酸酯、泊洛沙姆188、聚乙二醇1000維生素e琥珀酸酯或它們的混合物，優(yōu)選天然磷脂和聚乙二醇15羥基硬脂酸酯的混合物；有機(jī)溶劑選自：乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、n，n-二甲基乙酰胺、苯甲基芐酯、油酸乙酯、苯甲醇中的一種或多種的混合物，優(yōu)選乙醇。

其中各組分重量百分比如下：藥物重量百分比為1％-15％，優(yōu)選3％-10％；低密度脂蛋白功能多肽重量百分比為5％-25％，優(yōu)選8％-20％；磷脂重量百分比為8％-24％，優(yōu)選18％-22％；膽固醇成分和甘油三酯等成分的重量百分比為30％-75％，優(yōu)選50％-68％。

上述方法制備的前藥的低密度脂蛋白組合物粒徑在10-100nm，分散性良好，可以直接注射給藥，或凍干后制成凍干制劑，使用時(shí)可用5％葡萄糖溶液、生理鹽水、注射用水或它們的混合物將其分散，恢復(fù)成前藥的低密度脂蛋白組合物后注射給藥，或根據(jù)需要在前藥的低密度脂蛋白組合物中加入醫(yī)藥學(xué)上可接受的輔料，如輔助乳化劑、穩(wěn)定劑、ph值調(diào)節(jié)劑和抗氧劑等，可以按藥劑學(xué)的常規(guī)方法制備成膠囊劑、口服液體制劑或外用制劑等。

上述前藥及前藥的低密度脂蛋白組合物可以應(yīng)用于腫瘤治療中，其中腫瘤選自乳腺癌、肝癌、卵巢癌、肺癌、頭頸癌或腦膠質(zhì)瘤的一種或多種，優(yōu)選腦膠質(zhì)瘤和肝癌。

在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，首先建立了腦膠質(zhì)瘤裸鼠腋下移植瘤模型，通過給予不同的制劑后發(fā)現(xiàn)，與紫杉醇上市制劑泰素相比，亞麻酸與抗癌藥物的前藥有相當(dāng)?shù)目鼓[瘤效果，但重要的是，亞麻酸與抗癌藥物的前藥體內(nèi)毒副作用顯著降低；與泰素相比，前藥的低密度脂蛋白組合物具有更強(qiáng)的腫瘤抑制效果，且體內(nèi)毒副作用大大降低。其中紫杉醇、亞麻酸與抗癌藥物的前藥、前藥的低密度脂蛋白組合物腫瘤抑制效果分別達(dá)到51.2％、50.0％和72.1％。

