本申請根據(jù)35U.S.C.§119要求以下申請的權(quán)益：于2014年9月7日提交的美國臨時申請62/047,034；于2014年9月16日提交的62/051,255；于2015年1月9日提交的62/101,841；于2014年9月7日提交的62/047,044，于2014年9月16日提交的62/051,258；于2015年1月9日提交的62/101,861；于2014年9月7日提交的62/047,054；于2014年9月16日提交的62/051,263；于2015年1月9日提交的62/101,872；于2014年9月7日提交的62/047,051，于2014年9月16日提交的62/051,267；以及于2015年1月9日提交的62/101,882；其中每個申請的全部內(nèi)容通過引用并入本文。
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于施用病毒轉(zhuǎn)移載體(viraltransfervector)和靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑(antigen-presentingcelltargetedimmunosuppressant)的方法和組合物。發(fā)明概述本文中提供了用于施用基因表達調(diào)節(jié)病毒轉(zhuǎn)移載體和靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑的方法和組合物。病毒轉(zhuǎn)移載體包含編碼可在本文中提供的任一種方法或組合物中對本文中提供的任一種目的具有治療益處的蛋白質(zhì)、肽或核酸的基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因。在一個方面是包括通過向?qū)ο蟀殡S施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體來在所述對象中建立減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答的方法。在一個實施方案中，所述對象不具有針對病毒轉(zhuǎn)移載體的預(yù)先存在的免疫力。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答是針對所述病毒轉(zhuǎn)移載體的T細胞應(yīng)答，并且所述方法還包括在伴隨施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體之前，向?qū)ο笫┯盟霾《巨D(zhuǎn)移載體而不施用所述靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述伴隨施用所述靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體是重復(fù)地伴隨施用所述靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體。在另一個方面是包括以下的方法：通過向?qū)ο蟀殡S施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體來在所述對象中建立減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答，以及向所述對象施用一個或更多個重復(fù)劑量的所述病毒轉(zhuǎn)移載體。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答是針對所述病毒轉(zhuǎn)移載體的T細胞應(yīng)答，并且所述方法還包括在伴隨施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體以及所述一個或更多個重復(fù)劑量的所述病毒轉(zhuǎn)移載體之前，向?qū)ο笫┯盟霾《巨D(zhuǎn)移載體而不施用所述靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述方法還包括單獨地或與病毒轉(zhuǎn)移載體組合地提供或獲得靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑。在另一個方面是包括以下的方法：通過首先向?qū)ο笫┯貌《巨D(zhuǎn)移載體而不施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑來減弱抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答，其中所述抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答是T細胞應(yīng)答，以及隨后向所述對象伴隨施用所述病毒轉(zhuǎn)移載體和靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑。在所提供的任一種方法的一個實施方案中，所述方法還包括在向所述對象伴隨施用所述病毒轉(zhuǎn)移載體和所述靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑之后，向所述對象施用一個或更多個重復(fù)劑量的所述病毒轉(zhuǎn)移載體。在另一個方面是包括以下的方法：在向?qū)ο笫┯盟霾《巨D(zhuǎn)移載體之前，確定所述對象中針對所述病毒轉(zhuǎn)移載體的預(yù)先存在的免疫力水平，向所述對象伴隨施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體，以及向所述對象施用所述病毒轉(zhuǎn)移載體的劑量。在所提供的任一種方法的一個實施方案中，所述確定包括在向所述對象施用所述病毒轉(zhuǎn)移載體之前測量所述對象中抗病毒轉(zhuǎn)移載體抗體的水平。在所提供的任一種方法的另一個實施方案中，所述確定包括在向所述對象施用所述病毒轉(zhuǎn)移載體之前測量所述對象中針對所述病毒轉(zhuǎn)移載體的T細胞應(yīng)答水平。在所提供的任一種方法的一個實施方案中，所述方法還包括一個或更多個重復(fù)劑量的所述病毒轉(zhuǎn)移載體。在所提供的任一種方法的一個實施方案中，所述預(yù)先存在的免疫力水平針對的是所述病毒轉(zhuǎn)移載體的病毒抗原。在所提供的任一種方法的一個實施方案中，所述預(yù)先存在的免疫力水平針對的是所述病毒轉(zhuǎn)移載體的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)基因表達產(chǎn)物的抗原。在另一個方面是包括以下的方法：通過向?qū)ο笾貜?fù)地伴隨施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體來提高所述對象中病毒轉(zhuǎn)移載體的轉(zhuǎn)基因表達。在所提供的任一種方法的一個實施方案中，所述方法還包括確定提高對象中所述轉(zhuǎn)基因表達的重復(fù)地伴隨施用所述靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體的頻率和劑量。在另一個方面是包括以下的方法：向?qū)ο笾貜?fù)地伴隨施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體，以及選擇所述病毒轉(zhuǎn)移載體的一個或更多個劑量以使其小于當(dāng)所述對象預(yù)期由于重復(fù)施用所述病毒轉(zhuǎn)移載體而發(fā)生抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答時會為所述對象選擇的病毒轉(zhuǎn)移載體劑量。在另一個方面是包括以下的方法：通過向?qū)嶓w(entity)傳達(communicate)伴隨施用所述靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體導(dǎo)致對象中減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答，來誘導(dǎo)所述實體購買或獲得單獨或與病毒轉(zhuǎn)移載體組合的靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑。在另一個方面是包括以下的方法：通過向?qū)嶓w傳達通過向?qū)ο蟀殡S施用所述靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體進行有效的重復(fù)病毒轉(zhuǎn)移載體給藥是可能的，來誘導(dǎo)所述實體購買或獲得單獨或與病毒轉(zhuǎn)移載體組合的靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述傳達還包括用于實施本文中所述的任一種方法的說明(instructions)或描述病毒轉(zhuǎn)移載體與靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑伴隨施用之益處的信息。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述方法還包括將靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑或病毒轉(zhuǎn)移載體或二者分發(fā)給實體。在另一個方面是包括以下的方法：確定伴隨施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體以在對象中產(chǎn)生減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答的頻率和劑量。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述方法還包括根據(jù)所確定的頻率和劑量指導(dǎo)向?qū)ο蟀殡S施用所述靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體。在另一個方面是包括以下的方法：確定與一個或更多個重復(fù)劑量的病毒轉(zhuǎn)移載體組合地伴隨施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體以在對象中產(chǎn)生減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答的頻率和劑量。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述方法還包括根據(jù)所確定的頻率和劑量指導(dǎo)向?qū)ο蟀殡S施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體，以及施用一個或更多個重復(fù)劑量的病毒轉(zhuǎn)移載體。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述方法還包括在向?qū)ο蟀殡S施用所述靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體以及施用所述一個或更多個重復(fù)劑量的病毒轉(zhuǎn)移載體之前，指導(dǎo)向所述對象施用所述病毒轉(zhuǎn)移載體的劑量。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述對象是先前沒有施用病毒轉(zhuǎn)移載體的對象。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述對象是先前已經(jīng)施用了不超過一次病毒轉(zhuǎn)移載體的對象。在所提供的任一種方法的一個實施方案中，重復(fù)劑量中的病毒轉(zhuǎn)移載體的量至少等于先前劑量中病毒轉(zhuǎn)移載體的量。在所提供的任一種方法的一個實施方案中，重復(fù)劑量中的病毒轉(zhuǎn)移載體的量小于先前劑量中病毒轉(zhuǎn)移載體的量。在所提供的任一種方法的一個實施方案中，靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑還與一個或更多個重復(fù)劑量的病毒轉(zhuǎn)移載體伴隨施用于對象。在所提供的任一種方法的一個實施方案中，靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑不還與病毒轉(zhuǎn)移載體的一個或更多個重復(fù)劑量中的至少一個伴隨施用于對象。在所提供的任一種方法的一個實施方案中，所述對象不具有針對病毒轉(zhuǎn)移載體的預(yù)先存在的免疫力。在所提供的任一種方法的一個實施方案中，所述伴隨施用是同時施用。在所提供的任一種方法的一個實施方案中，所述方法還包括確定對象中針對病毒轉(zhuǎn)移載體的預(yù)先存在的免疫力水平。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述病毒轉(zhuǎn)移載體是逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)移載體、腺病毒轉(zhuǎn)移載體、慢病毒轉(zhuǎn)移載體或腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)移載體。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述病毒轉(zhuǎn)移載體是腺病毒轉(zhuǎn)移載體，并且所述腺病毒轉(zhuǎn)移載體是亞組A、亞組B、亞組C、亞組D、亞組E或亞組F腺病毒轉(zhuǎn)移載體。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述病毒轉(zhuǎn)移載體是慢病毒轉(zhuǎn)移載體，并且所述慢病毒轉(zhuǎn)移載體是HIV、SIV、FIV、EIAV或綿羊慢病毒載體。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述病毒轉(zhuǎn)移載體是腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)移載體，并且所述腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)移載體是AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10或AAV11腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)移載體。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述病毒轉(zhuǎn)移載體是嵌合病毒轉(zhuǎn)移載體。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述嵌合病毒轉(zhuǎn)移載體是AAV-腺病毒轉(zhuǎn)移載體。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因編碼DNA結(jié)合蛋白或治療性RNA。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述DNA結(jié)合蛋白是人工轉(zhuǎn)錄因子。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，治療性RNA是mRNA翻譯抑制劑、RNA干擾(RNAinterference，RNAi)劑、催化活性RNA分子(核酶)、轉(zhuǎn)移RNA(tRNA)或結(jié)合蛋白質(zhì)或其他分子配體的RNA(適配體)。在本文中提供的任一方法的一個實施方案中，RNAi劑是雙鏈RNA、單鏈RNA、微RNA、短干擾RNA、短發(fā)夾RNA或三鏈體形成寡核苷酸。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑包含紅細胞結(jié)合治療劑。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，紅細胞結(jié)合治療劑包含ERY1、ERY19、ERY59、ERY64、ERY123、ERY141和ERY162。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，紅細胞結(jié)合治療劑還包含病毒轉(zhuǎn)移載體抗原。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述病毒轉(zhuǎn)移載體抗原是病毒抗原。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑包含帶負電荷的顆粒。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述帶負荷的電顆粒是聚苯乙烯、PLGA或金剛石顆粒。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，顆粒的ζ電位為負。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，顆粒的ζ電位低于-50mV。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，顆粒的ζ電位低于-100mV。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑包含凋亡小體模擬物和一種或更多種病毒轉(zhuǎn)移載體抗原。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述凋亡小體模擬物是包含一種或更多種病毒轉(zhuǎn)移載體抗原的顆粒。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述一種或更多種病毒轉(zhuǎn)移載體抗原包含一種或更多種病毒抗原。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述顆粒還可包含凋亡信號分子。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述顆粒包含聚乙醇酸聚合物(PGA)、聚乳酸聚合物(PLA)、聚癸二酸聚合物(PSA)、聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)、聚乳酸-癸二酸共聚物(PLSA)、聚乙醇酸-癸二酸共聚物(PGSA)、聚丙交酯-乙交酯共聚物(PLG)或聚乙二醇(PEG)。在本文中提供的任一方法的一個實施方案中，所述顆粒的平均直徑為0.1至5μm、0.1至4μm、0.1至3μm、0.1至2μm、0.1至1μm或0.1至500nm。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑包含含有免疫抑制劑的合成納米載體。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述合成納米載體還包含病毒轉(zhuǎn)移載體抗原。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，病毒轉(zhuǎn)移載體抗原是病毒抗原。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，免疫抑制劑和/或抗原(如果存在的話)包封在合成納米載體中。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述合成納米載體包含脂質(zhì)納米顆粒、聚合物納米顆粒、金屬納米顆粒、基于表面活性劑的乳液、樹枝狀聚合物、巴基球(buckyball)、納米線、病毒樣顆?；蛘唠幕虻鞍踪|(zhì)顆粒。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述合成納米載體包含聚合物納米顆粒。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述聚合物納米顆粒包含聚合物，其作非甲氧基封端的普朗尼克聚合物。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述聚合物納米顆粒包含聚酯、與聚醚連接的聚酯、聚氨基酸、聚碳酸酯、聚縮醛、聚縮酮、多糖、聚乙基唑啉或聚乙烯亞胺。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述聚酯包含聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚乳酸-乙醇酸共聚物或聚己內(nèi)酯。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述聚合物納米顆粒包含聚酯和與聚醚連接的聚酯。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述聚醚包含聚乙二醇或聚丙二醇。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，使用合成納米載體群體的動態(tài)光散射獲得的粒度分布的均值是大于110nm的直徑。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述直徑大于150nm。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述直徑大于200nm。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述直徑大于250nm。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述直徑小于5μm。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述直徑小于4μm。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述直徑小于3μm。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述直徑小于2μm。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述直徑小于1μm。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述直徑小于500nm。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述直徑小于450nm。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述直徑小于400nm。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述直徑小于350nm。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述直徑小于300nm。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，包含在合成納米載體中的免疫抑制劑的載荷在所述合成納米載體中平均為0.1％至50％(重量/重量)。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，載荷為0.1％至25％。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，載荷為1％至25％。在本文中提供的任一方法的一個實施方案中，載荷為2％至25％。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，免疫抑制劑是NF-kB途徑的抑制劑。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，免疫抑制劑是雷帕霉素。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，合成納米載體群體的縱橫比(aspectratio)大于1∶1、1∶1.2、1∶1.5、1∶2、1∶3、1∶5、1∶7或1∶10。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述方法還包括按照減弱抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答(例如抗體、T細胞或B細胞應(yīng)答)、提高轉(zhuǎn)基因表達或建立抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答的方案執(zhí)行所述方法。在本文中提供的任一種方法的一個實施方案中，所述方法還包括確定減弱抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答(例如抗體、T細胞或B細胞應(yīng)答)、提高轉(zhuǎn)基因表達或者建立抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答的方案。在所提供的任一種方法的另一個實施方案中，所述方法還包括在向?qū)ο笫┯弥?、期間或之后評估針對病毒轉(zhuǎn)移載體的抗體免疫應(yīng)答。在另一方面，提供了任一實施例中所述的方法或組合物。在另一方面，將所述組合物中的任一種用于所提供的任一種方法。在另一方面，將任一種所述方法用于治療本文中所述的任一種疾病或病癥。在另一方面，將任一種所述方法用于減弱抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答、建立減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答、提高轉(zhuǎn)基因表達或者用于重復(fù)施用病毒轉(zhuǎn)移載體。附圖簡述圖1顯示在致敏(prime)或加強時，在注射了具有或不具有包含雷帕霉素之合成納米載體的AAV的小鼠的肝中的GFP表達。已經(jīng)分析了懸液中的所有細胞的GFP表達，除了由第一“凈”門排除的高側(cè)向散射碎片(總量的2-3％，其為膠原酶處理的副產(chǎn)物)。所有剩余的細胞被針對相對GFP強度(FL-1通道)設(shè)門(gate)。顯示的數(shù)字代表總的親本群體的GFP陽性細胞的百分比。圖2顯示了作為具有或不具有包含雷帕霉素之合成納米載體的加強功能的經(jīng)AAV注射小鼠肝中的GFP表達。所呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)與圖1中相同，但是根據(jù)所采用的AAV加強是否與包含雷帕霉素之合成納米載體共施用來進行分組(來自組5和6的未加強的樣品也顯示為單獨的“超組”)。圖3示出了以具有或不具有包含雷帕霉素之合成納米載體的AAV注射的動物的肝中的GFP高細胞份額。對GFP陽性細胞(如圖1中所示)設(shè)門，然后再對具有比親本群體中平均值高10倍的平均GFP熒光強度的群體設(shè)門。所呈現(xiàn)的數(shù)字是來自親本GFP陽性群體的百分比，如圖1中所示。圖4顯示來自實驗的結(jié)果，其中在接受了與或不與包含雷帕霉素之合成納米載體共施用的單次AAV-GFP接種后在第14天處對小鼠進行放血，并測定其血清的AAV抗體。顯示所有小鼠的1∶40血清稀釋度的最高OD。背景正常小鼠血清的OD為0.227。圖5顯示了來自實驗的結(jié)果，其中在接受了與或不與包含雷帕霉素之合成納米載體共施用的單次AAV-GFP接種后(i.v.)，在第14、21和33天對小鼠進行放血，并測定其血清的AAV抗體。顯示所有小鼠的1∶40血清稀釋度的最高OD。顯示了背景正常小鼠血清活性。使用雙因素方差分析(two-wayANOVA)計算統(tǒng)計學(xué)顯著性。圖6顯示了來自實驗的結(jié)果，其中在第0和21天與或不與包含雷帕霉素之合成納米載體共施用地注射AAV-GFP(i.v.)，然后在第14和33天放血，并測定其血清的AAV抗體。顯示所有小鼠的1∶40血清稀釋度的最高OD。顯示了背景正常小鼠血清活性。使用雙因素方差分析計算統(tǒng)計學(xué)顯著性。圖7提供了與圖6相同的數(shù)據(jù)，其中顯示了各小鼠的讀數(shù)。僅在加強免疫接種(第21天)時以包含雷帕霉素之合成納米載體處理的組中的兩只小鼠在第33天沒有顯示可檢出的抗體，盡管在第14天是陽性的(實線箭頭)。在致敏時用含有雷帕霉素的合成納米載體處理的兩組中均有5只小鼠之一在第33天具有可檢出的抗體水平(虛線箭頭)，而來自以包含雷帕霉素之合成納米載體處理的組中的小鼠在致敏和加強時均具有較低的抗體水平(空心菱形)。圖8顯示來自實驗的結(jié)果，其中在接受與或不與包含雷帕霉素之合成納米載體共施用的單次AAV-GFP接種后在第14天對小鼠進行放血，并且測定其血清中的AAV抗體。顯示所有小鼠的1∶40血清稀釋度的最高OD。背景正常小鼠血清的OD為0.227。N＝15只小鼠/組。圖9顯示了實驗的結(jié)果，其中在接受與或不與包含雷帕霉素之合成納米載體共施用的單次AAV-GFP接種后(i.v.)，在第14、21和33天對小鼠進行放血，并測定其血清中的AAV抗體。顯示所有小鼠的1∶40血清稀釋度的最高OD。顯示了背景正常小鼠血清水平。使用雙因素方差分析計算統(tǒng)計學(xué)顯著性。在第14天時N＝15只小鼠/組，并且在第21和33天時為5只小鼠/組。圖10示出了來自實驗的結(jié)果，其中在第0和21天與或不與包含雷帕霉素之合成納米載體共施用地以AAV8-GFP進行一次或兩次注射(i.v.)，如所示，然后在第14和33天放血。通過ELISA測定血清中的抗AAV8抗體。顯示所有小鼠的1∶40血清稀釋的OD。正常小鼠血清的背景水平由虛線指示。使用雙因素方差分析計算統(tǒng)計學(xué)顯著性。圖11顯示在致敏或加強時，在以具有或不具有包含雷帕霉素之合成納米載體注射的AAV的小鼠的肝中的GFP表達。已經(jīng)分析了懸液中的所有細胞的GFP表達，除了由第一“凈”門排除的高側(cè)向散射碎片(總量的2-3％，其為膠原酶處理的副產(chǎn)物)。所有剩余的細胞被針對相對GFP強度(FL-1通道)設(shè)門。顯示的數(shù)字代表總的親本群體的GFP陽性細胞的百分比。圖12顯示在致敏和/或加強時，在以具有或不具有包含雷帕霉素之合成納米載體注射的AAV的小鼠的肝中的RFP表達。已經(jīng)分析了懸液中的所有細胞的RFP表達，除了高側(cè)向散射碎片以外。顯示的數(shù)字代表肝細胞的總親本群體的RFP陽性細胞的百分比。圖13顯示了以單獨的AAV-GFP或與包含雷帕霉素之合成納米載體組合免疫接種的小鼠中的細胞毒活性。在第0和21天用具有或不具有包含雷帕霉素之合成納米載體的AAV8-GFP(i.v.)注射動物。在最后一次注射后第7天(第28天)施用以來自AAV衣殼蛋白的顯性細胞毒性肽和GFP轉(zhuǎn)基因的組合脈沖的靶細胞，并在18小時后測量它們的生存力，并與無肽脈沖對照細胞的活力進行比較。圖14顯示用單獨的AAV-GFP或與包含雷帕霉素之合成納米載體組合免疫接種的小鼠中的AAV特異性IFN-γ產(chǎn)生。在第0和17天以具有或不具有NCS的AAV-GFP(i.v.)注射動物。在第25天分離脾細胞，并在體外與來自AAV衣殼蛋白的顯性MHCI類結(jié)合肽孵育7天，然后通過ELISpot用相同的肽進行測定。每個樣品一式兩份，并減除背景地顯示。圖15顯示用單獨的AAV-GFP或與包含雷帕霉素之合成納米載體組合免疫接種的小鼠中的GFP特異性IFN-γ產(chǎn)生。在第0和17天用具有或不具有包含雷帕霉素之合成納米載體的AAV8-GFP(i.v.)注射動物。分離脾細胞并在體外與來自GFP的MHCI類結(jié)合肽一起孵育7天，然后通過ELISpot用相同的肽進行測定。每個樣品一式兩份，并減除背景地顯示。圖16顯示了實驗的設(shè)計。圖17顯示來自實驗的結(jié)果，其中在第0天與或不與帶有100μg雷帕霉素的合成納米載體共施用地以rAAV2/8-螢光素酶注射小鼠(i.v.)，并且隨后在第14天以i.v.注射AAV-hFIX攻擊小鼠。在指定的多個時間點收集血清，并測定抗AAV8抗體(左)和人因子IX蛋白的水平(右)。圖18顯示了實驗的實驗設(shè)計。圖19顯示來自實驗的結(jié)果，其中對雄性C57BL/6小鼠在第0天與帶有100μg雷帕霉素的合成納米載體伴隨注射(i.v.)rAAV2/8-螢光素酶，然后在第21天與帶有100μg雷帕霉素的合成納米載體伴隨注射rAAV2/8-hFIX。類似地處理對照動物，但用空納米載體代替包含雷帕霉素之合成納米載體。如所指示在不同時間點收集血清，并通過ELISA測定AAV抗體(左)和人FIX蛋白的水平(右)。通過PCR確定肝中的AAV2/8-FIX載體拷貝數(shù)(中間)。圖20顯示了實驗的實驗設(shè)計。圖21提供的結(jié)果表明：在第0天相伴隨地i.v.施用帶有雷帕霉素的合成納米載體和rAAV2/8載體(AAV2/8-Luc)對于在第21天施用的AAV5載體(AAV5-hFIX)的抗體應(yīng)答沒有顯著影響。相反，結(jié)果還顯示在第0天以包含雷帕霉素之合成納米載體和rAAV2/8-Luc伴隨地處理的小鼠在第21天顯示出對在完全弗氏佐劑(completeFreund’sadjuvant，CFA)中的重組hFIX蛋白之免疫接種的穩(wěn)健應(yīng)答。發(fā)明詳述在詳細描述本發(fā)明之前，應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明不限于特別示例的材料或工藝參數(shù)，因為這些當(dāng)然可以改變。還應(yīng)當(dāng)理解，本文中使用的術(shù)語僅是為了描述本發(fā)明的具體實施方案的目的，并且不旨在限制使用替代性術(shù)語來描述本發(fā)明。本文中引用的所有出版物、專利和專利申請(無論上文中或下文中)，出于所有目的通過引用整體并入本文。這種通過引用的并入不旨在承認本文中引用的任何所并入的出版物、專利和專利申請構(gòu)成現(xiàn)有技術(shù)。除非內(nèi)容另有明確規(guī)定，本說明書和所附權(quán)利要求中使用的沒有數(shù)量詞修飾的名詞表示一個/種或更多個/種。例如，提及“聚合物”包括兩種或更多種這樣的分子的混合物或不同分子量的單一聚合物種類的混合物；提及“合成納米載體”包括兩種或更多種這樣的合成納米載體的混合物或多種這樣的合成納米載體；提及“DNA分子”包括兩種或更多種這樣的DNA分子的混合物或多種這樣的DNA分子；提及“免疫抑制劑”包括兩種或更多種此類免疫抑制劑分子的混合物或多種此類免疫抑制劑分子等。本文中使用的術(shù)語“包括/包含”或其變化形式應(yīng)理解為指明包括任何所列舉的整體(例如特征、要素、特性、性質(zhì)、方法/工藝步驟或限制)或整體(例如特征、要素、特性、性質(zhì)、方法/工藝步驟或限制)的組，但不排除任何其他整體或整體的組。因此，本文中使用的術(shù)語“包括/包含”是包括性的，并且不排除另外的未列舉的整體或方法/工藝步驟。在本文中提供的任何組合物和方法的一些實施方案中，“包括/包含”可以用“基本上由……組成”或“由……組成”代替。短語“基本上由……組成”在本文中用于要求指定的整體或步驟以及不會實質(zhì)上影響所要求保護的發(fā)明的特征或功能的那些。本文中使用的術(shù)語“由……組成”用于指示僅存在所列舉的整體(例如特征、要素、特性、性質(zhì)、方法/工藝步驟或限制)或整體(例如特征、要素、特性、性質(zhì)、方法/工藝步驟或限制)的組。A.引言抗病毒轉(zhuǎn)移載體是用于多種應(yīng)用的有希望的治療劑，所述應(yīng)用例如基因表達調(diào)節(jié)。因此，病毒轉(zhuǎn)移載體可以包含編碼蛋白質(zhì)或核酸的轉(zhuǎn)基因。這樣的實例包括微RNA(microRNA，miRNA)、小干擾RNA(smallinterferingRNA，siRNA)，以及結(jié)合信使RNA中的突變位點的反義寡核苷酸(例如小核RNA(smallnuclearRNA，snRNA))。遺憾的是，對這些治療劑的希望在本領(lǐng)域中還沒有實現(xiàn)，這在很大程度上是由于針對病毒轉(zhuǎn)移載體的細胞和體液免疫應(yīng)答。