本發(fā)明涉及門鳥氨酸在制備防治脂肪肝藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：肝臟是人體內(nèi)最大的消化腺，負(fù)責(zé)體內(nèi)物質(zhì)能量代謝，維持著人類日常生命活動。肝臟病變，包括病毒性肝炎，肝硬化，脂肪肝，肝癌等，是一種常見的危害性極大的疾病，應(yīng)以積極預(yù)防為主。肝病種類按照發(fā)病機(jī)理可以分為病毒性肝病和非病毒性肝?。悍遣《拘愿尾≈饕ㄒ韵聨追N：(1)酒精性肝病，是由于長期大量飲酒(嗜酒)所致的肝臟損傷性疾??；(2)藥物或毒物性肝病，是由化學(xué)毒物(如磷、砷、四氯化碳等)、藥物或生物毒素所引起的肝炎或所致的肝臟病變；(3)非酒精性脂肪肝(nafld)，是指由于糖尿病、血脂肪過高、體重過重等各種原因引起的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積過多的肝臟病變，其包括單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎及其相關(guān)肝硬化，隨著肥胖及其相關(guān)代謝綜合征全球化的流行趨勢，非酒精性脂肪肝現(xiàn)已成為歐美等發(fā)達(dá)國家和我國富裕地區(qū)慢性肝病的重要病因，非酒精性脂肪肝除可直接導(dǎo)致失代償期肝硬化、肝細(xì)胞癌外，還可影響其他慢性肝病的進(jìn)展，并參與2型糖尿病和動脈粥樣硬化的發(fā)病。nafld的發(fā)病機(jī)制至今尚未明確，主要有以下兩種假說：①外周胰島素抵抗增加脂質(zhì)的降解，促進(jìn)游離脂肪酸(ffa)轉(zhuǎn)運到肝臟，增加脂肪酸的β-氧化，因此導(dǎo)致氧化應(yīng)激；②肝細(xì)胞內(nèi)的異常導(dǎo)致肝細(xì)胞對來自氧化應(yīng)激的損傷更易感。nafld的治療方法為減輕體重和藥物治療，常用治療藥物有(1)胰島素增敏劑，如噻唑烷二酮類藥物、二甲雙胍等；(2)抗氧化劑，如維生素e、水飛薊素等；(3)降脂藥，如非諾貝特，hmgcoa還原酶抑制劑等；(3)肝細(xì)胞保護(hù)藥，如多烯磷脂酰膽堿、硫普羅寧等；(4)血管緊張素ⅱ受體拮抗劑，如替米沙坦；(5)減肥藥物，如胰高血糖素樣肽-1(glp-1)類似物。胰島素抵抗是nafld患者的一個基本特征，噻唑烷二酮類藥物是一種強效的胰島素增敏劑，其可以增加脂肪組織對胰島素的敏感性，初步研究發(fā)現(xiàn)噻唑烷二酮類藥物能改善nafld患者胰島素抵抗及抑制肝臟炎癥反應(yīng)作用，減輕肝臟脂肪含量，改善肝功能，其機(jī)制可能與改善胰島索抵抗、調(diào)節(jié)細(xì)胞因子等有關(guān)，該類藥物已成為治療nafld極具潛力的一類藥物。法尼酯x受體(fxr)是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，研究表明，fxr的活化可增強胰島素信號傳導(dǎo)的敏感性，減少糖原異生，減少肝內(nèi)脂肪堆積，緩解脂肪肝導(dǎo)致的肝纖維化，在fxr缺失小鼠模型中，檢測到血漿和肝臟的膽固醇及甘油三酯的水平增加，在fxr缺失小鼠9和 12月齡時，有明顯肝損傷和肝細(xì)胞凋亡，在15月齡時則出現(xiàn)肝腺瘤及肝細(xì)胞癌；fxr的配體或激動劑可通過激活fxr及fxr靶基因shp，抑制肝星狀細(xì)胞表達(dá)ecm，并增加ecm的清除，從而減少ecm沉積，最后發(fā)揮治療肝纖維化作用。門冬氨酸鳥氨酸(門鳥氨酸)是l-鳥氨酸和l-門冬氨酸反應(yīng)形成的一種穩(wěn)定化合物，具有增加促進(jìn)肝細(xì)胞代謝、參與肝細(xì)胞的修復(fù)等作用，臨床上用于因急、慢性肝病(如各型肝炎、肝硬化、脂肪肝、肝炎后綜合癥)引發(fā)的血氨升高及肝性腦病，如伴發(fā)或繼發(fā)于肝臟解毒功能受損(如肝硬化)的潛在性或發(fā)作期肝性腦病，尤其適用于治療肝昏迷早期或肝昏迷期的意識模糊狀態(tài)。技術(shù)實現(xiàn)要素：本申請人實驗研究發(fā)現(xiàn)門鳥氨酸和一些活性化合物聯(lián)合用藥對脂肪堆積過多的肝臟病變具有良好的治療作用。本發(fā)明提供了一種藥物組合物在制備防治脂肪肝藥物中的用途，其特征在于，所述組合物包含：(a)門鳥氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽，或是門冬氨酸鳥氨酸組合物，或是精氨酸的谷氨酸鹽(l-精氨酸l-谷氨酸)，其中所述的門冬氨酸鳥氨酸組合物由鳥氨酸或其鹽和門冬氨酸或其鹽組成的，其中鳥氨酸或其鹽和門冬氨酸或其鹽的摩爾比為10-1：1-10，或是8-1：1-8，或是5-1：1-5，或是3-1：1-3，或是2-1：1-2，優(yōu)選1：1。