本發(fā)明屬于藥物用途技術(shù)，具體涉及白頭翁皂苷b4在制備治療疼痛的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：疼痛是一種不愉快的感覺(jué)，是伴有實(shí)際或潛在組織損傷的情緒體驗(yàn)，是臨床上最常見(jiàn)的癥狀，會(huì)給患者造成多方面的損害，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量，目前疼痛仍是困擾病人的一個(gè)常見(jiàn)問(wèn)題。疼痛可分為多種。按疼痛的部位，可分為淺表痛、深部痛和牽涉痛，例如由機(jī)械性、化學(xué)性、物理性的不良刺激引起皮膚和黏膜部位的疼痛。深部痛是指內(nèi)臟、胸膜、關(guān)節(jié)、腹膜等部位受刺激而產(chǎn)生的疼痛。常表現(xiàn)為灼痛，不呈局限性。牽涉痛是指深部痛表現(xiàn)為遠(yuǎn)離病灶的淺表痛，如膽囊炎表現(xiàn)為右肩痛。此外，按疼痛起因分為炎癥性痛、神經(jīng)病理性痛、癌痛、創(chuàng)傷性疼痛等，按疼痛程度可分為輕度痛、中度痛、重度痛、極度痛等。持續(xù)的疼痛嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量，給患者帶來(lái)痛苦，可導(dǎo)致患者的抑郁、情緒低落。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界人口1/3以上遭受著持續(xù)或反復(fù)發(fā)作的疼痛折磨。導(dǎo)致疼痛的原因很多，目前疼痛機(jī)制研究比較多，但是疼痛的機(jī)制還不是很清楚。疼痛根據(jù)其神經(jīng)生理學(xué)機(jī)制可分為感受性疼痛和神經(jīng)病理性疼痛兩類，前者直接由傷害性刺激引起，與組織損傷有關(guān)；后者由軀體感覺(jué)神經(jīng)系統(tǒng)的損傷或疾病直接造成的慢性疼痛。目前，大家比較關(guān)心的還有癌性疼痛，有75%～95%的晚期癌和轉(zhuǎn)移癌患者都有癌癥疼痛。癌癥誘導(dǎo)的骨疼痛（簡(jiǎn)稱骨癌痛）是癌癥疼痛的典型代表，是一種獨(dú)特的疼痛狀態(tài)，嚴(yán)重影響癌癥患者的生活質(zhì)量，目前尚缺乏有效的治療手段。腫瘤組織壓迫并侵蝕鄰近的感覺(jué)神經(jīng)，腫瘤細(xì)胞及相關(guān)免疫細(xì)胞釋放一系列因子致敏外周傷害性感受器，腫瘤導(dǎo)致的骨質(zhì)破壞和局部缺血、缺氧的微環(huán)境是骨癌痛形成的起始因素，在這些因素的持續(xù)刺激下中樞神經(jīng)系統(tǒng)也被致敏，并對(duì)骨癌痛的維持起重要作用。臨床上癌癥疼痛主要表現(xiàn)為：持續(xù)的進(jìn)行性的背景痛（ongoingpain）、突破痛（beakthroughpain）和痛覺(jué)異常。骨癌痛的治療藥物包括非類固醇類藥、阿片類藥物、二膦酸鹽類藥物和其他尚在開(kāi)發(fā)中的藥物等。此外，在各種類型的病理性疼痛中，神經(jīng)性疼痛(neuropathiepain)被視為最難攻克的難題。神經(jīng)性疼痛是指由神經(jīng)系統(tǒng)受損或功能失調(diào)引起的病理性疼痛。主要表現(xiàn)為：1)自發(fā)性疼痛，如外傷、腫瘤、燒傷、病毒感染、糖尿病和化療藥物等多種原因引起神經(jīng)損傷，從而引起的疼痛；2)痛敏，就是痛反應(yīng)增強(qiáng)；3)痛超敏，指痛閾顯著下降。外周和中樞機(jī)制共同參與神經(jīng)病理痛的發(fā)生。外周神經(jīng)損傷后，早期的異位放電不僅是早期急性痛的重要原因。并且這些異位放電不斷轟擊脊髓背角等中樞部位．誘發(fā)產(chǎn)生脊髓背角長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)等中樞敏化現(xiàn)象，中樞敏化和下行易化系統(tǒng)的激活等中樞機(jī)制在神經(jīng)病理痛后期維持中起到重要作用。