本發(fā)明所述的亞麻酸與抗癌藥物前藥及前藥的低密度組合物具有以下優(yōu)點(diǎn)：

(1)亞麻酸與抗癌藥物的前藥能夠減小藥物在動(dòng)物體內(nèi)的毒副作用，提高抗癌藥物在納米制劑中的包封率。

(2)前藥及前藥的低密度組合物體內(nèi)具有更好的腫瘤抑制效果，且毒副作用顯著降低。

(3)低密度脂蛋白各種材料生物相容性較好、成本低，且制備工藝簡單，便于工業(yè)化生產(chǎn)。

附圖說明：

圖1為α-亞麻酸與紫杉醇前藥的合成圖；

圖2為α-亞麻酸與紫杉醇前藥的質(zhì)譜圖；

圖3為α-亞麻酸與紫杉醇前藥的核磁共振氫譜圖；

圖4為前藥的低密度脂蛋白組合物用動(dòng)態(tài)光散射法測得的粒徑分布圖；

圖5為前藥的低密度脂蛋白組合物的透射電鏡圖；

圖6為紫杉醇及α-亞麻酸與紫杉醇前藥對荷u87腦膠質(zhì)瘤裸鼠的腫瘤生長曲線圖；

圖7為紫杉醇及α-亞麻酸與紫杉醇前藥對荷u87腦膠質(zhì)瘤裸鼠體重變化曲線圖。

圖8為紫杉醇及前藥的低密度脂蛋白組合物對荷u87腦膠質(zhì)瘤裸鼠的腫瘤生長曲線圖；

圖9為α-亞麻酸與紫杉醇前藥及前藥的低密度脂蛋白組合物對荷u87腦膠質(zhì)瘤裸鼠的腫瘤生長曲線圖；

圖10為前藥乳劑組合物及前藥的低密度脂蛋白組合物對荷u87腦膠質(zhì)瘤裸鼠的腫瘤生長曲線圖；

圖11為紫杉醇及前藥的低密度脂蛋白組合物對荷u87腦膠質(zhì)瘤裸鼠體重變化曲線圖。

圖12為不同制劑對荷u87腦膠質(zhì)瘤裸鼠的離體腫瘤圖片。

圖13為腫瘤切片tunel凋亡檢測圖。

注：附圖中control為生理鹽水對照，為紫杉醇上市制劑泰素，pala為α-亞麻酸與紫杉醇的前藥，pala-me為前藥的乳劑組合物，pala-sldl為前藥的低密度脂蛋白組合物。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會隨著描述而更為清楚。但是應(yīng)理解所述實(shí)施例僅是范例性的，不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改或替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例1α-亞麻酸與紫杉醇前藥的合成

紫杉醇95mg在惰性環(huán)境中加入到有2.5ml二氯甲烷的圓底燒瓶中，再加入二甲氨基吡啶13.6mg，二環(huán)己基碳二酰亞胺46mg，α-亞麻酸31mg，常溫下攪拌反應(yīng)兩小時(shí)；用乙醚稀釋，5％的鹽酸，水，飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)相；有機(jī)相用硫酸銨干燥，旋蒸濃縮，過硅膠色譜柱純化得到產(chǎn)品；分別以質(zhì)譜和核磁共振氫譜對產(chǎn)物進(jìn)行表征。

其中圖1為合成路線圖。質(zhì)譜(圖2)中1136和1152分別為[pala+na⁺]和[pala+k⁺]的分子離子峰；核磁共振氫譜(圖3)中分別為原料紫杉醇(ptx)、α-亞麻酸(ala)和產(chǎn)物α-亞麻酸與紫杉醇前藥(pala)核磁共振氫譜圖；與紫杉醇相比，α-亞麻酸與紫杉醇前藥化學(xué)位移在1ppm出現(xiàn)了α-亞麻酸上甲基相應(yīng)的特征峰，在5.35ppm出現(xiàn)了α-亞麻酸上雙鍵的特征峰，這表明成功合成了較純的α-亞麻酸與紫杉醇前藥。

實(shí)施例2α-亞麻酸與多西紫杉醇前藥的合成

多西紫杉醇90mg在惰性環(huán)境中加入到有2.5ml二氯甲烷的圓底燒瓶中，再加入二甲氨基吡啶13.6mg，二環(huán)己基碳二酰亞胺46mg，α-亞麻酸31mg，常溫下攪拌反應(yīng)兩小時(shí)；用5.0ml的乙醚稀釋，5％的鹽酸，水，飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)相；有機(jī)相用硫酸銨干燥，旋蒸濃縮，過硅膠色譜柱純化得到產(chǎn)品。最終得到α-亞麻酸與多西紫杉醇前藥質(zhì)量為102mg，產(chǎn)率約為85％。

實(shí)施例3α-亞麻酸與阿霉素前藥的合成

阿霉素62mg在惰性環(huán)境中加入到有2.5ml二氯甲烷的圓底燒瓶中，再加入二甲氨基吡啶13.6mg，二環(huán)己基碳二酰亞胺46mg，α-亞麻酸31mg，常溫下攪拌反應(yīng)兩小時(shí)；用5.0ml乙醚稀釋，5％的鹽酸，水，飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)相；有機(jī)相用硫酸銨干燥，旋蒸濃縮，過硅膠色譜柱純化得到產(chǎn)品。最終得到α-亞麻酸與阿霉素前藥質(zhì)量為74mg，產(chǎn)率約為80％。