這些免疫應(yīng)答包括抗體、B細胞和T細胞應(yīng)答，并且可以特異性針對病毒轉(zhuǎn)移載體的病毒抗原(例如病毒衣殼或外殼蛋白或者其肽)。目前，許多可能的患者具有針對病毒轉(zhuǎn)移載體所基于的病毒的一定水平的預(yù)先存在的免疫力。事實上，針對病毒抗原的抗體(例如抗腺相關(guān)病毒的抗體)在人群中是高度普遍的。此外，即使預(yù)先存在的免疫力水平低，例如由于病毒轉(zhuǎn)移載體的低免疫原性，這樣低的水平仍然可以阻止成功轉(zhuǎn)導(dǎo)(例如Jeune，等，HumanGeneTherapyMethods，24：59-67(2013))。因此，甚至低水平的預(yù)先存在的免疫力也可能阻礙特定病毒轉(zhuǎn)移載體的使用，并且可能需要臨床醫(yī)生基于不同血清型的病毒選擇病毒轉(zhuǎn)移載體，這可能不是有效的；或如果另一種病毒轉(zhuǎn)移載體治療不可用，甚至選擇不同類型的治療。另外，病毒載體(例如腺相關(guān)載體)可以是高度免疫原性的，并引發(fā)體液和細胞介導(dǎo)的免疫，這可損害效力，特別是在再施用的情況下。事實上，針對病毒轉(zhuǎn)移載體的細胞和體液免疫應(yīng)答可在單次施用病毒轉(zhuǎn)移載體后產(chǎn)生。在施用病毒轉(zhuǎn)移載體后，中和抗體滴度可以提高并保持高水平達幾年，并且可以降低病毒轉(zhuǎn)移載體再施用的有效性，因為重復(fù)施用病毒轉(zhuǎn)移載體通常導(dǎo)致增強的不希望的免疫應(yīng)答。此外，可能出現(xiàn)病毒轉(zhuǎn)移載體特異性CD8+T細胞，其例如在重新暴露于病毒抗原(例如衣殼蛋白)時消除表達期望轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)細胞。事實上，已經(jīng)顯示AAV衣殼抗原觸發(fā)了以AAV病毒轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的肝細胞的免疫介導(dǎo)的破壞(例如Manno等，NatureMedicine，Vol.12，No.3，2006)。對于許多治療應(yīng)用，預(yù)期將需要多輪施用病毒轉(zhuǎn)移載體以獲得長期益處，并且在沒有本文中提供的方法和組合物的情況下，預(yù)期這樣做的能力受到嚴重限制，特別是如果需要再施用的情況下。與將病毒轉(zhuǎn)移載體用于治療相關(guān)的問題進一步變得復(fù)雜，因為病毒轉(zhuǎn)移載體抗原可以在單次施用后持續(xù)一段時間，例如至少幾周(例如Nathawani等，NEnglJMed365；25，2011；Nathwani，等，NEnglJMed371；21，2014)。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在接受腺相關(guān)病毒血清型8(adeno-associatedvirusserotype8，AAV8)病毒轉(zhuǎn)移載體的單次輸注的患者中產(chǎn)生的持久的衣殼特異性體液免疫(例如Nathwani，等，NEnglJMed371；21，2014)?？乖某志眯赃M一步阻礙了成功使用病毒轉(zhuǎn)移載體的能力。避免對病毒轉(zhuǎn)移載體的免疫應(yīng)答是重要的，以便成功地用病毒轉(zhuǎn)移載體進行治療。然而，在本發(fā)明之前，沒有辦法這樣做并實現(xiàn)長期免疫應(yīng)答減弱而不需要長期施用免疫抑制劑。本發(fā)明人令人驚訝地和出人意料地發(fā)現(xiàn)，上述問題和限制可以通過實施本文中公開的本發(fā)明來克服。提供了為前述障礙給出解決方案以有效將病毒轉(zhuǎn)移載體用于治療的方法和組合物。特別地，已出人意料地發(fā)現(xiàn)，可以用本文中提供的方法和相關(guān)組合物減弱抗病毒轉(zhuǎn)移載體的免疫應(yīng)答。所述方法和組合物可以提高用病毒轉(zhuǎn)移載體治療的效力，并提供長期免疫減弱，即使在需要重復(fù)施用病毒轉(zhuǎn)移載體的情況下。現(xiàn)在將在下文中更詳細地描述本發(fā)明。B.定義“施用”是指以藥理學(xué)可用的方式向?qū)ο蠼o予或分配材料。該術(shù)語旨在包括“導(dǎo)致被施用”?！皩?dǎo)致被施用”意指直接或間接地導(dǎo)致、敦促、鼓勵、輔助、誘導(dǎo)或指導(dǎo)另一方施用該材料。本文中提供的任一種方法可以包括或另外包括伴隨施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體的步驟。在一些實施方案中，重復(fù)地進行伴隨施用。在另一些實施方案中，伴隨施用是同時施用。在本文中提供的用于向?qū)ο笫┯玫慕M合物或劑型的上下文中，“有效量”是指在對象中產(chǎn)生一種或更多種期望結(jié)果的組合物或劑型的量，所述結(jié)果例如，降低或消除針對病毒轉(zhuǎn)移載體的免疫應(yīng)答或產(chǎn)生減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答。有效量可以用于體外或體內(nèi)目的。對于體內(nèi)目的，所述量可以是臨床醫(yī)生認為對于可能由于施用病毒轉(zhuǎn)移載體而經(jīng)歷不期望免疫應(yīng)答的對象具有臨床益處的量。在本文中提供的任一種方法中，所施用的組合物可以是以本文中提供的任一種有效量來施用。有效量可涉及降低不期望免疫應(yīng)答的水平，盡管在一些實施方案中，其涉及完全防止不期望的免疫應(yīng)答。有效量還可以涉及延遲不期望的免疫應(yīng)答的發(fā)生。有效量也可以是導(dǎo)致期望治療終點或期望治療結(jié)果的量。有效量優(yōu)選導(dǎo)致對象中對抗原(如病毒轉(zhuǎn)移載體抗原)的致耐受性免疫應(yīng)答。有效量也可以優(yōu)選導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因表達提高(轉(zhuǎn)基因由病毒轉(zhuǎn)移載體遞送)。這可以通過測量對象中的多種目的組織或系統(tǒng)中的轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)濃度來確定。可以局部或全身測量這種表達的提高?？梢酝ㄟ^常規(guī)方法監(jiān)測上述任何方法的實現(xiàn)。在所提供的任一種組合物和方法中的一些實施方案中，有效量是使其中期望免疫應(yīng)答(例如降低或消除針對病毒轉(zhuǎn)移載體的免疫應(yīng)答或產(chǎn)生減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答)在對象中持續(xù)至少1周、至少2周或至少1個月的量。在所提供的任一種組合物和方法中的另一些實施方案中，有效量是產(chǎn)生可測量的期望免疫應(yīng)答的量，例如降低或消除針對病毒轉(zhuǎn)移載體的免疫應(yīng)答或產(chǎn)生減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答。在一些實施方案中，有效量是產(chǎn)生可測量的期望免疫應(yīng)答(例如，針對特定病毒轉(zhuǎn)移載體抗原)至少1周、至少2周或至少1個月的量。有效量將當(dāng)然地取決于所治療的特定對象；病癥、疾病或障礙的嚴重性；個體患者參數(shù)包括年齡、身體狀況、身材和體重；治療的持續(xù)時間；共存治療的性質(zhì)(如果有的話)；具體的施用途徑和在健康從業(yè)者的知識和專長內(nèi)的類似因素。這些因素是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的，并且可以僅通過常規(guī)實驗來解決?！翱共《巨D(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答”或“針對病毒轉(zhuǎn)移載體的免疫應(yīng)答”等是指針對病毒轉(zhuǎn)移載體的任何不期望的免疫應(yīng)答。在一些實施方案中，不期望的免疫應(yīng)答是針對病毒轉(zhuǎn)移載體或其抗原的抗原特異性免疫應(yīng)答。在一些實施方案中，免疫應(yīng)答對病毒轉(zhuǎn)移載體的病毒抗原是特異性的。在另一些實施方案中，免疫應(yīng)答對于由病毒轉(zhuǎn)移載體的轉(zhuǎn)基因編碼的蛋白質(zhì)或肽是特異性的。在一些實施方案中，免疫應(yīng)答特異性針對病毒轉(zhuǎn)移載體的病毒抗原，而不是由病毒轉(zhuǎn)移載體的轉(zhuǎn)基因編碼的蛋白質(zhì)或肽。免疫應(yīng)答可以是抗病毒轉(zhuǎn)移載體抗體應(yīng)答、抗病毒轉(zhuǎn)移載體T細胞免疫應(yīng)答，例如CD4+T細胞或CD8+T細胞免疫應(yīng)答或抗病毒轉(zhuǎn)移載體B細胞免疫應(yīng)答。當(dāng)在對象中，或與所述對象或另一對象中的預(yù)期或測量的應(yīng)答相比，抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答以某種方式降低或消除時，則被稱為“減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答”。在一些實施方案中，對象中的減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答包括：相比于抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答B(yǎng)而言降低的抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答A(例如T細胞、B細胞或抗體應(yīng)答)，其中所述抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答A為使用從經(jīng)過本文中提供的伴隨施用之后的對象中所獲得的生物樣品所測得，且所述抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答B(yǎng)為在將病毒轉(zhuǎn)移載體施用于另一個對象(例如測試對象)而未伴隨施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑之后，使用從所述另一個對象中獲得的生物樣品所測得。在一些實施方案中，在向另一個對象施用病毒轉(zhuǎn)移載體而未施用任何靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑之后，從所述另一對象中獲得所述生物樣品。在一些實施方案中，所述減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答是相比于抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答B(yǎng)而言降低的抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答A(例如T細胞、B細胞或抗體應(yīng)答)，其中所述抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答A為在如本文中所提供的伴隨施用后，在對對象的生物樣品進行隨后的病毒轉(zhuǎn)移載體體外攻擊后從所述對象中獲得的生物樣品中的免疫應(yīng)答；所述抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答B(yǎng)是在將病毒轉(zhuǎn)移載體施用于另一個對象(例如測試對象)而未伴隨施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑之后，對從所述另一個對象中獲得的生物樣品進行病毒轉(zhuǎn)移載體體外攻擊后所檢測的免疫應(yīng)答。在一些實施方案中，所述減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答是相比于抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答B(yǎng)而言降低的抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答A(例如T細胞、B細胞或抗體應(yīng)答)，其中所述抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答A是在如本文中所提供的伴隨施用之后，對所述對象施用病毒轉(zhuǎn)移載體攻擊后在所述對象中的免疫應(yīng)答；所述抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答B(yǎng)是在將病毒轉(zhuǎn)移載體施用于另一個對象(例如測試對象)而未伴隨施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑之后，對所述另一個對象施用隨后的病毒轉(zhuǎn)移載體攻擊后在所述另一個對象中的免疫應(yīng)答。在一些實施方案中，在不施用任何靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑的情況下施用病毒轉(zhuǎn)移載體。“抗原”是指B細胞抗原或T細胞抗原?！翱乖愋汀币庵腹蚕硐嗤蚧旧舷嗤目乖卣鞯姆肿?。在一些實施方案中，抗原可以是蛋白質(zhì)、多肽、肽、脂蛋白、糖脂、多核苷酸、多糖等?！鞍邢蚩乖蔬f細胞之免疫抑制劑”意指導(dǎo)致產(chǎn)生具有致耐受性作用的抗原呈遞細胞(antigen-presentingcell，APC)的試劑。這種免疫抑制劑可以包括與導(dǎo)致遞送至APC并導(dǎo)致致耐受性作用的載體相偶聯(lián)的免疫抑制劑，以及憑借其形式或特征可導(dǎo)致APC致耐受性作用的試劑。靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑的實例包括但不限于包含本文中所述的免疫抑制劑的合成納米載體；與靶向APC的抗體或其抗原結(jié)合片段(或靶向APC的其他配體)偶聯(lián)的如本文中所述的免疫抑制劑、紅細胞結(jié)合治療劑，以及通過其特征導(dǎo)致APC致耐受性免疫應(yīng)答的顆粒等。當(dāng)靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑是與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體時，在一些實施方案中，免疫抑制劑是除了構(gòu)成合成納米載體的結(jié)構(gòu)的材料之外的要素。例如，在一個實施方案中，其中合成納米載體由一種或更多種聚合物構(gòu)成，則免疫抑制劑是附加的并且在一些實施方案中與所述一種或更多種聚合物連接的化合物。作為另一個實例，在一個實施方案中，其中合成納米載體由一種或更多種脂質(zhì)構(gòu)成，則免疫抑制劑也還是附加于其中的，并且在一些實施方案中，與一種或更多種脂質(zhì)連接。在這樣的一些實施方案中，其中靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑是與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體，并且合成納米載體的材料也導(dǎo)致致耐受作用，則免疫抑制劑是除了導(dǎo)致致耐受性作用的合成納米載體的材料之外存在的要素?！翱乖禺愋浴笔侵赣赡康目乖拇嬖谒鶎?dǎo)致的，或產(chǎn)生特異性識別或結(jié)合目的抗原的分子的免疫應(yīng)答。一般而言，雖然這種應(yīng)答針對目的抗原是可測量的，但對于其他抗原的應(yīng)答則降低或可忽略不計。例如，當(dāng)免疫應(yīng)答產(chǎn)生抗原特異性抗體時，其產(chǎn)生選擇性結(jié)合目的抗原但不與其他抗原結(jié)合的抗體。作為另一個實例，其中免疫應(yīng)答涉及CD4+或CD8+T細胞的產(chǎn)生，則在MHCI類或II類抗原呈遞的情況下，抗原特異性CD4+或CD8+T細胞可通過抗原呈遞細胞(APC)，或在CD8+T細胞的情況下通過其中產(chǎn)生抗原的任何其他細胞(例如以病毒感染的細胞)，分別與目的抗原或其一部分結(jié)合。在免疫耐受的情況下，抗原特異性是指相對于其他不相關(guān)或未關(guān)聯(lián)抗原(例如，在時間上或在空間上與靶抗原錯位的抗原)，針對靶抗原的特異性免疫應(yīng)答的選擇性預(yù)防或抑制?！霸u估免疫應(yīng)答”是指對于體外或體內(nèi)免疫應(yīng)答的水平、存在或不存在、降低、提高等的任何測量或測定。這樣的測量或測定可以對從對象獲得的一個或更多個樣品來進行。這樣的評估可以用本文中提供的或本領(lǐng)域中已知的任一種方法進行。所述評估可以是評估抗體或T細胞的數(shù)目或百分比，例如特異性針對病毒轉(zhuǎn)移載體的那些抗體或T細胞，例如在來自對象的樣品中的抗體或T細胞。所述評估還可以是評估與免疫應(yīng)答相關(guān)的任何效應(yīng)，例如測量細胞因子、細胞表型等的存在或不存在。本文中提供的任一種方法可以包括或另外包括評估針對病毒轉(zhuǎn)移載體或其抗原的免疫應(yīng)答的步驟。評估可以直接或間接進行。所述術(shù)語旨在包括導(dǎo)致、敦促、鼓勵、輔助、誘導(dǎo)或指導(dǎo)另一方評估免疫應(yīng)答的行動?！斑B接”或“連接的”或者“偶聯(lián)”或“偶聯(lián)的”(等)意指將一個實體(例如部分)與另一個實體經(jīng)化學(xué)結(jié)合。在一些實施方案中，所述連接是共價的，意指連接發(fā)生在兩個實體之間存在共價鍵的情況下。在一些非共價實施方案中，非共價連接由非共價相互作用介導(dǎo)，其包括但不限于電荷相互作用、親和力相互作用、金屬配位作用、物理吸附、主客體相互作用、疏水相互作用、TT堆疊相互作用、氫鍵相互作用、范德華相互作用、磁相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用和/或其組合。在一些實施方案中，封裝是連接的形式。除非另有說明，本文所用的“平均”是指算術(shù)均值?！鞍殡S地”是指以時間相關(guān)的方式向?qū)ο笫┯脙煞N或更多種材料/試劑，優(yōu)選在時間上充分相關(guān)，以提供免疫應(yīng)答中的調(diào)節(jié)，并且甚至更優(yōu)選地組合施用兩種或更多種材料/試劑。在一些實施方案中，伴隨施用可以包括在指定的時間段內(nèi)，優(yōu)選在1個月內(nèi)，更優(yōu)選在1周內(nèi)，還更優(yōu)選在1天內(nèi)，甚至更優(yōu)選在1小時內(nèi)施用兩種或更多種材料/試劑。在一些實施方案中，材料/試劑可以重復(fù)地伴隨施用，即伴隨施用多于一次，如實施例中所提供的?！按_定”意指客觀地確定某事物，例如事實、關(guān)系或數(shù)量。在一些實施方案中，可以確定對象是否對病毒轉(zhuǎn)移載體具有預(yù)先存在的免疫力。該術(shù)語旨在包括“導(dǎo)致被確定”?！皩?dǎo)致被確定”意指導(dǎo)致、敦促、鼓勵、幫助、誘導(dǎo)或指導(dǎo)另一方執(zhí)行如本文中所提供的確定步驟。在一些實施方案中，確定步驟可以是確定對象是否對病毒轉(zhuǎn)移載體具有預(yù)先存在的免疫力。本文中提供的任一種方法可以包括或另外包括如本文中所述的確定步驟，包括確定對象是否對病毒轉(zhuǎn)移載體具有預(yù)先存在的免疫力的步驟?！爸笇?dǎo)”意指影響，例如采取某種行動來以某種方式影響另一方的行為，例如以這樣的方式引起或控制另一方的行為，以使得他們執(zhí)行如本文中所提供的一個或更多個步驟。在一些實施方案中，另一方是正在進行指導(dǎo)的一方的代理。在另一些實施方案中，另一方不是正在進行指導(dǎo)的一方的代理，但由另一方所執(zhí)行的步驟可歸因于指導(dǎo)或是指導(dǎo)的結(jié)果。因此，指導(dǎo)包括指示或提供指令以執(zhí)行一個或更多個步驟，以便收獲以所述一個或更多個步驟的執(zhí)行為條件的益處?！皠┬汀币庵冈谶m于施用于對象的介質(zhì)、載體、載劑或裝置中的藥理學(xué)和/或免疫學(xué)活性材料。本文中提供的任一種組合物或劑量可以是劑型的形式?！皠┝俊笔侵冈诮o定時間內(nèi)向?qū)ο笫┯玫乃幚韺W(xué)和/或免疫學(xué)活性物質(zhì)的具體量?！霸谙葎┝俊笔侵覆牧系妮^早劑量。一般而言，本發(fā)明的方法和組合物中靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和/或病毒轉(zhuǎn)移載體的劑量是指靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和/或病毒轉(zhuǎn)移載體的量?；蛘撸谄渲邪邢蚩乖蔬f細胞之免疫抑制劑是包含免疫抑制劑的合成納米載體的情況下，可以基于提供期望量之靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑的合成納米載體的數(shù)目來施用劑量。當(dāng)在重復(fù)劑量的情況下使用劑量時，劑量是指每個重復(fù)劑量的量，其可以相同或不同?！胺庋b”意指將至少一部分物質(zhì)包封在合成納米載體內(nèi)。在一些實施方案中，物質(zhì)完全包封在合成納米載體內(nèi)。在另一些實施方案中，被封裝的物質(zhì)的大部分或全部不暴露于合成納米載體外部的局部環(huán)境。在另一些實施方案中，不超過50％、40％、30％、20％、10％或5％(重量/重量)暴露于局部環(huán)境。封裝不同于吸收，后者將大部分或全部物質(zhì)置于合成納米載體的表面上，并使物質(zhì)暴露于合成納米載體外部的局部環(huán)境。“提高轉(zhuǎn)基因表達”是指提高對象中病毒轉(zhuǎn)移載體的轉(zhuǎn)基因表達產(chǎn)物的水平，所述轉(zhuǎn)基因由病毒轉(zhuǎn)移載體遞送。在一些實施方案中，轉(zhuǎn)基因表達產(chǎn)物的水平可以通過測量對象的多種目的組織或系統(tǒng)中的轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)濃度來確定。或者，當(dāng)轉(zhuǎn)基因表達產(chǎn)物是核酸時，轉(zhuǎn)基因表達的水平可以通過轉(zhuǎn)基因核酸產(chǎn)物測量?？梢岳缤ㄟ^測量從對象中獲得的樣品中的轉(zhuǎn)基因表達產(chǎn)物的量并將其與先前樣品進行比較來確定轉(zhuǎn)基因表達提高。樣品可以是組織樣品。在一些實施方案中，可以使用流式細胞術(shù)測量轉(zhuǎn)基因表達產(chǎn)物?！敖ⅰ币庵府a(chǎn)生成果或結(jié)果或推斷出某事物，例如事實或關(guān)系。基于使用該術(shù)語的情況，該術(shù)語的用途將是顯而易見的。為了產(chǎn)生成果或結(jié)果，可以以多種方式完成建立，其包括但不限于采取措施來完成成果或結(jié)果。例如，在一些實施方案中，施用如本文中所提供的材料可產(chǎn)生成果或結(jié)果。為了確定某事物，例如事實或關(guān)系，建立可以通過進行實驗、執(zhí)行設(shè)計等來完成。例如，可以基于關(guān)于對象的實驗結(jié)果來建立“施用病毒轉(zhuǎn)移載體可能在對象中產(chǎn)生抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答”，所述結(jié)果包括關(guān)于從對象獲得的一個或更多個樣品的結(jié)果。一般而言，在對象中產(chǎn)生抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答的可能性是在不施用如本文中提供的靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑的情況下，在施用(或在一些實施方案中重復(fù)施用)病毒轉(zhuǎn)移載體后產(chǎn)生這種應(yīng)答的可能性。同樣，還可以基于關(guān)于對象的實驗結(jié)果來建立“對象對病毒轉(zhuǎn)移載體具有預(yù)先存在的免疫力”，所述結(jié)果包括關(guān)于從對象中獲得的一個或更多個樣品的結(jié)果。在另一個實施方案中，這樣的建立可以通過評估對象中的免疫應(yīng)答來確定。關(guān)于建立施用劑量，靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑或病毒轉(zhuǎn)移載體的劑量可以通過從測試劑量開始并使用已知的縮放技術(shù)(例如異速縮放或等比例縮放)來確定，以確定用于施用的劑量。這樣也可以用于建立本文中提供的方案?！敖ⅰ卑ā皩?dǎo)致被建立”。“導(dǎo)致被建立”意指為實體進行導(dǎo)致、敦促、鼓勵、輔助、誘導(dǎo)或指導(dǎo)或與實體協(xié)調(diào)行動，以執(zhí)行本文中所提供的建立步驟。在本文中提供的任一種方法的一些實施方案中，該方法可以包括或另外包括如本文中所述的任何一個建立步驟?！邦l率”是指向?qū)ο笫┯冒邢蚩乖蔬f細胞之免疫抑制劑、病毒轉(zhuǎn)移載體或二者組合(例如伴隨施用)的時間間隔?！盎虮磉_調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因”是指編碼基因表達調(diào)節(jié)劑的任何核酸?！盎虮磉_調(diào)節(jié)劑”是指可以增強、抑制或調(diào)節(jié)一種或更多種內(nèi)源基因之表達的分子。因此，基因表達調(diào)節(jié)劑包括DNA結(jié)合蛋白(例如，人工轉(zhuǎn)錄因子)以及介導(dǎo)RNA干擾的分子。基因表達調(diào)節(jié)劑包括RNAi分子(例如dsRNA或ssRNA)、miRNA和三鏈體形成寡核苷酸(triplex-formingoligonucleotide，TFO)。基因表達調(diào)節(jié)劑還可包括經(jīng)修飾的RNA，包括任何前述RNA分子的經(jīng)修飾形式。“免疫抑制劑”意指引起致耐受性作用的化合物，優(yōu)選通過其對APC產(chǎn)生作用。致耐受性作用一般是指APC或其他免疫細胞全身性地和/或局部地調(diào)節(jié)，其以持久的方式降低、抑制或防止對抗原的不期望免疫應(yīng)答。在一個實施方案中，免疫抑制劑是引起APC在一種或更多種免疫效應(yīng)細胞中促進調(diào)節(jié)性表型的免疫抑制劑。例如，調(diào)節(jié)性表型的特征可以是：抑制抗原特異性CD4+T細胞或B細胞的產(chǎn)生、誘導(dǎo)、刺激或募集；抑制抗原特異性抗體的產(chǎn)生，Treg細胞(例如，CD4+CD25highFoxP3+Treg細胞)的產(chǎn)生、誘導(dǎo)、刺激或募集等。這可以是CD4+T細胞或B細胞轉(zhuǎn)化為調(diào)節(jié)表型的結(jié)果。這也可以是在其他免疫細胞(例如CD8+T細胞、巨噬細胞和iNKT細胞)中誘導(dǎo)FoxP3的結(jié)果。在一個實施方案中，免疫抑制劑是在APC處理抗原后影響APC應(yīng)答的免疫抑制劑。在另一個實施方案中，免疫抑制劑不是干擾抗原處理的免疫抑制劑。在另一個實施方案中，免疫抑制劑不是凋亡信號分子。在另一個實施方案中，免疫抑制劑不是磷脂。免疫抑制劑包括但不限于：他汀類；mTOR抑制劑，例如雷帕霉素或雷帕霉素類似物(即，rapalog)；TGF-β信號傳導(dǎo)劑；TGF-β受體激動劑；組蛋白脫乙酰酶抑制劑，例如曲古抑菌素A；皮質(zhì)類固醇；線粒體功能抑制劑，例如魚藤酮；P38抑制劑；NF-κβ抑制劑，例如6Bio、地塞米松、TCPA-1、IKKVII；腺苷受體激動劑；前列腺素E2激動劑(PGE2)，例如米索前列醇；磷酸二酯酶抑制劑，例如磷酸二酯酶4抑制劑(PDE4)，例如咯利普蘭；蛋白酶體抑制劑；激酶抑制劑；G蛋白偶聯(lián)受體激動劑；G蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑；糖皮質(zhì)激素；類視黃醇；細胞因子抑制劑；細胞因子受體抑制劑；細胞因子受體激活劑；過氧化物酶體增殖物激活受體拮抗劑；過氧化物酶體增殖物激活受體激動劑；組蛋白脫乙酰酶抑制劑；鈣調(diào)磷酸酶抑制劑；磷酸酶抑制劑；PI3KB抑制劑，例如TGX-221；自噬抑制劑，例如3-甲基腺嘌呤；芳烴受體抑制劑；蛋白酶體抑制劑I(PSI)；和氧化的ATP，例如P2X受體阻斷劑。免疫抑制劑還包括IDO、維生素D3、視黃酸、環(huán)孢素例如環(huán)孢素A、芳烴受體抑制劑、白藜蘆醇、硫唑嘌呤(Aza)、6-巰基嘌呤(6-MP)、6-硫鳥嘌呤(6-TG)、FK506、薩菲菌素A、沙美特羅、霉酚酸酯(MMF)、阿司匹林和其他COX抑制劑、尼氟酸、雌三醇和雷公藤內(nèi)酯。其他示例性免疫抑制劑包括但不限于：小分子藥物、天然產(chǎn)物、抗體(例如抗CD20、CD3、CD4的抗體)、基于生物制劑的藥物、基于碳水化合物的藥物、RNAi、反義核酸、適配體、甲氨蝶呤、NSAID；芬戈莫德；那他珠單抗；阿侖單抗；抗CD3；他克莫司(FK506)，阿巴西普，貝拉西普等?！癛apalog”是指在結(jié)構(gòu)上與雷帕霉素(西羅莫司)(的類似物)相關(guān)的分子。Rapalog的實例包括但不限于坦羅莫司(CCI-779)、依維莫司(RAD001)、地磷莫司(AP-23573)和佐他莫司(ABT-578)。Rapalog的另一些實例可見于例如WO公開WO1998/002441和美國專利8,455,510，其Rapalog通過引用整體并入本文。免疫抑制劑可以是直接提供對APC的致耐受性作用的化合物，或者其可以是間接提供致耐受性作用的化合物(即在施用后以某種方式處理后)。因此，免疫抑制劑包括本文中提供的任何化合物的前藥形式。其他免疫抑制劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，并且本發(fā)明不限于這一方面。在一些實施方案中，免疫抑制劑可以包含本文中提供的任一種藥劑?！罢T導(dǎo)購買”是指建議實體購買靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑、病毒轉(zhuǎn)移載體或二者以實現(xiàn)如本文中所述的有益效果或執(zhí)行本文中提供的任一種方法的任何行為。這種行為包括：包裝靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑、病毒轉(zhuǎn)移載體或二者，其描述伴隨施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體以減弱抗病毒轉(zhuǎn)移載體反應(yīng)、提高轉(zhuǎn)基因表達或允許重復(fù)施用病毒轉(zhuǎn)移載體的益處?；蛘?，所述包裝可以描述或建議本文中提供的任一種方法的性能。誘導(dǎo)實體購買的行為還包括營銷靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑、病毒轉(zhuǎn)移載體或靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體產(chǎn)物，其中帶有描述或建議使用此類產(chǎn)品來實施本文中所述的任何有益效果或本文中提供的任一種方法的信息。或者，市場營銷包括描述或建議使用此類產(chǎn)品以減弱抗病毒轉(zhuǎn)移載體反應(yīng)、提高轉(zhuǎn)基因表達或重復(fù)施用病毒轉(zhuǎn)移載體的材料。作為另一示例，誘導(dǎo)行為還可以包括傳達描述或建議任何前述內(nèi)容的信息的行為。傳達是可以以書面、口頭等任何形式進行的行為。如果是書面形式，則可以經(jīng)由包括電子或紙基介質(zhì)的任何介質(zhì)進行傳達。此外，誘導(dǎo)行為還包括分發(fā)靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑、病毒轉(zhuǎn)移載體或二者的行為。分發(fā)的行為包括將靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑、病毒轉(zhuǎn)移載體或二者連帶信息、包裝、營銷材料等都提供給實體的任何行為，所述信息、包裝、營銷材料等描述、指導(dǎo)或傳達本文中所述的任何益處或本文中提供的任一種方法的步驟或其減弱抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答、提高轉(zhuǎn)基因表達或允許重復(fù)施用病毒轉(zhuǎn)移載體的能力。分發(fā)行為包括銷售、提供銷售和運輸用于銷售(例如，運輸?shù)剿幏?、醫(yī)院等)。當(dāng)偶聯(lián)至合成納米載體時，“載荷”是基于整個合成納米載體中材料的配方總干重(重量/重量)與合成納米載體偶聯(lián)的免疫抑制劑的量。通常來說，這樣的載荷作為合成納米載體群體的平均來計算。在一個實施方案中，合成納米載體的平均載荷為0.1％至99％。在另一個實施方案中，載荷為0.1％至50％。在另一個實施方案中，載荷為0.1％至20％。在另一個實施方案中，載荷為0.1％至10％。在又一個實施方案中，載荷為1％至10％。在又一個實施方案中，載荷為7％至20％。在另一個實施方案中，載荷在合成納米載體群體中平均為至少0.1％、至少0.2％、至少0.3％、至少0.4％、至少0.5％、至少0.6％、至少0.7％、至少0.8％、至少0.9％、至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少7％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、至少13％、至少14％、至少15％、至少16％、至少17％、至少18％、至少19％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一個實施方案中，載荷在合成納米載體群體中平均為0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％。在上述實施方案的一些實施方案中，載荷在合成納米載體群體中平均為不超過25％。在一些實施方案中，可以如在實施例中描述的或本領(lǐng)域已知的那樣計算載荷。在一些實施方案中，當(dāng)免疫抑制劑的形式本身是顆?；蝾w粒樣(例如納米晶體免疫抑制劑)時，免疫抑制劑的載荷是在顆粒等中的免疫抑制劑的量(重量/重量)。在這樣的一些實施方案中，載荷可以接近97％、98％、99％或更高。“合成納米載體的最大尺寸”意指沿著合成納米載體的任何軸測量的納米載體的最大尺寸。“合成納米載體的最小尺寸”意指沿著合成納米載體的任何軸測量的合成納米載體的最小尺寸。例如，對于球形合成納米載體，合成納米載體的最大和最小尺寸將基本上相同，并且將是其直徑的尺寸。類似地，對于立方形合成納米載體，合成納米載體的最小尺寸將是其高度，寬度或長度中的最小值，而合成納米載體的最大尺寸將是其高度，寬度或長度中的最大值。在一個實施方案中，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，在樣品中至少75％、優(yōu)選至少80％、更優(yōu)選至少90％的合成納米載體的最小尺寸為等于或大于100nm。在一個實施方案中，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75％、優(yōu)選至少80％、更優(yōu)選至少90％的最大尺寸等于或小于5μm。優(yōu)選地，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75％、優(yōu)選至少80％、更優(yōu)選至少90％的合成納米載體的最小尺寸為大于110nm、更優(yōu)選大于120nm、更優(yōu)選大于130nm、還更優(yōu)選大于150nm。合成納米載體的最大和最小尺寸的縱橫比可以根據(jù)實施方案而變化。例如，合成納米載體的最大尺寸與最小尺寸的縱橫比可以在1∶1至1,000,000∶1、優(yōu)選1∶1至100,000∶1、更優(yōu)選1∶1至10,000∶1、更優(yōu)選1∶1至1000∶1、還更優(yōu)選1∶1至100∶1、并且還更優(yōu)選1∶1至10∶1之間變化。