關(guān)節(jié)疼痛是一種常見(jiàn)的疼痛疾病，其基本病理改變?yōu)槎喾N致病因素引起的進(jìn)行性關(guān)節(jié)軟骨變性、破壞及喪失，關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨邊緣骨贅形成，由此引起關(guān)節(jié)疼痛、僵硬、腫大、畸形及功能障礙，其中關(guān)節(jié)疼痛為最突出的癥狀。隨著病情的進(jìn)展，疼痛呈輕度至中度間歇性疼痛，最后發(fā)展成為持續(xù)性疼痛。關(guān)節(jié)疼痛的機(jī)制是復(fù)雜的，包括支配關(guān)節(jié)的a8和c纖維具有小的感受野，可以被關(guān)節(jié)的傷害性刺激所激活，這些感受器能夠感受關(guān)節(jié)的機(jī)械刺激，也能感受關(guān)節(jié)的化學(xué)刺激。此外，關(guān)節(jié)內(nèi)還有一些其他的神經(jīng)纖維，不能夠被正常的傷害性刺激所激活，稱之為靜止感受器，只有在關(guān)節(jié)內(nèi)損傷已經(jīng)形成，才能被激活并應(yīng)答、敏化，從而形成痛敏。此外，伴隨外周損傷，導(dǎo)致神經(jīng)中樞敏化包括活化、調(diào)控以及修飾，因此關(guān)節(jié)疼痛是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程。目前治療疼痛的藥物有兩大類，包括以阿片類藥物（麻醉性緩解疼痛藥）和非甾體類藥為主。阿片類藥物作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，有強(qiáng)大的緩解疼痛作用，臨床上主要用于癌性疼痛和其他各種銳痛的治療。然而，因其成癮性而在臨床應(yīng)用受到很大的限制。非甾體類緩解疼痛藥是具有解熱、緩解疼痛，但是長(zhǎng)期大量使用會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)，包括胃腸道反應(yīng)、肝腎毒性、引發(fā)心血管系統(tǒng)疾病和出血傾向。因此，選擇性高、安全性好、副作用小的新型緩解疼痛藥物的研究和開(kāi)發(fā)日益成為醫(yī)藥界研究的熱點(diǎn)。目前，上市用于臨床治療和臨床實(shí)驗(yàn)中的緩解疼痛藥物還包括（1）激肽受體抑制劑類，包括緩激肽和胰激肽受體抑制劑以及速激肽受體拮抗劑，這類藥物具有高效、長(zhǎng)效緩解疼痛作用，并且在鎮(zhèn)咳、止吐等方面也有良好的開(kāi)發(fā)前景；（2）選擇性環(huán)氧化酶抑制劑。代表藥物有替尼達(dá)普，一種脂氧合酶-環(huán)氧合酶雙效抑制劑；（3）no合酶抑制劑，如7-硝基吲唑，此藥對(duì)血壓、血管平滑肌無(wú)影響；（4）辣椒素衍生物。目前，臨床已局部應(yīng)用辣椒素緩解疼痛，如乳房切除后疼痛等，但因其燒灼感而限制了應(yīng)用。白頭翁為毛莨科植物白頭翁（pulsatillachinensis(bunge)regel）的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。是中醫(yī)治療熱毒血痢的臨床常用藥，尤善清大腸濕熱及血分熱毒。目前對(duì)白頭翁化學(xué)成分、藥理作用、含量測(cè)定等已有較為廣泛的研究。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)白頭翁具有增強(qiáng)免疫功能、抗腫瘤、抗病原微生物、抗寄生蟲、保肝、毒性及治療內(nèi)毒素血癥等作用。白頭翁的化學(xué)成分研究始于60年代初，共分得了約19種成分，主要為皂苷和內(nèi)酯等成分，目前認(rèn)為白頭翁的有效化學(xué)成分主要為三萜皂苷。最近的研究表明白頭翁皂苷元(23-羥基白樺酸)具有最有效的抗黑色素瘤作用，低糖基白頭翁皂苷能促進(jìn)皮膚膠元蛋白合成及抗自由基氧化，故可將其應(yīng)用于皮膚抗老化化妝品行業(yè)及保健食品行業(yè)。