實(shí)施例4α-亞麻酸與10-羥基喜樹堿前藥的合成

10-羥基喜樹堿40mg在惰性環(huán)境中加入到有2.5ml二氯甲烷的圓底燒瓶中，再加入二甲氨基吡啶13.6mg，二環(huán)己基碳二酰亞胺46mg，α-亞麻酸31mg，常溫下攪拌反應(yīng)兩小時(shí)；用5.0ml乙醚稀釋，5％的鹽酸，水，飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)相；有機(jī)相用硫酸銨干燥，旋蒸濃縮，過硅膠色譜柱純化得到產(chǎn)品。最終得到α-亞麻酸與10-羥基喜樹堿前藥質(zhì)量為59mg，產(chǎn)率約為83％。

實(shí)施例5前藥的乳劑組合物的制備

稱取適量膽固醇油酸酯35mg、三油酸甘油酯25mg、非酯化膽固醇12mg，前藥6mg，加入少量乙醇助溶，加熱至60±2℃熔融，作為油相備用。稱取適量大豆磷脂35mg，聚乙二醇15羥基硬脂酸酯45mg，加注射用生理鹽水5ml，加熱至60±2℃，作為水相備用。在400r/min的磁力攪拌下，將水相趁熱滴加到有機(jī)溶劑揮盡的油相中，滴加完畢后，攪拌5min，制備成o/w型初乳。將制備好的初乳迅速用探頭式超聲波細(xì)胞粉碎儀超聲分散，功率100w，時(shí)間5min，超聲1s間歇1s。冰浴10min使制劑固化，過0.22um微孔濾膜得所需制劑。

通過動(dòng)態(tài)光散射測得前藥的乳劑組合物粒徑為51.80nm，pdi為0.102，通過高效液相色譜測得藥物包封率為92.36％。

實(shí)施例6前藥的乳劑組合物的制備

稱取適量膽固醇油酸酯35mg、三油酸甘油酯25mg、非酯化膽固醇12mg，前藥6mg，加入少量乙醇助溶，加熱至60±2℃熔融，作為油相備用。稱取適量大豆磷脂35mg，聚乙二醇15羥基硬脂酸酯45mg，加注射用生理鹽水5ml，加熱至60±2℃，作為水相備用。在400r/min的磁力攪拌下，將水相趁熱滴加到有機(jī)溶劑揮盡的油相中，滴加完畢后，攪拌5min，制備成o/w型初乳。將制備好的初乳迅速用高壓均質(zhì)機(jī)分散，壓力為200mpa,循環(huán)10次。冰浴10min使制劑固化，過0.22um微孔濾膜得所需制劑。

通過動(dòng)態(tài)光散射測得前藥的乳劑組合物粒徑為45.12nm，pdi為0.100，通過高效液相色譜測得藥物包封率為96.09％。

實(shí)施例7前藥的低密度脂蛋白組合物的制備

稱取適量膽固醇油酸酯35mg、三油酸甘油酯25mg、非酯化膽固醇12mg，前藥6mg，加入少量乙醇助溶，加熱至60±2℃熔融，作為油相備用。稱取適量大豆磷脂35mg，聚乙二醇15羥基硬脂酸酯45mg，功能多肽15mg，加注射用生理鹽水5ml，加熱至60±2℃，作為水相備用。在400r/min的磁力攪拌下，將水相趁熱滴加到有機(jī)溶劑揮盡的油相中，滴加完畢后，攪拌5min，制備成o/w型初乳。將制備好的初乳迅速用探頭式超聲波細(xì)胞粉碎儀超聲分散，功率100w，時(shí)間5min，超聲1s間歇1s。冰浴10min使制劑固化，過0.22um微孔濾膜得所需制劑。

通過動(dòng)態(tài)光散射測得前藥低密度脂蛋白組合物粒徑為66.80nm，pdi為0.163(圖4)，通過高效液相色譜測得藥物包封率為95.39％。而且可通過透射電鏡可以觀察到所制備的組合物為球形(圖5)。