優(yōu)選地，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75％、優(yōu)選至少80％、更優(yōu)選至少90％的合成納米載體的最大尺寸為等于或小于3μm、更優(yōu)選等于或小于2μm、更優(yōu)選等于或小于1μm、更優(yōu)選等于或小于800nm、更優(yōu)選等于或小于600nm、還更優(yōu)選等于或小于500nm。在一些優(yōu)選的實施方案中，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75％、優(yōu)選至少80％、更優(yōu)選至少90％的合成納米載體的最小尺寸等于或大于100nm、更優(yōu)選等于或大于120nm、更優(yōu)選等于或大于130nm、更優(yōu)選等于或大于140nm、并且還更優(yōu)選等于或大于150nm。在一些實施方案中，通過將合成納米載體懸浮在液體(通常為水性)介質(zhì)中并使用動態(tài)光散射(dynamiclightscattering，DLS)(例如使用BrookhavenZetaPALS儀器)，可以獲得對合成納米載體尺寸(例如有效直徑)的測量。例如，可將合成納米載體的懸浮液從水性緩沖液稀釋到純化水中，以達到約0.01至0.1mg/mL的最終合成納米載體懸浮液濃度。稀釋的懸浮液可以直接在合適的比色杯內(nèi)部制備，或轉(zhuǎn)移到合適的比色杯中以用于DLS分析。然后可以將比色杯放置在DLS中，使其平衡到受控溫度，然后掃描足夠的時間以基于介質(zhì)的黏度和樣品的折射率的適當(dāng)輸入來獲得穩(wěn)定的和可重復(fù)的分布。然后報告有效直徑或分布的均值。確定高縱橫比或非球形的合成納米載體的有效尺寸可能需要放大技術(shù)(例如電子顯微術(shù))以獲得更準確的測量。合成納米載體的“尺寸”或“大小”或“直徑”意指例如使用動態(tài)光散射獲得的粒度分布的均值。“可測量水平”是指高于陰性對照水平或?qū)⒈徽J為高于背景或信號噪聲的任何水平?？蓽y量水平是將被認為指示所測量的分子存在的水平。“非甲氧基封端的聚合物”意指具有至少一個以不同于甲氧基的部分結(jié)束的末端的聚合物。在一些實施方案中，聚合物具有至少兩個以不同于甲氧基的部分結(jié)束的末端。在另一些實施方案中，聚合物不具有以甲氧基結(jié)尾的末端?！胺羌籽趸舛说钠绽誓峥司酆衔铩币庵赋嗽趦蓚€末端具有甲氧基的線性普朗尼克聚合物之外的聚合物。本文中提供的聚合物納米顆?？梢园羌籽趸舛说木酆衔锘蚍羌籽趸舛说钠绽誓峥司酆衔?。“獲得”是指以任何方式獲取材料的行為。所述材料可以通過生產(chǎn)、購買、接收等獲取。該術(shù)語旨在包括“導(dǎo)致獲得”?！皩?dǎo)致獲得”意指導(dǎo)致、敦促、鼓勵、輔助、誘導(dǎo)或指導(dǎo)實體或與實體協(xié)調(diào)以獲得本文中提供的材料。在本文中提供的任一種方法的一些實施方案中，該方法可以包括或另外包括如本文所述地來獲得的任一步驟?！翱伤幱觅x形劑”或“可藥用載體”意指與藥理活性物質(zhì)一起使用以配制組合物的藥理非活性物質(zhì)?？伤幱觅x形劑包括本領(lǐng)域已知的多種材料，包括但不限于糖類(例如葡萄糖、乳糖等)、防腐劑(例如抗微生物劑)、重構(gòu)助劑、著色劑、鹽水(例如磷酸緩沖鹽水)和緩沖劑?！搬槍Σ《巨D(zhuǎn)移載體的預(yù)先存在的免疫力”是指對象中抗體、T細胞和/或B細胞的存在，所述細胞已經(jīng)預(yù)先通過先前暴露于病毒轉(zhuǎn)移載體的抗原或交叉反應(yīng)性抗原(包括但不限于其他病毒)而被致敏。在一些實施方案中，這種預(yù)先存在的免疫力達到這樣的水平，其預(yù)期導(dǎo)致干擾病毒轉(zhuǎn)移載體效力的抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答。在一些實施方案中，這種預(yù)先存在的免疫達到這樣的水平，其在隨后暴露于病毒轉(zhuǎn)移載體后預(yù)期導(dǎo)致抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答。預(yù)先存在的免疫力可以通過確定針對來自對象的樣品(例如血液樣品)中存在的病毒轉(zhuǎn)移載體的抗體(例如中和抗體)的水平來評估。本文中至少在實施例中描述了用于評估抗體(例如中和抗體)水平的測定，并且其也是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。這樣的測定是ELISA測定。預(yù)先存在的免疫力還可以通過確定免疫細胞(例如B或T細胞)的抗原回憶應(yīng)答來評估，所述免疫細胞以由APC呈遞的病毒轉(zhuǎn)移載體抗原或由MHCI類或MHCII類的分子呈遞的病毒抗原表位體內(nèi)或體外刺激?？乖禺愋曰貞洃?yīng)答的測定包括但不限于ELISpot、胞內(nèi)細胞因子染色、細胞增殖和細胞因子產(chǎn)生測定。一般而言，這些和其他測定是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。在一些實施方案中，不顯示針對病毒轉(zhuǎn)移載體的預(yù)先存在的免疫力的對象是具有一定水平的抗病毒轉(zhuǎn)移載體抗體(例如中和抗體)或被認為是陰性的記憶B或T細胞的對象。在另一些實施方案中，不顯示針對病毒轉(zhuǎn)移載體的預(yù)先存在的免疫力的對象是具有高于平均陰性對照不超過3個標準偏差的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答水平的對象。“生產(chǎn)”是指導(dǎo)致材料被制造的任何行為。生產(chǎn)的行為包括制備材料或以某種方式處理材料。在一些實施方案中，生產(chǎn)的行為包括使得該材料可供另一人使用的任何行為。該術(shù)語旨在包括“導(dǎo)致生產(chǎn)”?！皩?dǎo)致產(chǎn)生”意指導(dǎo)致、敦促、鼓勵、輔助、誘導(dǎo)或指導(dǎo)實體或與實體協(xié)調(diào)行動以制造本文中提供的材料。在本文中提供的任一種方法的一些實施方案中，所述方法可以包括或另外包括如本文中所述的任一生產(chǎn)步驟?！胺桨浮币庵赶?qū)ο笫┯玫哪Ｊ?，并且包括一種或更多種物質(zhì)向?qū)ο蟮娜魏谓o藥方案。方案由要素(或變量)構(gòu)成；因此方案包括一個或更多個要素。方案的這些要素可包括給藥量(劑量)、給藥頻率、施用途徑、給藥持續(xù)時間、給藥速率、給藥間隔、任何前述的組合等。在一些實施方案中，可以使用方案向一個或更多個測試對象施用本發(fā)明的一種或更多種組合物。然后可以評估這些測試對象的免疫應(yīng)答，以確定該方案是否有效產(chǎn)生期望的或期望水平的免疫應(yīng)答或治療作用?？梢栽u估任何治療和/或免疫作用。方案的一個或更多個要素可已先前在測試對象(例如非人對象)中證明，然后轉(zhuǎn)化為對人方案。例如，使用已建立的技術(shù)(例如異速縮放或其他縮放方法)在非人對象中證明的給藥量可以縮放轉(zhuǎn)化為對人方案的要素?？梢允褂帽疚闹刑峁┑幕虮绢I(lǐng)域已知的任何方法確定方案是否具有期望的作用。例如，樣品可以從根據(jù)特定方案已施用本文中提供的組合物的對象中獲得，以確定特定免疫細胞、細胞因子、抗體等是否降低、產(chǎn)生、活化等。示例性方案是先前證明會導(dǎo)致針對病毒轉(zhuǎn)移載體抗原的致耐受性免疫應(yīng)答或?qū)崿F(xiàn)本文中所述的任一種有益結(jié)果的方案。用于檢測免疫細胞的存在和/或數(shù)量的可用方法包括但不限于流式細胞術(shù)方法(例如，F(xiàn)ACS)、ELISpot、增殖應(yīng)答、細胞因子產(chǎn)生和免疫組織化學(xué)方法。用于免疫細胞標志物的特異性染色的抗體和其他結(jié)合劑是可商購的。此類試劑盒通常包括用于抗原的染色試劑，其允許對來自異質(zhì)細胞群體的期望細胞群體的基于FACS的檢測、分離和/或定量。在一些實施方案中，如果預(yù)期所選擇的要素在對象中實現(xiàn)期望的結(jié)果，則使用所述方案包含的一種或更多種或者所有或基本上所有要素來向?qū)ο笫┯帽疚闹刑峁┑慕M合物。這種期望可以基于在測試對象中確定的方案，并且如果需要可以縮放。本文中提供的任一種方法可包括或另外包括根據(jù)這樣的方案單獨或與一個或更多個劑量的病毒轉(zhuǎn)移載體組合施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑的劑量的步驟，所述方案已經(jīng)顯示減弱抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答或允許重復(fù)施用病毒轉(zhuǎn)移載體。本文中提供的任一種方法可以包括或另外包括確定實現(xiàn)本文中所述的任一種有益結(jié)果的此類方案?！疤峁币庵競€體執(zhí)行的提供用于實踐本發(fā)明之材料的行為或一組行為。提供可以包括生產(chǎn)、分發(fā)、銷售、給予、使之可用、開處方或施用材料的行為。行為或一組行為可以直接地或間接地執(zhí)行。因此，該術(shù)語旨在包括“導(dǎo)致提供”。“導(dǎo)致提供”意指導(dǎo)致、敦促、鼓勵、輔助、誘導(dǎo)或指導(dǎo)實體或與實體協(xié)調(diào)行動以提供用于實施本發(fā)明的材料。在本文中提供的任一種方法的一些實施方案中，所述方法可以包括或另外包括如本文中所述提供的任一步驟。“重復(fù)劑量”或“重復(fù)給藥”等意指在較早劑量或給藥之后向?qū)ο笫┯孟嗤牧系闹辽僖粋€額外劑量或給藥。例如，病毒轉(zhuǎn)移載體的重復(fù)劑量是在相同材料的在先劑量后的至少一個額外劑量的病毒轉(zhuǎn)移載體。雖然材料可以相同，但是重復(fù)劑量中的材料的量可以不同于較早的劑量。例如，在本文中提供的任一種方法或組合物的一個實施方案中，重復(fù)劑量中的病毒轉(zhuǎn)移載體的量可以小于較早劑量中的病毒轉(zhuǎn)移載體的量。或者，在本文中提供的任一種方法或組合物的實施方案中，重復(fù)劑量的量可以至少等于較早劑量中的病毒轉(zhuǎn)移載體的量。重復(fù)劑量可以在先前劑量后數(shù)周、數(shù)月或數(shù)年施用。在本文中提供的任一種方法的一些實施方案中，重復(fù)劑量在剛好在所述重復(fù)劑量之前進行的劑量后至少1周施用。如果重復(fù)劑量對于對象產(chǎn)生有益作用，則認為重復(fù)劑量是有效的。優(yōu)選地，有效的重復(fù)劑量導(dǎo)致與減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答相結(jié)合的有益作用?！斑x擇病毒轉(zhuǎn)移載體的劑量以小于……”是指選擇病毒轉(zhuǎn)移載體的劑量，其小于當(dāng)所述對象由于重復(fù)施用所述病毒轉(zhuǎn)移載體而發(fā)生針對所述病毒轉(zhuǎn)移載體的抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答時會被選擇的向?qū)ο笫┯玫牟《巨D(zhuǎn)移載體量。該術(shù)語旨在包括“導(dǎo)致選擇”?！皩?dǎo)致選擇”意指導(dǎo)致、敦促、鼓勵、輔助、誘導(dǎo)或指導(dǎo)實體或與實體協(xié)調(diào)行動來選擇上述較小劑量。在本文中提供的任一種方法的一些實施方案中，所述方法可以包括或另外包括如本文所述進行選擇的任一步驟。“同時”意指同時或基本上同時施用，其中臨床醫(yī)生將認為施用之間的任何時間對于期望治療結(jié)果的影響實際上為零或可忽略。在一些實施方案中，意指以5、4、3、2、1或更少的分鐘數(shù)進行施用?！皩ο蟆币庵竸游铮匮溉閯游?，例如人和靈長類動物；鳥類；家養(yǎng)或農(nóng)場動物，例如貓、狗、綿羊、山羊、牛、馬和豬；實驗動物，例如小鼠、大鼠和豚鼠；魚類；爬行動物；動物園動物和野生動物等。本文中使用的對象可以是本文中提供的任一種方法或組合物中需要的一種。“合成納米載體”意指在為見于自然界中的離散物體，并且具有尺寸小于或等于5微米的至少一個維度。一般包括白蛋白納米顆粒作為合成納米載體，然而在某些實施方案中，合成納米載體不包含白蛋白納米顆粒。在一些實施方案中，合成納米載體不包含殼聚糖。在另一些實施方案中，合成納米載體不是基于脂質(zhì)的納米顆粒。在另外的實施方案中，合成納米載體不包含磷脂。合成納米載體可以是但不限于一種或多種基于脂質(zhì)的納米顆粒(本文中也稱為脂質(zhì)納米顆粒，即構(gòu)成其結(jié)構(gòu)的大多數(shù)材料是脂質(zhì)的納米顆粒)、聚合物納米顆粒、金屬納米顆粒、基于表面活性劑的乳液、樹枝狀聚合物、巴基球、納米線、病毒樣顆粒(即主要由病毒結(jié)構(gòu)蛋白構(gòu)成但不具有感染性或具有低感染性的顆粒)、基于肽或蛋白質(zhì)的顆粒(本文中也稱為蛋白質(zhì)顆粒，即構(gòu)成其結(jié)構(gòu)的大多數(shù)材料是肽或蛋白質(zhì)的顆粒)(例如白蛋白納米顆粒)和/或使用納米材料(例如脂質(zhì)-聚合物納米顆粒)的組合而開發(fā)的納米顆粒。合成納米載體可以是多種不同的形狀，包括但不限于球形、立方形、角錐形、橢圓體形、圓柱形、環(huán)形等。根據(jù)本發(fā)明的合成納米載體包含一個或更多個表面。可適用于本發(fā)明實踐的示例性合成納米載體包括：(1)Gref等人的美國專利5,543,158中公開的可生物降解的納米顆粒，(2)Saltzman等人的公開的美國專利申請20060002852的聚合物納米顆粒，(3)DeSimone等人的公開的美國專利申請20090028910的光刻構(gòu)建的納米粒子，(4)vonAndrian等人的WO2009/051837的公開內(nèi)容，(5)Penades等人的公開的美國專利申請2008/0145441中公開的納米顆粒，(6)delosRios等人的公開的美國專利申請20090226525中公開的蛋白質(zhì)納米顆粒，(7)Sebbel等人的公開的美國專利申請20060222652中公開的病毒樣顆粒，(8)Bachmann等人的公開的美國專利申請20060251677中公開的核酸連接的病毒樣顆粒，(9)WO2010047839A1或WO2009106999A2中公開的病毒樣顆粒，(10)P.Paolicelli等人，“Surface-modifiedPLGA-basedNanoparticlesthatcanEfficientlyAssociateandDeliverVirus-likeParticles”Nanomedicine.5(6)：843-853(2010)中公開的納米沉淀納米顆粒，(11)美國公開2002/0086049中公開的凋亡細胞、凋亡小體或者合成或半合成模擬物，或(12)Look等人，Nanogel-baseddeliveryofmycophenolicacidamelioratessystemiclupuserythematosusinmice”J.ClinicalInvestigation123(4)：1741-1749(2013)中的那些。根據(jù)本發(fā)明的具有等于或小于約100nm、優(yōu)選等于或小于100nm的最小尺寸的合成納米載體不包含具有激活補體之羥基的表面，或者包含基本上由不激活補體之羥基的部分組成的表面。在一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的具有等于或小于約100nm、優(yōu)選等于或小于100nm的最小尺寸的合成納米載體不包含基本上激活補體的表面，或者包含實質(zhì)上由基本上不激活補體的部分組成的表面。在一個更優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的具有等于或小于約100nm、優(yōu)選等于或小于100nm的最小尺寸的合成納米載體不包含激活補體的表面，或者包含實質(zhì)上由不激活補體的部分組成的表面。在一些實施方案中，合成納米載體排除了病毒樣顆粒。在一些實施方案中，合成納米載體可以具有大于1∶1、1∶1.2、1∶1.5、1∶2、1∶3、1∶5、1∶7或大于1∶10的縱橫比?！爸委熜缘鞍踪|(zhì)”意指可以用于治療目的的任何蛋白質(zhì)。治療性蛋白質(zhì)可以是用于蛋白質(zhì)替代或蛋白質(zhì)補充的蛋白質(zhì)。治療性蛋白質(zhì)包括但不限于酶、酶輔因子、激素、凝血因子、細胞因子、生長因子等。其他治療性蛋白質(zhì)的實例在本文其他地方提供。“病毒轉(zhuǎn)移載體的轉(zhuǎn)基因”是指使用病毒轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)運到細胞中的核酸材料，并且一旦在細胞中，其表達以分別產(chǎn)生蛋白質(zhì)或核酸分子，例如用于如本文中所述的治療應(yīng)用。轉(zhuǎn)基因可以是基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因?！氨槐磉_”或“表達”等是指在轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入細胞并由轉(zhuǎn)導(dǎo)細胞加工后，合成功能性(即，對于期望目的具有生理活性)基因產(chǎn)物。這樣的基因產(chǎn)物在本文中也稱為“轉(zhuǎn)基因表達產(chǎn)物”。因此，表達的產(chǎn)物是所得蛋白質(zhì)或核酸，例如由轉(zhuǎn)基因編碼的反義寡核苷酸或治療性RNA?！安《巨D(zhuǎn)移載體”意指已經(jīng)適于遞送本文中提供的轉(zhuǎn)基因的病毒載體?！安《据d體”是指遞送轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體的所有病毒組分。因此，“病毒抗原”是指病毒轉(zhuǎn)移載體的病毒組分的抗原，例如衣殼或外殼蛋白，但不是轉(zhuǎn)基因或其編碼的產(chǎn)物?！安《巨D(zhuǎn)移載體抗原”是指病毒轉(zhuǎn)移載體的任何抗原，包括其病毒組分以及蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)基因表達產(chǎn)物。將病毒載體改造以將一種或更多種期望核酸轉(zhuǎn)導(dǎo)到細胞中。轉(zhuǎn)基因可以是基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因。在一些實施方案中，轉(zhuǎn)基因是編碼本文中提供的蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)基因，例如治療性蛋白質(zhì)、DNA結(jié)合蛋白質(zhì)等。在另一些實施方案中，轉(zhuǎn)基因是編碼反義核酸、snRNA、RNAi分子(例如，dsRNA或ssRNA)、miRNA或三鏈體形成寡核苷酸(TFO)等的轉(zhuǎn)基因。病毒載體可以基于但不限于逆轉(zhuǎn)錄病毒(例如，鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒、禽逆轉(zhuǎn)錄病毒、莫洛尼鼠白血病病毒(MoMuLV)、哈維鼠肉瘤病毒(HaMuSV)、鼠乳腺腫瘤病毒(MuMTV)、長臂猿白血病病毒(GaLV)和勞斯肉瘤病毒(RSV))、慢病毒、皰疹病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒、甲病毒等。其他實例在本文中其他地方提供或在本領(lǐng)域中是已知的。病毒載體可基于病毒的天然變體、毒株或血清型，例如本文中提供的那些中的任一種。病毒載體也可基于通過分子進化選擇的病毒。病毒載體也可以是工程化載體、重組載體、突變體載體或雜交載體。在一些實施方案中，病毒載體是“嵌合病毒載體”。在這樣的一些實施方案中，這意味著病毒載體由來自于多于一種病毒或病毒載體的病毒組分構(gòu)成。C.本發(fā)明方法中使用的組合物如上所述，針對病毒轉(zhuǎn)移載體的細胞和體液免疫應(yīng)答可以不利地影響病毒轉(zhuǎn)移載體治療劑的效力，并且還可以干擾其再施用，使得許多患者不可能長期治療。如本領(lǐng)域所證明的，由于先前暴露于病毒轉(zhuǎn)移所基于的病毒，用病毒轉(zhuǎn)移載體的治療預(yù)期對于一些患者是不會成功的。另外，即使患者不具有針對病毒轉(zhuǎn)移載體的預(yù)先存在的免疫力，單次施用病毒轉(zhuǎn)移載體也可能導(dǎo)致細胞和體液免疫應(yīng)答，例如中和抗體效價和/或記憶性T細胞的活化，這將不允許成功的再施用。使這些問題進一步復(fù)雜化的是病毒轉(zhuǎn)移載體抗原的長期持久性。重要的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本文中提供的方法和組合物通過減弱針對病毒轉(zhuǎn)移載體的免疫應(yīng)答來克服上述障礙。還發(fā)現(xiàn)本文中提供的方法和組合物允許再施用病毒轉(zhuǎn)移載體并提供針對病毒轉(zhuǎn)移載體的長期耐受性，而不需要長期免疫抑制。因此，本文中提供的方法和組合物可用于用病毒轉(zhuǎn)移載體治療對象。病毒轉(zhuǎn)移載體可用于遞送轉(zhuǎn)基因用于多種目的，包括用于基因表達調(diào)節(jié)，本文中提供的方法和組合物也是可如此應(yīng)用的。對象本文中提供的對象可以是患有本文中提供的任一種疾病或病癥的對象，并且轉(zhuǎn)基因是編碼可用于控制本文中提供的任一種蛋白質(zhì)的表達的基因表達調(diào)節(jié)劑的轉(zhuǎn)基因。所述蛋白質(zhì)可以是胞外、胞內(nèi)或膜結(jié)合蛋白質(zhì)。在一些實施方案中，對象患有這樣的疾病或病癥，其中對象的內(nèi)源性形式的蛋白質(zhì)有缺陷或以有限量產(chǎn)生或根本不產(chǎn)生，并且基因表達調(diào)節(jié)劑可以控制這種蛋白質(zhì)的表達。因此，在一些實施方案中，基因表達調(diào)節(jié)劑可以控制本文中提供的任一種蛋白質(zhì)或其內(nèi)源形式(例如本文中提供的治療性蛋白質(zhì)的內(nèi)源形式)的表達。治療性蛋白質(zhì)的實例包括但不限于可輸注或可注射的治療性蛋白質(zhì)、酶、酶輔助因子、激素、血液或凝血因子、細胞因子和干擾素、生長因子、脂肪因子等?？奢斪⒒蚩勺⑸涞闹委熜缘鞍踪|(zhì)的實例包括例如托珠單抗(Roche/)、α-1抗胰蛋白酶(Kamada/AAT)、(Affymax和Takeda，合成肽)、白蛋白干擾素α-2b(Novartis/ZalbinTM)、(PharmingGroup，C1抑制劑替代療法)、特沙拉林(Theratechnologies/Egrifta，合成生長激素釋放因子)、ocrelizumab(Genentech，Roche和Biogen)、belimumab(GlaxoSmithKline/)、pegloticase(SavientPharmaceuticals/KrystexxaTM)、taligluceraseα(Protalix/Uplyso)、阿加糖酶α(Shire/)和維拉苷酶α(Shire)。酶的實例包括溶菌酶、氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、水解酶、裂解酶、異構(gòu)酶、天冬酰胺酶、尿酸酶、糖苷酶、蛋白酶、核酸酶、膠原酶、透明質(zhì)酸酶、肝素酶、類肝素酶、激酶、磷酸酶、溶素和連接酶。酶的其他實例包括用于酶替代療法的那些，包括但不限于伊米苷酶(例如，CEREZYMETM)、α-半乳糖苷酶A(α-galA)(例如，阿加糖酶β，F(xiàn)ABRYZYMETM)、酸性α-葡糖苷酶(GAA)(例如，葡糖苷酶α，LUMIZYMETM，MYOZYMETM)和芳基硫酸酯酶B(例如，laronidase，ALDURAZYMETM，艾杜硫酶，ELAPRASETM，芳基硫酸酯酶B，NAGLAZYMETM)。激素的實例包括褪黑激素(N-乙?；?5-甲氧基色胺)、5-羥色胺、甲狀腺素(或四碘甲腺原氨酸)(一種甲狀腺激素)、三碘甲腺原氨酸(一種甲狀腺激素)、腎上腺素(Epinephrine或adrenaline)、去甲腎上腺素(Norepinephrine或noradrenaline)、多巴胺(或催乳素抑制激素)、抗繆勒氏管激素(antimullerianhormone)(或繆勒氏管抑制因子或激素)、脂連蛋白、促腎上腺皮質(zhì)激素(或促皮質(zhì)素)、血管緊張素原和血管緊張素、抗利尿激素(或升壓素、精氨酸升壓素)、心房鈉尿肽(或心房肽)、降鈣素、膽囊收縮素、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素、紅細胞生成素、促卵泡激素、胃泌素、食欲刺激素、胰高血糖素、胰高血糖素樣肽(GLP-1)、GIP、促性腺激素釋放激素、生長激素釋放激素、人絨毛膜促性腺激素、人胎盤催乳素、生長激素、抑制素、胰島素、胰島素樣生長因子(或生長調(diào)節(jié)素)、瘦素、促黃體激素、黑素細胞刺激激素、促食欲肽、催產(chǎn)素、甲狀旁腺激素、催乳素、松弛素、促胰液素、生長抑素、血小板生成素、促甲狀腺激素(或促甲狀腺素)、促甲狀腺素釋放激素、皮質(zhì)醇、醛固酮、睪酮、脫氫表雄酮、雄烯二酮、二氫睪酮、雌二醇、雌酮、雌三醇、孕酮、骨化三醇(1，25-二羥基維生素D3)、骨化二醇(25-羥基維生素D3)、前列腺素、白三烯、前列環(huán)素、血栓素、催乳素釋放激素、促脂肪素、腦利鈉肽、神經(jīng)肽Y、組胺、內(nèi)皮素、胰多肽、腎素和腦啡肽。血液或凝血因子的實例包括因子I(纖維蛋白原)、因子II(凝血酶原)、組織因子、因子V(前加速素、不穩(wěn)定因子)、因子VII(穩(wěn)定因子、前轉(zhuǎn)化素)、因子VIII(抗血友病球蛋白)、因子IX(克雷司馬斯因子或血漿凝血激酶組分)、因子X(Stuart-Prower因子)、因子Xa、因子XI、因子XII(Hageman因子)、因子XIII(纖維蛋白穩(wěn)定因子)、vonWillebrand因子、vonHeldebrant因子、前激肽釋放因子(Fletcher因子)、高分子量激肽原(HMWK)(Fitzgerald因子)、纖連蛋白、纖維蛋白、凝血酶、抗凝血酶(例如抗凝血酶III)、肝素輔助因子II、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相關(guān)蛋白酶抑制劑(proteinZ-relatedproteaseinhibitot，ZPI)、纖溶酶原、α2-纖溶酶抑制劑、組織纖溶酶原激活物(tissueplasminogenactivator，tPA)、尿激酶、纖溶酶原激活物抑制劑-1(plasminogenactivatorinhibitor-1，PAI1)、纖溶酶原激活物抑制劑-2(plasminogenactivatorinhibitor-2，PAI2)、癌癥促凝劑和阿法依伯汀(Epogen，Procrit)。細胞因子的實例包括淋巴因子、白介素和趨化因子、1型細胞因子(例如IFN-γ、TGF-β)和2型細胞因子(例如IL-4、IL-10和IL-13)。生長因子的實例包括腎上腺髓質(zhì)素(Adrenomedullin，AM)、促血管生成素(Angiopoietin，Ang)、自分泌運動因子、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(Bonemorphogeneticprotein，BMP)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-derivedneurotrophicfactor，BDNF)、表皮生長因子(Epidermalgrowthfactor，EGF)、紅細胞生成素(Erythropoietin，EPO)、成纖維細胞生長因子(Fibroblastgrowthfactor，F(xiàn)GF)、膠質(zhì)細胞系衍生的神經(jīng)營養(yǎng)因子(Glialcellline-derivedneurotrophicfactor，GDNF)、粒細胞集落刺激因子(Granulocytecolony-stimulatingfactor，G-CSF)、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(Granulocytemacrophagecolony-stimulatingfactor，GM-CSF)、生長分化因子-9(Growthdifierentiationfactor-9，GDF9)、肝細胞生長因子(Hepatocytegrowthfactor，HGF)、肝癌衍生生長因子(Hepatoma-derivedgrowthfactor，HDGF)、胰島素樣生長因子(Insulin-likegrowthfactor，IGF)、遷移刺激因子、肌生成抑制蛋白(GDF-8)、神經(jīng)生長因子(Nervegrowthfactor，NGF)及其他神經(jīng)營養(yǎng)因子、血小板衍生生長因子(Platelet-derivedgrowthfactor，PDGF)、血小板生成素(Thrombopoietin，TPO)、轉(zhuǎn)化生長因子α(Transforminggrowthfactoralpha，TGF-α)、轉(zhuǎn)化生長因子β(Transforminggrowthfactorbeta，TGF-β)、腫瘤壞死因子-α(Tumournecrosisfactor-alpha，TNF-α)、血管內(nèi)皮生長因子(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)、Wnt信號途徑、胎盤生長因子(placentalgrowthfactor，PlGF)、[(胎牛促生長素)](FoetalBovineSomatotrophin，F(xiàn)BS)、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6和IL-7。脂肪因子的實例包括瘦素和脂連蛋白。蛋白質(zhì)的其他實例包括但不限于：受體、信號蛋白、細胞骨架蛋白、支架蛋白、轉(zhuǎn)錄因子、結(jié)構(gòu)蛋白、膜蛋白、胞質(zhì)蛋白、結(jié)合蛋白、核蛋白、分泌蛋白、高爾基體蛋白、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白、線粒體蛋白和囊泡蛋白等。疾病或病癥的實例包括但不限于溶酶體貯積病/癥，例如Santavuori-Haltia病(嬰兒型神經(jīng)膠質(zhì)性脂樣脂褐質(zhì)沉積癥1型)、Jansky-Bielschowsky病(晚幼兒神經(jīng)性元蠟樣脂褐質(zhì)沉積癥，2型)、Batten病(幼年神經(jīng)元性臘樣脂褐質(zhì)沉積癥，3型)、Kufs病(神經(jīng)元性脂樣脂褐質(zhì)沉積癥，4型)、VonGierke病(糖原貯積病，Ia型)、糖原貯積病(Ib型)、Pompe病(糖原貯積病，II型)、Forbes或Cori病(糖原貯積病，III型)、黏脂脂沉積癥II(I-細胞疾病)，黏脂糖病III(假-胡勒多發(fā)性營養(yǎng)不良)、黏液脂肪變性IV(唾液脂肪變性)、胱氨酸血癥(成人非腎病類型)、胱氨酸血癥(嬰兒型腎病類型)、胱氨酸血癥(青少年腎病)、Salla病/嬰兒唾液酸儲存病癥和鞘脂激活蛋白缺乏癥；脂質(zhì)和鞘脂降解障礙，例如GM1神經(jīng)節(jié)苷脂貯積癥(嬰兒、晚嬰兒/幼年和成人/慢性)，Tay-Sachs病、Sandhoff病、GM2神經(jīng)節(jié)苷脂貯積癥(Ab變體)、法布里病、戈謝病(I，II和III型)、異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良、克拉伯病(早期和晚期發(fā)病)、Neimann-Pick病(A，B，C1和C2型)、法伯病和沃爾曼病(膽固醇貯積病)；黏多糖降解障礙，例如Hurler綜合征(MPSI)、Scheie綜合征(MPSIS)、Hurler-Scheie綜合征(MPSIH/S)、Hunter綜合征(MPSII)、SanfillippoA綜合征(MPSIIIA)、SanfillippoB綜合征(MPSIIIB)、SanfillippoC綜合征(MPSIIIC)、SanfillippoD綜合征(MPSIIID)、MorquioA綜合征(MPSIVA)、MorquioB綜合征(MPSIVB)、馬-拉綜合征(MPSVI)和Sly綜合征(MPSVII)；糖蛋白降解障礙，例如α甘露糖苷沉積癥、β甘露糖苷沉積癥、巖藻糖沉積癥、阿司帕林葡萄糖尿癥、黏脂質(zhì)病I(唾液酸沉積癥)、半乳糖唾液酸沉積癥、辛德勒病，以及辛德勒病II型/Kanzaki病；以及白質(zhì)營養(yǎng)不良疾病/病癥，例如無β脂蛋白血癥、新生兒腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良、卡納萬病、腦源性黃斑病、PelizaeusMerzbacher病、丹吉爾病、Refsum病(嬰兒)和Refum病(經(jīng)典)。本文中提供的對象的此類疾病/病癥的另外的實例包括但不限于：酸性麥芽糖酶缺乏癥(例如Pompe病、2型糖原病、溶酶體貯積病)；肉堿缺乏；肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶缺乏；脫支酶缺陷(例如，Cori或Forbes病、3型糖原癥)；乳酸脫氫酶缺乏癥(例如11型糖原病)；肌苷酸脫氨酶缺乏；磷酸果糖激酶缺陷(例如，Tarui病、7型糖原病)；磷酸甘油酸激酶缺乏(例如，9型糖原病)；磷酸甘油酸變位酶缺陷(例如，10型糖原病)；磷酸化酶缺乏(例如，McArdle病、肌磷酸酶缺乏、5型糖原病)；戈謝病(例如，染色體1，酶葡糖腦苷脂酶受影響)；軟骨發(fā)育不全(例如，染色體4，成纖維細胞生長因子受體3受影響)；亨廷頓病(例如，染色體4，亨廷頓蛋白)；血色素沉著病(例如，染色體6，HFE蛋白)；囊性纖維化(例如，染色體7，CFTR)；弗里德賴希共濟失調(diào)(染色體9，frataxin)；Best疾病(染色體11，VMD2)；鐮狀細胞病(染色體11，血紅蛋白)；苯丙酮尿癥(染色體12，苯丙氨酸羥化酶)；Marfan綜合征(染色體15，原纖維蛋白)；強直性肌張力障礙(19號染色體，強直性肌營養(yǎng)不良蛋白激酶)；腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(x染色體，過氧化物酶體中的木脂酰-CoA連接酶)；杜克氏肌營養(yǎng)不良(x染色體，肌養(yǎng)蛋白)；Rett綜合征(x染色體，甲基CpG結(jié)合蛋白2)；萊伯氏遺傳性視神經(jīng)病(線粒體，呼吸蛋白)；線粒體腦病、乳酸中毒和中風(fēng)(MELAS)(線粒體，轉(zhuǎn)移RNA)；和尿素循環(huán)的酶缺陷。這樣的疾病或病癥的另外的實例包括但不限于：鐮狀細胞性貧血、肌管性肌病、血友病B、脂蛋白脂肪酶缺乏、鳥氨酸轉(zhuǎn)氨酶缺乏、克-格氏綜合征、黏膜脂質(zhì)沉積癥IV、Niemann-PickA、SanfilippoA、SanfilippoB、SanfilippoC、SanfilippoD、b地中海貧血和Duchenne肌營養(yǎng)不良。疾病或病癥的另外的實例包括脂質(zhì)和鞘脂降解缺陷、黏多糖降解、糖蛋白降解、白細胞營養(yǎng)不良等的結(jié)果。因此，治療性蛋白質(zhì)還包括肌磷酸化酶、葡糖腦苷脂酶、成纖維細胞生長因子受體3、亨廷頓蛋白、HFE蛋白、CFTR、弗氏蛋白酶、VMD2、血紅蛋白、苯丙氨酸羥化酶、原纖維蛋白、強直性肌營養(yǎng)不良蛋白激酶、木脂酰-CoA連接酶、肌養(yǎng)蛋白、甲基CpG結(jié)合蛋白2、β血紅蛋白、肌管蛋白、組織蛋白酶A、因子IX、脂蛋白脂肪酶、β半乳糖苷酶、鳥氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶、艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶、酸性α葡糖苷酶、UDP-葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶1-1、GlcNAc-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶、GlcNAc-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶、Mucolipin-1、微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白、鞘磷脂酶、酸性神經(jīng)酰胺酶、溶酶體酸性脂肪酶、α-L-艾杜糖醛酸酶、類肝素N-硫酸酯酶、α-N-乙酰氨基葡糖苷酶、乙酰CoA-α-葡糖胺乙酰轉(zhuǎn)移酶、N-乙酰葡糖胺6-硫酸酯酶、N-乙酰半乳糖胺-6硫酸酯酶、α-甘露糖苷酶、α-半乳糖苷酶A、囊性纖維化傳導(dǎo)跨膜調(diào)節(jié)蛋白和呼吸蛋白。