白頭翁主要有效成分為皂苷類成分，其中白頭翁皂苷b4為其主要代表。近年來(lái)對(duì)于b4的化學(xué)結(jié)構(gòu)及含量測(cè)定的研究居多，對(duì)于其藥理活性卻知之甚少。近年也已有關(guān)于白頭翁皂苷b4抗肝癌的研究，但對(duì)白頭翁皂苷b4的疼痛作用尚未有文獻(xiàn)報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明公開(kāi)了白頭翁皂苷b4在治療疼痛中的應(yīng)用。為達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：白頭翁皂苷b4在制備治療疼痛的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還公開(kāi)了一種治療疼痛的藥物，其活性成份為白頭翁皂苷b4。上述技術(shù)方案中，所述治療疼痛的藥物還包括藥物輔料。本發(fā)明還公開(kāi)了一種治療疼痛的藥物的制備方法，將白頭翁皂苷b4與藥物輔料混合，制備治療疼痛的藥物。白頭翁皂苷b4在制備治療足腫脹的藥物中的應(yīng)用。白頭翁皂苷b4在制備提高痛閾值的藥物中的應(yīng)用。白頭翁皂苷b4在制備減輕踝關(guān)節(jié)變形和滑膜組織異常增生的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還公開(kāi)了一種治療疼痛的試劑，包括白頭翁皂苷b4、藥物輔料以及包裝瓶。本發(fā)明的藥物為片劑、丸劑、滴丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、涂劑、巴布劑、噴霧劑或注射劑。本發(fā)明藥物的劑量為0～60mg/kg，且不含0，優(yōu)選5～60mg/kg。本發(fā)明采用小鼠醋酸扭體法，觀察給藥后不同劑量組的小鼠扭體次數(shù)，采用福爾馬林誘導(dǎo)的小鼠疼痛模型，觀察舔足時(shí)間和次數(shù)，采用大鼠完全弗氏佐劑誘導(dǎo)模型，通過(guò)熱板實(shí)驗(yàn)，足趾容積，機(jī)械性痛閾測(cè)定，病理學(xué)檢查等測(cè)定進(jìn)行觀察。結(jié)果表明在小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)中，與造模組比較，白頭翁皂苷b4各劑量組的小鼠扭體次數(shù)明顯減少，b4低劑量組（12.5mg/kg）的數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意（p<0.05），b4中劑量組（25mg/kg）的扭體次數(shù)減少有顯著性差異（p<0.01），b4高劑量（50mg/kg）的扭體次數(shù)減少具有非常顯著性差異（p<0.001），并且與陽(yáng)性對(duì)照組（aspirin）相比，扭體次數(shù)也明顯減少，具有顯著性差異（p<0.01）；在福爾馬林誘導(dǎo)的疼痛模型中，白頭翁皂苷b4（50mg/kg）減少小鼠的舔足時(shí)間和次數(shù)（p<0.05）；白頭翁皂苷b4（6.25mg/kg）抑制大鼠的關(guān)節(jié)腫脹，降低足體積腫脹度（p<0.05）和痛閾值（p<0.05），病理切片顯示白頭翁皂苷b4減輕踝關(guān)節(jié)的變形和滑膜組織的異常增生，并減少細(xì)胞浸潤(rùn)。在小鼠熱板實(shí)驗(yàn)中,b白頭翁皂苷4（12.5mg/kg）能提高小鼠的痛閾?？傊?，白頭翁皂苷b4對(duì)醋酸所致小鼠扭體模型，熱輻射痛模型，福爾馬林誘導(dǎo)的小鼠疼痛模型和大鼠疼痛模型具有良好的緩解疼痛作用。