實(shí)施例8前藥的低密度脂蛋白組合物的制備

稱取適量膽固醇油酸酯35mg、三油酸甘油酯30mg、非酯化膽固醇15mg，前藥10mg，加入少量乙醇助溶，加熱至60±2℃熔融，作為油相備用。稱取適量大豆磷脂35mg，聚乙二醇15羥基硬脂酸酯35mg，功能多肽13mg，加注射用生理鹽水5ml，加熱至60±2℃，作為水相備用。在400r/min的磁力攪拌下，將水相趁熱滴加到有機(jī)溶劑揮盡的油相中，滴加完畢后，攪拌5min，制備成o/w型初乳。將制備好的初乳迅速使用高壓均質(zhì)機(jī)分散，壓力為200mpa,循環(huán)10次。冰浴10min使制劑固化，過0.22um微孔濾膜得所需制劑。

通過動(dòng)態(tài)光散射測得前藥低密度脂蛋白組合物粒徑在45.32nm，pdi為0.113，通過高效液相色譜測得藥物包封率為95.18％。

實(shí)施例9紫杉醇及α-亞麻酸與紫杉醇前藥體內(nèi)藥效

建立腋下u87腦膠質(zhì)瘤裸鼠模型，在腫瘤體積達(dá)到100mm³分別靜脈注射生理鹽水(control)，紫杉醇上市制劑泰素α-亞麻酸與紫杉醇前藥(pala)，每三天給藥一次，共三次。每天測量腫瘤長徑和短徑，繪制腫瘤生長曲線(相對瘤體積-時(shí)間曲線)。

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖6)可知，與對照組相比，泰素和α-亞麻酸與紫杉醇前藥的平均腫瘤抑制率分別為51.2％和50.0％，兩者之間無顯著性差異。

實(shí)施例10紫杉醇及α-亞麻酸與紫杉醇前藥體內(nèi)安全性評價(jià)

建立腋下u87腦膠質(zhì)瘤裸鼠模型，在腫瘤體積達(dá)到100mm³分別靜脈注射生理鹽水(control)，紫杉醇上市制劑泰素α-亞麻酸與紫杉醇前藥(pala)，每三天給藥一次，共三次。每天裸鼠體重，繪制裸鼠體重變化曲線，以此來衡量不同給藥組體內(nèi)安全性。

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖7)可知，與對照組相比，泰素在給藥后第二天體重有很明顯的減輕，且在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)體重低于對照組；α-亞麻酸與紫杉醇前藥給藥后體重持續(xù)增加，實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)體重比對照組更重；這說明α-亞麻酸與紫杉醇前藥比紫杉醇在體內(nèi)給藥時(shí)更安全。

實(shí)施例11紫杉醇及前藥的低密度脂蛋白組合物體內(nèi)藥效

建立腋下u87腦膠質(zhì)瘤裸鼠模型，在腫瘤體積達(dá)到100mm³分別靜脈注射生理鹽水(control)，紫杉醇上市制劑泰素前藥的低密度脂蛋白組合物(pala-sldl，實(shí)施例8方法制備)，每三天給藥一次，共三次。每天測量腫瘤長徑和短徑，繪制腫瘤生長曲線(相對瘤體積-時(shí)間曲線)。

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖8)可知，與對照組相比，泰素具有一定的腫瘤生長抑制效果，在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)，腫瘤抑制率為51.2％；前藥的低密度脂蛋白組合物腫瘤抑制效果明顯強(qiáng)于泰素，其實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)的腫瘤抑制率為72.1％。

實(shí)施例12α-亞麻酸與紫杉醇前藥及前藥的低密度脂蛋白組合物體內(nèi)藥效

建立腋下u87腦膠質(zhì)瘤裸鼠模型，在腫瘤體積達(dá)到100mm³分別靜脈注射生理鹽水(control)，α-亞麻酸與紫杉醇前藥(pala)，前藥的低密度脂蛋白組合物(pala-sldl，實(shí)施例8方法制備)，每三天給藥一次，共三次。每天測量腫瘤長徑和短徑，繪制腫瘤生長曲線(相對瘤體積-時(shí)間曲線)。