(b)選自下列至少一種活性成分或其可藥用鹽和可藥用載體：(1)維生素e；(2)法尼醇x受體的配體或法尼醇x受體激動劑；(3)噻唑烷二酮類藥物；其中所述法尼醇x受體的配體或法尼醇x受體激動劑選自下列化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物：熊去氧膽酸、熊去氧膽酸鈉、熊去氧膽酸三水鎂鹽、奧貝膽酸、?；切苋パ跄懰帷⑴；切苋パ跄懰徕c、gw4064、fexaramine、turofexorateisopropyl(xl335)、px-104或px20606，優(yōu)選熊去氧膽酸、奧貝膽酸、?；切苋パ跄懰?。其中所述噻唑烷二酮類藥物選自(s)-((3，4-二氫-2-(苯基-甲基)-2h-1-苯并吡喃-6-基)甲基-噻唑烷-2，4-二酮(恩格列酮)、5{[4-(3-(5-甲基-2-苯基-4-噁唑基)-1-氧代丙基)-苯基]-甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(達(dá)格列酮)、5-{[4-((1-甲基-環(huán)己基)甲氧基)-苯基]甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(環(huán)格列酮)、5-{[4-(2-(1-吲哚基)乙氧基)苯基]甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(drf2189)、5-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-4-噁唑基)-乙氧基]芐基}-噻唑烷-2，4-二酮、5-(2-萘基磺?；?-噻唑烷-2，4-二酮(ay-31637)、雙{4-[(2，4-二氧代-5-噻唑烷基)甲基]苯基}甲烷、5-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-4-噁唑基)-2-羥基乙氧基]芐基}-噻唑烷-2，4-二酮(ad-5075)、5-[4-(1-苯基-1-環(huán)丙烷羰基氨基)-芐基]-噻唑烷-2，4-二酮(dn-108)、5-{[4-(2-(2，3-二氫吲哚-1-基)乙氧基)苯基] 甲基}-噻唑烷-2，4-二酮、5-[3-(4-氯-苯基)-2-丙炔基]-5-苯基磺?；?-噻唑烷-2，4-二酮、5-[3-(4-氯苯基)]-2-丙炔基]-5-(4-氟苯基-磺酰基)噻唑烷-2，4-二酮、5-{[4-(2-(甲基-2-吡啶基-氨基)-乙氧基)苯基]甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(羅格列酮)、5-{[4-(2-(5-乙基-2-吡啶基)乙氧基)苯基]甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(吡格列酮)、5-{[4-((3，4-二氫-6-羥基-2，5，7，8-四甲基-2h-1-苯并吡喃-2-基)甲氧基)-苯基]-甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(曲格列酮)、5-[6-(2-氟-芐氧基)萘-2-基甲基]-噻唑烷-2，4-二酮(mcc555)、5-{[2-(2-萘基)-苯并噁唑-5-基]甲基}-噻唑烷-2，4-二酮和5-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基-甲基)-2-甲氧基-n-(4-三氟甲基-芐基)苯甲酰胺(krp297)，優(yōu)選吡格列酮。此外，本發(fā)明的組成物可進(jìn)一步包括諸如維生素a、維生素e、維生素b1、維生素b2、維生素b3、維生素b6、維生素b12、葉酸、維生素c、維生素d3中的至少一種維生素；諸如銅、鈣、鐵、鎂、鉀、鋅等礦物質(zhì)；以及適量的其他安全食物添加劑。進(jìn)一步地，本發(fā)明所提供的藥物組合物中門鳥氨酸和奧貝膽酸的質(zhì)量比為50～1000：1，或是800：1，或是700：1，或是600：1，或是500：1，或是400：1，或是300：1，或是150：1，或是100：1，或是50：1，優(yōu)選600-1000:1，最優(yōu)選600：1；進(jìn)一步地，本發(fā)明所提供的藥物組合物中門鳥氨酸和以吡格列酮為代表的噻唑烷二酮類藥物的質(zhì)量比為60～300：1，或是200：1，或是160：1，或是120：1，或是80：1，或是60：1，優(yōu)選120-200:1，最優(yōu)選200：1；進(jìn)一步地，本發(fā)明所提供的藥物組合物中，所述門冬氨酸鳥氨酸(門鳥氨酸)或其藥學(xué)上可接受的鹽用量為每天1mg/kg-50mg/kg，或是每天不超過45mg/kg，或是每天不超過40mg/kg，或是每天不超過35mg/kg，或是每天不超過30mg/kg，或是每天不超過25mg/kg，或是每天不超過20mg/kg，或是每天不超過15mg/kg，或是每天不超過10mg/kg，或是每天不超過5mg/kg，或是每天不超過1mg/kg，優(yōu)選每天為20-40mg/kg。