1.一種利用腺病毒載體表達(dá)狂犬病病毒G蛋白和細(xì)菌鞭毛蛋白制備狂犬病活載體疫苗的方法，其特征在于包括如下步驟：
(1)制備目的基因：
設(shè)計(jì)引物，通過PCR的方法擴(kuò)增出狂犬病病毒(Rabies Virus，RV)的抗原蛋白G基因與細(xì)菌鞭毛蛋白FIjB或FIiC基因；
(2)構(gòu)建重組復(fù)制缺陷型腺病毒穿梭載體：
將步驟(1)擴(kuò)增的到的抗原蛋白G基因與細(xì)菌鞭毛蛋白FIjB或FIiC基因一同插入到復(fù)制缺陷型腺病毒穿梭載體特異性啟動(dòng)子和終止子之間，檢測(cè)抗原蛋白G基因以及FIjB或FIiC基因是否已經(jīng)整合到腺病毒穿梭載體中，構(gòu)建得到含有G-FIjB或G-FIiC的重組復(fù)制缺陷型腺病毒穿梭載體，命名為PAdTrack-CMV/G-FIjB或PAdTrack-CMV/G-FIiC；
(3)獲得復(fù)制缺陷型腺病毒質(zhì)粒：
將獲得的重組復(fù)制缺陷型腺病毒穿梭載體PAdTrack-CMV/G-FIjB或PAdTrack-CMV/G-FIiC與腺病毒骨架載體PAdEasy-1通過在大腸桿菌中進(jìn)行質(zhì)粒間同源重組從而得到重組腺病毒質(zhì)粒；
(4)用重組腺病毒質(zhì)粒產(chǎn)生基因組結(jié)構(gòu)均一的重組腺病毒，包括以下操作：
1)用Pac I酶切步驟(3)得到的重組腺病毒質(zhì)粒，
2)轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，
3)接種293細(xì)胞，
4)獲得基因組結(jié)構(gòu)均一的重組腺病毒，收集病毒感染的病變細(xì)胞，連同上清凍存，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是于步驟(1)中用于擴(kuò)增抗原蛋白基因G和細(xì)菌鞭毛蛋白FIjB或FIiC基因的擴(kuò)增引物為：
GF：5’GCAGATCTGCCACCATGGTTCCTCAAGCTCTTTTG 3’
GR：5’GCGTCGACTCACAGTCTGATCTCACC 3’
FIjBF：5’ATTGTCGACGCCACCATGGCACAAGTAATCAACACT 3’
FIjBR：5’GCTCTAGATTAACGTAACAGAGACAGC 3’
FIiCF：5’ATTGTCGACGCCACCATGGCACAAGTCATTAATACA…3’
FIiCR：5’GCAAGCTTTTAACGCAGTAAAGAGAG 3’
其中，ATG為起始密碼子；狂犬病病毒G基因以狂犬病毒aG毒株為模板使用 引物對(duì)GF/GR進(jìn)行擴(kuò)增；細(xì)菌鞭毛蛋白FIjB或FIiC基因分別以鼠傷寒沙門氏菌的鞭毛蛋白基因?yàn)槟０迨褂靡飳?duì)FIjBF/FIjBR或FIiCF/FIiCR進(jìn)行擴(kuò)增。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于在步驟(2)中，所述的腺病毒載體啟動(dòng)子為CMV；終止子為PolyA；所述的重組復(fù)制缺陷型腺病毒穿梭載體的構(gòu)建包括以下操作：
1)將擴(kuò)增得到的目的基因G經(jīng)Bgl Ⅱ、Sal Ⅰ雙酶切，形成帶有粘性末端的目的基因片段；
2)同時(shí)，將腺病毒穿梭載體PAdTrack-CMV經(jīng)Bgl Ⅱ、Sal Ⅰ雙酶切，得到線性化的載體；
3)使用T4DNA連接酶對(duì)上述產(chǎn)物進(jìn)行粘端連接；
4)按常規(guī)方法將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸埃希氏菌，在含卡那抗性的瓊脂平板上篩選，挑選克隆后，提取質(zhì)粒；
5)采用酶切、PCR擴(kuò)增方法鑒定，得到陽性重組質(zhì)粒，命名為PAdTrack-CMV/G；
6)將回收得到的目的基因FIjB經(jīng)Sal Ⅰ、Xba Ⅰ雙酶切，目的基因FIiC經(jīng)Sal Ⅰ、HindⅢ雙酶切，形成帶有粘性末端的目的基因片段；
7)同時(shí)，將陽性重組質(zhì)粒PAdTrack-CMV/G分別經(jīng)Sal Ⅰ、Xba Ⅰ雙酶切或Sal Ⅰ、HindⅢ雙酶切，得到線性化的載體；
8)使用T4DNA連接酶對(duì)步驟(6)和(7)的產(chǎn)物進(jìn)行粘端連接；按常規(guī)方法將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸埃希氏菌JM109，在含卡那抗性的瓊脂平板上篩選，挑選克隆后，提取質(zhì)粒；采用酶切、PCR擴(kuò)增方法鑒定，得到陽性重組質(zhì)粒，命名為PAdTrack-CMV/G-FIjB或PAdTrack-CMV/G-FIiC。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于在步驟(3)中，獲得復(fù)制缺陷型腺病毒質(zhì)粒的過程包括以下操作：