作為另一些實例，基因表達調(diào)節(jié)劑可以控制與如下疾病或病癥相關(guān)的蛋白質(zhì)的表達：脂質(zhì)和鞘脂降解障礙(例如β-半乳糖苷酶A、β-己糖胺酶A和B、GM2激活蛋白、8-半乳糖苷酶A、葡糖腦苷脂酶、葡糖腦苷脂酶、葡糖腦苷脂酶、芳基硫酸酯酶A、半乳糖神經(jīng)酰胺酶、鞘磷脂酶、鞘磷脂酶、NPC1、HE1蛋白(膽固醇運輸缺陷)、酸性神經(jīng)酰胺酶、溶酶體酸脂肪酶)；黏多糖降解障礙(例如L-艾杜糖苷酸酶、L-艾杜糖醛酸酶、L-艾杜糖醛酸酶、艾杜糖醛酸硫酸酯酶、類肝素N-硫酸酯酶、N-乙酰葡糖胺酶、乙酰CoA-葡糖胺酶、乙酰轉(zhuǎn)移酶、乙酰葡糖胺-6-硫酸酯酶、半乳糖胺-6-硫酸酯酶、芳基硫酸酯酶B、葡糖醛酸糖苷酶)；糖蛋白降解障礙(例如，甘露糖苷酶、甘露糖苷酶、1-巖藻糖苷酶、天冬氨酰葡糖胺酶、神經(jīng)氨酸酶、溶酶體保護性蛋白、溶酶體8-N-乙酰半乳糖胺酶、溶酶體8-N-乙酰半乳糖胺酶)；溶酶體貯積病癥(例如，棕櫚酰蛋白硫酯酶(至少4個亞型)、溶酶體膜蛋白(未知)、葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸轉(zhuǎn)位酶、酸性麥芽糖酶、脫葡萄糖酶淀粉-1，6-葡萄糖苷酶、N-乙酰葡糖胺-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶、N-乙酰葡糖胺-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶、神經(jīng)節(jié)苷脂唾液酸酶(神經(jīng)氨酸酶)、溶酶體半胱氨酸轉(zhuǎn)運蛋白、溶酶體半胱氨酸轉(zhuǎn)運蛋白、溶酶體半胱氨酸轉(zhuǎn)運蛋白、唾液酸轉(zhuǎn)運蛋白鞘脂激活蛋白、A、B、C、D)和白細胞營養(yǎng)不良(例如，微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白/載脂蛋白B、過氧化物酶體膜轉(zhuǎn)移蛋白、Peroxin、天冬酰轉(zhuǎn)移酶、固醇-27-羥化酶、蛋白脂質(zhì)蛋白、ABC1轉(zhuǎn)運蛋白、過氧化物酶體膜蛋白3或過氧化物酶體生物合成因子1、植烷酸氧化酶)。本文中提供的病毒轉(zhuǎn)移載體的轉(zhuǎn)基因是基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因。這樣的轉(zhuǎn)基因編碼可以增強、抑制或調(diào)節(jié)一種或更多種內(nèi)源基因之表達的基因表達調(diào)節(jié)劑。內(nèi)源基因可以編碼本文中提供的任一種蛋白質(zhì)，只要該蛋白質(zhì)是對象的內(nèi)源性蛋白質(zhì)即可。因此，對象可以是患有本文中提供的任一種疾病或病癥的對象，其中將存在由基因表達調(diào)節(jié)所提供的益處?；虮磉_調(diào)節(jié)劑包括DNA結(jié)合蛋白(例如，人工轉(zhuǎn)錄因子，例如美國公開No.20140296129中的那些，其人工轉(zhuǎn)錄因子通過引用并入本文；以及美國公開No.20030125286的轉(zhuǎn)錄沉默子蛋白NRF，其轉(zhuǎn)錄沉默子蛋白NRF通過引用并入本文)以及治療性RNA。治療性RNA包括但不限于mRNA翻譯的抑制劑(反義)、RNA干擾(RNAi)劑、催化活性RNA分子(核酶)、轉(zhuǎn)移RNA(tRNA)和結(jié)合蛋白質(zhì)和其他分子配體的RNA(適配體)?；虮磉_調(diào)節(jié)劑是前述的任何試劑，并且包括反義核酸、RNAi分子(例如，雙鏈RNA(dsRNA)、單鏈RNA(ssRNA)、微RNA(miRNA)、短干擾RNA(siRNA)、短發(fā)夾RNA(shRNA))和三鏈體形成寡核苷酸(TFO)?；虮磉_調(diào)節(jié)劑還可以包括任何前述RNA分子的修飾形式，并因此包括經(jīng)修飾的mRNA，例如合成的經(jīng)化學(xué)修飾的RNA?；虮磉_調(diào)節(jié)劑可以是反義核酸。反義核酸可以提供基因表達的靶向抑制(例如，突變蛋白質(zhì)、顯性活性基因產(chǎn)物、與毒性相關(guān)的蛋白質(zhì)或由感染原(例如病毒)引入到細胞中的基因產(chǎn)物的表達)。因此，調(diào)節(jié)基因表達的病毒轉(zhuǎn)移載體可用于治療與顯性失活或獲得功能的致病機制相關(guān)的疾病或病癥，癌癥或感染。本文中提供的任一種方法的對象可以是患有病毒感染、炎性病癥、心血管疾病、癌癥、遺傳性病癥或自身免疫病的對象。反義核酸還可以干擾mRNA剪接機制并擾亂正常細胞mRNA加工。因此，基因表達調(diào)控轉(zhuǎn)基因可以編碼與剪接體蛋白相互作用的元件。反義核酸(及相關(guān)構(gòu)建體)的實例可見于例如美國公開No.20050020529和20050271733，其反義核酸和其構(gòu)建體通過引用并入本文?；虮磉_調(diào)節(jié)劑還可以是核酶(即，可以切割其他RNA的RNA分子，例如單鏈RNA)。這樣的分子可以被工程化以識別RNA分子中的特定核苷酸序列并將其切割(Cech，J.Amer.Med.Assn.，260：3030，1988)。例如，可以改造核酶，使得只有具有與含有核酶的構(gòu)建體互補之序列的mRNA失活。核酶的類型和如何制備相關(guān)構(gòu)建體是本領(lǐng)域中已知的(Hasselhoff，等，Nature，334：585，1988；和U.S.PublicationNo.20050020529，其關(guān)于這種核酶和方法的教導(dǎo)通過引用并入本文)?；虮磉_調(diào)節(jié)劑可以是干擾RNA(RNAi)。RNA干擾是指由干擾RNA介導(dǎo)的序列特異性轉(zhuǎn)錄后基因沉默的過程。一般而言，dsRNA的存在可以觸發(fā)RNAi應(yīng)答。已經(jīng)在多種系統(tǒng)中研究了RNAi。Fire等，1998，Nature，391，806，RNAiinC.elegans；BahramianandZarbl，1999，MolecularandCellularBiology，19，274-283以及WiannyandGoetz，1999，NatureCellBiol.，2，70，RNAimediatedbydsRNAinmammaliansystems；Hammond等，2000，Nature，404，293，RNAiinDrosophilacells；Elbashir等，2001，Nature，411，494，RNAiinducedbyintroductionofduplexesofsynthetic21-nucleotideRNAsinculturedmammaliancells。這樣的工作與其他工作一起為有助于構(gòu)建RNAi分子的長度、結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成和序列以便介導(dǎo)RNAi活性提供指導(dǎo)。多種出版物提供了可用作基因表達調(diào)節(jié)劑的RNAi分子的實例。這樣的出版物包括，美國專利No.8,993,530、8,877,917、8,293,719、7,947,659、7,919,473、7,790,878、7,737,265、7,592,322；以及美國公開No.20150197746、20140350071、20140315835、20130156845和20100267805，涉及RNAi分子類型及其生產(chǎn)的教導(dǎo)通過引用并入本文。適配體可結(jié)合多種蛋白質(zhì)靶標并破壞那些蛋白質(zhì)與其他蛋白質(zhì)的相互作用。因此，基因表達調(diào)節(jié)劑可以是適配體，并且基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因可以編碼這種適配體?？赏ㄟ^特異性結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白的DNA結(jié)合位點來選擇適配體阻止基因轉(zhuǎn)錄的能力。PCT公開No.WO98/29430和WO00/20040提供了用于調(diào)節(jié)基因表達的適配體的實例；并且美國公開No.20060128649也提供了這樣的適配體的實例，其中每一個的適配體通過引用并入本文。作為另一個實例，調(diào)節(jié)基因表達的可以是三鏈體寡聚體。這樣的分子可以阻礙轉(zhuǎn)錄。一般而言，這被稱為三鏈體策略，因為寡聚物圍繞雙螺旋DNA，形成三鏈螺旋。這樣的分子可以被設(shè)計為識別所選擇基因上的獨特位點(Maher等，AntisenseRes.andDev.，1(3)：227，1991；Helene，C.，AnticancerDrugDesign，6(6)：569，1991)。轉(zhuǎn)基因的序列還可以包括表達控制序列。表達控制DNA序列包括啟動子、增強子和操縱子，并且一般基于這樣的表達系統(tǒng)來選擇，所述表達系統(tǒng)中將利用所述表達構(gòu)建體。在一些實施方案中，選擇啟動子和增強子序列來用于提高基因表達的能力，而可以選擇操縱子序列用于調(diào)節(jié)基因表達的能力。轉(zhuǎn)基因還可以包括促進并優(yōu)選促進宿主細胞中的同源重組的序列。轉(zhuǎn)基因還可以包括在宿主細胞中復(fù)制所必需的序列。示例性的表達控制序列包括啟動子序列，例如巨細胞病毒啟動子；勞斯肉瘤病毒啟動子；和猴病毒40啟動子；以及在本文中別處公開或本領(lǐng)域已知的任何其他類型的啟動子。通常來說，啟動子有效地連接編碼期望表達產(chǎn)物的序列的上游(即5’)。轉(zhuǎn)基因還可以包括可操作地連接編碼序列下游(即3’)的合適的多聚腺苷酸化序列(例如，SV40或人生長激素基因多聚腺苷酸化序列)。病毒載體病毒已經(jīng)進化出了專門的機制以將它們的基因組轉(zhuǎn)運到它們所感染的細胞內(nèi)；基于這樣的病毒的病毒載體可以針對特定應(yīng)用定制以轉(zhuǎn)導(dǎo)細胞?？扇绫疚闹刑峁┑氖褂玫牟《据d體的實例是本領(lǐng)域中已知的或在本文中描述的。合適的病毒載體包括例如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、慢病毒載體、基于單純皰疹病毒(HSV)的載體、基于腺病毒的載體、基于腺相關(guān)病毒(AAV)的載體和AAV-腺病毒嵌合載體。本文中提供的病毒轉(zhuǎn)移載體可以基于逆轉(zhuǎn)錄病毒。逆轉(zhuǎn)錄病毒是能夠感染多種宿主細胞的單鏈正義RNA病毒。感染后，逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組整合到其宿主細胞的基因組中，使用其自身的逆轉(zhuǎn)錄酶從其RNA基因組產(chǎn)生DNA。然后病毒DNA與宿主細胞DNA一起復(fù)制，其翻譯和轉(zhuǎn)錄病毒和宿主基因?？梢圆僮髂孓D(zhuǎn)錄病毒載體以使病毒不能復(fù)制。因此，認為逆轉(zhuǎn)錄病毒載體特別可用于體內(nèi)穩(wěn)定的基因轉(zhuǎn)移。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的實例可見于例如美國公開No.20120009161、20090118212和20090017543，病毒載體及其制備方法通過引用整體并入本文。慢病毒載體是可用于生產(chǎn)本文中提供的病毒轉(zhuǎn)移載體的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的實例。慢病毒具有感染非分裂細胞的能力，這是構(gòu)成基因遞送載體的更高效方法的性質(zhì)(見例如Durand等，Viruses.2011Feb；3(2)：132-159)。慢病毒的實例包括HIV(人)、猿猴免疫缺陷病毒(SIV)、貓免疫缺陷病毒(FIV)、馬感染性貧血病毒(EIAV)和綿羊髓鞘脫落病毒(visnavirus)(綿羊慢病毒)。與其他逆轉(zhuǎn)錄病毒不同，已知基于HIV的載體將其乘客基因并入非分裂細胞中。慢病毒載體的實例可見于例如美國公開No.20150224209、20120203870、20140335607、20140248306、20090148936和20080254008，其中病毒載體及其制備方法通過引用整體并入本文?；趩渭儼捳畈《?herpessimplexvirus，HSV)的病毒載體也適用于本文中提供的用途。許多復(fù)制缺陷型HSV載體含有用于去除一個或更多個立即早期基因的缺失以阻止復(fù)制。皰疹病毒載體的優(yōu)點是其進入潛伏期的能力，其可以導(dǎo)致長期DNA表達，并且其大的病毒DNA基因組可以容納高達25kb的外源DNA。對于基于HSV的載體的描述參見例如美國專利No.5,837,532、5,846,782、5,849,572和5,804,413，以及國際專利申請WO91/02788、WO96/04394、WO98/15637和WO99/06583，其對病毒載體及其制備方法的描述通過引用整體并入。腺病毒(Adenovirus，Ad)是可以在體內(nèi)將DNA轉(zhuǎn)移到多種不同靶細胞類型中的非包膜病毒。通過缺失病毒復(fù)制所需的選擇基因，可以使病毒復(fù)制缺陷。消耗性非復(fù)制必需E3區(qū)域也經(jīng)常被缺失，以允許用于更大DNA插入物的額外空間。病毒轉(zhuǎn)移載體可基于腺病毒?？梢砸愿叩味犬a(chǎn)生腺病毒轉(zhuǎn)移載體，并且可以高效地將DNA轉(zhuǎn)移到復(fù)制和非復(fù)制細胞中。與慢病毒不同，腺病毒DNA不整合到基因組中，因此不在細胞分裂期間復(fù)制，而是使用宿主的復(fù)制機制在宿主細胞的核中復(fù)制。病毒轉(zhuǎn)移載體可以基于的腺病毒可以來自任何來源、任何亞組、任何亞型、亞型混合物或任何血清型。例如，腺病毒可以是亞型A(例如，血清型12、18和31)、亞組B(例如，血清型3、7、11、14、16、21、34、35和50)、亞組C(例如血清型1、2、5和6)、亞組D(例如，血清型8、9、10、13、15、17、19、20、22-30、32、33、36-39和42-48)、亞組E(例如血清型4)、亞組F(例如血清型40和41)、未分類的血清組(例如血清型49和51)或任何其他腺病毒血清型。腺病毒血清型1至51可從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC，Manassas，Va.)獲得。非C組腺病毒以及甚至非人腺病毒可用于制備復(fù)制缺陷型腺病毒載體。非C組腺病毒載體、產(chǎn)生非C組腺病毒載體的方法和使用非C組腺病毒載體的方法公開于例如，美國專利No.5,801,030、5,837,511和5,849,561，以及國際專利申請WO97/12986和WO98/53087。任何腺病毒、甚至嵌合腺病毒可以用作腺病毒載體的病毒基因組的來源。例如，人腺病毒可以用作復(fù)制缺陷型腺病毒載體的病毒基因組的來源。腺病毒載體的另一些實例可見于美國公開No.20150093831、20140248305、20120283318、201000008889、20090175897和20090088398，其中病毒載體及其制備方法的描述通過引用整體并入。本文中提供的病毒轉(zhuǎn)移載體也可以基于腺相關(guān)病毒(AAV)。AAV載體對于例如本文中所述的那些治療應(yīng)用令人特別感興趣。AAV是尚未知其引起人疾病的DNA病毒。通常來說，AAV需要與輔助病毒(例如，腺病毒或皰疹病毒)共感染，或輔助基因的表達，以高效復(fù)制。AAV具有在特定位點穩(wěn)定感染宿主細胞基因組的能力，使得它們比逆轉(zhuǎn)錄病毒更可預(yù)測；然而，通常來說，載體的克隆容量為4.9kb。已經(jīng)在基因治療應(yīng)用中所使用的AAV載體通常具有大約96％的親本基因組缺失，使得僅剩下包含用于DNA復(fù)制和包裝的識別信號的末端重復(fù)序列(ITR)。對于基于AAV的載體的描述參見例如美國專利No.8,679,837、8,637,255、8,409,842、7,803,622和7,790,449，以及美國公開No.20150065562、20140155469、20140037585、20130096182、20120100606和20070036757，其病毒載體和方法或其制備通過引用整體并入本文。AAV載體可以是重組AAV載體。AAV載體還可以是自身互補(self-complementary，sc)AAV載體，其描述于例如美國專利公開2007/01110724和2004/0029106，以及美國專利No.7,465,583和7,186,699中，其中載體和其生產(chǎn)方法通過引用并入本文。其中有病毒轉(zhuǎn)移載體的腺相關(guān)病毒可以是任何血清型或血清型混合物。AAV血清型包括AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10和AAV11。例如，當(dāng)病毒轉(zhuǎn)移載體基于血清型的混合物時，病毒轉(zhuǎn)移載體可以含有取自一種AAV血清型的衣殼信號序列(例如選自AAV血清型1、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11中的任一種)和來自不同血清型(例如選自AAV血清型1、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11中的任一種)的包裝序列。因此，在本文中提供的任一種方法或組合物的一些實施方案中，AAV載體是AAV2/8載體。在本文中提供的任一種方法或組合物的另一些實施方案中，AAV載體是AAV2/5載體。本文中提供的病毒轉(zhuǎn)移載體也可以基于甲病毒。甲病毒包括辛德畢斯(和VEEV)病毒、奧拉病毒、Babanki病毒、巴馬森林病毒、貝巴魯病毒、卡巴斯歐病毒病毒、基孔肯雅病毒、東部馬腦炎病毒、沼澤地病毒、摩根堡病毒、蓋塔病毒、高地J病毒、孜拉加奇病毒、馬亞羅病毒病毒、MeTri病毒、米德爾堡病毒、莫斯達斯佩德拉斯病毒、穆坎布病毒、恩杜穆病毒、歐尼恩病毒、那皮舒納病毒、里奧內(nèi)格羅病毒、羅斯河病毒、鮭魚胰腺病病毒、塞姆利基森林病毒、南方象海豹病毒、圖那特病毒、特羅卡拉病毒、烏納病毒、委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒、西方馬腦炎病毒和瓦塔羅阿病毒。通常來說，這種病毒的基因組編碼可以在宿主細胞的細胞質(zhì)中翻譯的非結(jié)構(gòu)蛋白(例如，復(fù)制子)和結(jié)構(gòu)蛋白(例如衣殼和包膜)。羅斯河病毒、辛德比斯病毒、塞姆利基森林病毒(SemlikiForestvirus，SFV)和委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒(Venezuelanequineencephalitisvirus，VEEV)都已被用于開發(fā)用于轉(zhuǎn)基因遞送的病毒轉(zhuǎn)移載體。假型病毒可以通過組合甲病毒包膜糖蛋白和逆轉(zhuǎn)錄病毒衣殼來形成。甲病毒載體的實例可見于美國公開No.20150050243、20090305344和20060177819；載體及其制備方法通過引用整體并入本文。靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑可包括通過其形式或特性可導(dǎo)致APC致耐受性作用的試劑。靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑還包括包含與免疫抑制劑綴合之載體的試劑。靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑包括帶負電的顆粒，例如具有一定尺寸和ζ電位的聚苯乙烯、PLGA或金剛石顆粒，例如美國公開No.20150010631中描述的那些，這樣的顆粒及其制備方法的描述通過引用并入本文。這種顆?？梢跃哂腥魏晤w粒形狀或構(gòu)象。然而，在一些實施方案中，優(yōu)選使用在體內(nèi)不太可能聚集的顆粒。在一個實施方案中，這些顆粒具有球形形狀。一般而言，這種顆粒的尺寸不一定是均勻的，盡管這種顆粒通常必須具有足以引發(fā)抗原呈遞細胞或其他MPS細胞中的吞噬作用的尺寸。優(yōu)選地，這些顆粒在尺寸上是微米尺度或納米尺度的，以增強溶解度，避免由體內(nèi)聚集引起的可能的并發(fā)癥并促進胞飲作用。這些顆?？梢跃哂屑s0.1μm至約10μm、約0.2μm至約2μm、約0.3μm至約5μm或約0.5μm至約3μm的平均直徑。在一些實施方案中，這些顆粒可以具有約0.1μm、約0.2μm、約0.3μm、約0.4μm、約0.5μm、約1.0μm、約1.5μm、約2.0μm、約2.5μm、約3.0μm、約3.5μm、約4.0μm、約4.5μm或約5.0μm的平均直徑。這些顆粒不需要具有均一的直徑，并且藥物制劑可以包含具有混合顆粒尺寸的多種顆粒。在一些實施方案中，這些顆粒是非金屬的。在這些實施方案中，這些顆?？梢杂删酆衔镄纬伞Ｔ谝粋€優(yōu)選的實施方案中，這些顆粒是可生物降解的。合適的顆粒的實例包括聚苯乙烯顆粒、PLGA顆粒、PLURONICS穩(wěn)定化聚丙烯硫化物顆粒和金剛石顆粒。另外，這些顆粒可以由寬范圍的其他材料形成。例如，這些顆?？梢杂刹Ａ?、二氧化硅、羥基羧酸的聚酯、二羧酸的聚酐、或羥基羧酸與二羧酸的共聚物構(gòu)成。更一般地，這些顆?？梢杂擅绹_No.20150010631中描述的其他材料構(gòu)成。顆粒通常具有特定的ζ電位。在某些實施方案中，ζ電位為負。ζ電位可以小于約-100mV或小于約-50mV。在某些實施方案中，顆粒具有-100mV至0mV、-75mV至0mV、-60mV至0mV、-50mV至0mV、-40mV至0mV、-30mV至0mV、-20mV至+0mV、-10mV至-0mV、-100mV至-50mV、-75mV至-50mV或-50mV和-40mV的ζ電位。在另一個實施方案中，這些顆粒還包含本文中提供的一種或更多種抗原。在這些實施方案的一些中，所述一種或更多種抗原被包封在顆粒中。靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑的另一個實例是納米晶體形式的免疫抑制劑，其中免疫抑制劑本身的形式是顆?；蝾w粒樣。在這些實施方案中，這種形式模擬了病毒或其他外來病原體。許多藥物已被納米化并且用于生產(chǎn)這種藥物形式的適當(dāng)方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。藥物納米晶體(例如納米晶體雷帕霉素)是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的(Katteboinaa等2009，InternationalJournalofPharmTechResesarch；Vol.1，No.3；pp682-694)。本文中使用的“藥物納米晶體”是指不包括載體或基質(zhì)材料的藥物(例如，免疫抑制劑)的形式。在一些實施方案中，藥物納米晶體包含90％、95％、98％或99％或更多的藥物。用于生產(chǎn)藥物納米晶體的方法包括但不限于研磨、高壓均質(zhì)化、沉淀、噴霧干燥、超臨界溶液的迅速膨脹(rapidexpansionofsupercriticalsolution，RESS)、技術(shù)(BaxterHealthcare)和Nanocrystal技術(shù)TM(ElanCorporation)。在一些實施方案中，表面活性劑或穩(wěn)定劑可用于藥物納米晶體的空間或靜電穩(wěn)定性。在一些實施方案中，免疫抑制劑的納米晶體或納米晶體形式可以用于提高免疫抑制劑(特別是不溶或不穩(wěn)定的免疫抑制劑)的溶解度、穩(wěn)定性和/或生物利用度。靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑也可以是凋亡小體模擬物，并且使得相關(guān)抗原被耐受。這樣的模擬物描述于美國公開No.20120076831中，所述模擬物及其制備方法通過引用并入本文。凋亡小體模擬物可以是顆粒、珠、分支化聚合物、樹枝狀聚合物或脂質(zhì)體。優(yōu)選地，模擬物是顆粒狀，并且一般是球面形、橢圓形、棒形、球形或多面體形狀。然而，或者模擬物可以是不規(guī)則或分支形狀。在一些優(yōu)選的實施方案中，模擬物由可生物降解的材料構(gòu)成。還優(yōu)選的是，模擬物具有凈中性或負電荷，以便降低與一般帶有凈負電荷的細胞表面的非特異性結(jié)合。優(yōu)選地，模擬物表面由使得非特異性或不需要的生物相互作用最小化的材料構(gòu)成。當(dāng)為顆粒時，所述模擬物表面可用阻止或降低非特異性相互作用的材料包被。通過用親水層例如聚(乙二醇)(poly(ethyleneglycol)，PEG)及其共聚物如PLURONICS(包括聚(乙二醇)-bl-聚(丙二醇)-bl-聚(乙二醇)的共聚物)涂覆顆粒所獲得的空間穩(wěn)定化可降低與間質(zhì)的蛋白質(zhì)的非特異性相互作用。當(dāng)作為顆粒時，模擬物可以是由玻璃、二氧化硅、羥基羧酸的聚酯、二羧酸的聚酐或羥基羧酸與二羧酸的共聚物構(gòu)成的顆粒。這些模擬物可以是量子點，或由量子點構(gòu)成，例如量子點聚苯乙烯顆粒。這些模擬物可以包括聚乙醇酸聚合物(PGA)、聚乳酸聚合物(PLA)、聚癸二酸聚合物(PSA)、聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)、聚乳酸-癸二酸共聚物(PLSA)、聚乙醇酸-癸二酸共聚物(PGSA)等。模擬物也可以是聚苯乙烯珠。這些模擬物可以包含一種或更多種抗原。模擬物可以能夠直接或間接地與一種或更多種期望獲得其耐受性的抗原綴合。在一些情況下，模擬物將具有多個結(jié)合位點，以便暴露抗原的多個拷貝，并提高致耐受性應(yīng)答的可能性。模擬物可以在其表面上具有一種抗原或在表面上具有多種不同的抗原。然而，或者模擬物可具有可吸附綴合部分的表面而不形成化學(xué)鍵。在一些實施方案中，模擬物還可以包含凋亡信號分子，例如使用聚苯乙烯珠，盡管這不是必需的。凋亡信號分子包括但不限于美國公開No.20050113297中描述的凋亡信號分子，所述凋亡信號分子通過引用并入本文。適用于這些顆粒的分子包括靶向吞噬細胞的分子，所述吞噬細胞包括巨噬細胞、樹突狀細胞、單核細胞和嗜中性粒細胞。這樣的分子可以是血小板反應(yīng)素或膜聯(lián)蛋白I。靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑也可以是紅細胞結(jié)合治療劑，例如美國公開No.20120039989中描述的那些，所述治療劑及其制備方法通過引用并入本文。如其所述，發(fā)現(xiàn)了與紅細胞(也稱為紅血球)特異性結(jié)合的肽。這些肽甚至在存在于血液中的其他因子的存在下與紅細胞特異性結(jié)合，并且可用于產(chǎn)生免疫耐受。因此，紅細胞結(jié)合治療劑包含一種或更多種期望對其耐受的抗原和紅細胞親和配體。所述一種或更多種抗原可以是本文中所述的病毒轉(zhuǎn)移載體抗原，例如一種或更多種病毒抗原(例如一種或更多種病毒衣殼蛋白的病毒抗原)。此外，所述一種或更多種抗原還可以是或包括所提供的被表達轉(zhuǎn)基因的一種或更多種抗原。所述抗原可以形成期望對其耐受的混合物。特異性結(jié)合紅細胞的肽的實例包括ERY1、ERY19、ERY59、ERY64、ERY123、ERY141和ERY162。除了結(jié)合紅細胞的肽之外，蛋白質(zhì)(例如抗體，例如單鏈抗體及其抗原結(jié)合片段)也可以用作親和配體。親和配體還可以包括用于紅細胞表面組分的核苷酸適配體配體。因此，可以制備適配體并用于代替其他紅細胞親和配體。DNA和RNA適配體可用于提供非共價紅細胞結(jié)合。適配體可以分類為DNA適配體、RNA適配體或肽適配體。另外，親和配體可以是兩種或更多種親和配體的融合物，例如紅細胞結(jié)合肽。此外，紅細胞結(jié)合治療劑的組分可以與載體(例如聚合物囊泡(polymersome)、脂質(zhì)體或膠束或一些類型的納米顆粒)相締合。在一些實施方案中，組分被包封在這樣的載體中。在一些實施方案中，載體包含本文中所述的親和配體和一種或更多種抗原。在這樣的一個實施方案中，親和配體和一種或更多種抗原不一定需要彼此綴合。靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑還包括本文中提供的與靶向APC的載體相偶聯(lián)的任一種免疫抑制劑。在一些實施方案中，所述載體可以是對APC標志物具有特異性的抗體或其抗原結(jié)合片段(或一些其他配體)。這樣的標志物包括但不限于CD1a(R4，T6，HTA-1)；CD1b(R1)；CD1c(M241，R7)；CD1d(R3)；CD1e(R2)；CD11b(αM整合素鏈，CR3，Mo1，C3niR，Mac-1)；CD11c(αX整合素，p150，95，AXb2)；CDw117(乳糖神經(jīng)酰胺(Lactosylceramide，LacCer)；CD19(B4)；CD33(gp67)；CD35(CR1，C3b/C4b受體)；CD36(GpIIIb，GPIV，PASIV)；CD39(ATP脫氫酶，NTP脫氫酶-1)；CD40(Bp50)；CD45(LCA，T200，B220，Ly5)；CD45RA；CD45RB；CD45RC；CD45RO(UCHL-1)；CD49d(VLA-4α，α4整合素)；CD49e(VLA-5α，α5整合素)；CD58(LFA-3)；CD64(FcγRI)；CD72(Ly-19.2，Ly-32.2，Lyb-2)；CD73(Ecto-5’核苷酸酶(nucloticlase))；CD74(Ii，恒定鏈)；CD80(B7，B7-1，BB1)；CD81(TAPA-1)；CD83(HB15)；CD85a(ILT5，LIR3，HL9)；CD85d(ILT4，LIR2，MIR10)；CD85j(ILT2，LIR1，MIR7)；CD85k(IIT3，LIR5，HM18)；CD86(B7-2/B70)；CD88(C5aB)；CD97(BL-KDD/F12)；CD101(IGSF2，P126，V7)；CD116(GM-CSFRα)；CD120a(TMFRI，p55)；CD120b(TNFRII，p75，TNFRp80)；CD123(IL-3Rα)；CD139；CD148(HPTP-η，p260，DEP-1)；CD150(SLAM，IPO-3)；CD156b(TACE，ADAM17，cSVP)；CD157(Mo5，BST-1)；CD167a(DDR1，trkE，cak)；CD168(RHAMM，IHABP，HMMR)；CD169(唾液酸黏附素，Siglec-1)；CD170(Siglec-5)；CD171(L1CAM，NILE)；CD172(SIRP-1α，MyD-1)；CD172b(SIRPβ)；CD180(RP105，Bgp95，Iy64)；CD184(CXCR4，NPY3R)；CD193(CCR3)；CD196(CCR6)；CD197(CCR7(wsCDw197))；CDw197(CCR7，EBI1，BLR2)；CD200(OX2)；CD205(DEC-205)；CD206(MMR)；CD207(Langerin)；CD208(DC-LAMP)；CD209(DC-SIGN)；CDw218a(IL18Rα)；CDw218b(IL8Rβ)；CD227(MUC1，PUM，PEM，EMA)；CD230(朊病毒蛋白(PrP))；CD252(OX40L，TNF(配體)超家族，成員4)；CD258(LIGHT，TNF(配體)超家族，成員14)；CD265(TRANCE-R，TNF-R超家族，成員11a)；CD271(NGFR，p75，TNFR超家族，成員16)；CD273(B7DC，PDL2)；CD274(B7H1，PDL1)；CD275(B7H2，ICOSL)；CD276(B7H3)；CD277(BT3.1，B7家族：嗜乳脂蛋白3)；CD283(TLR3，TOLL樣受體3)；CD289(TLR9，TOLL樣受體9)；CD295(LEPR)；CD298(ATP1B3，NaKATP酶β3亞基)；CD300a(CMRF-35H)；CD300c(CMRF-35A)；CD301(MGL1，CLECSF14)；CD302(DCL1)；CD303(BDCA2)；CD304(BDCA4)；CD312(EMR2)；CD317(BST2)；CD319(CRACC，SLAMF7)；CD320(8D6)；和CD68(gp110，巨噬唾液酸蛋白)；II類MHC；BDCA-1；和Siglec-H。用于制備抗體-藥物綴合物的方法可見于美國公開No.20150231241，所述方法通過引用并入本文。其他方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑還可以是包含本文中所述的任一種免疫抑制劑的合成納米載體。這樣的合成納米載體包括美國公開No.20100151000的那些，其合成納米載體及其制備方法通過引用并入本文。如其所述，發(fā)現(xiàn)可以通過施用包含NF-κB抑制劑和抗原的顆粒(例如脂質(zhì)體或聚合物顆粒)在體內(nèi)產(chǎn)生致耐受性應(yīng)答。因此，包含NF-κB途徑抑制劑和一種或更多種病毒轉(zhuǎn)移載體抗原的顆?？捎米鞅疚闹刑峁┑陌邢蚩乖蔬f細胞之免疫抑制劑。在一些實施方案中，所述顆粒是脂質(zhì)體。在另一些實施方案中，顆粒包含載體顆粒，例如金屬顆粒(例如鎢、金、鉑或銥顆粒)。在另一些實施方案中，顆粒包含聚合物基質(zhì)或載體，其示例性實例包括生物相容性聚合物顆粒(例如，用聚丙交酯-乙交酯共聚物制備的顆粒)。在另一些實施方案中，顆粒包含陶瓷或無機基質(zhì)或載體。NF-κB途徑的抑制劑可以降低NF-κB途徑的成員的水平或功能活性，并且可以選自BTK、LYN、BCRIgα、BCRIgβ、Syk、Blnk、PLCγ2、PKCβ、DAG、CARMA1、BCL10、MAIT1、PI3K、PIPS、AKT、p38MAPK、ERK、COT、IKKα、IKKβ、IKKγ、NIK、RelA/p65、P105/p50、c-Rel、RelB、p52、NIK、Leu13、CD81、CD19、CD21及其在補體和凝集級聯(lián)中的配體、TRAF6、泛素連接酶、Tab2、TAK1、NEMO、NOD2、RIP2、Lck、fyn、Zap70、LAT、GRB2、SOS、CD3ζ、Slp-76、GADS、ITK、PLCγ1、PKCθ、ICOS、CD28、SHP2、SAP、SLAM和2B4。在一些實施方案中，NF-κB途徑抑制劑降低RelA/p65、P105/p50、c-Rel、RelB或p52中的任一種或更多種的水平或功能活性。根據(jù)本發(fā)明可以使用多種其他合成納米載體，并且在一些實施方案中，將其與免疫抑制劑偶聯(lián)以提供其他靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑。在一些實施方案中，合成納米載體是球體或球狀體。在一些實施方案中，合成納米載體是平的或板狀的。在一些實施方案中，合成納米載體是立方體或立方體狀的。在一些實施方案中，合成納米載體是橢圓形或橢球狀的。在一些實施方案中，合成納米載體是圓柱體、錐體或棱錐體。在一些實施方案中，期望使用在尺寸或形狀方面相對均一的合成納米載體群體，使得每個合成納米載體具有相似的性質(zhì)。例如，基于合成納米載體的總數(shù)，所提供的組合物或方法中的任一種的至少80％、至少90％或至少95％的合成納米載體可具有這樣的最小尺寸或最大尺寸，其落在合成納米載體的平均直徑或平均尺寸的5％、10％或20％內(nèi)。合成納米載體可以是實心或中空的，并且可以包含一個或更多個層。在一些實施方案中，每層相對于其他層具有獨特的組成和獨特的性質(zhì)。僅舉一個例子，合成納米載體可以具有核/殼結(jié)構(gòu)，其中核是一層(例如聚合物核)，并且殼是第二層(例如脂質(zhì)雙層或單層)。合成納米載體可以包含多個不同的層。在一些實施方案中，合成納米載體可任選地包含一種或更多種脂質(zhì)。在一些實施方案中，合成納米載體可以包含脂質(zhì)體。