本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及淫羊藿苷元在制備預(yù)防或治療帕金森病藥物中的醫(yī)藥用途。

背景技術(shù)：

帕金森病(parkinson’sdisease，pd)是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，老年人多見，平均發(fā)病年齡為60歲左右，40歲以下起病的青年帕金森病較少見。我國65歲以上人群pd的患病率大約是1.7％。大部分帕金森病患者為散發(fā)病例，僅有不到10％的患者有家族史。帕金森病最主要的病理改變是中腦黑質(zhì)多巴胺(dopamine,da)能神經(jīng)元的變性死亡，由此而引起紋狀體da含量顯著性減少而致病。導(dǎo)致這一病理改變的確切病因目前仍不清楚，遺傳因素、環(huán)境因素、年齡老化、氧化應(yīng)激等均可能參與pd多巴胺能神經(jīng)元的變性死亡過程。

1817年英國醫(yī)生jamesparkinson首先對此病進行了詳細的描述，其臨床表現(xiàn)主要包括靜止性震顫、運動遲緩、肌強直和姿勢步態(tài)障礙，同時患者可伴有抑郁、便秘和睡眠障礙等非運動癥狀。帕金森病的診斷主要依靠病史、臨床癥狀及體征。一般的輔助檢查多無異常改變。藥物治療是帕金森病最主要的治療手段。左旋多巴制劑仍是最有效的藥物。手術(shù)治療是藥物治療的一種有效補充?？祻?fù)治療、心理治療及良好的護理也能在一定程度上改善癥狀。目前應(yīng)用的治療手段雖然只能改善癥狀，不能阻止病情的進展，也無法治愈疾病，但有效的治療能顯著提高患者的生活質(zhì)量。pd患者的預(yù)期壽命與普通人群無顯著差異。

藥物治療中用藥宜從小劑量開始逐漸加量。以較小劑量達到較滿意療效，不求全效。用藥在遵循一般原則的同時也應(yīng)強調(diào)個體化。根據(jù)患者的病情、年齡、職業(yè)及經(jīng)濟條件等因素采用最佳的治療方案。藥物治療時不僅要控制癥狀，也應(yīng)盡量避免藥物副作用的發(fā)生，并從長遠的角度出發(fā)盡量使患者的臨床癥狀能得到較長期的控制。目前治療帕金森病的藥物主要有：

1、抗膽堿能藥物：主要是通過抑制腦內(nèi)乙酰膽堿的活性，相應(yīng)提高多巴胺效應(yīng)。臨床常用的是鹽酸苯海索。此外有開馬君、苯甲托品、東莨菪堿等。主要適用于震顫明顯且年齡較輕的患者。老年患者慎用，狹角型青光眼及前列腺肥大患者禁用。

2、金剛烷胺：可促進多巴胺在神經(jīng)末梢的合成和釋放，阻止其重吸收。對少動、僵直、震顫均有輕度改善作用，對異動癥可能有效。腎功能不全、癲癇、嚴重胃潰瘍、肝病患者慎用。

3、單胺氧化酶b(mao-b)抑制劑：通過不可逆地抑制腦內(nèi)mao-b，阻斷多巴胺的降解，相對增加多巴胺含量而達到治療的目的。mao-b抑制劑可單藥治療新發(fā)、年輕的帕金森病患者，也可輔助復(fù)方左旋多巴治療中晚期患者。它可能具有神經(jīng)保護作用，因此原則上推薦早期使用。mao-b抑制劑包括司來吉蘭和雷沙吉蘭。晚上使用易引起失眠，故建議早、中服用。胃潰瘍者慎用，禁與5-羥色胺再攝取抑制劑(ssri)合用。

4、dr激動劑：可直接刺激多巴胺受體而發(fā)揮作用。目前臨床常用的是非麥角類dr激動劑。適用于早期帕金森病患者，也可與復(fù)方左旋多巴聯(lián)用治療中晚期患者。年輕患者病程初期首選mao-b抑制劑或dr激動劑。激動劑均應(yīng)從小劑量開始，逐漸加量。使用激動劑癥狀波動和異動癥的發(fā)生率低，但體位性低血壓和精神癥狀發(fā)生率較高。常見的副作用包括胃腸道癥狀，嗜睡，幻覺等。非麥角類dr激動劑有普拉克索、羅匹尼羅、吡貝地爾、羅替戈汀和阿樸嗎啡。