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖9)可知，與對照組相比，α-亞麻酸與紫杉醇前藥具有一定的腫瘤生長抑制效果，在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)，腫瘤抑制率為50.0％；前藥的低密度脂蛋白組合物腫瘤抑制效果明顯強(qiáng)于α-亞麻酸與紫杉醇前藥，其實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)的腫瘤抑制率為72.1％。

實(shí)施例13前藥的乳劑組合物及前藥的低密度脂蛋白組合物體內(nèi)藥效

建立腋下u87腦膠質(zhì)瘤裸鼠模型，在腫瘤體積達(dá)到100mm³分別靜脈注射生理鹽水(control)，前藥的乳劑組合物(pala-me，實(shí)施例5方法制備)，前藥的低密度脂蛋白組合物(pala-sldl，實(shí)施例8方法制備)，每三天給藥一次，共三次。每天測量腫瘤長徑和短徑，繪制腫瘤生長曲線(相對瘤體積-時(shí)間曲線)。

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖10)可知，與對照組相比，前藥的乳劑組合物具有一定的腫瘤生長抑制效果，在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)，腫瘤抑制率為58.8％；前藥的低密度脂蛋白組合物腫瘤抑制效果明顯強(qiáng)于前藥的乳劑組合物，其實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)的腫瘤抑制率為72.1％。

實(shí)施例14紫杉醇及前藥的低密度脂蛋白組合物體內(nèi)安全性評價(jià)

建立腋下u87腦膠質(zhì)瘤裸鼠模型，在腫瘤體積達(dá)到100mm³分別靜脈注射生理鹽水(control)，紫杉醇上市制劑泰素前藥的低密度脂蛋白組合物(pala-sldl，實(shí)施例8方法制備)，每三天給藥一次，共三次。每天測定裸鼠體重，繪制裸鼠體重變化曲線，以此來衡量不同給藥組體內(nèi)安全性。

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖11)可知，與對照組相比，泰素在給藥后第二天體重有很明顯的減輕，且在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)體重低于對照組，提示泰素的毒性作用；前藥的低密度脂蛋白組合物給藥后體重持續(xù)增加，實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)體重比對照組更重；這說明前藥低密度脂蛋白組合物比紫杉醇更安全。

實(shí)施例15不同制劑對荷u87腦膠質(zhì)瘤裸鼠的離體腫瘤情況

建立腋下u87腦膠質(zhì)瘤裸鼠模型，在腫瘤體積達(dá)到100mm³分別靜脈注射生理鹽水(control)，紫杉醇上市制劑泰素α-亞麻酸與紫杉醇前藥(pala)，前藥的乳劑組合物(pala-me，實(shí)施例5方法制備)，前藥的低密度脂蛋白組合物(pala-sldl，實(shí)施例8方法制備)，每三天給藥一次，共三次。在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)處死各組裸鼠，解剖出腫瘤并拍照。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖12)可知，對照組腫瘤在各組中是最大的；泰素和α-亞麻酸與紫杉醇前藥具有相當(dāng)?shù)哪[瘤抑制效果，離體腫瘤小于對照組；前藥的乳劑組合物及前藥的低密度脂蛋白組合物離體腫瘤小于泰素和α-亞麻酸與紫杉醇前藥組，且前藥的低密度脂蛋白組合物離體腫瘤最小，說明前藥的低密度脂蛋白組合物具有最好的體內(nèi)抗腫瘤藥效。

實(shí)施例16腫瘤組織的的tunel凋亡分析

剝離出的腫瘤制成冰凍切片，使用tunel凋亡檢測試劑盒對不同給藥組的凋亡情況進(jìn)行評價(jià)，最終通過共聚焦顯微鏡觀察。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖13)可知，與對照組相比，泰素組和α-亞麻酸與紫杉醇前藥(pala)組的細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯增加，且凋亡情況相當(dāng)；前藥的乳劑組合物組及前藥的低密度脂蛋白組合物組的腫瘤細(xì)胞凋亡數(shù)量多于泰素組和α-亞油酸與紫杉醇前藥組，且前藥的低密度脂蛋白組合物誘導(dǎo)凋亡效果最好。