在一些實施方案中，合成納米載體可以包含脂質(zhì)雙層。在一些實施方案中，合成納米載體可以包含脂質(zhì)單層。在一些實施方案中，合成納米載體可以包含膠束。在一些實施方案中，合成納米載體可以包含由脂質(zhì)層(例如脂質(zhì)雙層、脂質(zhì)單層等)包圍的包含聚合物基質(zhì)的核心。在一些實施方案中，合成納米載體可以包含由脂質(zhì)層(例如，脂質(zhì)雙層，脂質(zhì)單層等)包圍的非聚合物的核心(例如，金屬顆粒、量子點、陶瓷顆粒、骨顆粒、病毒顆粒、蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物等)。在另一些實施方案中，合成納米載體可以包含金屬顆粒、量子點、陶瓷顆粒等。在一些實施方案中，非聚合物的合成納米載體是非聚合物組分的聚集體，例如金屬原子(例如金原子)的聚集體。在一些實施方案中，合成納米載體可任選地包含一種或更多種兩親性實體。在一些實施方案中，兩親性實體可以促進具有提高的穩(wěn)定性、改善的均一性或提高的黏度的合成納米載體的生產(chǎn)。在一些實施方案中，兩親性實體可以與脂質(zhì)膜(例如，脂質(zhì)雙層、脂質(zhì)單層等)的內(nèi)表面締合。本領(lǐng)域已知的許多兩親性實體適合用于制備根據(jù)本發(fā)明的合成納米載體。這樣的兩親性實體包括但不限于，磷酸甘油酯；磷脂酰膽堿；二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)；二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)；二油基丙基三乙基銨(DOTMA)；二油酰磷脂酰膽堿；膽固醇；膽固醇酯；二酰基甘油；琥珀酸二?；视王ィ欢字８视?DPPG)；己烷癸醇；脂肪醇如聚乙二醇(PEG)；聚氧乙烯-9-月桂醚；表面活性脂肪酸，例如棕櫚酸或油酸；脂肪酸；脂肪酸單甘油酯；脂肪酸甘油二酯；脂肪酸酰胺；脫水山梨糖醇三油酸酯甘膽酸鹽；脫水山梨糖醇單月桂酸酯聚山梨醇酯20聚山梨醇酯60聚山梨醇酯65聚山梨醇酯80聚山梨醇酯85聚氧乙烯單硬脂酸酯；表面活性素；泊洛沙姆；脫水山梨糖醇脂肪酸酯，例如脫水山梨醇三油酸酯；卵磷脂；溶血卵磷脂；磷脂酰絲氨酸；磷脂酰肌醇；鞘磷脂；磷脂酰乙醇胺(腦磷脂)；心磷脂；磷脂酸；腦苷脂；磷酸二鯨蠟酯；二棕櫚酰磷脂酰甘油；硬脂胺；十二烷基胺；十六烷基胺；乙酰棕櫚酸酯；甘油蓖麻油酸酯；硬脂酸十六烷基酯；肉豆蔻酸異丙酯；泰洛沙泊；聚(乙二醇)5000-磷脂酰乙醇胺；聚(乙二醇)400單硬脂酸酯；磷脂；具有高表面活性劑性質(zhì)的合成和/或天然洗滌劑；脫氧膽酸鹽；環(huán)糊精；離液鹽；離子配對劑；及其組合。兩親性實體組分可以是不同的兩親性實體的混合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到，這是具有表面活性劑活性的物質(zhì)的示例性而非全面的列舉。任何兩親性實體可用于生產(chǎn)根據(jù)本發(fā)明所使用的合成納米載體。在一些實施方案中，合成納米載體可任選地包含一種或更多種碳水化合物。碳水化合物可以是天然的或合成的。碳水化合物可以是衍生化的天然碳水化合物。在某些實施方案中，碳水化合物包括單糖或二糖，其包括但不限于葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、海藻糖、纖維二糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡糖胺、半乳糖胺和神經(jīng)氨酸。在某些實施方案中，碳水化合物是多糖，其包括但不限于短梗霉聚糖(pullulan)、纖維素、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥基纖維素(HC)、甲基纖維素(MC)、葡聚糖、環(huán)葡聚糖、糖原、羥乙基淀粉、角叉菜膠、糖、直鏈淀粉、殼聚糖、N，O-羧甲基殼聚糖、藻膠和藻酸、淀粉、殼多糖、菊粉、魔芋、葡甘露聚糖、石耳葡聚糖、肝素、透明質(zhì)酸、凝膠多糖和黃原膠。在一些實施方案中，合成納米載體不包含(或特別排除)碳水化合物，例如多糖。在某些實施方案中，碳水化合物可包括碳水化合物衍生物，例如糖醇，其包括但不限于甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖醇和乳糖醇。在一些實施方案中，合成納米載體可以包含一種或更多種聚合物。在一些實施方案中，合成納米載體包含一種或更多種作為非甲氧基封端之普朗尼克聚合物的聚合物。在一些實施方案中，構(gòu)成合成納米載體的聚合物中的至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或99％(重量/重量)是非甲氧基封端的普朗尼克聚合物。在一些實施方案中，構(gòu)成合成納米載體的所有聚合物是非甲氧基封端的普朗尼克聚合物。在一些實施方案中，合成納米載體包含一種或更多種作為非甲氧基封端聚合物的聚合物。在一些實施方案中，構(gòu)成合成納米載體的聚合物中的至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或99％(重量/重量)是非甲氧基封端的聚合物。在一些實施方案中，構(gòu)成合成納米載體的所有聚合物是非甲氧基封端的聚合物。在一些實施方案中，合成納米載體包括不含普朗尼克聚合物的一種或更多種聚合物。在一些實施方案中，構(gòu)成合成納米載體的聚合物中的至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或99％(重量/重量)不包含普朗尼克聚合物。在一些實施方案中，構(gòu)成合成納米載體的所有聚合物不包含普朗尼克聚合物。在一些實施方案中，這樣的聚合物可以被包衣層(例如脂質(zhì)體、脂質(zhì)單層、膠束等)包圍。在一些實施方案中，合成納米載體的要素可以與聚合物連接。可以通過多種方法中的任一種將免疫抑制劑與合成納米載體偶聯(lián)。一般而言，連接可以是免疫抑制劑與合成納米載體之間結(jié)合的結(jié)果。這種結(jié)合可導(dǎo)致免疫抑制劑與合成納米載體的表面連接和/或被包含(包封)在合成納米載體內(nèi)。然而，在一些實施方案中，由于合成納米載體的結(jié)構(gòu)，免疫抑制劑被合成納米載體包封，而不是與合成納米載體結(jié)合。在一些優(yōu)選的實施方案中，合成納米載體包含本文中提供的聚合物，并且免疫抑制劑與聚合物連接。當(dāng)由于免疫抑制劑和合成納米載體之間的結(jié)合而發(fā)生連接時，可以通過偶聯(lián)部分進行連接。偶聯(lián)部分可以是免疫抑制劑通過其與合成納米載體相結(jié)合的任何部分。這樣的部分包括共價鍵，例如酰胺鍵或酯鍵，以及將免疫抑制劑與合成納米載體(共價或非共價地)結(jié)合的單獨分子。這樣的分子包括接頭或聚合物或其單元。例如，偶聯(lián)部分可以包含與免疫抑制劑靜電結(jié)合的帶電聚合物。作為另一個實例，偶聯(lián)部分可以包含與其共價結(jié)合的聚合物或其單元。在一些優(yōu)選的實施方案中，合成納米載體包含本文中提供的聚合物。這些合成納米載體可以是完全聚合的，或者它們可以是聚合物與其他材料的混合物。在一些實施方案中，合成納米載體的聚合物締合以形成聚合物基質(zhì)。在這些實施方案的一些中，組分(例如免疫抑制劑)可以與聚合物基質(zhì)中的一種或更多種聚合物共價締合。在一些實施方案中，共價締合由接頭介導(dǎo)。在一些實施方案中，組分可以與聚合物基質(zhì)中的一種或更多種聚合物非共價締合。例如，在一些實施方案中，組分可以包封在聚合物基質(zhì)內(nèi)、被聚合物基質(zhì)包圍和/或分散在聚合物基質(zhì)中。作為替代或補充，組分可通過疏水相互作用、電荷相互作用、范德華力等與聚合物基質(zhì)中的一種或更多種聚合物締合。許多種聚合物和用于從其形成聚合物基質(zhì)的方法是常規(guī)已知的。聚合物可以是天然或非天然(合成)聚合物。聚合物可以是包含兩種或更多種單體的均聚物或共聚物。就序列而言，共聚物可以是無規(guī)、嵌段或包含無規(guī)和嵌段序列的組合。通常來說，根據(jù)本發(fā)明的聚合物是有機聚合物。在一些實施方案中，聚合物包括聚酯、聚碳酸酯、聚酰胺或聚醚或其單元。在另一些實施方案中，聚合物包含聚(乙二醇)(PEG)、聚丙二醇、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚乳酸-乙醇酸共聚物或聚己內(nèi)酯或其單元。在一些實施方案中，優(yōu)選聚合物是可生物降解的。因此，在這些實施方案中，優(yōu)選的是，如果聚合物包含聚醚，例如聚(乙二醇)或聚丙二醇或其單元，則聚合物包含聚醚和生物可降解聚合物的嵌段共聚物，以使得聚合物是可生物降解的。在另一些實施方案中，聚合物不僅僅包含聚醚或其單元，例如聚(乙二醇)或聚丙二醇或其單元。適用于本發(fā)明的聚合物的其他實例包括但不限于：聚乙烯、聚碳酸酯(例如聚(1，3-二氧雜環(huán)己烷-2-酮))、聚酐(例如聚(癸二酸酐))、聚丙基富馬酸酯、聚酰胺(例如聚己內(nèi)酰胺)、聚縮醛、聚醚、聚酯(例如，聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯-乙交酯共聚物、聚己內(nèi)酯、聚羥基酸(例如、聚(β羥基鏈烷酸酯)))、聚原酸酯、聚氰基丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚氨酯、聚磷腈、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚脲、聚苯乙烯和聚胺、聚賴氨酸、聚賴氨酸-PEG共聚物和聚(乙烯亞胺)、聚(乙烯亞胺)-PEG共聚物。在一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聚合物包括已由美國食品和藥物管理局(FDA)根據(jù)21C.F.R.§177.2600批準用于人的聚合物，其包括但不限于聚酯(例如，聚乳酸、聚乳酸-乙醇酸共聚物、聚己內(nèi)酯、聚戊內(nèi)酯、聚(1，3-二氧雜環(huán)己烷-2酮))；聚酐(例如，聚(癸二酸酐))；聚醚(例如，聚乙二醇)；聚氨酯；聚甲基丙烯酸酯；聚丙烯酸酯；和聚氰基丙烯酸酯。在一些實施方案中，聚合物可以是親水的。例如，聚合物可以包含陰離子基團(例如磷酸根基團、硫酸根基團、羧酸根基團)；陽離子基團(例如季銨基)；或極性基團(例如，羥基、巰基、胺基)。在一些實施方案中，包含親水性聚合物基質(zhì)的合成納米載體在合成納米載體內(nèi)產(chǎn)生親水性環(huán)境。在一些實施方案中，聚合物可以是疏水性的。在一些實施方案中，包含疏水性聚合物基質(zhì)的合成納米載體在合成納米載體內(nèi)產(chǎn)生疏水環(huán)境。聚合物的親水性或疏水性的選擇可對并入合成納米載體內(nèi)的材料的性質(zhì)具有影響。在一些實施方案中，聚合物可以用一個或更多個部分和/或官能團修飾。根據(jù)本發(fā)明可以使用多種部分或官能團。在一些實施方案中，聚合物可以用聚乙二醇(PEG)、碳水化合物和/或衍生自多糖的無環(huán)聚縮醛修飾(Papisov，2001，ACSSymposiumSeries，786：301)。某些實施方案可以使用Gref等人的美國專利No.5543158或VonAndrian等人的WO公開W02009/051837的一般教導(dǎo)來進行。在一些實施方案中，聚合物可以用脂質(zhì)或脂肪酸基團修飾。在一些實施方案中，脂肪酸基團可以是丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、花生酸、山崳酸或木蠟酸中的一種或更多種。在一些實施方案中，脂肪酸基團可以是棕櫚油酸、油酸、反型異油酸、亞油酸、α-亞油酸、γ-亞油酸、花生四烯酸、鱈肝油酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸或芥酸中的一種或更多種。在一些實施方案中，聚合物可以是聚酯，其包括含有乳酸和乙醇酸單元的共聚物，例如聚乳酸-乙醇酸共聚物和聚丙交酯-乙交酯共聚物，在本文中統(tǒng)稱為“PLGA”；以及包含乙醇酸單元的均聚物，在本文中稱為“PGA”，以及乳酸單元如聚-L-乳酸、聚-D-乳酸、聚-D，L-乳酸、聚-L-丙交酯、聚-D-丙交酯和聚-D，L-丙交酯，在本文中統(tǒng)稱為“PLA”。在一些實施方案中，示例性聚酯包括例如聚羥基酸；PEG共聚物和丙交酯與乙交酯的共聚物(例如，PLA-PEG共聚物、PGA-PEG共聚物、PLGA-PEG共聚物及其衍生物)。在一些實施方案中，聚酯包括例如聚(己內(nèi)酯)、聚(己內(nèi)酯)-PEG共聚物、聚L-丙交酯-L-賴氨酸共聚物、聚(絲氨酸酯)、聚(4-羥基-L-脯氨酸酯)、聚[α-(4-氨基丁基)-L-乙醇酸]及其衍生物。在一些實施方案中，聚合物可以是PLGA。PLGA是乳酸與乙醇酸的生物相容性且生物可降解的共聚物，并且多種形式的PLGA的特征在于乳酸∶乙醇酸的比例。乳酸可以是L-乳酸、D-乳酸或D，L-乳酸。PLGA的降解速率可以通過改變?nèi)樗帷靡掖妓岜嚷蕘碚{(diào)節(jié)。在一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明使用的PLGA的特征在于乳酸∶乙醇酸的比率為約85∶15、約75∶25、約60∶40、約50∶50、約40∶60、約25∶75或約15∶85。在一些實施方案中，聚合物可以是一種或更多種丙烯酸類聚合物。在某些實施方案中，丙烯酸類聚合物包括例如丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰基乙酯、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸酐)、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸甲酯共聚物、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、甲基丙烯酸縮水甘油酯共聚物、聚氰基丙烯酸酯，以及包含一種或更多種前述聚合物的組合。丙烯酸聚合物可以包括具有低含量的季銨基團的丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的完全聚合的共聚物。在一些實施方案中，聚合物可以是陽離子聚合物。通常來說，陽離子聚合物能夠縮合和/或保護核酸的帶負電荷的鏈。含胺聚合物如聚(賴氨酸)(Zauner等，1998，Adv.DrugDel.Rev.，30：97；和Kabanov等，1995，BioconiugateChem.，6：7)、聚(乙烯亞胺)(PEI；Boussif等，1995，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，1995，92：7297)和聚(酰氨基胺)樹枝狀聚合物(Kukowska-Latallo等，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，93：4897；Tang等，1996，BioconjugateChem.，7：703；和Haensler等，1993，BioconjugateChem.，4：372)在生理pH下帶正電荷，與核酸形成離子對。在一些實施方案中，合成納米載體可以不包含(或可以排除)陽離子聚合物。在一些實施方案中，聚合物可以是帶有陽離子側(cè)鏈的可降解聚酯(Putnam等，1999，Macromolecules，32：3658；Barrera等，1993，J.Am.Chem.Soc.，115：11010；Kwon等，1989，Macromolecules，22：3250；Lim等，1999，J.Am.Chem.Soc.，121：5633；和Zhou等，1990，Macromolecules，23：3399)。這些聚酯的實例包括聚(L-丙交酯-L-賴氨酸)共聚物(Barrera等，1993，J.Am.Chem.Soc.，115：11010)、聚(絲氨酸酯)(Zhou等，1990，Macromolecules，23：3399)、聚(4-羥基-L-脯氨酸酯)(Putnam等，1999，Macromolecules，32：3658；和Lim等，1999，J.Am.Chem.Soc.，121：5633)和聚(4-羥基-L-脯氨酸酯)(Putnam等，1999，Macromolecules，32：3658；和Lim等，1999，J.Am.Chem.Soc.，121：5633)。這些和其他聚合物的性質(zhì)及其制備方法是本領(lǐng)域中公知的(見例如美國專利6,123,727；5,804,178；5,770,417；5,736,372；5,716,404；6,095,148；5,837,752；5,902,599；5,696,175；5,514,378；5,512,600；5,399,665；5,019,379；5,010,167；4,806,621；4,638,045；和4,946,929；Wang等，2001，J.Am.Chem.Soc.，123：9480；Lim等，2001，J.Am.Chem.Soc.，123：2460；Langer,2000，Acc.Chem.Res.，33：94；Langer，1999，J.Contr0l.Release，62：7；以及Uhrich等，1999，Chem.Rev.，99：3181)。更一般地，用于合成某些合適的聚合物的多種方法在下列文獻中描述于：ConciseEncyclopediaofPolymerScienceandPolymericAminesandAmmoniumSalts，Goethals編，PergamonPress，1980；Principles0fPolymerization，Odian，JohnWiley&Sons著，第四版，2004；ContemporaryPolymerChemistry，Allcock等著，Prentice-Hall，1981；Deming等，1997，Nature，390：386；以及美國專利6,506,577，6,632,922，6,686,446和6,818,732。在一些實施方案中，聚合物可以是直鏈或支鏈聚合物。在一些實施方案中，聚合物可以是樹枝狀聚合物。在一些實施方案中，聚合物可以基本上彼此交聯(lián)。在一些實施方案中，聚合物可以基本上不含交聯(lián)。在一些實施方案中，可以根據(jù)本發(fā)明使用聚合物而不經(jīng)歷交聯(lián)步驟。還應(yīng)理解，合成納米載體可包含嵌段共聚物、接枝共聚物、共混物、混合物和/或任何前述物質(zhì)和其他聚合物的加合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到，本文中列出的聚合物代表可以根據(jù)本發(fā)明使用的聚合物的示例性而非全面的列表。在一些實施方案中，合成納米載體不包含聚合物組分。在一些實施方案中，合成納米載體可包含金屬顆粒、量子點、陶瓷顆粒等。在一些實施方案中，非聚合的合成納米載體是非聚合物組分的聚集體，例如金屬原子(例如金原子)的聚集體。在一些實施方案中，本文中提供的任何免疫抑制劑可以與合成納米載體、抗體或其抗原結(jié)合片段(或靶向APC的其他配體)、紅細胞結(jié)合肽等偶聯(lián)。免疫抑制劑包括但不限于：他汀類；mTOR抑制劑，例如雷帕霉素或雷帕霉素類似物；TGF-β信號傳導(dǎo)劑；TGF-β受體激動劑；組蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制劑；皮質(zhì)類固醇；線粒體功能抑制劑，例如魚藤酮；P38抑制劑；NF-κB抑制劑；腺苷受體激動劑；前列腺素E2激動劑；磷酸二酯酶抑制劑，例如磷酸二酯酶4抑制劑；蛋白酶體抑制劑；激酶抑制劑；G蛋白偶聯(lián)受體激動劑；G蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑；糖皮質(zhì)激素；類視黃醇；細胞因子抑制劑；細胞因子受體抑制劑；細胞因子受體激活劑；過氧化物酶體增殖物激活受體拮抗劑；過氧化物酶體增殖物激活受體激動劑；組蛋白去乙?；敢种苿?；鈣調(diào)磷酸酶抑制劑；磷酸酶抑制劑和氧化的ATP。免疫抑制劑還包括IDO、維生素D3、環(huán)孢素A、芳烴受體抑制劑、白藜蘆醇、硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、阿司匹林、尼氟酸、雌三醇、雷公藤甲素(tripoiide)、白介素(例如IL-1，IL-10)、環(huán)孢素A、靶向細胞因子或細胞因子受體的siRNA等。他汀類的實例包括阿托伐他汀西立伐他汀、氟伐他汀(XL)、洛伐他汀美伐他汀匹伐他汀瑞舒伐他汀瑞舒伐他汀和辛伐他汀mTOR抑制劑的實例包括雷帕霉素及其類似物(例如CCL-779，RAD001，AP23573，C20-甲代烯丙基雷帕霉素(C20-Marap)，C16-(S)-丁基磺酰氨基雷帕霉素(C16-BSrap)，C16-(S)-3-甲基吲哚雷帕霉素(C16-iRap)(Bayle等Chemistry&Biology2006，13：99-107))、AZD8055、BEZ235(NVP-BEZ235)、大黃根酸(大黃酚)、地磷莫司(MK-8669)、依維莫司(RAD0001)、KU-0063794、PI-103、PP242、替西羅莫司和WYE-354(可得自Selleck，休斯敦，TX，美國)。TGF-β信號傳導(dǎo)劑的實例包括TGF-β配體(例如激活素A、GDF1、GDF11、骨形態(tài)發(fā)生蛋白、nodal、TGF-β)及其受體(例如ACVR1B、ACVR1C、ACVR2A、ACVR2B、BMPR2、BMPR1A、BMPR1B、TGFβRI、TGFβRII)、R-SMADS/c0-SMADS(例如，SMAD1、SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD5、SMAD8)和配體抑制劑(例如卵泡抑素、頭蛋白(noggin)、脊索素、DAN、lefty、LTBP1、THBS1、飾膠蛋白聚糖(Decorin))。線粒體功能抑制劑的實例包括蒼術(shù)苷(二鉀鹽)、豆氨酸(三銨鹽)、羰基氰化物m-氯苯腙、羧基蒼術(shù)苷(例如來自膠蒼術(shù)(Atractylisgummffera))、CGP-37157、(-)-魚藤素(例如來自絹毛萌豆(Munduleasericea))、F16、己糖激酶IIVDAC結(jié)合結(jié)構(gòu)域肽、寡霉素、魚藤酮、Ru360、SFK1和纈氨霉素(例如來自灰色鏈霉菌(Streptomycesfulvissimus))(EMD4Biosciences，美國)。P38抑制劑的實例包括SB-203580(4-(4-氟苯基)-2-(4-甲基亞磺酰基苯基)-5-(4-吡啶基)-1H-咪唑)、SB-239063(反式-1-(4-羥基環(huán)己基)-4-(氟苯基)-5-(2-甲氧基-嘧啶-4-基)咪唑)、SB-220025(5-(2-氨基-4-嘧啶基)-4-(4-氟苯基)-1-(4-哌啶基)咪唑)和ARRY-797。NF(例如NK-βIII)抑制劑的實例包括IFRD1、2-(1，8-萘啶-2-基)-苯酚、5-氨基水楊酸、BAY11-7082、BAY11-7085、CAPE(咖啡酸苯乙酯)、馬來酸二乙酯、IKK-2抑制劑IV、IMD0354、乳胞素、MG-132[Z-Leu-Leu-Leu-CHO]、NFκB激活抑制劑III、NF-κB激活抑制劑II、JSH-23、小白菊內(nèi)酯(parthenolide)、苯基胂氧化物(PAO)、PPM-18、吡咯烷二硫代氨基甲酸銨鹽、QNZ、RO106-9920、楝酰胺(rocaglamide)、楝酰胺AL、楝酰胺C、楝酰胺I、楝酰胺J、洛克米蘭醇(rocagla0l)、(R)-MG-132、水楊酸鈉、雷公藤內(nèi)酯(PG490)和蟛蜞菊內(nèi)酯(vedelolactone)。腺苷受體激動劑的實例包括CGS-21680和ATL-146e。前列腺素E2激動劑的實例包括前列腺素2和前列腺素4。磷酸二酯酶抑制劑(非選擇性和選擇性抑制劑)的實例包括咖啡因、氨荼堿、IBMX(3-異丁基-1-甲基黃嘌呤)、副黃嘌呤、己酮可可堿、可可堿、荼堿、甲基化黃嘌呤、長春西汀、EHNA(赤式-9-(2-羥基-3-壬基)腺嘌呤)、阿那格雷、依諾昔酮(PERFANTM)、米力農(nóng)、左西孟旦、松葉菊堿、異丁司特、吡拉米特、木犀草素、屈他維林、羅氟司特(DAXASTM，DALIRESPTM)、西地那非他達那非伐地那非烏地那非、阿伐那非、淫羊藿苷、4-甲基哌嗪和吡唑并嘧啶-7-1。蛋白酶體抑制劑的實例包括硼替佐米、雙硫侖、表沒食子兒荼素-3-沒食子酸酯和鹽孢菌酰胺A。激酶抑制劑的實例包括貝伐單抗、BIBW2992、西妥昔單抗伊馬替尼曲妥珠單抗吉非替尼雷珠單抗哌加他尼、索拉非尼、達沙替尼、舒尼替尼、埃羅替尼、尼羅替尼、拉帕替尼、帕尼單抗、凡德他尼、E7080、帕唑帕尼和木利替尼。糖皮質(zhì)激素的實例包括氫化可的松(皮質(zhì)醇)、醋酸可的松、潑尼松、潑尼松龍、甲基潑尼松龍、地塞米松、倍他米松、曲安西龍、倍氯米松、醋酸氟氫可的松、醋酸去氧皮質(zhì)酮(DOCA)和醛固酮。類維生素A的實例包括視黃醇、視黃醛、維A酸(視黃酸，)、異維A酸阿利維A酸阿維A酯(TEGISONTM)及其代謝物阿曲汀他扎羅汀貝沙羅汀和阿達帕林細胞因子抑制劑的實例包括IL1ra、IL1受體拮抗劑、IGFBP、TNF-BF、尿調(diào)節(jié)素、α-2-巨球蛋白、環(huán)孢素A、戊脒和己酮可可堿過氧化物酶體增殖物激活受體拮抗劑的實例包括GW9662、PPARγ拮抗劑III、G335和T0070907(EMD4Biosciences，美國)。過氧化物酶體增殖物激活受體激動劑的實例包括吡格列酮、環(huán)格列酮、氯貝特、GW1929、GW7647、L-165,041、LY171883、PPARγ激活劑、Fmoc-Leu、曲格列酮和WY-14643(EMD4Biosciences，美國)。組蛋白脫乙酰酶抑制劑的實例包括異羥肟酸(或異羥肟酸鹽)例如曲古柳菌素A、環(huán)狀四肽(例如trapoxinB)和縮酚酸肽，苯甲酰胺，親電酮，脂肪酸化合物如丁酸苯酯和丙戊酸，異羥肟酸如伏立諾他(SAHA)、貝利司他(PXD101)、LAQ824和潘比司他(LBH589)，苯甲酰胺如恩孕酮(MS-275)、CI994和莫西司他(MGCD0103)，煙酰胺，NAD的衍生物，二氫香豆素，萘并吡喃酮和2-羥基萘醛。鈣調(diào)磷酸酶抑制劑的實例包括環(huán)孢素、吡美莫司、voclosporin和他克莫司。磷酸酶抑制劑的實例包括BN82002鹽酸鹽、CP-91149、花萼海綿誘癌素A、斑蝥酸、斑蝥素、氯氰菊酯、乙基-3，4-脫質(zhì)抑素、福司曲星鈉鹽、MAZ51、甲基-3，4-脫質(zhì)抑素、NSC95397、去甲斑蝥素、來自東海原甲藻(prorocentrumconcavum)的岡田酸銨鹽、岡田酸、岡田酸鉀鹽、岡田酸鈉鹽、苯基胂氧化物、多種磷酸酶抑制劑混合物、蛋白磷酸酶1C、蛋白磷酸酶2A抑制蛋白、蛋白磷酸酶2A1、蛋白磷酸酶2A2和原釩酸鈉。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以包含可藥用賦形劑，例如防腐劑、緩沖劑、鹽水或磷酸緩沖鹽水?？梢允褂贸Ｒ?guī)藥物制造和配混技術(shù)制備組合物以得到可用的劑型。在一個實施方案中，將組合物與防腐劑一起懸浮在注射用無菌鹽水溶液中。D.使用和制造組合物的方法病毒轉(zhuǎn)移載體可以用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法或本文另有描述的方法制備。例如，可以使用例如在美國專利No.4,797,368和Laughlin等，Gene，23，65-73(1983)中所述的方法構(gòu)建和/或純化病毒轉(zhuǎn)移載體。例如，可以在互補細胞系中以適當(dāng)?shù)乃疆a(chǎn)生復(fù)制缺陷型腺病毒載體，所述互補細胞系提供不存在于復(fù)制缺陷型腺病毒載體中但是病毒繁殖所需的基因功能，從而產(chǎn)生高滴度的病毒轉(zhuǎn)移載體儲備?；パa細胞系可補充由早期區(qū)、晚期區(qū)、病毒包裝區(qū)、病毒相關(guān)RNA區(qū)或其組合所編碼的至少一種復(fù)制必需的基因功能缺陷，包括所有腺病毒功能(例如，以使腺病毒擴增子能夠增殖)。互補細胞系的構(gòu)建涉及標準分子生物學(xué)和細胞培養(yǎng)技術(shù)，例如由Sambrook等，MolecularCloning，aLaboratoryManual，第二版，ColdSpringHarbor出版社，ColdSpringHarbor，N.Y.(1989)，和Ausubel等，CurrentProtocolsinMolecularBiology，GreenePublishingAssociatesandJohnWiley&Sons，NewYork，N.Y.(1994)所述。用于產(chǎn)生腺病毒載體的互補細胞系包括但不限于293細胞(描述于例如Graham等，J.Gen.Viroi.，36，59-72(1977))、PER.C6細胞(描述于例如國際專利申請WO97/00326，以及美國專利No.5,994,128和6,033,908)和293-ORF6細胞(描述于例如國際專利申請WO95/34671和Brough等，J.Viroi.，71，9206-9213(1997))。在一些情況下，互補細胞不會補充所有需要的腺病毒基因功能。可使用輔助病毒以提供不由細胞或腺病毒基因組編碼的反式基因功能，以使得能夠復(fù)制腺病毒載體。腺病毒載體可以使用由例如以下所描述的材料和方法構(gòu)建、擴增和/或純化：美國專利No.5,965,358、5,994,128、6,033,908、6,168,941、6,329,200、6,383,795、6,440,728、6,447,995和6,475,757，美國專利申請公開號2002/0034735A1，以及國際專利申請WO98/53087、WO98/56937、WO99/15686、WO99/54441、WO00/12765、WO01/77304和WO02/29388，以及本文確定的其他參考文獻。非C組腺病毒載體(包括腺病毒血清型35載體)可以使用例如美國專利No.5,837,511和5,849,561以及國際專利申請WO97/12986和WO98/53087中所述的方法產(chǎn)生?？梢允褂弥亟M方法產(chǎn)生AAV載體。通常來說，該方法包括培養(yǎng)含有編碼以下的核酸序列的宿主細胞：AAV衣殼蛋白或其片段；功能性rep基因；由AAV反向末端重復(fù)序列(invertedterminalrepeat，ITR)構(gòu)成的重組AAV載體和轉(zhuǎn)基因；和足夠的輔助功能，以允許將重組AAV載體包裝到AAV衣殼蛋白中。在一些實施方案中，病毒轉(zhuǎn)移載體可以包含選自以下的AAV血清型的反向末端重復(fù)序列(ITR)：AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11及其變體。要在宿主細胞中培養(yǎng)以在AAV衣殼中包裝rAAV載體的組分可以反式地提供給宿主細胞。或者，可以由穩(wěn)定的宿主細胞提供任一種或更多種所需組分(例如，重組AAV載體、rep序列、cap序列和/或輔助功能)，所述穩(wěn)定宿主細胞已經(jīng)被使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法所改造以含有一種或更多種所需組分。最合適地，這種穩(wěn)定的宿主細胞可以在誘導(dǎo)型啟動子的控制下含有所需的組分。然而，期望組分也可以在組成型啟動子的控制下?？梢允褂萌魏魏线m的遺傳元件來將產(chǎn)生本發(fā)明的rAAV所需的重組AAV載體、rep序列、cap序列和輔助功能遞送到包裝宿主細胞。所選擇的遺傳元件可以通過任何合適的方法遞送，包括本文中所述的那些。用于構(gòu)建本發(fā)明的任何實施方案的方法對于核酸操作技術(shù)人員是已知的，并且包括遺傳工程、重組工程和合成技術(shù)。見例如，Sambrook等，MolecularCloning：ALaboratoryManual，ColdSpringHarbor出版社，ColdSpringHarbor,N.Y.。類似地，產(chǎn)生rAAV病毒粒子的方法是公知的，并且合適方法的選擇不是對本發(fā)明的限制。見例如，K.Fisher等，J.Virol.，70：520-532(1993)和U.S.Pat.No.5,478,745。在一些實施方案中，可以使用三重轉(zhuǎn)染方法(例如，如美國專利No.6,001,650中詳細描述的，其涉及三重轉(zhuǎn)染方法的內(nèi)容通過引用并入本文)來產(chǎn)生重組AAV載體。通常來說，通過以待包裝入AAV顆粒的重組AAV載體(包含轉(zhuǎn)基因)、AAV輔助功能載體和附屬功能載體轉(zhuǎn)染宿主細胞來產(chǎn)生重組AAV。一般來說，AAV輔助功能載體編碼AAV輔助功能序列(rep和cap)，其反式地作用于多產(chǎn)的AAV復(fù)制和衣殼化。優(yōu)選地，AAV輔助功能載體支持高效的AAV載體產(chǎn)生，而不產(chǎn)生任何可檢出的野生型AAV病毒粒子(即，含有功能rep和cap基因的AAV病毒粒子)。附屬功能載體可以編碼用于非AAV衍生的病毒和/或細胞功能的核苷酸序列，AAV依賴于所述功能以復(fù)制。附屬功能包括AAV復(fù)制所需的那些功能，包括但不限于參與AAV基因轉(zhuǎn)錄激活、階段特異性AAVmRNA剪接、AAVDNA復(fù)制、cap表達產(chǎn)物的合成和AAV衣殼組裝的那些部分?；诓《镜母綄俟δ芸梢詠碜匀魏我阎妮o助病毒，例如腺病毒、皰疹病毒(除了單純皰疹病毒1型)和痘苗病毒?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的多種方法中的任一種來產(chǎn)生慢病毒載體。慢病毒載體和/或其生產(chǎn)方法的實例可見于例如：美國公開No.20150224209、20150203870、20140335607、20140248306、20090148936和20080254008，這樣的慢病毒載體和生產(chǎn)方法通過引用并入本文。例如，當(dāng)慢病毒載體為整合無能力時，慢病毒基因組還包含復(fù)制起點(ori)，其序列取決于其中必須表達慢病毒基因組的細胞的性質(zhì)。所述復(fù)制起點可以來自真核來源，優(yōu)選來自哺乳動物來源，最優(yōu)選來自人來源。由于慢病毒基因組不整合到細胞宿主基因組中(因為缺陷的整合酶)，慢病毒基因組可在經(jīng)歷頻繁細胞分裂的細胞中丟失；這在免疫細胞(例如B或T細胞)中尤其如此。復(fù)制起點的存在在一些情況下可以是有益的?？梢栽谕ㄟ^所述質(zhì)粒或通過其他方法轉(zhuǎn)染合適的細胞(例如293T細胞)后產(chǎn)生載體顆粒。在用于表達慢病毒顆粒的細胞中，可將所有或一些質(zhì)粒用于穩(wěn)定表達其編碼多核苷酸，或用于瞬時或半穩(wěn)定地表達其編碼多核苷酸。用于產(chǎn)生本文中提供的其他病毒載體的方法是本領(lǐng)域已知的，并且可與上述示例性方法類似。此外，病毒載體可商購獲得。在一些實施方案中，當(dāng)制備某些靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑時，用于將組分與例如紅細胞結(jié)合肽、抗體或其抗原結(jié)合片段(或靶向APC的其他配體)或合成納米載體連接的方法可能是可用的。在某些實施方案中，連接可以是共價接頭。在一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的免疫抑制劑可以通過由疊氮基與含有炔基的免疫抑制劑的1，3-偶極環(huán)加成反應(yīng)，或通過炔烴與含有疊氮基的免疫抑制劑的1，3-偶極環(huán)加成反應(yīng)所形成的1，2，3-三唑接頭共價連接到外表面。這樣的環(huán)加成反應(yīng)優(yōu)選在Cu(I)催化劑以及合適的Cu(I)-配體和還原劑的存在下進行以將Cu(II)化合物還原為催化活性Cu(I)化合物。這種Cu(I)催化的疊氮化物-炔烴環(huán)加成(CuAAC)也可以稱為點擊反應(yīng)。另外，共價偶聯(lián)可包含這樣的共價接頭，其包含酰胺接頭、二硫接頭、硫醚接頭、腙連接頭、酰肼接頭、亞胺或肟接頭、脲或硫脲接頭、脒接頭、胺接頭、以及磺酰胺接頭。通過一種組分(例如免疫抑制劑)上的胺與第二組分(例如納米載體)上的羧酸基團之間的酰胺鍵形成酰胺接頭。