附圖說(shuō)明圖1白頭翁皂苷b4對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響；圖2為小鼠甲醛模型的舔足次數(shù)的變化圖；圖3為小鼠甲醛模型的兩相中舔足次數(shù)的變化圖；圖4為小鼠甲醛模型的兩相中舔足時(shí)間的變化圖；圖5為15d各組大鼠足腫脹情況比較圖；圖6為白頭翁皂苷b4對(duì)弗氏佐劑模型大鼠足體積的影響圖；圖7為白頭翁皂苷b4對(duì)熱板實(shí)驗(yàn)的小鼠痛閾提高率的影響圖；圖8為各組大鼠機(jī)械痛閾的變化圖；圖9為大鼠踝關(guān)節(jié)與膝關(guān)節(jié)滑膜組織病理切片情況圖；圖10為小鼠熱輻射甩尾實(shí)驗(yàn)痛閾提高百分率圖。具體實(shí)施方式白頭翁皂苷b4（純度為99.8％），由蘇州大學(xué)天然藥物化學(xué)課題組分離純化而得；完全弗氏佐劑cfa（其含有在液體石蠟中的10mg/ml熱滅活的結(jié)核分枝桿菌），每支10ml，sigma公司產(chǎn)品；冰乙酸：純度99.5％，江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司，批號(hào)20160601；甲醛：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，含量37-40％，批號(hào)20161011。el204電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司生產(chǎn)；pv-200足趾容積測(cè)量?jī)x，成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)；rb-200智能熱板儀，成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)；vonfreyfilaments纖毛機(jī)械刺激絲。觀察指標(biāo)足體積測(cè)量造模成功后，每天腹腔注射b4給藥，在第6h，1天，2天，3天，11天，13天，15天，17天和19天給藥后1h測(cè)量大鼠足腫脹，根據(jù)容積排水法原理在足容積測(cè)量?jī)x上測(cè)定足體積，求出腫脹度（δml=腫脹后關(guān)節(jié)體積－腫脹前關(guān)節(jié)體積）。熱板實(shí)驗(yàn)（20±2）℃室溫條件下，置大鼠于（55±0.5）℃的熱板測(cè)痛儀上，以大鼠舔后足作為痛反應(yīng)的指標(biāo)，大鼠接觸熱板至舔后足所經(jīng)歷的時(shí)間為痛閾值；造模前兩天每天測(cè)量痛閾值，取平均值作為給藥前(基礎(chǔ))痛閾值。在第6h，1天，2天，3天，11天，13天，15天，17天和19天測(cè)量給藥后1h各大鼠的痛閾值，并計(jì)算各大鼠給藥前后痛閾值的差值（基礎(chǔ)痛閾值-給藥后痛閾值），痛閾提高率=[（基礎(chǔ)痛閾值-給藥后痛閾值）/基礎(chǔ)痛閾值]×％。機(jī)械性痛閾測(cè)定纖毛機(jī)械刺激絲法檢測(cè)痛閾是較常用的慢性疼痛模型檢測(cè)方法。檢測(cè)時(shí)，將大鼠置于塑料板隔開(kāi)的單獨(dú)空間內(nèi)，底部是鐵制網(wǎng)格結(jié)構(gòu)。在安靜環(huán)境下，將大鼠置于疼痛檢測(cè)架上，用透明鼠籠約束大鼠，適應(yīng)10min后，使用vonfreyfilaments纖毛機(jī)械刺激絲，刺激大鼠的后足，每次測(cè)評(píng)均從輕到重（1.2,1.4,2.0,4.0,6.0,8.0,10,12,15,26和50g）觸壓后足的足底表面，當(dāng)vonfreyfilaments纖毛機(jī)械刺激絲彎曲90°，大鼠仍然不抬足，視為無(wú)反應(yīng)，以刺激開(kāi)始6s內(nèi)出現(xiàn)躲避或抬足記為陽(yáng)性反應(yīng)。每次刺激持續(xù)3s,間隔15s，連續(xù)5次。若3次不抬足，換用更高克數(shù)的纖毛；若5次中有3次抬足，則返回下一克數(shù)的纖毛，直到每5次測(cè)試中有3次抬足。能夠引起3/5次抬足的最低vonfrey纖毛克數(shù)被定義為機(jī)械痛閾值（mwt）。先提前1天測(cè)量基礎(chǔ)值，然后在第6，24，48，72h，11天，13天，15天，17天和19天測(cè)量機(jī)械痛閾值（mwt），并計(jì)算痛閾差值。