5、復(fù)方左旋多巴(包括左旋多巴/芐絲肼和左旋多巴/卡比多巴)：左旋多巴是多巴胺的前體。外周補充的左旋多巴可通過血腦屏障，在腦內(nèi)經(jīng)多巴脫羧酶的脫羧轉(zhuǎn)變?yōu)槎喟桶?，從而發(fā)揮替代治療的作用。芐絲肼和卡比多巴是外周脫羧酶抑制劑，可減少左旋多巴在外周的脫羧，增加左旋多巴進入腦內(nèi)的含量以及減少其外周的副作用。鑒于此，有必要研制新型的高效、安全的治療帕金森病的藥物。

淫羊藿為小檗科植物淫羊藿、箭葉淫羊藿、粗毛淫羊藿、巫山淫羊藿或朝鮮淫羊藿的干燥地上部分。淫羊藿含多種黃酮類成分，如淫羊藿苷、淫羊藿次苷、淫羊藿苷元(icaritin，ict)等。中醫(yī)認為其味辛、甘，性溫，歸肝、腎經(jīng)，主治功能：補腎陽，強筋骨，祛風(fēng)濕。淫羊藿苷元屬黃酮醇類化合物，少量存在于淫羊藿藥材中，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

有文獻報道淫羊藿苷元具有抗aβ肽致大鼠原代培養(yǎng)神經(jīng)細胞凋亡的作用(張翔南，王 歡歡，王志強等，淫羊藿苷元抗aβ肽致大鼠原代培養(yǎng)神經(jīng)細胞凋亡的作用，浙江大學(xué)學(xué)報，2007，36(3)：224-226)。中國專利cn101836976a公開了淫羊藿苷元具有抗腫瘤血管生成的作用。中國專利cn101428015a公開了淫羊藿苷元具有抗內(nèi)毒素血癥的作用。中國專利cn101284000a公開了淫羊藿苷元具有防治肥胖癥或脂肪肝的作用。中國專利cn1869204a公開了淫羊藿苷元在誘導(dǎo)干細胞體外定向分化方面的用途。中國專利cn1194701c公開了淫羊藿苷元或去甲基淫羊藿苷元具有在制備雌激素受體調(diào)節(jié)劑中的應(yīng)用。但迄今為止，未見有關(guān)淫羊藿苷元具有抗帕金森病生物活性的臨床報道或臨床應(yīng)用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種新的預(yù)防或治療帕金森病的藥物，該藥物以淫羊藿苷元為藥物活性成分。淫羊藿苷元為從中藥淫羊藿中提取的一種中藥單體，現(xiàn)有技術(shù)表明其具有多種治療活性，因此本發(fā)明涉及淫羊藿苷元的一種新的醫(yī)藥用途，即淫羊藿苷元在制備預(yù)防或治療帕金森病藥物中的用途。

雖然淫羊藿苷元為淫羊藿苷的代謝產(chǎn)物之一，但藥效試驗顯示，不管是灌胃還是注射給予淫羊藿苷后帕金森病的行為學(xué)癥狀以及多巴胺的含量并沒有顯著升高，而淫羊藿苷元則對帕金森病患者體現(xiàn)出顯著的治療效果，其可以改善帕金森病患者的行為學(xué)癥狀，并能顯著升高帕金森病患者紋狀體內(nèi)的多巴胺含量，起到標本兼治的治療效果。本發(fā)明實施例10顯示淫羊藿苷元能夠顯著改善帕金森小鼠的行為學(xué)試驗評分，并能升高其紋狀體內(nèi)多巴胺的含量，對帕金森體現(xiàn)出顯著的治療效果，其治療效果均優(yōu)于淫羊藿苷組，其中以淫羊藿苷元高組的治療效果最佳。