接頭中的酰胺鍵可以使用任何常規(guī)的酰胺鍵形成反應(yīng)以適當(dāng)保護的氨基酸和活化羧酸(例如N-羥基琥珀酰亞胺活化的酯)來制備。通過在例如R1-S-S-R2形式的兩個硫原子之間形成二硫(S-S)鍵來制備二硫接頭。二硫鍵可以通過含有巰基/硫醇基(-SH)的組分與另一活化的硫醇基，或含有硫醇/硫醇基的組分與含有活化硫醇基的組分的硫醇交換而形成。三唑接頭(特別是其中R1和R2可以是任何化學(xué)實體的形式的1，2，3-三唑)通過連接到第一組分的疊氮化物與連接到第二組分(例如免疫抑制劑)的末端炔的1，3-偶極環(huán)加成反應(yīng)制備。1，3-偶極環(huán)加成反應(yīng)在具有或不具有催化劑下(優(yōu)選具有Cu(I)-催化劑下)進行，其通過1，2，3-三唑官能團連接兩種組分。該化學(xué)由Sharpless等，Angew.Chem.Int.Ed.41(14)，2596，(2002)和Meldal等，Chem.Rev.，2008，108(8)，2952-3015詳細描述，并且通常被稱為“點擊”反應(yīng)或CuAAC。硫醚接頭為通過形成例如R1-S-R2形式的硫-碳(硫醚)鍵來制備。硫醚可以通過在一種組分上用烷基化基團(例如鹵化物)烷基化硫醇/巰基(-SH)基團或在第二組分上用環(huán)氧化物烷基化來制備。硫醚接頭也可以通過將一個組分上的硫醇/巰基基團邁克爾加成(Michaeladdition)到含有作為邁克爾受體的馬來酰亞胺基團或乙烯基砜基團的第二組分上的缺電子烯基團上而形成。在另一種方式中，硫醚接頭可以通過一個組分上的硫醇/巰基基團與第二組分上的烯基的自由基硫醇-烯反應(yīng)來制備。腙接頭通過一個組分上的酰肼基團與第二組分上的醛/酮基團的反應(yīng)制備。酰肼接頭通過一個組分上的肼基團與第二組分上的羧酸基團的反應(yīng)形成。這種反應(yīng)通常使用類似于形成酰胺鍵的化學(xué)進行，其中羧酸用活化試劑活化。亞胺或肟接頭通過一個組分上的胺或N-烷氧基胺(或氨氧基)基團與第二組分上的醛基或酮基反應(yīng)形成。脲或硫脲接頭通過一個組分上的胺基與第二組分上的異氰酸酯或硫代異氰酸酯基團反應(yīng)制備。脒接頭通過一個組分上的胺基與第二組分上的酰亞胺酯基反應(yīng)制備。胺接頭通過一個組分上的胺基與第二組分上的烷基化基團(例如鹵化物、環(huán)氧化物或磺酸酯基)的烷基化反應(yīng)制備?；蛘?，胺接頭也可以通過用合適的還原劑(例如氰基硼氫化鈉或三乙酰氧基硼氫化鈉)將一種組分上的胺基與第二組分上的醛基或酮基的還原胺化來制備?；酋０方宇^通過一個組分上的胺基與第二組分上的磺酰鹵(例如磺酰氯)基團反應(yīng)制備。砜接頭通過親核試劑邁克爾加成到乙烯基砜制備。乙烯基砜或親核試劑可以在納米載體的表面上或與組分連接。組分也可以通過非共價綴合方法綴合。例如，帶負電荷的免疫抑制劑可以通過靜電吸附與帶正電荷的組分綴合。含有金屬配體的組分也可以通過金屬-配體絡(luò)合物與金屬絡(luò)合物綴合。在一些實施方案中，在組裝合成納米載體之前，組分可以與聚合物(例如聚乳酸嵌段-聚乙二醇)連接，或者合成納米載體可以在其表面上形成具有反應(yīng)性或可活化基團。在后一種情況下，組分可以用與由合成納米載體的表面呈現(xiàn)的連接化學(xué)物相容的基團制備。在另一些實施方案中，可以使用合適的接頭將肽組分與VLP或脂質(zhì)體連接。接頭是能夠?qū)蓚€分子偶聯(lián)在一起的化合物或試劑。在一個實施方案中，接頭可以是如Hermanson2008中所述的同型雙功能或異型雙功能試劑。例如，在EDC存在下，可以用同雙功能接頭己二酸二酰肼(ADH)處理表面上含有羧基的VLP或脂質(zhì)體合成納米載體，以與ADH接頭形成相應(yīng)的合成納米載體。然后將所得ADH連接的合成納米載體通過納米載體上的ADH接頭的另一端與含有酸基團的肽組分綴合，以產(chǎn)生相應(yīng)的VLP或脂質(zhì)體肽綴合物。在一些實施方案中，制備了在聚合物鏈末端含有疊氮基或炔基的聚合物。然后將該聚合物用于以這樣的方式制備合成納米載體，即多個炔或疊氮基團位于該納米載體的表面上。或者，合成納米載體可以通過另一種途徑制備，并且隨后用炔或疊氮基團官能化。該組分在炔烴(如果聚合物含有疊氮化物)或疊氮化物(如果聚合物含有炔烴)存在下制備。然后使該組分在有或者沒有催化劑的情況下通過1，3-偶極環(huán)加成反應(yīng)與納米載體進行反應(yīng)，所述催化劑通過1，4-二取代的1，2，3-三唑接頭將組分與顆粒共價連接。如果組分是小分子，則在組裝合成納米載體之前將組分與聚合物連接可以是有利的。在一些實施方案中，制備具有用于通過其將組分與合成納米載體上的表面基團連接的合成納米載體也是有利的，而不是將組分與聚合物連接，然后在合成納米載體的構(gòu)建中使用該聚合物綴合物。有關(guān)可用的綴合方法的詳細描述，見HermansonGT“BioconjugateTechniques”，第二版，Academic出版社出版，Inc.，2008。除了共價連接之外，組分可以通過吸附連接到預(yù)先形成的合成納米載體上，或者可以在形成合成納米載體期間通過包封連接。合成納米載體可以使用本領(lǐng)域已知的多種方法制備。例如，合成納米載體可以通過例如以下方法形成：納米沉淀、使用流控通道的流動聚焦、噴霧干燥、單和雙乳液溶劑蒸發(fā)、溶劑萃取、相分離、研磨、微乳液處理、微加工、納米加工、犧牲層、簡單和復(fù)合凝聚，以及本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的其他方法。作為替代或補充，已經(jīng)描述了用于單分散半導(dǎo)體、導(dǎo)電、磁性、有機和其他納米材料的水性和有機溶劑合成(Pellegrino等，2005，Small，1：48；Murray等，2000，Ann.Rev.Mat.Sci.，30：545；和Trindade等，2001，Chem.Mat.，13：3843)。文獻中已經(jīng)描述了另外的方法(見例如Doubrow，Ed..“MicrocapsulesandNanoparticlesinMedicineandPharmacy”CRCPress，BocaRaton，1992；Mathiowitz等，1987，J.Contr01.Release，5：13；Mathiowitz等，1987，ReactivePolymers，6：275；和Mathiowitz等，1988，J.Appl.PolymerSci.，35：755；美國專利5578325和6007845；P.Paolicelli等，“Surface-modifiedPLGA-basedNanoparticlesthatcanEfficientlyAssociateandDeliverVirus-likeParticles”Nanomedicine.5(6)：843-853(2010))?？梢允褂枚喾N方法將材料封裝成期望的合成納米載體，所述方法包括但不限于：C.Astete等，“SynthesisandcharacterizationofPLGAnanoparticles”J.Biomater.Sci.PolymerEdn，Vol.17，No.3，pp.247-289(2006)；K.Avgoustakis“PegylatedPoly(Lactide)andPoly(Lactide-Co-Glycolide)Nanoparticles：Preparation，PropertiesandPossibleApplicationsinDrugDelivery”CurrentDrugDelivery1：321-333(2004)；C.Reis等，“NanoencapsulationI.Methodsforpreparation0fdrug-loadedpolymericnanoparticles”Nanomedicine2：8-21(2006)；P.Paolicelli等，“Surface-modifiedPLGA-basedNanoparticlesthatcanEfficientlyAssociateandDeliverVirus-likeParticles”Nanomedicine.5(6)：843-853(2010)。可以使用適合于將材料封裝到合成納米載體中的其他方法包括但不限于由2003年10月14日授予Unger的美國專利6,632,671中公開的方法。在某些實施方案中，通過納米沉淀法或噴霧干燥制備合成納米載體。用于制備合成納米載體的條件可以改變以產(chǎn)生具有期望尺寸或性質(zhì)(例如疏水性、親水性、外部形態(tài)、“黏性”、形狀等)的顆粒。制備合成納米載體的方法和使用的條件(例如，溶劑、溫度、濃度、空氣流速等)可取決于要與合成納米載體連接的材料和/或聚合物基質(zhì)的組成。如果通過任何上述方法制備的合成納米載體具有在期望范圍之外的尺寸范圍，則可以例如使用篩子來篩分合成納米載體的尺寸。合成納米載體的要素可以例如通過一個或更多個共價鍵與整個合成納米載體連接，或者可以通過一個或更多個接頭連接。合成納米載體官能化的其他方法可以修改自Saltzman等人的公開的美國專利申請2006/0002852、DeSimone等人的公開的美國專利申請2009/0028910或Murthy等人的公開的國際專利申請WO/2008/127532A1。作為替代或補充，合成納米載體可以直接或間接地通過非共價相互作用與組分連接。在一些非共價實施方案中，非共價連接由非共價相互作用介導(dǎo)，包括但不限于電荷相互作用、親和力相互作用、金屬配位、物理吸附、主-客相互作用、疏水相互作用、TT堆疊相互作用、氫鍵相互作用、范德華相互作用、磁相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用，和/或其組合。這種連接可以布置在合成納米載體的外表面或內(nèi)表面上。在一些實施方案中，封裝和/或吸收是附著的形式。本文中提供的組合物可包含無機或有機緩沖劑(例如，磷酸鹽、碳酸鹽、乙酸鹽或檸檬酸鹽的鈉或鉀鹽)和pH調(diào)節(jié)劑(例如，鹽酸、氫氧化鈉或氫氧化鉀、檸檬酸鹽或乙酸鹽、氨基酸及其鹽)、抗氧化劑(例如，抗壞血酸、α-生育酚)、表面活性劑(例如，聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、聚氧乙烯9-10壬基苯酚、脫氧膽酸鈉)、溶液和/或低溫/凍干穩(wěn)定劑(例如，蔗糖、乳糖、甘露糖醇、海藻糖)、滲透調(diào)節(jié)劑(例如，鹽或糖)、抗菌劑(例如，苯甲酸、苯酚、慶大霉素)、消泡劑(例如，聚二甲基硅氧烷)、防腐劑(例如，硫柳汞、2-苯氧基乙醇、EDTA)、聚合物穩(wěn)定劑和黏度調(diào)節(jié)劑(例如，聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆488、羧甲基纖維素)和潛溶劑(例如，甘油、聚乙二醇、乙醇)。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以包含可藥用賦形劑。可以使用常規(guī)藥物制造和混合技術(shù)制備組合物以得到可用的劑型。適用于實施本發(fā)明的技術(shù)可見于：HandbookofIndustrialMixing：ScienceandPractice，EdwardL.Paul，VictorA.Atiemo-Obeng和SuzanneM.Kresta編，2004JohnWiley&Sons，Inc.；和Pharmaceutics：TheScienceofDosageFormDesign，第二版，M.E.Auten編，2001，ChurchillLivingstone。在一個實施方案中，將組合物與防腐劑混懸于注射用無菌鹽水溶液中。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的組合物可以以任何合適的方式制備，并且本發(fā)明決不限于可以使用本文中所述的方法制備的組合物。合適的制造方法的選擇可需要注意相關(guān)特定部分的性質(zhì)。在一些實施方案中，組合物在無菌條件下制造或最終滅菌。這可以確保所得組合物是無菌的和非感染性的，因此與非無菌組合物相比提高了安全性。這提供了有價值的安全措施，尤其是當(dāng)接受組合物的對象具有免疫缺陷、患有感染和/或易感染時。根據(jù)本發(fā)明的給藥可以通過多種途徑，包括但不限于皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)和腹膜內(nèi)途徑。本文中提及的組合物可以制造和制備以用于施用，在一些實施方案中用于使用常規(guī)方法的伴隨施用。本發(fā)明的組合物可以以有效量施用，例如本文中別處所描述的有效量。在一些實施方案中，靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和/或病毒轉(zhuǎn)移載體以有效減弱抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答或允許病毒轉(zhuǎn)移載體向?qū)ο笤偈┯玫牧看嬖谟趧┬椭小Ｔ谝恍嵤┓桨钢?，靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和/或病毒轉(zhuǎn)移載體以有效提高對象中轉(zhuǎn)基因表達的量存在于劑型中。在一些優(yōu)選的實施方案中，靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和/或病毒轉(zhuǎn)移載體以有效降低對病毒轉(zhuǎn)移載體的免疫應(yīng)答的量存在于劑型中，例如當(dāng)伴隨施用于對象時。劑型可以以多種頻率施用。在一些實施方案中，進行靶向抗原呈遞細胞免疫抑制劑與病毒轉(zhuǎn)移載體的重復(fù)施用。本發(fā)明的一些方面涉及確定本文中提供的施用方法的方案。方案可以通過至少改變病毒轉(zhuǎn)移載體和靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑的頻率、劑量，并隨后評估期望或不期望的免疫應(yīng)答來確定。用于實施本發(fā)明的優(yōu)選方案降低針對病毒轉(zhuǎn)移載體的免疫應(yīng)答、減弱抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答和/或提高轉(zhuǎn)基因表達。所述方案至少包括病毒轉(zhuǎn)移載體和靶向抗原呈遞細胞免疫抑制劑的施用頻率和劑量。實施例實施例1：含聚合物-雷帕霉素綴合物的聚合物納米載體(預(yù)示)PLGA-雷帕霉素綴合物的制備：將具有酸端基的PLGA聚合物(7525DLG1A，酸值0.46mmol/g，LakeshoreBiomaterials；5g，2.3mmol，1.0當(dāng)量)溶于30mL二氯甲烷(DCM)中。添加N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(1.2當(dāng)量，2.8mmol，0.57g)，然后添加雷帕霉素(1.0當(dāng)量，2.3mmol，2.1g)和4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(2.0當(dāng)量，4.6mmol，0.56g)。將混合物在室溫下攪拌2天。然后將混合物過濾以除去不溶的二環(huán)己基脲。將濾液濃縮至約10mL體積，并添加到100mL異丙醇(IPA)中以沉淀出PLGA-雷帕霉素綴合物。除去IPA層，然后用50mLIPA和50mL甲基叔丁基醚(MTBE)洗滌聚合物。然后將聚合物在真空下在35℃下干燥2天以得到作為白色固體的PLGA-雷帕霉素(約6.5g)。含有PLGA-雷帕霉素的納米載體如下制備：用于納米載體形成的溶液如下制備：溶液1：在二氯甲烷中的PLGA-雷帕霉素100mg/mL。通過將PLGA-雷帕霉素溶解在純二氯甲烷中制備溶液。溶液2：在二氯甲烷中的PLA-PEG100mg/mL。通過將PLA-PEG溶解在純二氯甲烷中制備溶液。溶液3：在100mMpH8磷酸鹽緩沖液中的聚乙烯醇50mg/mL。首先制備初級油包水乳液。通過在小壓力管中組合溶液1(0.75mL)和溶液2(0.25mL)并使用Branson數(shù)字超聲波儀250在50％振幅下超聲處理40秒來制備W1/O1。然后通過將溶液3(3.0mL)與初級W1/O1乳液組合，渦旋10秒，并使用Branson數(shù)字超聲波儀250在30％振幅下超聲處理60秒來制備次級乳液(W1/O1/W2)。將W1/O1/W2乳液添加到含有70mMpH8磷酸鹽緩沖溶液(30mL)的燒杯中，并在室溫下攪拌2小時以使二氯甲烷蒸發(fā)，形成納米載體。通過將納米載體懸浮液轉(zhuǎn)移到離心管中并在75,600×g和4℃下離心35分鐘，除去上清液，并將沉淀重新懸浮在磷酸緩沖鹽水中來洗滌一部分納米載體。重復(fù)洗滌過程，將沉淀重懸于磷酸緩沖鹽水中用于約10mg/mL的最終納米載體分散體。實施例2：含有雷帕霉素的金納米載體(AuNC)的制備(預(yù)示)HS-PEG-雷帕霉素的制備：將PEG酸二硫化物(1.0當(dāng)量)、雷帕霉素(2.0-2.5當(dāng)量)、DCC(2.5當(dāng)量)和DMAP(3.0當(dāng)量)在無水DMF中的溶液在室溫下攪拌過夜。通過過濾除去不溶性二環(huán)己基脲，將濾液添加異丙醇(IPA)中以沉淀出PEG-二硫化物-二-雷帕霉素酯，并用IPA洗滌并干燥。然后在DMF中用三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽處理聚合物，以將PEG二硫化物還原為巰基PEG雷帕霉素酯(HS-PEG-雷帕霉素)。通過從IPA沉淀回收所得聚合物并如前所述干燥并通過HNMR和GPC分析。金NC(AuNC)的形成：將500mL的1mMHAuCl4水溶液在配有冷凝器的1L圓底燒瓶中在劇烈攪拌下加熱以回流10分鐘。然后將50mL的40mM檸檬酸三鈉的溶液迅速添加到攪拌的溶液中。將所得深酒紅色溶液保持回流25-30分鐘，停止加熱，將溶液冷卻至室溫。然后將溶液通過0.8μm膜過濾器過濾，得到AuNC溶液。使用可見光譜和透射電子顯微鏡來表征AuNC。AuNC大約20nm直徑，由檸檬酸鹽封端，峰吸收在520nm。AuNC與HS-PEG-雷帕霉素的綴合物：將150μl的HS-PEG-雷帕霉素(10μM，在10mMpH9.0碳酸鹽緩沖液中)的溶液添加到1mL的20nm直徑的檸檬酸鹽封端的金納米載體(1.16nM)中，以產(chǎn)生2500∶1的巰基與金的摩爾比。將混合物在室溫下在氬氣下攪拌1小時，以允許巰基與金納米載體上的檸檬酸完全交換。然后通過在12,000g下離心30分鐘來純化表面上具有PEG-雷帕霉素的AuNC。傾析出上清液，然后用1×PBS緩沖液沉淀洗滌含有AuNC-S-PEG-雷帕霉素的沉淀。然后將純化的金-PEG-雷帕霉素納米載體重懸于合適的緩沖液中用于進一步分析和生物測定。實施例3：具有連接的布洛芬的介孔二氧化硅納米顆粒(預(yù)示)介孔SiO2納米顆粒核心通過溶膠-凝膠方法產(chǎn)生。將十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)(0.5g)溶于去離子水(500mL)中，然后向CTAB溶液中添加2MNaOH水溶液(3.5mL)。將溶液攪拌30分鐘，然后向溶液中添加四乙氧基硅烷(TEOS)(2.5mL)。將所得凝膠在80℃的溫度下攪拌3小時。通過過濾捕獲形成的白色沉淀，隨后用去離子水洗滌并在室溫下干燥。然后通過在HCl的乙醇溶液中懸浮過夜從顆粒中提取剩余的表面活性劑。用乙醇洗滌顆粒、離心，并在超聲波處理下再分散。該洗滌過程重復(fù)另外兩次。然后使用(3-氨基丙基)-三乙氧基硅烷(APTMS)，用氨基將SiO2納米顆粒官能化。為此，將顆粒懸浮在乙醇(30mL)中，并將APTMS(50μL)添加到懸浮液中。將懸浮液在室溫下靜置2小時，然后煮沸4小時，通過定期添加乙醇保持體積恒定。通過離心洗滌5個循環(huán)除去剩余的反應(yīng)物，并再分散在純乙醇中。在單獨的反應(yīng)中，產(chǎn)生1-4nm直徑的金晶種(goldseed)。在該反應(yīng)中使用的所有水首先被去離子，然后從玻璃中蒸餾。將水(45.5mL)添加到100mL圓底燒瓶中。在攪拌下，添加0.2MNaOH水溶液(1.5mL)，然后添加1％四(羥甲基)氯化鏻(THPC)的水溶液(1.0mL)。在添加THPC溶液兩分鐘后，添加已經(jīng)陳化至少15分鐘的10mg/mL氯金酸水溶液(2mL)。將金晶種通過對水透析而純化。為了形成核-殼納米載體，首先將上面形成的氨基官能化的SiO2納米顆粒與金晶種在室溫下混合2小時。通過離心收集金修飾的SiO2顆粒，并與氯金酸和碳酸氫鉀的水溶液混合以形成金殼。然后通過離心洗滌顆粒并再分散在水中。通過將顆粒懸浮在布洛芬鈉(1mg/L)的溶液中72小時來加載布洛芬。然后通過離心將游離的布洛芬從顆粒中洗滌并再分散在水中。實施例4：含有環(huán)孢素A的脂質(zhì)體(預(yù)示)使用薄膜水合形成脂質(zhì)體。將1，2-二棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿(DPPC)(32μmol)、膽固醇(32μmol)和環(huán)孢素A(6.4μmol)溶于純氯仿(3mL)中。將該脂質(zhì)溶液添加到50mL圓底燒瓶中，并在60℃的溫度下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸發(fā)溶劑。然后用氮氣沖洗燒瓶以除去剩余的溶劑。將磷酸緩沖鹽水(2mL)和五個玻璃珠添加至燒瓶中，并且通過在60℃下?lián)u動1小時使脂質(zhì)膜水合以形成懸浮液。將懸浮液轉(zhuǎn)移到小壓力管中并在60℃下超聲處理30秒脈沖的四個循環(huán)，每個脈沖之間有30秒的延遲。然后將懸浮液在室溫下靜置2小時，以允許完全水合。通過離心洗滌脂質(zhì)體，然后再懸浮于新鮮的磷酸緩沖鹽水中。實施例5：包含雷帕霉素之合成納米載體材料雷帕霉素購自TSZCHEM(Wilson街185號，F(xiàn)ramingham，MA01702；產(chǎn)品目錄#R1017)。具有76％丙交酯和24％乙交酯含量且特性黏度為0.69dL/g的PLGA購自SurModicsPharmaceuticals(TomMartin大道756號，Birmingham，AL35211，產(chǎn)品編號7525DLG7A)。具有約5,000Da的PEG嵌段和約40,000Da的PLA嵌段的PLA-PEG嵌段共聚物購自SurModicsPharmaceuticals(TomMartin大道756號，Birmingham，AL35211，產(chǎn)品編號100DLmPEG50005CE)。聚乙烯醇(85-89％水解)購自EMDChemicals(產(chǎn)品號1.41350.1001)。方法溶液如下制備：溶液1：在二氯甲烷中的75mg/mL的PLGA和25mg/mL的PLA-PEG。通過將PLGA和PLA-PEG溶解在純二氯甲烷中制備溶液。溶液2：在二氯甲烷中的100mg/mL的雷帕霉素。通過將雷帕霉素溶解在純二氯甲烷中制備溶液。溶液3：在100mMpH8磷酸鹽緩沖液中的50mg/mL的聚乙烯醇。使用水包油乳液制備納米載體。通過在小壓力管中組合溶液1(1mL)、溶液2(0.1mL)和溶液3(3mL)并且使用Branson數(shù)字超聲波儀250在30％振幅下超聲處理60秒來制備O/W乳液。將O/W乳液添加到含有70mMpH8磷酸鹽緩沖溶液(30mL)的燒杯中，并在室溫下攪拌2小時，使二氯甲烷蒸發(fā)，形成納米載體。通過將納米載體懸浮液轉(zhuǎn)移到離心管中并在75,000×g和4℃下離心35分鐘，除去上清液，并將沉淀重新懸浮在磷酸緩沖鹽水中以洗滌一部分納米載體。重復(fù)洗滌過程，將沉淀重懸于磷酸緩沖鹽水中用于約10mg/mL的最終納米載體分散體。通過動態(tài)光散射測定納米載體尺寸。通過HPLC分析測定納米載體中雷帕霉素的量。通過重量分析法測定每mL懸浮液的總納米載體干重。實施例6：包含GSK1059615的合成納米載體材料GSK1059615購自MedChemExpress(DeerPark大道11號，Suite102DMonmouthJunction，NJ08852)，產(chǎn)品編號HY-12036。丙交酯∶乙交酯比為1∶1且特性黏度為0.24dL/g的PLGA購自LakeshoreBiomaterials(TomMartin大道756號，Birmingham，AL35211)，產(chǎn)品編號5050DLG2.5A。約5,000Da的具有甲基醚封端的PEG嵌段和0.26DL/g的總特性黏度的PLA-PEG-OMe嵌段共聚物購自LakeshoreBiomaterials(TomMartin大道756號，Birmingham，AL35211；產(chǎn)品編號100DLmPEG50005K-E)。Cellgro磷酸緩沖鹽水1×pH7.4(PBS1×)購自Corning(9345DiscoveryBlvd.Manassas，VA20109)，產(chǎn)品編號21-040-CV。方法溶液如下制備：溶液1：將PLGA(125mg)和PLA-PEG-OMe(125mg)溶解在10mL丙酮中。溶液2：將10mg的GSK1059615制備在1mLN-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)中。通過在小玻璃壓力管中組合溶液1(4mL)和溶液2(0.25mL)并在攪拌下將混合物滴加到含有20mL超純水的250mL圓底燒瓶中來制備納米載體。將燒瓶安裝在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)裝置上，并在減壓下除去丙酮。通過將納米載體懸浮液轉(zhuǎn)移到離心管中并在75,600rcf和4℃下離心50分鐘，除去上清液，并將沉淀物重新懸浮在PBS1×中來洗滌一部分納米載體。重復(fù)洗滌過程，并將沉淀重懸于PBS1×中，以獲得基于聚合物標稱濃度為10mg/mL的納米載體懸浮液。然后使用來自Pall的1.2μmPES膜注射器過濾器(部件號4656)過濾經(jīng)洗滌的納米載體溶液。如上制備相同的納米載體溶液，并在過濾步驟之后與第一次的合并。將均勻懸浮液在-20℃冷凍儲存。通過動態(tài)光散射測定納米載體尺寸。通過在351nm的UV吸收測定納米載體中GSK1059615的量。通過重量分析法測定每mL懸浮液的總納米載體干重。實施例7：具有病毒轉(zhuǎn)移載體抗原的紅細胞結(jié)合治療(預(yù)示)基于美國公開No.20120039989的教導(dǎo)制備紅細胞結(jié)合治療劑，并用作靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑。紅細胞結(jié)合治療劑可以包含ERY1、ERY19、ERY59、ERY64、ERY123、ERY141和ERY162中的任一種和任一種本文中所述的病毒轉(zhuǎn)移載體抗原，例如病毒載體抗原，例如衣殼蛋白(或從其來源的肽抗原)或蛋白質(zhì)(或從其來源的肽抗原)，例如由本文中所述的轉(zhuǎn)基因編碼的治療性蛋白質(zhì)(或從其來源的肽抗原)。實施例8：含有NF-κB途徑抑制劑的顆粒(預(yù)示)根據(jù)美國公開No.20100151000的教導(dǎo)制備靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑。所述顆?？梢允侵|(zhì)體或聚合物顆粒，并且包含本文中提供的免疫抑制劑中的任一種或美國公開No.20100151000中提供的任一種NF-kB途徑抑制劑，所述抑制劑通過引用整體并入本文。此外，脂質(zhì)體或聚合物顆粒還可以包含任一種本文中所述的病毒轉(zhuǎn)移載體抗原，例如病毒載體抗原，例如衣殼蛋白(或從其來源的肽抗原)或蛋白質(zhì)(或從其來源的肽抗原)，例如由本文中所述的轉(zhuǎn)基因編碼的治療性蛋白質(zhì)(或從其來源的肽抗原)。實施例9：具有基因治療轉(zhuǎn)基因的腺病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)根據(jù)美國專利公開2004/0005293中提供的方法產(chǎn)生腺病毒轉(zhuǎn)移載體。這樣的載體可以包含任一種本文中提供的轉(zhuǎn)基因。例如，制備了表達來自人α1-抗胰蛋白酶啟動子(AAT)的人B結(jié)構(gòu)域缺失的FVIIIcDNA的Ad-AAT-hFVIII載體。使用HPRT填充片段來優(yōu)化載體大小并避免載體重排(ParksRJ，GrahamFL.Ahelper-dependentsystemforadenovirusvectorproductionhelpsdefinealowerlimitforefficientDNApackaging.JVirol.1997，71：3293-3298)。使用了Cre66包裝細胞系。實施例10：伴隨施用具有與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)將任何一個實施例(例如實施例9)的病毒轉(zhuǎn)移載體與本文中提供的任一種靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑(例如實施例1-8或12)伴隨施用(例如在同一天)于招募來進行臨床試驗的對象。評價針對病毒轉(zhuǎn)移載體的一種或更多種免疫應(yīng)答。針對病毒轉(zhuǎn)移載體的一種或更多種免疫應(yīng)答的水平可以通過與在不存在靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑下施用病毒轉(zhuǎn)移載體(例如當(dāng)單獨施用病毒轉(zhuǎn)移載體時)的對象或另一組對象中的一種或更多種免疫應(yīng)答的水平進行比較來評價。在一些實施方案中，以類似的方式評價重復(fù)的伴隨施用。在這些試驗期間建立的信息的應(yīng)用中，當(dāng)病毒轉(zhuǎn)移載體不與靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑伴隨施用時預(yù)期對象對病毒轉(zhuǎn)移載體具有不期望的免疫應(yīng)答時，病毒轉(zhuǎn)移載體和靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑可以伴隨施用于需要病毒轉(zhuǎn)移載體的對象。在另一個實施方案中，可以準備使用在試驗期間確定的信息的方案，以指導(dǎo)需要用病毒轉(zhuǎn)移載體治療的對象的病毒轉(zhuǎn)移載體和合成納米載體的伴隨劑量，并且所述對象具有或預(yù)期具有針對病毒轉(zhuǎn)移載體的不期望的免疫應(yīng)答，而不具有靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑的益處。然后可將如此制備的方案用于治療對象，特別是人對象。實施例11：施用帶有與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體的具有基因治療轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體如果納米載體包封的免疫抑制劑(NC)在加強階段共注射，則表達重組綠色熒光蛋白(AAV-GFP)的腺相關(guān)病毒的兩次連續(xù)靜脈內(nèi)(i.v.)接種導(dǎo)致在體內(nèi)肝細胞中更高的GFP表達。實驗方法使用雄性C57BL/6小鼠(5只小鼠/組)。在不同的重復(fù)(參見下表1)，在21天間隔內(nèi)向動物注射200μLAAV-GFP或AAV-GFP+包含雷帕霉素混合物的合成納米載體(NC)一次或兩次。在第一次注射后第33天(＝在注射兩次的那些組的第二次注射后第12天)，處死動物，用膠原酶4(Worthington，Lakewood，NJ)處理其肝，過篩并用FACS分析全細胞懸浮液的GFP表達。簡言之，首先用膠原酶(100U)灌注組織，在37℃孵育(30分鐘)，除去膠原酶上清液，并用2％FBS終止。然后將組織樣品切成約2毫米的方塊，消化(膠原酶，400U)，重復(fù)攪拌，過濾(尼龍網(wǎng))，離心(1500rpm)，并將沉淀物重新懸浮于冰冷的2％FBS中。在第一次注射后第14天，將所有動物放血，并如下用ELISA分析其血清中的AAV抗體。將96孔板用在碳酸鹽緩沖液中的50μLAAV以2×109vg/mL包被92小時，然后用300μL酪蛋白封閉2小時。將樣品以1∶40稀釋度添加到50μL酪蛋白中，并在室溫下孵育2小時。使用兔抗小鼠IgG(JacksonImmunoResearch，WestGrove，PA，315-035-008)作為二抗(0.5μg/mL，1小時)，然后添加TMB底物(10分鐘)，然后添加終止溶液。然后在450nm的波長下讀取平板，減去在570nm處的背景。將小鼠單克隆抗AAV8抗體(Fitzgerald，Acton，MA，10R-2136)用作陽性對照。AAV-GFP的量：在第0天致敏時為1×1010個病毒基因組(VG)，在第21天加強時為5×1010VG。所使用的納米載體包封的免疫抑制劑(雷帕霉素或Rapa)的量：在致敏(第2、3和5組)或加強(第3和4組)時，為50μg納米載體包封的Rapa。表1.實驗組結(jié)果與僅用AAV-GFP的致敏和加強相比，如果在僅用AAV-GFP致敏后在加強階段使用NC，觀察到AAV注射的小鼠的肝中GFP表達的統(tǒng)計學(xué)上較高水平(圖1)。如果在致敏和加強兩種情況下將AAV-GFP與NC共注射，也存在較高GFP表達的趨勢，但是由于單個離群值，其未表現(xiàn)出相對于僅用AAV-GFP致敏-加強的明顯統(tǒng)計學(xué)優(yōu)勢。僅在致敏注射時使用NC不會導(dǎo)致GFP表達的任何升高(圖1，組1與組2和組5與組6)?？偟膩碚f，看來在加強時共施用AAV-GFP和NC驅(qū)使在動物中更高的GFP表達，所述動物根據(jù)目前的方案接受兩次重組AAV注射。如果用AAV-GFP+NC加強的所有動物(圖2)對僅用AAV-GFP(無論是否在致敏時用NC處理)加強的所有動物作圖，則這是顯著的，其中在存在NC下加強的9/10的動物表現(xiàn)出比沒有NC加強的所有(10/10)動物更高的GFP表達(前者的平均表達提高＞50％)。類似地，如果僅考慮高度GFP陽性肝細胞，不管是否在致敏階段利用NC，在加強期間利用NC導(dǎo)致統(tǒng)計上比利用AAV-GFP而沒有NC加強的更高數(shù)值(圖3)。還顯而易見的是，沒有NC的AAV-GFP加強導(dǎo)致甚至與單次致敏免疫接種相比降低的GFP表達。單獨地，在第14天對小鼠采血，并測試其血清中AAV抗體的存在。在這一點，所有小鼠已經(jīng)在伴有或不伴有NC的共施用的情況下注射AAV-GFP一次(導(dǎo)致產(chǎn)生兩組，每組15只小鼠)。如圖4所示，接受不含NC的單一AAV-GFP注射的所有15/15只小鼠表現(xiàn)出對AAV的抗體反應(yīng)性，導(dǎo)致最高OD高于正常血清對照(OD＝0.227)，而接受與NC共施用的AAV的小鼠中沒有表現(xiàn)可檢出水平的AAV抗體。如果僅使用單一AAV免疫接種，在NC與AAV共施用的小鼠中抗AAV抗體的水平在第21天保持低于基線，而在接受AAV而沒有NC的小鼠中升高(圖5)。在單次注射后33天，這些在未處理的小鼠中的水平仍然適度增長，而在NC處理的組中，5只小鼠中的4只沒有可檢出的AAV抗體(圖5)。如果在第21天用AAV-GFP加強小鼠，則未處理的小鼠中的抗體水平繼續(xù)顯著增長，而在僅在加強時接受NC的小鼠中鈍化(圖6和7)。有趣的是，在后一組中的兩只小鼠在第14天呈陽性(在致敏時無處理)，其AAV抗體水平在第33天降至低于背景(圖7)。同時，即使在第21天加強后，用NC處理的8/10小鼠在第33天也沒有可檢出的抗體(圖6和7)。在AAV加強時應(yīng)用NC可對阻斷AAV抗體的產(chǎn)生具有較小的影響，盡管在這一點上，其與在加強時無NC處理的情況不具有統(tǒng)計學(xué)顯著性(圖6和7)。因此，在致敏時的NC處理看來對阻斷AAV抗體的發(fā)展是重要的，其在稍后時間點的施用也是有益的。結(jié)果示出了與用于降低針對病毒轉(zhuǎn)移載體之抗體應(yīng)答的病毒轉(zhuǎn)移載體聯(lián)合施用與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體的益處。在與編碼用于表達的蛋白質(zhì)的病毒轉(zhuǎn)移載體聯(lián)合伴隨施用與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體的情況下，看到這樣的益處。因此，上文中例示了用于降低抗病毒轉(zhuǎn)移載體抗體應(yīng)答的方案。