組織病理檢查第21天脫頸處死大鼠，解剖對(duì)照組、弗氏佐劑誘導(dǎo)模型組、b4給藥組大鼠，取右后足的膝關(guān)節(jié)滑膜組織和踝關(guān)節(jié)，并保持關(guān)節(jié)完整。置于多聚甲醛固定液中固定至少24h，然后脫鈣2-3天。脫鈣完全后，將整個(gè)踝關(guān)節(jié)縱向切為4μm切片，膝關(guān)節(jié)滑膜橫切。石蠟包埋切片，he染色，在光鏡下觀察細(xì)胞浸潤(rùn)，滑膜增生及關(guān)節(jié)破壞情況。熱輻射甩尾實(shí)驗(yàn)（20±2)℃室溫條件下，輕輕將小鼠置于熱輻射甩尾儀上，以小鼠甩尾作為痛反應(yīng)的指標(biāo)，小鼠接觸熱輻射甩尾儀的輻射熱刺激至甩尾所經(jīng)歷的時(shí)間為痛閾值；計(jì)算各大鼠給藥前后痛閾值的差值（基礎(chǔ)痛閾值-給藥后痛閾值），痛閾提高率=[（基礎(chǔ)痛閾值-給藥后痛閾值）/基礎(chǔ)痛閾值]×％。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，統(tǒng)計(jì)分析使用spss13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析結(jié)果。單因素方差分析用于確定各實(shí)驗(yàn)組值之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)施例一18-22g的icr小鼠50只，合格證號(hào)：scyk(蘇）2013-0003，隨機(jī)分為4組，即醋酸扭體模型組，b4低劑量組（12.5mg/kg），中劑量組（25mg/kg）和高劑量組（50mg/kg），陽(yáng)性對(duì)照組。給藥組的給藥劑量分別為12.5mg/kg，25mg/kg，50mg/kg。陽(yáng)性對(duì)照藥物為阿司匹林。小鼠提前適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境1天，給藥組小鼠提前1h腹腔注射白頭翁皂苷b4，造模組給予等量生理鹽水，腹腔注射0.6%-1%醋酸溶液，觀察并記錄各鼠在20min內(nèi)扭體次數(shù)。小鼠扭體表現(xiàn)為伸展后肢、腹部?jī)?nèi)凹和臀部抬高。圖1白頭翁皂苷b4對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響（***與造模組相比，p<0.001；**與造模組相比，p<0.01；*與造模組相比，p<0.05），與造模組相比，白頭翁皂苷b4各劑量組的小鼠扭體次數(shù)明顯減少，尤其是本發(fā)明的技術(shù)方案與現(xiàn)有成熟臨床藥物陽(yáng)性對(duì)照組（aspirin）的扭體次數(shù)相當(dāng)甚至減少；結(jié)果顯示白頭翁皂苷b4有較強(qiáng)的緩解疼痛作用。實(shí)施例二19-21g清潔級(jí)的icr雄性小鼠32只，合格證號(hào)：scyk(蘇）2013-0003，隨機(jī)分為甲醛造模組和b4給藥組（50mg/kg）。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均由昭衍（蘇州）新藥研究中心有限公司提供。19-21g的icr雄性小鼠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境3天。分為造模組和b4給藥組（50mg/kg），實(shí)驗(yàn)前把小鼠放入觀察籠（10×20×15cm）內(nèi)適應(yīng)環(huán)境1h，從觀察籠內(nèi)取出。用25μl微量注射器在小鼠右后足趾皮下注射20μl的2%甲醛溶液，立即放入觀察籠內(nèi)觀察舔足時(shí)間和次數(shù)。產(chǎn)生一種明顯的自發(fā)性痛行為反應(yīng)，即右后足表現(xiàn)出縮腿、舔爪及顫抖等反應(yīng)，觀察1h，分為12個(gè)時(shí)間段，每5min為一個(gè)時(shí)間段，記錄小鼠舔足時(shí)間，作為疼痛指標(biāo)。