所述的淫羊藿苷元原料可以為中藥分離得到或通過生物酶解或化學(xué)合成途徑得到?，F(xiàn)有技術(shù)中，淫羊藿苷元可以從淫羊藿藥材或淫羊藿苷的體內(nèi)代謝物中分離得到(孫朋悅，徐穎，文曄等，朝鮮淫羊藿的化學(xué)成分，中國植物化學(xué)雜志，1998，8(2)：122-125；劉鐵漢，王毅，吳立軍等，淫羊藿苷的腸菌代謝研究i.腸內(nèi)細菌對淫羊藿苷的代謝轉(zhuǎn)化，2000，31(11)：834-837)，或?qū)⒁蜣杰战?jīng)酶解分離得到(葉海涌，劉健，樓宜嘉，淫羊藿苷衍生物的制備及其雌激素樣作用研究，浙江大學(xué)學(xué)報，2005，34(2)：131-136)。這些方法制備得到的淫羊藿苷元單體均可適用于本發(fā)明上述用途中。

上述所述的醫(yī)藥用途中，淫羊藿苷元可以制備成合適的藥物劑型用于口服給藥或注射給藥，其適用對象可以為人或其他恒溫動物。當適用對象為人時，淫羊藿苷元的用量優(yōu)選 為0.001mg/kg·d～50mg/kg·d，進一步優(yōu)選為0.01mg/kg·d～10mg/kg·d。對于本發(fā)明預(yù)防或治療帕金森病的藥物的給藥時間和給藥次數(shù)需要根據(jù)病情的具體診斷結(jié)果而定，這在本領(lǐng)域技術(shù)人員掌握的技術(shù)范圍之內(nèi)。例如，將對小鼠預(yù)防或治療帕金森病的治療方案應(yīng)用于人身上，所用藥物對人的有效劑量可以通過該藥物對小鼠的有效劑量進行換算，這對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說是顯而易見的。

上述所述的醫(yī)藥用途中，根據(jù)動物病情以及用藥部位可以將淫羊藿苷元制備成合適的藥物制劑以方便用藥，如淫羊藿苷元可以開發(fā)成口服制劑或注射制劑方便患者的使用，其中所述口服制劑可以為片劑、膠囊劑或微乳制劑；所述注射制劑可以為其注射液、注射微乳等，優(yōu)選為注射液。當淫羊藿苷元制備成注射液時，藥物可接受的載體可以為注射用水、氯化鈉、檸檬酸鈉、檸檬酸、甘油、乙醇、丙二醇等。上述所述淫羊藿苷元注射液還可以根據(jù)藥物的性質(zhì)加入適宜的附加劑，如滲透壓調(diào)節(jié)劑、ph值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、治療氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑等，其中所述增溶劑為聚乙二醇400、吐溫-80中的任意一種或兩種。

上述藥物制劑的制備方法均可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員制備該種劑型常規(guī)使用制備方法制得。上述包含淫羊藿苷元的藥物制劑中，每一制劑單位中含有淫羊藿苷元的含量為0.001mg～200mg。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)勢在于：

1、本發(fā)明所述的淫羊藿苷元具有顯著的預(yù)防或治療帕金森病的作用。本發(fā)明實施例10顯示淫羊藿苷元能夠顯著改善帕金森小鼠的行為學(xué)試驗評分，并能升高其紋狀體內(nèi)多巴胺的含量，對帕金森體現(xiàn)出顯著的治療效果，其治療效果優(yōu)于淫羊藿苷組，其中以淫羊藿苷元高組的治療效果最佳。

2、本發(fā)明所述淫羊藿苷元是從傳統(tǒng)中藥淫羊藿中提取得到的天然中藥單體，其對人體毒副作用低，可以顯著提高患者的用藥安全性和用藥依從性，進而大幅度改善了帕金森病患者的治療效果和生活質(zhì)量。

具體實施方式

為了使本領(lǐng)域技術(shù)人員充分了解本發(fā)明，以下通過具體的實施例進一步說明本發(fā)明，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該知曉，本發(fā)明實施例并不以任何方式限制本發(fā)明。