實施例12：包含雷帕霉素之合成納米載體材料特性黏度為0.41dL/g的PLA購自LakeshoreBiomaterials(TomMartin大道756號，Birmingham，AL35211)，產(chǎn)品編號為100DL4A。約5,000Da的具有甲基醚封端的PEG嵌段和0.50DL/g的總特性黏度的PLA-PEG-OMe嵌段共聚物購自LakeshoreBiomaterials(TomMartin大道756號，Birmingham，AL35211)，產(chǎn)品編號為100DLmPEG50005CE。雷帕霉素購自ConcordBiotechLimited(Trasad路1482-1486號，Dholka382225，Ahmedabad印度)，產(chǎn)品編號為SIROLIMUS。脫水山梨醇單棕櫚酸酯購自Sigma-Aldrich(Spruce街3050號，St.Louis，MO63103)，產(chǎn)品編號為388920。聚乙烯醇(PVA)4-88，USP(85-89％水解，黏度為3.4-4.6mpa·s)購自EMDChemicalsInc.(SouthDemocrat路480號，Gibbstown，NJ08027)，產(chǎn)品編號為1.41350。Dulbecco磷酸緩沖鹽水1×(DPBS)購自Lonza(Muenchensteinerstrasse38，CH-4002Basel，瑞士)，產(chǎn)品編號為17-512Q。方法溶液如下制備：溶液1：通過在二氯甲烷中溶解37.5mg/mL的PLA、12.5mg/mL的PLA-PEG-Ome、8mg/mL的雷帕霉素和2.5的脫水山梨醇單棕櫚酸酯來制備聚合物、雷帕霉素和脫水山梨醇單棕櫚酸酯混合物。溶液2：在100mMpH8磷酸鹽緩沖液中制備50mg/mL的聚乙烯醇。通過在小玻璃壓力管中組合溶液1(1.0mL)和溶液2(3mL)制備O/W乳液，渦旋混合10秒。然后將制劑通過在30％振幅下超聲處理1分鐘來勻化。然后將乳液添加到含有DPBS(30mL)的開口燒杯中。使用與上述相同的材料和方法制備第二O/W乳液，然后添加到含有第一乳液和DPBS的同一燒杯中。然后將組合的乳液在室溫下攪拌2小時，以使二氯甲烷蒸發(fā)并形成納米載體。通過將納米載體懸浮液轉(zhuǎn)移至離心管并在75,600×g和4℃下離心50分鐘，除去上清液，并將沉淀物再懸浮于含有0.25％w/vPVA的DPBS中來洗滌一部分納米載體。重復(fù)洗滌過程，然后將沉淀物重懸浮于含有0.25％w/vPVA的DPBS中，以獲得基于聚合物標稱濃度為10mg/mL的納米載體懸浮液。然后使用0.22μmPES膜注射器過濾器(Millipore部件號SLGP033RB)過濾納米載體懸浮液。然后將經(jīng)過濾的納米載體懸浮液儲存在-20℃。通過動態(tài)光散射測定納米載體尺寸。通過HPLC分析測定納米載體中雷帕霉素的量。通過重量分析法測定每mL懸浮液的總納米載體干重。實施例13：具有基因治療轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體的單次施用誘導(dǎo)可被與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體的伴隨施用所抑制的抗載體抗體應(yīng)答在CMV啟動子下單次靜脈內(nèi)(i.v.)施用編碼重組綠色熒光蛋白(AAV-GFP)(Virovek，Hayward，CA)的腺相關(guān)病毒導(dǎo)致抗AAV抗體應(yīng)答，其通過用納米載體包封的免疫抑制劑(根據(jù)實施例12產(chǎn)生)伴隨處理而得到抑制。實驗方法使用雄性C57BL/6小鼠(5-15只小鼠/組)。對動物i.v.注射200μLAAV8-GFP或AAV8-GFP+NC的混合物，所述NC為含有雷帕霉素的PLGA納米載體(見下表2)。在處理后第14天，對所有動物采血，并通過ELISA分析其血清中的AAV8抗體。簡言之，將96孔板用50μL在碳酸鹽緩沖液中的2×109個載體基因組(vg)/mL的AAV8包被92小時，然后用300μL酪蛋白封閉2小時。將樣品以1∶40稀釋度添加50μL酪蛋白中，并在室溫(RT)孵育2小時。將辣根過氧化物酶綴合的兔抗小鼠IgG(JacksonImmunoResearch，WestGrove，PA，315-035-008)用作二抗(0.5μg/mL，1小時)，然后添加TMB底物(10分鐘)，然后添加終止溶液。然后在450nm的波長下讀取平板，減去在570nm處的背景。將小鼠單克隆抗AAV8抗體(Fitzgerald，Acton，MA，10R-2136)用作陽性對照。AAV-GFP的量：在第0天(致敏)為1×1010個病毒基因組(vg)，在第21天(加強)為5×1010vg。所使用的納米載體包封的雷帕霉素(Rapa)的量：50μg納米載體包封的雷帕霉素。表2.實驗組組#免疫接種，i.v.第0天NC(i.v.第0天)1AAV-GFP(1×1010vg)無2AAV-GFP(1×1010vg)50μg的Rapa在第14天對小鼠采血，并測試它們的血清中是否存在AAV8抗體。在這一點，所有小鼠已經(jīng)注射AAV8-GFP一次，伴有或不伴有納米載體的共施用(每種15只小鼠)。如圖8所示，接受不含納米載體的單一AAV-GFP注射的所有小鼠顯示出針對AAV8的抗體反應(yīng)性，導(dǎo)致高于正常血清對照的抗體水平(OD＝0.227)，而接受與NC共施用的AAV8的小鼠表現(xiàn)出很少或沒有可檢出水平的AAV8抗體。在NC處理組(n＝5)中，抗AAV8抗體水平在第21天保持在或低于基線，而在接受AAV8-GFP而沒有NC的小鼠中升高(圖9)。在單次注射AAV8-GFP后33天，未處理小鼠中的抗AAV8抗體水平繼續(xù)適度提高，而在NC處理組中，5只小鼠中有4只小鼠沒有可檢出的AAV抗體(圖9)。結(jié)果示出了與用于降低針對病毒轉(zhuǎn)移載體的抗體應(yīng)答的病毒轉(zhuǎn)移載體聯(lián)合施用與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體的益處。在包含編碼用于表達的蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體聯(lián)合伴隨施用與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體的情況下，看到這些益處。因此，本文中例示了用于降低抗病毒轉(zhuǎn)移載體抗體應(yīng)答的方案。實施例14：具有基因治療轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體和與合成納米載體偶聯(lián)的免疫抑制劑的伴隨施用抑制抗AAV抗體應(yīng)答實驗方法使用雄性C57BL/6小鼠(5只小鼠/組)。在第0天和/或第21天，如表3所示，向動物注射200μL的AAV8-GFP(Virovek，Hayward，CA)或AAV8-GFP+NC(如實施例12中制備)的混合物。在第0和33天收集血清，并如上所述通過ELISA分析抗AAV8抗體水平。AAV-GFP的量：第0天致敏時為1×1010病毒基因組(vg)，第21天加強時為5×1010vg。所使用的納米載體包封的免疫抑制劑(雷帕霉素或Rapa)的量：在致敏(組2和4)或加強(組3和4)下，為50μg納米載體包封的Rapa。表3.實驗組結(jié)果在第0天在不存在NC下注射AAV8-GFP的小鼠顯示出強的抗AAV8抗體應(yīng)答，所述應(yīng)答在第21天第二次注射AAV8-GFP后顯著提高(圖10)。然而，如果在第21天將NC和AAV8-GFP伴隨施用，則平均的抗體應(yīng)答顯著鈍化。有趣的是，在這里后一組中在第14天具有抗體陽性的兩只小鼠在第33天沒有可檢出水平的AAV8抗體(圖10)。然而，在另2只小鼠中抗AAV8抗體滴度提高。相比之下，在第一次AAV8-GFP注射時(第0天)伴隨施用的NC在第14天完全抑制抗AAV8抗體應(yīng)答。在第21天單獨第二次施用AAV8-GFP后，在第33天時，在5只小鼠中的4只中抗AAV8抗體也被抑制。在第0天和第21天伴隨施用NC顯示相似的趨勢。因此，在第一次施用AAV時的NC處理對于阻斷AAV抗體的發(fā)展是重要的。在AAV重復(fù)劑量時額外施用NC可以是潛在有益的。結(jié)果示出了與用于降低針對病毒轉(zhuǎn)移載體的抗體應(yīng)答的病毒轉(zhuǎn)移載體聯(lián)合施用與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體的益處。在與編碼用于表達的蛋白質(zhì)的病毒轉(zhuǎn)移載體聯(lián)合伴隨施用與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體的情況下，看到這些益處。因此，本文中例示了用于降低抗病毒轉(zhuǎn)移載體抗體應(yīng)答的方案。實施例15：與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體的治療性施用增強病毒轉(zhuǎn)移載體重復(fù)劑量后轉(zhuǎn)基因表達的維持如果在重復(fù)施用編碼用于表達的蛋白質(zhì)的病毒轉(zhuǎn)移載體時共注射納米載體包封的免疫抑制劑(NC)(如實施例12中所產(chǎn)生的)，則兩次連續(xù)靜脈內(nèi)(i.v.)接種編碼重組綠色熒光蛋白(AAV8-GFP)(Virovek，Hayward，CA)的腺相關(guān)病毒導(dǎo)致體內(nèi)肝細胞中較高的GFP表達。實驗方法使用雄性C57BL/6小鼠(5只小鼠/組)。在第0天，在不存在NC下向動物注射200μLAAV8-GFP。一組動物沒有接受另外的處理，而其他組在第21天接受AAV8-GFP的第二次劑量，其伴隨或不伴隨施用帶有50μg雷帕霉素的NC(參見下表4)。在第一次注射后第33天(對于注射兩次的那些組，則為第二次注射后12天)處死動物，將其肝用膠原酶4(Worthington，Lakewood，NJ)處理，過篩，并通過流式細胞術(shù)分析全細胞懸液的GFP表達。簡言之，首先用膠原酶(100U)灌注組織，并在37℃孵育30分鐘。除去膠原酶上清液，并用2％FBS終止。然后將組織樣品切成約2毫米的方塊，消化(膠原酶，400U)，重復(fù)攪拌，過濾(尼龍網(wǎng))，離心(1500rpm)，將沉淀物重新懸浮于冰冷的2％FBS中。AAV-GFP的量：在第0天為1×1010個病毒基因組(vg)，在第21天為5×1010vg(僅組2和3)。所使用的納米載體包封的免疫抑制劑(雷帕霉素或Rapa)的量：在第21天(組3)為50μg納米載體包封的Rapa。表4.實驗組結(jié)果與在NC不存在下接受AAV8-GFP第二次注射的動物相比，如果在第21天在第二次注射AAV8-GFP時伴隨施用NC，則觀察到在AAV8-GFP處理的小鼠的肝中統(tǒng)計學(xué)上更高水平的GFP表達(圖11)。在接受AAV8-GFP加NC的第二次注射的小鼠中觀察到的GFP表達水平與在第0天僅接受AAV8-GFP單次劑量的小鼠中觀察到的GFP表達水平相似。這些結(jié)果表明，可能由于抑制了可以消除表達GFP的經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)肝細胞的溶細胞性T細胞，在AAV8-GFP第二次劑量時共施用NC對于維持GFP的表達是重要的。結(jié)果示出了與病毒轉(zhuǎn)移載體聯(lián)合施用與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體對于維持載體轉(zhuǎn)基因表達的益處。在與包含編碼用于表達的蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體聯(lián)合伴隨施用與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體的情況下，看到這些益處。實施例16：與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體的伴隨施用增強轉(zhuǎn)基因表達實驗方法使用雄性C57BL/6小鼠(5只小鼠/組)。在第0天(組1-5)和/或第21天(組1-4、6)向動物注射200μLAAV-紅色熒光蛋白(RFP)(Virovek，Hayward，CA)(見下表5)。在第0天(組2、4)和/或第21天(組3、4)伴隨施用帶有50μg雷帕霉素的NC。在第一次注射后第33天(對于注射兩次的那些組，是在第二次注射后12天)處死動物，將其肝用膠原酶4(Worthington，Lakewood，NJ)處理，過篩，并通過流式細胞術(shù)分析全細胞懸液的RFP表達。簡言之，首先用膠原酶(100U)灌注組織，并在37℃孵育30分鐘。除去膠原酶上清液，用2％FBS終止。然后將組織樣品切成約2毫米的方塊，消化(膠原酶，400U)，重復(fù)攪拌，過濾(尼龍網(wǎng))，離心(1500rpm)，并將沉淀物重新懸浮于冰冷的2％FBS中。表5.實驗組結(jié)果在不存在NC下施用一次或兩次AAV8-RFP注射的動物在第33天顯示相似的低水平的RFP表達(圖12)。在第一次注射AAV8-RFP時伴隨用NC處理的小鼠顯示出具有統(tǒng)計學(xué)非顯著性的RFP表達提高的趨勢。相比之下，在第二次注射AAV8-RFP時(第21天)伴隨以NC處理的小鼠顯示RFP表達的統(tǒng)計學(xué)顯著的提高。與在第0天和第21天在不存在NC下接受AAV8-RFP的對照動物相比，在第0天和第21天用NC處理的小鼠也顯示RFP表達顯著提高。結(jié)果示出了與用于增強載體轉(zhuǎn)基因表達的病毒轉(zhuǎn)移載體聯(lián)合施用與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體的益處。在與包含編碼用于表達的蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體聯(lián)合伴隨施用與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體的情況下，看到這些益處。實施例17：施用具有基因治療轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體和與免疫抑制劑偶聯(lián)的合成納米載體抑制CD8+T細胞活化如果在兩次AAV8-GFP注射中均以納米載體封裝的免疫抑制劑(NC)共注射，則表達重組綠色熒光蛋白(AAV-GFP)(Virovek，Hayward，CA)的腺相關(guān)病毒的兩次連續(xù)靜脈內(nèi)(i.v.)接種導(dǎo)致體內(nèi)對AAV衣殼蛋白和GFP較低的溶細胞性T細胞(cytolyticTcell，CTL)活性。實驗方法使用雄性C57BL/6小鼠(3或6只小鼠/組)。在第0天和第17或21天(參見下表6)給動物注射200μL的AAV-GFP或AAV-GFP+NC混合物。在第一次注射后第28天(第二次注射后7天)測定在第0和21天注射的組(每組n＝3只小鼠)的抗原特異性CTL活性。簡言之，用0.5μM或5μMCFSE標記來自同基因未免疫小鼠(syngeneicmice)的脾細胞，分別產(chǎn)生CFSE低和CFSE高細胞群體。將CFSE高細胞與來自AAV衣殼的1μg/mL顯性MHCI類結(jié)合肽(序列NSLANPGIA，第517-525位氨基酸)和來自GFP的顯性MHCI類肽(HYLSTQSAL，aa200-208)在37℃下孵育1小時，而CFSE低細胞單獨在培養(yǎng)基中孵育。將對照CFSE低細胞和以肽脈沖的CFSE高靶細胞以1∶1的比例混合(總共2.0×107個細胞)并i.v.注射。在標記的細胞的注射后18小時，收獲脾，處理并通過流式細胞術(shù)分析?；谖疵庖咝∈笾袑φ栈謴?fù)比例(ratioofrecovery，RR)計算比細胞毒性：(CFSE低細胞的百分比)/(CFSE高細胞的百分比)。比裂解百分比(％)＝100×[1-(來自未免疫小鼠的細胞RR/來自經(jīng)免疫接種小鼠的細胞RR)或100×[1-(RR未免疫/RR經(jīng)免疫接種)]。對在第0和17天注射的組(每組n＝6只小鼠)在第一次注射后第25天(第二次注射后7天)測定抗原特異性IFN-γ產(chǎn)生。簡言之，分離脾細胞，平板接種在具有預(yù)吸收的抗-IFN-γ抗體的孔中，并在體外用AAV衣殼或GFP肽(1μg/mL)再刺激7天。通過生物素化的抗-IFN-γ抗體和鏈霉親和素-HRP使ELISpot顯色，并對斑點進行計數(shù)?？鄢翘禺愋员尘?。AAV-GFP的量：第0天致敏時為1×1010個病毒基因組(vg)，第21天加強時為5×1010vg。所使用的納米載體包封的免疫抑制劑(雷帕霉素或Rapa)的量：在致敏和加強(組2)下，為50μg納米載體包封的Rapa。表6.實驗組結(jié)果用NC伴隨處理的動物顯示較低水平的針對以AAV衣殼和GFP顯性MHCI類肽的組合脈沖的靶細胞的體內(nèi)CTL活性(圖13)。類似地，與非NC處理組相比，用NC伴隨處理的小鼠顯示出抗原特異性IFN-γ產(chǎn)生細胞的顯著降低(圖14和15)。特別地，4/6小鼠在250,000個細胞/孔密度下表現(xiàn)出對AAV衣殼蛋白的回憶應(yīng)答，而在NC處理組中沒有(0/6)小鼠對這種肽應(yīng)答(圖14，p＜0.05)。此外，AAV8-GFP免疫組中的3/6小鼠顯示對免疫顯性GFP肽的應(yīng)答，而NC處理組中沒有小鼠(0/6)對這種肽應(yīng)答(圖15，p＝0.01)?？偟膩碚f，似乎在致敏和加強時共施用AAV-GFP和NC導(dǎo)致抑制針對病毒衣殼和轉(zhuǎn)基因蛋白的細胞毒性T細胞應(yīng)答。實施例18：施用具有基因治療轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體和包含免疫抑制劑的合成納米載體實驗方法使用雄性C57BL/6小鼠(5只小鼠/組)。在第0天，對動物i.v.注射1010vg的rAAV2/8-螢光素酶(rAAV2/8-Luc)(以類似于本文中提供的方法(例如在實施例21或22中)的方式產(chǎn)生)或rAAV2/8-Luc+含有100μg雷帕霉素的合成納米載體(NC)(見下表7)。在第14天，所有動物接受靜脈內(nèi)注射1010vg的編碼人因子IX(hFIX)的rAAV2/8(rAAV2/8-hFIX)(以類似于本文中提供的方法(例如實施例21或22中)的方式產(chǎn)生)。在多個時間點收集血清，并通過ELISA測定抗AAV抗體水平和hFIX蛋白水平。圖16示出了包含免疫抑制劑的合成納米載體的施用方案和時間。在第0天(N＝5/組)，與rAAV2/8-Luc載體(1010vg)伴隨i.v.施用含有100μg雷帕霉素的合成PLGA納米載體(NC)或?qū)φ湛占{米顆粒(空NP)。所有組在第14天接受注射(i.v.)編碼人凝血因子IX(hFIX)的rAAV2/8載體。數(shù)據(jù)顯示單次施用包含與AAV8-Luc伴隨施用的免疫抑制劑的合成納米載體可以預(yù)防或延遲抗AAV8抗體的產(chǎn)生(圖17)。重要的是，帶有rAAV2/8-螢光素酶的NC的伴隨施用抑制了抗AAV8抗體形成足以使hFIX從在第14天施用的rAAV2/8-hFIX高效表達。相比之下，用空NP處理的動物產(chǎn)生抗AAV8抗體，其阻止hFIX從在第14天施用的rAAV2/8-hFIX載體高效表達。這些數(shù)據(jù)表明，在第一次施用AAV時伴隨施用包含免疫抑制劑的合成納米載體使得能夠使相同血清型的AAV有效重復(fù)給藥。表7：處理組實施例19：多次施用具有基因治療轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體和包含免疫抑制劑的合成納米載體實驗記計示于圖18中。使用雄性C57BL/6小鼠(5只小鼠/組)。在第0天，將含有雷帕霉素(100μg雷帕霉素)的合成納米載體與rAAV2/8-Luc載體(以與本文中提供的方法(例如實施例21或22中)類似的方式產(chǎn)生)(1×1011vg)伴隨i.v.施用(N＝5/組)(表8)。然后在第21天以伴隨施用含雷帕霉素(100μg雷帕霉素)之合成納米載體的rAAV2/8-hFIX(以與本文中提供的方法(例如實施例21或22中)類似的方式產(chǎn)生)攻擊小鼠。對照組在第0和21天接受空NP，而不是NC。表8：處理組結(jié)果顯示，將合成納米載體注射與病毒轉(zhuǎn)移載體的第一次(rAAV2/8-Luc)和第二次(rAAV2/8-hFIX)注射伴隨施用抑制了抗AAV8抗體應(yīng)答(圖19，左圖)并且降低了針對AAV8的中和抗體的滴度(表9)。對抗AAV8抗體的抑制使得能夠獲得更高水平的AAV2/8-hFIX載體拷貝數(shù)(圖19，中間圖)，這繼而提供hFIX轉(zhuǎn)基因的穩(wěn)健表達(圖19，右圖)。注意，在用空納米顆粒處理的對照組中，幾只動物在第20天具有低水平的抗體。在第21天，這些動物中的兩只具有中間水平的載體拷貝數(shù)和響應(yīng)于rAAV2/8-hFIX施用的一些hFIX表達。然而，對照動物中的三只顯示非常低的載體拷貝數(shù)并且沒有可檢出水平的FIX表達。因此，證實了多次施用包含免疫抑制劑的合成納米載體可以完全阻止抗原特異性抗AAV8抗體的誘導(dǎo)，允許在第二次注射AAV后高水平的轉(zhuǎn)基因表達。表9.中和抗AAV抗體滴度AAV8中和抗體滴度實施例20：抗原特異性實驗設(shè)計示于圖20中。在第0天，將包含免疫抑制劑(100μg雷帕霉素)的合成納米載體或?qū)φ湛占{米顆粒與rAAV2/8-Luc載體(以與本文中提供的方法(例如實施例21或22中)相似的方式產(chǎn)生)伴隨i.v.施用(1×1011vg/小鼠)。在第21天，使小鼠接受i.v.注射rAAV5-hFIX(以與本文中提供的方法(例如實施例21或22中)相似的方式產(chǎn)生)(1×1011vg/小鼠)或i.m.注射在完全弗氏佐劑(CFA)中乳化的人因子IX(hFIX)蛋白(表10)。表10：處理組結(jié)果表明，在第0天帶有雷帕霉素的合成納米載體和rAAV2/8載體(AAV2/8-Luc)的伴隨i.v.施用對于在第21天施用的AAV5載體(AAV5-hFIX)的抗體應(yīng)答沒有顯著影響(圖21，左圖)。用含有雷帕霉素的NC處理的動物與用空NP處理的小鼠相比，抗AAV5抗體應(yīng)答具有短的延遲，這可能是因為在針對AAV8致敏并與AAV5交叉反應(yīng)的空NP處理的小鼠中存在B細胞。然而，經(jīng)NC處理的小鼠的抗AAV5抗體應(yīng)答迅速地與經(jīng)空NP處理組的抗AAV5抗體應(yīng)答達到平行。相比之下，在第21天接受AAV2/8-FIX的動物顯示很少或沒有抗AAV8抗體。這些數(shù)據(jù)表明NC處理在抑制抗AAV抗體應(yīng)答上的作用對于與其共施用的AAV血清型(即AAV8)是特異性的，并且不使小鼠受到長期免疫抑制。類似地，在第0天用NC和rAAV2/8-Luc伴隨處理的小鼠在第21天表現(xiàn)出對在完全弗氏佐劑(CFA)中的重組hFIX蛋白免疫接種的穩(wěn)健應(yīng)答(圖21，右圖)。該抗hFIX抗體應(yīng)答可與在第0天用空NP而非NC處理的小鼠的應(yīng)答相區(qū)分。因此，證明了伴隨施用包含免疫抑制劑的合成納米載體和AAV不導(dǎo)致慢性免疫抑制。實施例21：具有基因治療轉(zhuǎn)基因的AAV5轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)ART-102如前所述制備(MatsushitaT，等GeneTher.1998；5：938-945)。質(zhì)粒在NF-κB啟動子和人生長激素聚腺苷酸化信號的控制下編碼本文中提供的任一轉(zhuǎn)基因。目的基因也可以在巨細胞病毒(cytomegalovirus，CMV)啟動子的控制下。轉(zhuǎn)基因盒側(cè)翼為AAV-2反向末端重復(fù)序列，并且包裝在來自AAV5的衣殼中，如GaoGP，等ProcNatlAcadSciUSA.2002；99：11854-11859所述。載體通過組合層析和氯化銫密度梯度離心純化，得到無空衣殼的級分。可以使用特異性引物和探針通過qPCR測定載體滴度。類似地，例如，可以產(chǎn)生編碼螢火蟲螢光素酶的rAAV5載體。實施例22：具有基因治療轉(zhuǎn)基因的AAV2/8和AAV2/5轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)通過將來自AAV2-HCR-hAAT-FIX的MscIBsaI和BsaITsp451片段與猿猴病毒40晚期polyA(SV40LpA)連接來構(gòu)建scAAV主鏈質(zhì)粒。所得質(zhì)粒含有以完整5′末端分解位點(terminalresolutionsite，trs)和缺失的3′trs修飾的AAV2主鏈。對于構(gòu)建LP1增強子/啟動子，可以使用標準聚合酶反應(yīng)(polymerasechainreaction，PCR)方法，其中擴增人載脂蛋白肝控制區(qū)(hepaticcontrolregion，HCR)的連續(xù)區(qū)段、包含5′非翻譯區(qū)的人α1抗胰蛋白酶(humanalpha1antitrypsin，hAAT)基因啟動子和克隆的在位置4582(g至c)、4580(g至c)、4578(a至c)和4561(a至t)處修飾的經(jīng)修飾的SV40小t抗原內(nèi)含子(SV40內(nèi)含子)到經(jīng)修飾的AAV2主鏈中。從AAV-HCR-hAAT-hFIX中PCR擴增野生型hFIXcDNA或其他目的cDNA，其中沒有3′非翻譯區(qū)(untranslatedregion，UTR)區(qū)，并插入經(jīng)修飾的SV40內(nèi)含子的下游以制備scAAV-LP1-hFIX。使用在高表達的真核基因中最常見的密碼子產(chǎn)生密碼子優(yōu)化的hFIX，合成為寡核苷酸，隨后通過連接裝配、PCR擴增和測序，然后克隆入AAVLP1主鏈以產(chǎn)生sc-AAV-LP1-hFIXco。ss和scAAV載體通過無腺病毒瞬時轉(zhuǎn)染方法制備。使用基于XX2和pAAV5-2的稱為pLT-RCO3的嵌合AAV2Rep-5Cap包裝質(zhì)粒產(chǎn)生AAV5假型載體顆粒。此外，使用包裝質(zhì)粒pAAV8-2制備AAV8假型載體。AAV2/5和2/8載體通過離子交換色譜法純化?？梢允褂贸菪|(zhì)粒DNA作為標準，通過定量狹縫印記法(quantitativeslotblot)測定載體基因組(vg)滴度。這樣的病毒載體可以包含本文中提供的任一種轉(zhuǎn)基因。實施例23：具有基因治療轉(zhuǎn)基因的AAV8轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)可以將小鼠基因組Alb區(qū)段(NCBI參考序列：NC_000071.6中的90474003-90476720)進行PCR擴增，并將其插入經(jīng)修飾的pTRUF主鏈中的AAV2反向末端重復(fù)序列之間的BsrGI和SpeI限制性位點中。在接頭編碼序列(甘氨酸-絲氨酸-甘氨酸)之后并且在NheI限制性位點之前的優(yōu)化的P2A編碼序列可以置入Bpu10I限制性位點。可將密碼子優(yōu)化的F9編碼序列插入NheI位點以獲得可用于構(gòu)建rAAV8載體的pAB269。為了構(gòu)建逆對照，可以使用合適的PCR引物擴增從BsiWI限制位點到NheI限制位點的內(nèi)部區(qū)段。最終的rAAV生產(chǎn)質(zhì)?？梢允褂肊ndoFree質(zhì)粒Megaprep試劑盒(Qiagen)產(chǎn)生。rAAV8載體可以如Grimm，等，J.Virol.80，426-439(2006)中所述使用Ca3(PO4)2轉(zhuǎn)染方案產(chǎn)生，然后由CsCl梯度純化?？赏ㄟ^定量斑點印跡法滴定載體。如Barzel，等，364，Nature，Vol.517，2015中所述，使用如上所述的載體證明了血友病B小鼠中出血因素的改善。特別地，所述載體實現(xiàn)了在肝細胞中整合到白蛋白等位基因中。由靶上整合(on-targetintegration)產(chǎn)生了F9，并且核糖體跳讀是高效的。獲得了穩(wěn)定的F9血漿水平，并且經(jīng)處理的F9缺陷小鼠具有正常的凝血時間。實施例24：具有基因治療轉(zhuǎn)基因的AAV9轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)使用“第一代”E1/E3缺失的復(fù)制缺陷型腺病毒的腺病毒構(gòu)建體可以如Kypson，等JThoracCardiovascSurg.1998和Akhter，等ProcNatlAcadSciUSA.1997；94：12100-12105中所述產(chǎn)生。b2AR構(gòu)建體(Adeno-b2AR)和轉(zhuǎn)基因可以由適當(dāng)?shù)膯幼域?qū)動。可以從經(jīng)感染的Epstein-Barr核抗原轉(zhuǎn)染的293細胞純化腺病毒的大規(guī)模制備物。如Shahetal.，Circulation.2000；101：408-414中所述，經(jīng)歷左或右冠狀動脈的經(jīng)皮亞選擇性導(dǎo)管插入術(shù)和輸注腺病毒載體(例如如上所述產(chǎn)生的含有標志物轉(zhuǎn)基因的那些)的兔子以腔室特異性方式表達轉(zhuǎn)基因。此外，結(jié)論是經(jīng)皮由腺病毒介導(dǎo)的治療性轉(zhuǎn)基因的冠狀動脈內(nèi)遞送是可行的，并且可以增強急性全左心室功能。實施例25：具有基因治療轉(zhuǎn)基因的慢病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)可以制備以下：含有包裝序列和插入在慢病毒LTR之間以允許靶細胞整合的轉(zhuǎn)基因的慢病毒表達質(zhì)粒；包裝質(zhì)粒，其編碼pol、gag、rev和tat病毒基因并含有rev應(yīng)答元件；以及編碼病毒包膜基因之蛋白質(zhì)的假型化質(zhì)粒?？梢酝ㄟ^前述方法轉(zhuǎn)染HEK293T細胞。在轉(zhuǎn)染HEK293T細胞后，慢病毒載體可以從含有重組慢病毒載體的細胞上清液中獲得。實施例26：具有基因治療轉(zhuǎn)基因的HIV慢病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)根據(jù)美國公開No.20150056696的方法制備HIV慢病毒轉(zhuǎn)移載體。從作為模板的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞株ARPE-19(美國典型培養(yǎng)物保藏中心，AmericanTypeCultureCollection，ATCC)的cDNA中并使用合適的引物以PCR擴增hPEDFCDS片段?？梢灶愃频孬@得本文中所述的任一種蛋白質(zhì)的替選片段。通過凝膠回收獲得hPEDF片段，并按照制造商的說明書通過TA克隆方法連接到pLenti6.3/V5-TOPO.RTM.載體(Invitrogen)中?？梢酝ㄟ^測序驗證所連接的hPEDF片段的序列。實施例27：具有基因治療轉(zhuǎn)基因的SIV慢病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)根據(jù)美國公開No.20150056696的方法制備SIV慢病毒轉(zhuǎn)移載體。獲得SIV基因轉(zhuǎn)移載體、包裝載體、rev表達載體和VSV-G表達載體，并將hPEDF片段導(dǎo)入基因轉(zhuǎn)移載體中?？梢灶愃频孬@得用于本文中所述的任一種蛋白質(zhì)的替選片段，以用于引入基因轉(zhuǎn)移載體中。將來自人胎兒腎細胞的細胞系293T細胞以每個直徑15cm的塑料培養(yǎng)皿接近1×107個細胞的細胞密度接種(第二天的細胞密度為70-80％)，并在20ml補充有10％胎牛血清的D-MEM培養(yǎng)基(GibcoBRL)中培養(yǎng)24小時。培養(yǎng)24小時后，將培養(yǎng)基替換為10mlOPTI-MEM培養(yǎng)基(GibcoBRL)。對于一個培養(yǎng)皿，將10μg的基因轉(zhuǎn)移載體、5μg的包裝載體、2μg的rev表達載體和2μg的VSV-G表達載體溶解在1.5ml的OPTI-MEM培養(yǎng)基中，并添加40μlPLUSReagent試劑(InvitroCo.)。將所得混合物攪拌并在室溫下放置15分鐘。通過用1.5mlOPTI-MEM培養(yǎng)基稀釋60μlLIPOFECTAMINE試劑獲得稀溶液；將所得混合物攪拌并在室溫下放置15分鐘。將所得的DNA復(fù)合物滴在上述培養(yǎng)皿中的細胞上。小心搖動培養(yǎng)皿以實現(xiàn)均勻混合，然后孵育。添加13ml含有20％胎牛血清的D-MEM培養(yǎng)基?；厥丈锨逡?。實施例28：具有基因治療轉(zhuǎn)基因的HSV轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)根據(jù)美國公開No.20090186003的方法制備HSV轉(zhuǎn)移載體。HSV-1(F)毒株是用作原型HSV-1毒株的低傳代臨床分離物。構(gòu)建了M002，其在鼠早期生長響應(yīng)-1啟動子(early-growthresponse-1promoter，Egr-1)的轉(zhuǎn)錄控制下表達鼠白介素12(mIL-12)。或者，可以在合適的啟動子控制下制備編碼本文中所述的任一種蛋白質(zhì)的類似構(gòu)建體。獲得在pBluescript-SK+(Stratagene)中的含有mIL-12的p40和p35亞基的質(zhì)粒。通過用HindIII(5′端)和BamHI(3′端)消化除去p40亞基，并通過用NcoI(5′端)和EcoRI(3′端)消化除去p35亞基。使用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和合適的引物從載體pCITE-4a+(Novagen，Madison，Wis.)中擴增內(nèi)部核糖體進入位點或IRES(internalribosomeentrysite)序列。通過將鼠p40、鼠p35和IRES序列三方連接到pBS-SK+的HindIII和EcoRI位點中來構(gòu)建質(zhì)粒pBS-IL12，使得IRES序列分隔p40和p35編碼序列?？梢匀缦惹八鲋苽銱SV穿梭質(zhì)粒pRB4878(Andreansky等(1998)GeneTher.5，121-130)。質(zhì)粒4878-IL12如下構(gòu)建：用XhoI和SpeI消化pBS-mIL-12以移出含有整個IL-12亞基編碼區(qū)(包括IRES)的2.2kb片段，使用Klenow片段填充末端，并連接到位于pRB4878內(nèi)的Egr-1啟動子與乙型肝炎病毒polyA序列之間的平端KpnI位點中。通過如先前所述的同源重組構(gòu)建M001(tk-)和M002(在天然基因座處修復(fù)tk)(Andreansky等(1998)GeneTher.5，121-130)。通過在1％瓊脂糖、1×TPE凝膠上電泳分離并轉(zhuǎn)移至Zeta-Probe膜(Bio-Rad)上的經(jīng)限制酶消化的病毒DNA的Southern印跡雜交，證實兩種tk修復(fù)的病毒M002.29和M002.211。使用GeneImagesAlkPhosDirectDNA標記系統(tǒng)(Amersham-PharmaciaBiotech，Piscataway，N.J.)將印跡與用堿性磷酸酶標記的合適的DNA探針雜交。通過酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)證明IL-12產(chǎn)生。實施例29：具有CRISPR/Cas-9轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)本文中描述的任一種病毒載體(例如在上述實施例中)，可用于產(chǎn)生具有基因編輯轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體?；蛘?，例如，以下提供了用于產(chǎn)生具有編碼Cas9(例如Cas9野生型(II型))的基因編輯轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體的方法?？