1)將重組復(fù)制缺陷型腺病毒穿梭載體PAdTrack-CMV/G-FIjB或PAdTrack-CMV/G-FIiC用Pme I單酶切以線性化；
2)取PAdEasy-1與步驟1)得到的線性化后的重組復(fù)制缺陷型腺病毒穿梭載體混合，高壓電轉(zhuǎn)化大腸桿菌BJ5183；
3)電轉(zhuǎn)后將細(xì)胞在培養(yǎng)液中復(fù)蘇，取細(xì)胞涂入含卡那霉素的培養(yǎng)板中，培養(yǎng)；
4)挑選卡那霉素抗性克隆，小量提取質(zhì)粒DNA，用0.8％瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳遷移率分析，并進(jìn)行限制性內(nèi)切酶圖譜分析；
5)將所得的重組腺病毒質(zhì)粒高壓電轉(zhuǎn)化入宿主菌，在此宿主菌中可獲得大量高 質(zhì)量的質(zhì)粒，挑取目的克隆，優(yōu)選的，所述的宿主菌為DH10B。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于在步驟(4)中，用重組腺病毒質(zhì)粒產(chǎn)生基因組結(jié)構(gòu)均一的重組腺病毒的各操作的具體做法為：
1)取步驟(3)得到的重組腺病毒質(zhì)粒，用Pac I酶切，完全消化以切去包括Ori和Kan抗性基因在內(nèi)的質(zhì)粒構(gòu)件，并暴露其反轉(zhuǎn)末端重復(fù)序列(ITR)；
2)脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，在組織培養(yǎng)皿中接種293細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染；
3)取病毒上清接種293細(xì)胞，以含2％小牛血清的完全DMEM培養(yǎng)液于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，逐日觀察細(xì)胞病變，到293細(xì)胞完全病變；
4)收集病毒感染的病變細(xì)胞，檢測(cè)抗原蛋白G-FIjB和G-FIiC基因是否獲得表達(dá)，最后連同上清液凍存。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于步驟2)中，所述的脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染包括以下操作步驟：
①稀釋Pac I酶切線性化的重組腺病毒質(zhì)粒至DMEM培養(yǎng)液中；
②然后將脂質(zhì)體懸液加至DMEM培養(yǎng)液中，充分將二者混勻，室溫下溫育；
③在此期間吸棄細(xì)胞原培養(yǎng)液，用DMEM培養(yǎng)液洗細(xì)胞一次；
④往每平皿中加DNA/脂質(zhì)體復(fù)合物，在5％CO2培養(yǎng)箱中溫育后吸棄含DNA/脂質(zhì)體復(fù)合物的培養(yǎng)液，
⑤補(bǔ)加含10％小牛血清的DMEM完全培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染后收集細(xì)胞，反復(fù)凍融。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于步驟4)中通過觀測(cè)綠色熒光蛋白表達(dá)的辦法，包括利用倒置顯微鏡觀測(cè)細(xì)胞病變和熒光顯微鏡觀測(cè)報(bào)告基因綠色熒光蛋白的表達(dá)來確定抗原蛋白G-FIjB和G-FIiC基因是否獲得表達(dá)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(2)中通過采用PCR和限制性內(nèi)切酶鑒定，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析檢測(cè)的方法來確定抗原蛋白G基因以及FIjB或FIiC基因是否已經(jīng)整合到腺病毒載體中。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的方法制備得到的含有抗原蛋白G基因與細(xì)菌鞭毛蛋白FIjB或FIiC基因的狂犬病活載體疫苗。
10.權(quán)利要求9所述的狂犬病活載體疫苗在制備預(yù)防或治療狂犬病的藥物中的用途。