實施例1淫羊藿苷元注射液

制備工藝：將處方量的丙二醇和乙醇混合均勻，向其中加入淫羊藿苷元，攪拌溶解，加入處方量的0.9％氯化鈉溶液至10l，攪拌均勻，加入0.5％針用活性炭，攪拌，脫炭，即得。

實施例2淫羊藿苷元注射液

制備工藝：將處方量的peg-400和乙醇混合均勻，向其中加入淫羊藿苷元，攪拌溶解，加入0.9％氯化鈉溶液至10l，攪拌均勻，加入0.5％針用活性炭，攪拌，脫炭，即得。

實施例3淫羊藿苷元注射液

制備工藝：將處方量的乙醇和吐溫-80混合均勻，向其中加入淫羊藿苷元，攪拌溶解，加入注射用水至10l，攪拌均勻，加入0.5％針用活性炭，攪拌，脫炭，即得。

實施例4淫羊藿苷元注射液

淫羊藿苷元0.01g

乙醇3.3l

注射用水加至10l

制備工藝：將處方量的乙醇加入淫羊藿苷元，攪拌溶解，加入注射用水至10l，攪拌 均勻，加入0.5％針用活性炭，攪拌，脫炭，即得。

實施例5淫羊藿苷元片劑的制備

制備工藝：將淫羊藿苷元和輔料微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉混合均勻，加入適量的淀粉漿制軟材，然后過16目篩制粒。濕顆粒在60℃干燥，干顆粒過20目篩整粒，篩出干粒中的細粉與硬脂酸鎂混勻，然后再與干顆?；靹颍瑝浩吹?。

實施例6淫羊藿苷元片劑

制備工藝：上述組分烘干、粉碎過篩預(yù)處理后混勻直接壓片制得。

實施例7淫羊藿苷元片劑

制備工藝：將主藥及各輔料成分烘干、粉碎過篩預(yù)處理，將主藥與糖分、乳糖、羧甲基纖維素鈉混勻，以純水作為粘合劑將混勻的物料制備軟材，過20目篩制粒并于60℃下干燥制備干顆粒，將硬脂酸鎂加入到上述干顆?？偦?，壓片即得。

實施例8淫羊藿苷元微乳濃縮物

制備工藝：稱取處方量中鏈脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油el-40、1，2-丙二醇、無水乙醇，混合后攪拌均勻，然后加入淫羊藿苷元溶解，也可以超聲波處理以加速溶解，得澄清濃縮液，即為淫羊藿苷元微乳濃縮物。上述微乳濃縮物可進一步稀釋用于注射或口服。

實施例9淫羊藿苷元微乳濃縮物

制備工藝：稱取處方量peg-2-硬脂酸酯、吐溫-20、1-己醇、peg3350混合后攪拌均勻，然后加入淫羊藿苷元溶解，也可以超聲波處理以加速溶解，得澄清濃縮液，即為淫羊藿苷元微乳濃縮物。上述微乳濃縮物可以根據(jù)用藥需要進行進一步稀釋用于患者注射給藥或口服給藥。

實施例10淫羊藿苷元對mptp致帕金森小鼠的影響

mptp(1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶)的毒性作用是在1982年加利福尼亞州一群男子因其吸食不潔的海洛因而患上嚴重亞急性帕金森病這一事件中發(fā)現(xiàn)的。患者表現(xiàn)出與pd病人非常類似的癥狀：運動遲緩、僵直、姿勢不穩(wěn)、靜止性震顫，尸檢證實了黑質(zhì)的損傷。從此mptp成為誘導(dǎo)黑質(zhì)退行性病變模型的有效藥物，對多種動物，如小鼠、狗、貓、猴都能誘導(dǎo)出pd樣癥狀。