梢栽诤?0％胎牛血清(Sigma，Steinheim，Germany)、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素(LifeTechnologies)的DMEM培養(yǎng)基(LifeTechnologies，Darmstadt，德國)中培養(yǎng)HEK293T細胞。Huh7和Hep56D細胞培養(yǎng)基可另外含有1％非必需氨基酸(LifeTechnologies)。Jurkat細胞可以在含有10％胎牛血清(Sigma)、100U/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素和2mML-谷氨酰胺(所有均為LifeTechnologies)的RPMI1640培養(yǎng)基(GEHealthcare，Pasching，奧地利)中培養(yǎng)。所有細胞系可以在37℃和5％CO2下培養(yǎng)。對于大規(guī)模AAV載體生產(chǎn)，可將HEK293T細胞接種在10個15cm2培養(yǎng)皿中(每個培養(yǎng)皿4×106個細胞)。兩天后，它們可以用(i)AAV載體質(zhì)粒(編碼gRNA和/或Cas9)、(ii)帶有AAVrep和cap基因的AAV輔助質(zhì)粒和(iii)為AAV產(chǎn)生提供輔助功能的腺病毒質(zhì)粒進行三重轉(zhuǎn)染。AAVcap基因可以來自于合成分離物AAV-DJ(Grimm，等，J.Virol.2008，82，5887-5911)或來自新的變體AAVrh10A2。簡言之，可以通過將七個氨基酸長的肽插入AAV血清型rh10的衣殼的暴露區(qū)域來產(chǎn)生AAVhh10A2。關(guān)于AAV生產(chǎn)質(zhì)粒和方案的其他細節(jié)可以如等，NucleicAcidsRes.2013，41，e199和Grimm，Methods2002，28，146-157中報道的進行。為了產(chǎn)生小規(guī)模AAV儲備，可以將每孔2×105個HEK293T細胞接種在6孔板中，并且第二天用上述質(zhì)粒三重轉(zhuǎn)染。三天后，將細胞刮到培養(yǎng)基中，通過以1500rpm離心10分鐘收集，重懸于300μL1×PBS(LifeTechnologies)中，并在液氮中和37℃下進行三次凍融循環(huán)。可以在13,200rpm下進行10分鐘離心以除去細胞碎片，并且含有病毒轉(zhuǎn)移載體顆粒的上清液可直接用于轉(zhuǎn)導(dǎo)實驗或在-20℃冷凍。對于小規(guī)模轉(zhuǎn)染和隨后的T7測定，可以將2.8×104個HEK293T或1.2×104個Huh7細胞接種在96孔板中的每個孔中，并且第二天使用lipofectamine2000(LifeTechnologies)按照制造商對于該形式的推薦進行轉(zhuǎn)染(200ngDNA和0.5μLlipofectamine2000，各自在25μL無血清培養(yǎng)基中)。200ngDNA可以由一體化的Cas9/gRNA載體構(gòu)成，或者在分離的Cas9和gRNA構(gòu)建體的情況下，每種100ng。為了獲得用于Western印跡的裂解物，可以根據(jù)制造商對于該形式的建議，使用lipofectamine2000在24孔板中轉(zhuǎn)染HEK293T細胞(每種裂解物一個孔)。在轉(zhuǎn)導(dǎo)實驗中，細胞可以在96孔板中培養(yǎng)，并在接種后1天用10μL非純化的AAV或純化的載體轉(zhuǎn)導(dǎo)。在三(轉(zhuǎn)染)至五(轉(zhuǎn)導(dǎo))天的孵育后，根據(jù)制造商的方案，用補充有0.2μg/mL蛋白酶K(Roche，Mannheim，德國)的DirectPCRLysisReagentCell(PeqLab，Erlangen，德國)裂解細胞。如Senís，等Biotechnol.J.2014，9，1402-1412中所述，對如上述的那些質(zhì)粒和載體可以實現(xiàn)CRISPR組分-Cas9和嵌合指導(dǎo)RNA(gRNA)的遞送。此外，證明了可以分別使用肝特異性啟動子或肝miRNA結(jié)合位點將Cas9表達導(dǎo)向或遠離肝細胞。提供了這樣的載體可用于體內(nèi)基因改造的進一步證據(jù)。這在成年小鼠的示例性肝中完成。實施例30：具有Cas9變體轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)實施例30中的方法也可用于產(chǎn)生具有基因編輯轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體，例如編碼Cas9變體的轉(zhuǎn)基因，例如本文中所述的任一種Cas9變體?；蛘?，可以使用本文中所述的任一種其他病毒載體代替來產(chǎn)生這種病毒轉(zhuǎn)移載體。所提供的任一種Cas9變體可以由本文中提供的任一種基因編輯轉(zhuǎn)基因編碼。為了制備Cas9變體，可以使用具有NLS和3×FLAG標簽的人密碼子優(yōu)化的化膿鏈球菌Cas9核酸酶(Addgene質(zhì)粒43861)作為野生型Cas9表達質(zhì)粒。使用Cas9_Exp引物，以野生型Cas9表達質(zhì)粒作為模板的PCR產(chǎn)物可以用Gibson裝配克隆試劑盒(NewEnglandBiolabs)裝配以構(gòu)建Cas9和FokI-dCas9變體。還可以克隆編碼單個gRNA構(gòu)建體(gRNAG1至G13)的表達質(zhì)粒。實施例31：具有鋅指核酸酶轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)本文中描述的任一種病毒載體(例如在上述實施例中)，可以用于產(chǎn)生具有編碼鋅指核酸酶的基因編輯轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體?；蛘?，例如，以下提供了用于制備這種具有基因編輯轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體的方法。TRBC和TRAC-ZFN可以如Urnov，等，Nature435，646-651(2005)中所述進行設(shè)計和組裝。所使用的識別螺旋可以如在Provasi，等，NatureMedicine，Vol.18，No.5，May2012中所提供。編碼TRBC-和TRAC-ZFN的慢病毒載體可以從來自于HIV的自失活轉(zhuǎn)移構(gòu)建體pCCLsin.cPPT.SFFV.eGFP.Wpre產(chǎn)生，其可以通過帶有HIV整合酶中的D64V突變并由VSV包膜假型化的整合酶缺陷的第三代包裝構(gòu)建體包裝。Ad5/F35腺病毒載體可以在E1-E3缺失的主鏈上產(chǎn)生。靶向TRBC或TRAC基因的ZFN可以使用2A肽序列連接，并克隆到pAdEasy-1/F35載體中，以處于在適當(dāng)?shù)膯幼涌刂葡?，并且可以使用TREX293T細胞產(chǎn)生用于每種構(gòu)建體的Ad5/F35病毒。編碼來自雙向自失活轉(zhuǎn)移載體pCCLsin.cPPT.ΔLNGFR.minCMV.hPGK.eGFP.Wpre和來自pCCLsin.cPPT.hPGK.eGFP.Wpre的WT1特異性TCR鏈和單個α21或β21WT1特異性TCR鏈的慢病毒載體可以通過整合酶-感受態(tài)第三代構(gòu)建體產(chǎn)生和包裝，并由VSV包膜假型化。使用如上述的載體，如Provasi，etal.，NatureMedicine，Vol.18，No.5，May2012中所述，已經(jīng)顯示ZFN促進內(nèi)源性TCRβ-和α-鏈基因的破壞。用ZFN處理的淋巴細胞缺乏CD3-TCR的表面表達，并且隨著白介素-7(IL-7)和IL-15的添加而擴增。此外，在特異性針對Wilms腫瘤1(WT1)抗原的TCR的慢病毒轉(zhuǎn)移后，TCR編輯的細胞以高水平表達新的TCR(也描述于Provasi，等，NatureMedicine，Vol.18，No.5，May2012)。實施例32：具有鋅指核酸酶轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)靶向hF9mut基因座的鋅指核酸酶(ZFN)和F9靶向載體可以如Li，等，Nature.2011；475(7355)：217-221中所述制備。這樣的載體已經(jīng)顯示成功地用于在血友病B(hemophiliaB，HB)的新生小鼠模型中的體內(nèi)基因靶向中。編碼靶向人F9基因的ZFN對的AAV載體和具有側(cè)翼校正cDNA盒的同源臂的基因靶向載體的全身遞送導(dǎo)致這樣的小鼠的肝中對改造到小鼠基因組中的缺陷hF9基因的校正。此外，實現(xiàn)了足以使凝固時間正?；姆€(wěn)定水平的人因子IX表達。實施例33：具有大范圍核酸酶轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)本文描述的任一種病毒載體(例如在上述實施例中)可用于產(chǎn)生具有編碼大范圍核酸酶的基因編輯轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體?；蛘撸?，以下描述了用于產(chǎn)生具有基因編輯轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體的一般方法。大范圍核酸酶可以是美國公開No.20110033935和20130224863中提供的任一種大范圍核酸酶。在一些實施方案中，將特定的病毒基因滅活以防止病毒的繁殖。優(yōu)選地，在一些實施方案中，改變病毒以使得其僅能夠在靶細胞內(nèi)遞送和維持，但不保留在靶細胞或組織內(nèi)復(fù)制的能力?？梢詫⒕幋a大范圍核酸酶的一個或更多個DNA序列引入改變的病毒基因組，以產(chǎn)生作為載體的病毒基因組。在一些實施方案中，病毒載體是逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，例如但不限于MFG或pLJ載體。MFG載體是簡化的莫洛尼鼠白血病病毒載體(Moloneymurineleukemiavirusvector，MoMLV)，其中缺失編碼pol和env蛋白的DNA序列以使其復(fù)制缺陷。Pll逆轉(zhuǎn)錄病毒載體也是MoMLV的一種形式(見例如Korman等(1987)，Proc.Nat′lAcad.Sci.，84：2150-2154)。在另一些實施方案中，重組腺病毒或腺相關(guān)病毒可用于產(chǎn)生病毒載體。實施例34：具有外顯子跳讀轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)本文中描述的任一種病毒載體(例如在上述實施例中)可以用于產(chǎn)生具有外顯子跳讀轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體?；蛘撸?，以下提供了用于產(chǎn)生具有特異性外顯子跳讀轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體的方法。三質(zhì)粒轉(zhuǎn)染方案可以與pAAV(U7smOPT-SD23/BP22)和pAAV(U7smOPT-scr)質(zhì)粒一起用于產(chǎn)生單鏈AAV1-U7ex235和AAV1-U7scr；并將scAAV-U7ex23質(zhì)粒用于產(chǎn)生自身互補性scAAV9-U7ex239。pAAV(U7smOPT-scr)質(zhì)?？梢院胁慌c任何鼠cDNA相匹配的非特異性序列GGTGTATTGCATGATATGT。根據(jù)上述制備的病毒轉(zhuǎn)移載體的使用，如LeHir等，MolecularTherapyvol.21no.8，1551-1558Aug.2013中所述，表明這種載體可用于恢復(fù)肌養(yǎng)蛋白。然而，所述恢復(fù)在3個月至12個月之間顯著降低，這與病毒基因組損失相關(guān)。因此，本文中提供的組合物和方法可以幫助維持這種治療的效果。實施例35：具有外顯子跳讀轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)克隆U1#23可以利用寡核苷酸mU1anti5(5’-CGAAATTTCAGGTAAGCCGAGGTTATGAGATCTTGGGCCTCTGC-3’)和mU1anti3(5’-GAACTTTGCAGAGCCTCAAAATTAAATAGGGCAGGGGAGATACCATGATC-3’)，通過人U1snRNA基因的反向PCR獲得。含有反義鏈的插入物可以從具有寡核苷酸U1cas-up-NheI(5’-CTAGCTAGCGGTAAGGACCAGCTTCTTTG-3’)和U1cas-down-NheI(5’-CTAGCTAGCGGTTAGCGTACAGTCTAC-3’)的相應(yīng)質(zhì)粒中擴增。所得片段可以被NheI消化，并以pAAV2.1-CMV-EGFP質(zhì)粒的正向方向克隆。AAV-U1#23載體可以通過293細胞的三重轉(zhuǎn)染產(chǎn)生，通過CsCl2超速離心純化并通過使用基于實時PCR和斑點印跡測定進行滴定?？梢酝ㄟ^在293細胞上連續(xù)稀釋來評估綠色形成單位的數(shù)量。AAV載體可以通過AAVTIGEM載體核心產(chǎn)生。六周齡的mdx小鼠可以通過尾靜脈施用3-4×1012個AAV載體的基因組拷貝。在病毒施用后6和12周，可以處死動物，并且可以收獲來自不同區(qū)域的肌肉。EGFP分析和解剖可以在熒光立體顯微鏡(LeicaMZ16FA)下進行。根據(jù)上述制備的病毒轉(zhuǎn)移載體的使用，如Dentietal.，3758-3763，PNAS，March7，2006，vol.103，no.10中所述，通過尾靜脈注射導(dǎo)致mdx小鼠中的持續(xù)外顯子跳讀。載體的全身遞送導(dǎo)致有效的全身范圍定殖，體內(nèi)功能性質(zhì)的顯著恢復(fù)，以及降低肌酸激酶血清水平。結(jié)果表明肌肉萎縮降低。實施例36：帶有外顯子跳讀轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)可以改造特異性針對某些外顯子的不同U7snRNA構(gòu)建體，例如來自U7smOPT-SD23/BP22(經(jīng)修飾的鼠U7snRNA基因)。靶向某些外顯子的反義序列可以被靶向肌養(yǎng)蛋白mRNA的外顯子的反義序列代替，其作為反義寡核苷酸誘導(dǎo)外顯子跳讀?？梢詫⑿蛄胁迦險7snRNA構(gòu)建體中。然后可將所得U7snRNA片段引入慢病毒載體構(gòu)建體用于進一步慢病毒生產(chǎn)，或引入AAV載體構(gòu)建體用于AAV生產(chǎn)。慢病毒載體可以基于pRRLcPPT-hPGK-eGFP-WPRE構(gòu)建體，其中去除了hPGK-GFP盒并用U7snRNA構(gòu)建體代替。如前所述，可以通過將包裝構(gòu)建體pCMVΔR8.74(產(chǎn)生囊泡性口病病毒-G包膜的質(zhì)粒(pMD.G))和載體本身轉(zhuǎn)染到293T細胞中產(chǎn)生慢病毒載體。可以通過在12孔板中用系列稀釋的載體制備物轉(zhuǎn)導(dǎo)NIH3T3細胞來測定病毒滴度(感染性顆粒)。72小時后，可以使用基因組DNA純化試劑盒(Qiagen，Crawley，英國)提取來自經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)細胞的基因組DNA。感染性顆粒滴度(感染性顆粒/ml)可以通過其他地方描述的定量實時PCR來測定。對于隨后的AAV載體產(chǎn)生，可以在pSMD2AAV2載體的XbaI位點引入不同的U7snRNA片段。AAV2/1假型載體可以通過在293細胞中共轉(zhuǎn)染pAAV2-U7snRNA、編碼腺病毒輔助功能的pXX6和含有AAV2rep和AAV1cap基因的pAAV1pITRCO2來制備。載體顆?？梢栽谵D(zhuǎn)染后48小時從獲得的細胞裂解物的碘克沙醇(Iodixanol)梯度上純化，并且滴度可以通過定量實時PCR測量。如描述于Goyenvalle，等TheAmericanSocietyofGene&CellTherapy，Vol.20No.6，1212-1221June2012中的，病毒轉(zhuǎn)移載體(例如用上述方法產(chǎn)生并且編碼U7小核RNA的那些)可以在體外和體內(nèi)誘導(dǎo)高效的外顯子跳讀。實施例37：具有外顯子跳讀轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)可以根據(jù)上述美國公開No.20090186003和實施例28的方法制備HSV轉(zhuǎn)移載體，除了可以改變方法以使轉(zhuǎn)基因代替為外顯子跳讀轉(zhuǎn)基因。外顯子跳讀轉(zhuǎn)基因可以是本文中所述或本領(lǐng)域已知的任一種這樣的轉(zhuǎn)基因。實施例38：具有外顯子跳讀轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)根據(jù)上述美國公開No.20150056696和實施例26的方法制備HIV慢病毒轉(zhuǎn)移載體，除了可以改變方法以使轉(zhuǎn)基因代替為外顯子跳讀轉(zhuǎn)基因。外顯子跳讀轉(zhuǎn)基因可以是本文所述或本領(lǐng)域已知的任一種這樣的轉(zhuǎn)基因。實施例39：具有基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)本文中描述的任一種病毒載體(例如在上述實施例中)可以用于產(chǎn)生具有基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體。或者，例如，以下提供了用于產(chǎn)生具有特異性基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體的方法。根據(jù)Brown等，NatMed.2006May；12(5)：585-91中所述的方法產(chǎn)生病毒轉(zhuǎn)移載體。簡言之，使用RNA的逆轉(zhuǎn)錄構(gòu)建質(zhì)粒，定量PCR分析以定量mRNA的濃度和GAPDH表達以用于標準化。VSV假型第三代慢病毒載體(LV)通過瞬時四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到293T細胞中產(chǎn)生并通過超速離心純化。載體顆粒可以通過HIV-1gagp24抗原免疫捕獲來測量。如描述于Brown等，NatMed.2006May；12(5)：585-91中的，示出這樣的編碼內(nèi)源miRNA的靶序列的慢病毒載體導(dǎo)致產(chǎn)生可在不同組織中使基因表達隔離的miRNA。提供了miRNA調(diào)節(jié)的證據(jù)，并且示出這樣的載體可以用于治療應(yīng)用。實施例40：具有基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)為了產(chǎn)生編碼針對基因(例如，亨廷頓基因；AAV2/1-miRNA-Htt)的基于miRNA的發(fā)夾的AAV2/1血清型載體，將特定基因(例如人HTT)的cDNA克隆到含有AAV2反向末端重復(fù)序列(ITR)和1.6-kb巨細胞病毒增強子/雞b-肌動蛋白(chickenb-actin，CBA)啟動子的穿梭質(zhì)粒中。還可以開發(fā)對照載體并且其含有空載體主鏈(例如AAV2/1-Null)或在相同啟動子的控制下表達報道分子例如增強的綠色熒光蛋白(AAV2/1-eGFP)。病毒轉(zhuǎn)移載體可以通過細胞系(例如人293細胞)的三重質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染產(chǎn)生，然后可以如先前在Stanek等，HumanGeneTherapy.2014；25：461-474中所述對重組病毒粒子進行柱純化。然后可以使用定量PCR測定得到的AAV2/1-miRNA-Htt的滴度。如Stanek等，HumanGeneTherapy.2014；25：461-474中所述，使用這種病毒轉(zhuǎn)移載體產(chǎn)生的數(shù)據(jù)證明AAV介導(dǎo)的RNAi可以有效地轉(zhuǎn)導(dǎo)紋狀體中的細胞，并且可以部分降低該區(qū)域中野生型和突變型Htt的水平。實施例41：具有基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)CD81基因可以通過逆轉(zhuǎn)錄擴增。cDNA可以用合適的引物進行PCR擴增。正向引物可以含有BamHI(Biolabs，Allschwill，瑞士)限制性位點，隨后是5′CD81cDNA特異性序列；反向引物可以包含3′CD81cDNA特異性序列、6His-標簽、終止密碼子和XhoI(Biolabs)限制性位點?？梢詫CR產(chǎn)物消化并克隆到pTK431中的相似位點。pTK431是一種自我失活的HIV-1載體，其含有完整的tet-off誘導(dǎo)系統(tǒng)、中央多嘌呤鏈(centralpolypurinetract，cPPT)和土撥鼠肝炎病毒轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)元件。質(zhì)?？梢越?jīng)CsCl2純化。靶標可以基于Hannon的設(shè)計標準(katahdin.cshl.org：9331/RNAi/html/rnai.html)根據(jù)CD81mRNA序列設(shè)計。使用pSilencer1.0-U6(Ambion)作為模板和含有限制性位點的U6啟動子特異性正向引物，可以通過PCR將每個shRNA靶標添加至小鼠U6啟動子?？梢詫CR產(chǎn)物消化，克隆到pTK431中的類似位點中并測序以驗證各構(gòu)建體的完整性。可以將載體質(zhì)粒與包裝構(gòu)建體質(zhì)粒pΔNRF和包膜質(zhì)粒pMDG-VSVG一起共轉(zhuǎn)染到HEK293T細胞中以產(chǎn)生病毒顆粒?？梢酝ㄟ^p24抗原測量(KPL，Lausanne，瑞士)測定病毒滴度。如Bahi，etal.J.Neurochem.(2005)92，1243-1255中所示，表達針對CD81的短發(fā)夾RNA(shRNA)的慢病毒(Lenti-CD81-shRNA)在體外感染HEK293T細胞后導(dǎo)致基因沉默。此外，體內(nèi)遞送Lenti-CD81-shRNA導(dǎo)致內(nèi)源CD81的沉默。實施例42：具有基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)本文中描述的任一種病毒載體(例如在上述實施例中)可以用于產(chǎn)生具有編碼RNAi劑的基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體。下文描述了可由本文中提供的基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因編碼的RNAi劑的實例。表達構(gòu)建體可以包含驅(qū)動三種或更多種單獨shRNA種類表達的啟動子。小核RNA和轉(zhuǎn)移RNA的合成可以由polIII特異性啟動子控制下的RNA聚合酶III(polIII)指導(dǎo)。由于由這些調(diào)節(jié)元件指導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄物的相對高豐度，polIII啟動子(包括來自U6和H1基因的啟動子)可用于驅(qū)動1-xRNAi的表達(見例如Domitrovich和Kunkel.Nucl.AcidsRes.31(9)：2344-52(2003)；Boden，等Nucl.AcidsRes.31(17)：5033-38(2003a)；和Kawasaki，等NucleicAcidsRes.31(2)：700-7(2003))。使用U6啟動子的RNAi表達構(gòu)建體可以包含靶向HCV基因組的三個不同區(qū)域的三種RNAi劑。可由基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因編碼的RNAi劑的其他實例包括本文中所述的任一種RNAi劑。實施例43：具有基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體(預(yù)示)本文中描述的任一種病毒載體(例如在上述實施例中)可用于產(chǎn)生具有編碼Serpina1RNAi劑(例如美國專利公開號20140350071中描述的這種試劑之一)的基因表達調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體。具有這種轉(zhuǎn)基因的病毒轉(zhuǎn)移載體可以按照本文中提供的或本領(lǐng)域已知的類似方法產(chǎn)生。例如，可以使用腺相關(guān)病毒(AAV)載體(Walsh等，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.204：289-300(1993)；U.S.Pat.No.5,436,146)。iRNA可以表達為來自具有例如U6或H1RNA啟動子或巨細胞病毒(CMV)啟動子的重組AAV載體的兩個分開的互補單鏈RNA分子。用于表達作為本發(fā)明特征的dsRNA的合適的AAV載體、用于構(gòu)建重組AV載體的方法和用于將載體遞送到靶細胞中的方法描述于SamulskiR等(1987)，J.Virol.61：3096-3101；FisherKJ等(1996)，J.Virol，70：520-532；SamulskiR等(1989)，J.Virol.63：3822-3826；美國專利No.5,252,479；美國專利No.5,139,941；國際專利申請WO94/13788；以及國際專利申請WO93/24641中，這些信息的全部公開內(nèi)容通過引用并入本文。實施例44：在對象中建立減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答(預(yù)示)任一種本文中提供的病毒轉(zhuǎn)移載體(例如任何一個實施例)均為伴隨施用，例如與本文中提供的靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑中的任一種同時i.v.、i.m.、s.c.或i.p.施用，例如在任何一個實施例中，也分別i.v.、i.m.、s.c.或i.p.施用。根據(jù)在對象中建立抗病毒轉(zhuǎn)移載體減弱應(yīng)答的方案，包括至少病毒轉(zhuǎn)移載體和靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑的頻率和劑量來進行施用。對象可以是任一種本文中所述的對象中，例如不具有對病毒轉(zhuǎn)移載體的預(yù)先存在的免疫力的對象，或者期望重復(fù)施用病毒轉(zhuǎn)移載體的對象。在一些實施方案中，當(dāng)減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答是針對病毒轉(zhuǎn)移載體的T細胞應(yīng)答時，在伴隨施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體之前，將不含靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑的病毒轉(zhuǎn)移載體施用于對象。在這樣的一些實施方案中，在伴隨施用和在其之前施用病毒轉(zhuǎn)移載體之后，向?qū)ο笫┯靡粋€或更多個重復(fù)劑量的病毒轉(zhuǎn)移載體。在一些實施方案中，當(dāng)減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答是針對病毒轉(zhuǎn)移載體的B細胞應(yīng)答時，在伴隨施用病毒轉(zhuǎn)移載體和靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑之前，不向?qū)ο笫┯貌《巨D(zhuǎn)移載體。在這樣的一些實施方案中，向?qū)ο笫┯靡粋€或更多個重復(fù)劑量的病毒轉(zhuǎn)移載體，并且每個重復(fù)劑量與靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑伴隨施用。在另一些實施方案中，當(dāng)減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答是抗病毒轉(zhuǎn)移載體抗體應(yīng)答時，在伴隨施用病毒轉(zhuǎn)移載體和靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑之前，不向?qū)ο笫┯貌《巨D(zhuǎn)移載體。在這樣的一些實施方案中，向?qū)ο笫┯靡粋€或更多個重復(fù)劑量的病毒轉(zhuǎn)移載體，并且每個重復(fù)劑量與靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑伴隨施用。用于測定抗體水平的方法可以使用ELISA測定。抗原特異性B細胞或T細胞回憶應(yīng)答的測定包括但不限于ELISpot、細胞內(nèi)細胞因子染色、細胞增殖和細胞因子產(chǎn)生測定。在任一個實施方案中，在伴隨施用病毒轉(zhuǎn)移載體和靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑之后評價減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答。在任一個實施方案中，可以確定用于建立減弱的抗病毒轉(zhuǎn)移載體應(yīng)答的方案。在這樣的一個實施方案中，在另一個對象(例如測試對象)中確定所述方案。如此確定的方案可用于治療需要用病毒轉(zhuǎn)移載體治療的其他對象。實施例45：在施用病毒轉(zhuǎn)移載體之前確定對象中預(yù)先存在的免疫力水平(預(yù)示)樣品(例如血液樣品)可以從需要用本文中提供的病毒轉(zhuǎn)移載體治療的對象中獲得，所述病毒轉(zhuǎn)移載體例如本文中提供的(如在任一實施例中)的病毒轉(zhuǎn)移載體中的任一種病毒轉(zhuǎn)移載體。使用來自對象的樣品，可以測定抗體(例如中和抗體)的水平或免疫細胞(例如T細胞或B細胞)的抗原回憶應(yīng)答。用于測定抗體水平的方法可以使用ELISA測定?？乖禺愋訠細胞或T細胞回憶應(yīng)答的測定包括但不限于ELISpot、細胞內(nèi)細胞因子染色、細胞增殖和細胞因子產(chǎn)生測定?？梢酝ㄟ^使樣品與病毒轉(zhuǎn)移載體或其抗原接觸來評估回憶應(yīng)答?；蛘?，還可以通過在向?qū)ο笫┯貌《巨D(zhuǎn)移載體或其抗原之后從對象取得的樣品，然后測定所產(chǎn)生的抗體水平或B細胞或T細胞回憶應(yīng)答，從而來評估回憶應(yīng)答。在一些實施方案中，其中通過測量對象中抗病毒轉(zhuǎn)移載體抗體的水平(或B細胞應(yīng)答)確定對象不具有針對病毒轉(zhuǎn)移載體的預(yù)先存在的免疫力，則向?qū)ο骾.v.、i.m.、s.c.或i.p.施用本文中提供的任一種病毒轉(zhuǎn)移載體，如在任一實施例中，與本文中提供的靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑中的任一種伴隨地(例如同時地)施用，例如在任何一個實施例中。靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑通過相同的途徑施用。在另一些實施方案中，其中通過對象中針對病毒轉(zhuǎn)移載體的T細胞應(yīng)答的水平確定對象不具有針對病毒轉(zhuǎn)移載體的預(yù)先存在的免疫力，則在施用于對象病毒轉(zhuǎn)移載體的劑量而未伴隨施用靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑之后，將靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑和病毒轉(zhuǎn)移載體伴隨地(例如同時地)i.v.、i.m.、s.c.或i.p.施用于對象。在任一個實施方案中，向?qū)ο笫┯靡粋€或更多個重復(fù)劑量的病毒轉(zhuǎn)移載體。這些重復(fù)劑量可以與靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑伴隨施用。實施例46：病毒轉(zhuǎn)移載體在對象中的提高的轉(zhuǎn)基因表達(預(yù)示)例如在任一實施例中，根據(jù)提高轉(zhuǎn)基因表達的頻率和劑量(轉(zhuǎn)基因由病毒轉(zhuǎn)移載體遞送)，將本文中提供的任一種病毒轉(zhuǎn)移載體與本文中提供的任一種靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑伴隨地(例如同時)i.v.、i.m.、s.c.或i.p.施用，例如在任一實施例中。這可以通過測量在對象中的多種目的組織或系統(tǒng)中的轉(zhuǎn)基因蛋白濃度來確定。轉(zhuǎn)基因表達是否提高可以根據(jù)例如上述實施例中所述的方法來確定。根據(jù)病毒轉(zhuǎn)移載體和靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑的頻率和劑量進行施用，以使對象中的轉(zhuǎn)基因表達提高。對象可以是任一種本文中所述的對象，例如不具有對病毒轉(zhuǎn)移載體的預(yù)先存在的免疫力的對象，或者期望重復(fù)施用病毒轉(zhuǎn)移載體的對象。在任一個實施方案中，在另一個對象(例如測試對象)中測定實現(xiàn)轉(zhuǎn)基因表達提高的頻率和劑量。這也可以通過測量其他對象中的多種目的組織或系統(tǒng)中的轉(zhuǎn)基因蛋白濃度來確定，例如使用上述方法。如果在另一個對象中，通過測量的轉(zhuǎn)基因蛋白濃度所確定的頻率和劑量實現(xiàn)了提高的轉(zhuǎn)基因表達的，則根據(jù)所述頻率和劑量伴隨地(例如同時)施用病毒轉(zhuǎn)移載體和靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑可用于治療需要用病毒轉(zhuǎn)移載體治療的其他對象。實施例47：以低劑量重復(fù)、伴隨施用(預(yù)示)如本文中提供的，可以評價對象對本文中提供的任一種病毒轉(zhuǎn)移載體(例如任一個實施例的病毒轉(zhuǎn)移載體)的預(yù)先存在的免疫力水平?；蛘撸R床醫(yī)生可以評價對象并確定如果施用病毒轉(zhuǎn)移載體，如果病毒轉(zhuǎn)移載體重復(fù)施用于對象，則對象是否預(yù)期會發(fā)生抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答。可以基于病毒轉(zhuǎn)移載體將產(chǎn)生這樣的結(jié)果的可能性做出該確定，并且這可以基于其他對象(例如測試對象)中的這樣的結(jié)果、關(guān)于用于產(chǎn)生病毒轉(zhuǎn)移載體的病毒的信息、關(guān)于對象的信息等。一般來說，如果預(yù)期抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答是可能的結(jié)果，則臨床醫(yī)生根據(jù)所預(yù)期的結(jié)果選擇病毒轉(zhuǎn)移載體的劑量。然而，根據(jù)發(fā)明人的發(fā)現(xiàn)，臨床醫(yī)生現(xiàn)在可以選擇和使用比為對象本來選擇的更低劑量的病毒轉(zhuǎn)移載體。較低劑量的益處可包括與病毒轉(zhuǎn)移載體給藥相關(guān)的毒性降低，以及其他脫靶效應(yīng)的降低。因此，任一種本文中提供的對象可以重復(fù)、伴隨(例如同時)施用本文中提供的任一種病毒轉(zhuǎn)移載體和本文中提供的任一種靶向抗原呈遞細胞之免疫抑制劑，其中如果對象預(yù)期由于重復(fù)劑量的病毒轉(zhuǎn)移載體而發(fā)生抗病毒轉(zhuǎn)移載體免疫應(yīng)答，則將病毒轉(zhuǎn)移載體的劑量選擇為小于本來為對象選擇的病毒轉(zhuǎn)移載體的劑量。重復(fù)、伴隨施用的病毒轉(zhuǎn)移載體的每個劑量均可以小于本將被選擇的劑量。當(dāng)前第1頁1 2 3