把觀察得到的小鼠實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分為2個(gè)時(shí)間段處理：0-10min時(shí)間段為第一相，這個(gè)時(shí)間段實(shí)驗(yàn)小鼠感受急性疼痛的時(shí)間段，15-55min時(shí)間段為第二相。在小鼠右后足趾皮下注射20μl的2%甲醛溶液后，小鼠產(chǎn)生舔足反應(yīng)在第1相(0-10min)中立即發(fā)生雙相傷害感染行為，結(jié)果見(jiàn)圖2-4，圖2為小鼠甲醛模型的舔足次數(shù)的變化，圖3為小鼠甲醛模型的兩相中舔足次數(shù)的變化，圖4為小鼠甲醛模型的兩相中舔足時(shí)間的變化。與造模組比較，b4給藥組（50mg/kg）舔足次數(shù)和時(shí)間逐漸減少；在第2相(15-55min)中b4給藥組（50mg/kg）的舔足次數(shù)明顯減少（p<0.05）（見(jiàn)圖3)，舔足時(shí)間有一定程度減少(見(jiàn)圖4)。實(shí)施例三年齡4-6周的清潔級(jí)雌性sd大鼠20只,合格證號(hào)：scyk(蘇）2013-0003，體重180-210g,隨機(jī)分為3組，即空白對(duì)照組8只，完全弗氏佐劑誘導(dǎo)的模型組，白頭翁皂苷b4給藥組（6.25mg/kg），每組6只。給藥組提前2天腹腔注射白頭翁皂苷b4，每天1次。第0天給藥后1h開(kāi)始造模，除對(duì)照組足趾皮下注射0.1ml生理鹽水外，其他組通過(guò)在右后足跖皮下單次注射0.1mlcfa（其含有在液體石蠟中的10mg/ml熱滅活的結(jié)核分枝桿菌）；足爪腫脹，表現(xiàn)為對(duì)側(cè)后肢和雙前肢足爪腫脹，進(jìn)行性加重，耳和尾部出現(xiàn)結(jié)節(jié)和紅斑，提示弗氏佐劑誘導(dǎo)模型誘導(dǎo)成功。對(duì)照組和弗氏佐劑誘導(dǎo)模型組給生理鹽水，給藥組大鼠腹腔注射白頭翁皂苷b4，均每天1次，連續(xù)腹腔注射21天。白頭翁皂苷b4給藥組的劑量為6.25mg/kg。在第6h，1天，2天，3天，11天，13天，15天，17天和19天給藥后1h觀察足腫脹，熱板實(shí)驗(yàn)和機(jī)械絲痛閾三項(xiàng)指標(biāo)。完全弗氏佐劑模型大鼠的足腫脹一般變化情況為：足腫脹程度在第3天時(shí)達(dá)到峰值，屬于急性期；之后開(kāi)始消退，而后在第14天足腫脹度又開(kāi)始增大達(dá)到另一個(gè)峰值，然后慢慢消腫。除正常對(duì)照組外，其余2組大鼠在第0天注射0.1mlcfa之后，在第1天時(shí)右后足明顯腫脹，造模后的足體積測(cè)量實(shí)驗(yàn)顯示造模成功；第3天后可見(jiàn)b4給藥組（6.25mg/kg）中大鼠足腫脹逐漸消退，該組大鼠在第15天后足腫脹更是明顯消腫，具有緩解疼痛的效果。第15天各組大鼠足腫脹情況見(jiàn)圖5，a：正常組；b：造模組；c：b4給藥組（6.25mg/kg）。在第6h，1天，2天，3天，11天，13天，15天，17天和19天，正常對(duì)照組、完全弗氏佐劑誘導(dǎo)模型組、白頭翁皂苷b4給藥組（6.25mg/kg)的大鼠足體積的比較見(jiàn)圖6；b4給藥組（6.25mg/kg）的大鼠足體積與模型組相比明顯減小，說(shuō)明b4給藥組（6.25mg/kg）抑制大鼠足腫脹。從第11天開(kāi)始到19天b4給藥組（6.25mg/kg）大鼠右后足體積與造模組相比有顯著性差異（p＜0.01），而且在第11天的數(shù)據(jù)有非常顯著性差異（p＜0.001）。從表1中可看出，第19天造模組大鼠的足體積大于正常大鼠，說(shuō)明完全弗氏佐劑誘導(dǎo)模型在實(shí)驗(yàn)期間造模成功，且從造模第2天起發(fā)現(xiàn)白頭翁皂苷b4給藥組（6.25mg/kg)抑制足腫脹，腫脹度減小。