1、模型建立及分組給藥

將c57bl/6小鼠隨機分為6組：正常對照組和pd模型組，淫羊藿苷元低組(給藥量1.5mg/kg)、淫羊藿苷元中組(給藥量3.0mg/kg)、淫羊藿苷元高組(給藥量6.0mg/kg)、淫羊藿苷組(給藥量2mg/kg)，每組為12只。各組自入組第1d開始灌胃給藥，每天給藥一次，正常對照組和pd模型組分別給予等體積的生理鹽水。給藥第8d除正常對照組外各給藥組pd模型組腹腔注射mptp40mg/kg，每天一次，連續(xù)3d。正常對照組腹腔注射生理鹽水0.1ml/只，每天一次，連續(xù)3d。造模結(jié)束后繼續(xù)給藥一周，最后一天給藥結(jié)束后進行動物行為學(xué)實驗，并測定給藥組小鼠的腦紋狀體多巴胺(da)含量。

2、檢測指標及測定方法：

2.1游泳實驗

在水箱中放置小鼠，水箱規(guī)格和水溫分別為20cm×30cm×20cm和22～25℃，觀察小鼠游泳情況，并按照以下方法評分：10分＝小鼠偶爾用后肢游動并在一邊漂浮，15分＝小鼠偶爾游泳，20分＝小鼠漂浮至少50％，25分＝小鼠大部分時間游泳偶爾漂浮，30分＝10min內(nèi)連續(xù)不斷游泳。

2.2懸掛實驗

將小鼠懸掛在一水平電線上，觀察小鼠懸掛時間，并按照以下方法評分：1分＝小鼠兩前爪均無法將電線抓住，2分＝小鼠用一前爪將電線抓住，3分＝小鼠用兩前爪將電線抓住，4分＝小鼠軀體上舉。

2.3小鼠腦紋狀體多巴胺(da)含量測定

對小鼠的運動功能進行有效檢測后將其麻醉處死，在冰上放置取腦紋狀體，稱重后置于10倍量生理鹽水中，玻璃勻漿器勻漿后，4℃3000rpm離心10min，取上清，用小鼠多巴胺(da)elisa試劑盒檢測多巴胺含量。

3、實驗結(jié)果及結(jié)果討論

3.1行為評分

表1.游泳實驗和懸掛實驗分值

注：**p<0.01vs正常對照組；^#p<0.05，^##p<0.01vspd模型組；^▲p<0.05，^▲▲p<0.01vspd模型組。

由表1實驗結(jié)果可知，淫羊藿苷元可顯著提高帕金森小鼠游泳時間和懸掛時間，提示淫羊藿苷元對帕金森小鼠具有潛在的保護作用。具體如下：

1)模型組的游泳實驗分值和懸掛實驗分值與正常對照組具有極顯著性差異，表明模型建造成功。

2)淫羊藿苷組相對于pd模型組也可以提高小鼠的游泳時間和懸掛時間，但其與pd模型組無顯著性差異。

3)淫羊藿苷元各組的游泳實驗分值和懸掛實驗分值與pd模型組相比顯著提高，具有顯著性差異，其中淫羊藿苷元高組效果最佳，與pd模型組相比具有極顯著性差異。淫羊藿苷元各組的游泳實驗分值和懸掛實驗分值與淫羊藿苷組相比也具有顯著提高。

3.2淫羊藿苷元對mptp致帕金森小鼠多巴胺分泌的影響

表2.淫羊藿苷元對mptp致帕金森小鼠多巴胺分泌的影響

注：**p<0.01vs正常對照組；^#p<0.05，^##p<0.01vspd模型組；^▲p<0.05，^▲▲p<0.01vspd模型組。

由表2可知，淫羊藿苷元可顯著提高mptp致帕金森小鼠紋狀體多巴胺的分泌。具體如下：

1)模型組的多巴胺含量與正常對照組具有極顯著性差異，表明模型建造成功。

2)淫羊藿苷組多巴胺含量與模型組相比具有一定升高，但并無顯著性差異。淫羊藿苷元各組的多巴胺含量與pd模型組相比顯著提高，具有顯著性差異，其中淫羊藿苷元高組效果最佳，與pd模型組相比具有極顯著性差異。淫羊藿苷元各組的多巴胺含量與淫羊藿苷組相比也具有顯著提高。