表1造模后19d各組大鼠右后足關(guān)節(jié)腫脹度的變化(`x±s)組別劑量（mg/kg）足腫脹體積(△ml)正常-0.18±0.19弗氏佐劑誘導(dǎo)模型-0.92±0.19###b46.250.43±0.18**注：###與正常對(duì)照組相比，p<0.001，**與造模組相比，p<0.01。第6h，1天，2天，3天，11天，13天，15天，17天和19天的熱板實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2和圖7。與造模組比較，白頭翁皂苷b4給藥組(6.25mg/kg)大鼠給藥后從第13天開(kāi)始明顯抑制熱板所致大鼠疼痛反應(yīng)，延長(zhǎng)動(dòng)物痛閾值。痛閾提高率變化情況見(jiàn)圖7，b4給藥組(6.25mg/kg)的大鼠在第15、17天的痛閾提高率相對(duì)完全弗氏佐劑誘導(dǎo)模型組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），而第13、19天的痛閾提高率有顯著性差異（p<0.01）。表2造模后19d白頭翁皂苷b4對(duì)熱板刺激的影響(`x±s)組別劑量（mg/kg）痛閾差值（s)痛閾提高率（％）正常_0.05±2.700.05±0.30弗氏佐劑誘導(dǎo)模型_-4.87±3.73#-0.44±0.14#b46.25-1.13±4.000.08±0.19*注：#與正常對(duì)照組相比，p<0.05;*與造模組相比，p<0.05。第6h，1天，2天，3天，11天，13天，15天，17天和19天的機(jī)械絲痛閾值結(jié)果見(jiàn)圖8。由圖8可知，弗氏佐劑誘導(dǎo)模型組大鼠機(jī)械痛閾值逐漸降低，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；在第2、11、19天b4給藥組(6.25mg/kg）與模型組比較，明顯延長(zhǎng)痛閾值，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。結(jié)果表明白頭翁皂苷b4給藥組（6.25mg/kg）具有緩解疼痛作用。各組動(dòng)物的踝關(guān)節(jié)病理學(xué)檢查結(jié)果顯示，正常對(duì)照組中滑膜襯里層是由1～2層滑膜細(xì)胞及滑膜下層組成，無(wú)明顯細(xì)胞浸潤(rùn)；弗氏佐劑誘導(dǎo)模型組踝關(guān)節(jié)病理切片可見(jiàn)關(guān)節(jié)軟骨變薄不明顯；但是白頭翁皂苷b4給藥組(6.25mg/kg）的踝關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)保持完整，無(wú)明顯軟骨破壞，滑膜無(wú)明顯增生。弗氏佐劑誘導(dǎo)模型組膝關(guān)節(jié)的滑膜組織細(xì)胞明顯浸潤(rùn)，滑膜異常增生，血管擴(kuò)張；白頭翁皂苷b4給藥組(6.25mg/kg）滑膜病理改變較模型組明顯減輕，滑膜細(xì)胞層增生程度減弱，細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少。說(shuō)明白頭翁皂苷b4減輕踝關(guān)節(jié)的變形和滑膜組織的異常增生，并減少細(xì)胞的浸潤(rùn)（見(jiàn)圖9，踝關(guān)節(jié)比較：①正常對(duì)照組；②弗氏佐劑誘導(dǎo)模型組；③b4給藥組(6.25mg/kg）。滑膜組織比較：④正常對(duì)照組；⑤弗氏佐劑誘導(dǎo)模型組；⑥b4給藥組(6.25mg/kg）。圖10所示為小鼠熱輻射甩尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果，生理鹽水對(duì)照組給生理鹽水后，痛閾沒(méi)有改變。b4給藥組（6.25mg/kg）腹腔注射2小時(shí)后，與生理鹽水組相比，痛閾明顯提高，陽(yáng)性對(duì)照抗炎藥地塞米松不能提高小鼠的痛閾，無(wú)法起到鎮(zhèn)痛作用。當(dāng)前第1頁(yè)12