所述法尼醇x受體的配體含量為每天不超過20mg/kg，優(yōu)選每天不超過10mg/kg；其中熊去氧膽酸含量為每天不超過15mg/kg，或是每天不超過110mg/kg，或是每天不超過5mg/kg，優(yōu)選每天為6-10mg/kg；奧貝膽酸含量為每天不超過0.4mg/kg，或是每天不超過0.3mg/kg，或是每天不超過0.2mg/kg，或是每天不超過0.1mg/kg，優(yōu)選每天為0.2mg/kg；?；切苋パ跄懰岷繛槊刻觳怀^10mg/kg，或是每天不超過8mg/kg，或是每天不超過6mg/kg，或是每天不超過4mg/kg，或是每天不超過2mg/kg，優(yōu)選每天為3-5mg/kg；所述噻唑烷二酮類藥物的用量為每天0.05-0.5mg/kg，其中：所述羅格列酮含量為每天不超過0.15mg/kg，或是每天不超過0.13mg/kg，或是每天不超過0.1mg/kg，或是每天不超過0.08mg/kg，或是每天不超過0.06mg/kg，或是每天不超過0.05mg/kg，優(yōu)選每天為 0.06-0.08mg/kg；吡格列酮含量為每天不超過0.5mg/kg，或是每天不超過0.4mg/kg，或是每天不超過0.3mg/kg，或是每天不超過0.2mg/kg，或是每天不超過0.1mg/kg，優(yōu)選每天為0.2-0.25mg/kg；本發(fā)明提供了所述藥物組合物和藥學(xué)上可接受的載體在制備防治脂肪肝藥物中的用途，所述脂肪肝包括脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝纖維化、非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝硬化、非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝硬化及肝細(xì)胞癌、肝纖維化、肝硬化以及繼發(fā)性脂肪肝疾病。本發(fā)明的組合物可以制備為任何形式，例如顆粒、粉末、片劑、包衣片劑、膠囊、藥丸、糖漿、滴劑、溶液、混懸劑和乳劑，或者活性成分的緩釋制劑。本發(fā)明的組成物可進(jìn)一步包括一種或多種醫(yī)藥或生理上可接受的載體，這些載體將適當(dāng)配制以便于給藥。例如，醫(yī)藥或生理上可接受的載體可以是水、林格氏液、緩沖鹽水、葡萄糖、麥芽糖糊精、甘油、醇、蜂蜜、甘露醇、山梨醇、糊精、乳糖、焦糖、明膠、硫酸鈣、硬脂酸鎂、滑石粉、高嶺土、吐溫、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性劑、環(huán)糊精及其衍生物、磷脂類、磷酸鹽類、淀粉類及其衍生物、硅衍生物、纖維素類及其衍生物、吡咯烷酮類、聚乙二醇類、丙烯酸樹脂類、酞酸酯類、丙烯酸共聚物、苯三酸酯類中的一種或幾種。本發(fā)明的組成物還可以包括醫(yī)藥或生理上可接受的添加劑，例如稀釋劑、分散劑、表面活性劑、溶劑、崩解劑、甘味劑、粘合劑、涂層劑、發(fā)泡劑、滑潤劑、助流劑或芳香劑。本發(fā)明的組成物可以根據(jù)傳統(tǒng)方法來通過各種途徑給藥，包括口服、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、胸腔內(nèi)、透皮、鼻腔、吸入、直腸、眼部和皮下導(dǎo)入。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明提供了門鳥氨酸與奧貝膽酸或噻唑烷二酮類藥物組合后用于制備防治脂肪肝的用途，藥物組合后門鳥氨酸使用劑量比單獨給予門鳥氨酸要低很多，而且藥物組合后比單方用藥效果更優(yōu)。臨床應(yīng)用中單獨給予門鳥氨酸，用藥劑量較大，使得門鳥氨酸臨床上只能制備有限的劑型，如顆粒劑，本發(fā)明通過藥物組合降低了門鳥氨酸的用藥劑量，為研制更多類型的門鳥氨酸制劑提供了可能；同時本發(fā)明藥物組合中奧貝膽酸或噻唑烷二酮類藥物用量很少。藥物組合后，奧貝膽酸或噻唑烷二酮類藥物使用劑量也比臨床上要低很多，由于其用藥劑量降低，也可一定程度降低奧貝膽酸或噻唑烷二酮類藥物副作用。具體實施方式實施例1：對高脂飲食誘導(dǎo)肥胖小鼠的肝臟脂質(zhì)和甘油三酯的影響將78只6周大c57bl/6小鼠分成兩組，6只給予含10％脂肪的正常飲食(正常對照組)，72只給予含60％脂肪的高脂肪飲食，飼養(yǎng)10周，高脂飼養(yǎng)小鼠再分成12組：模型組，每日灌胃0.5％的cmc-na溶液；陽性對照組，每日給予門鳥氨酸1g/kg；藥物組合1組，每日給予門鳥氨酸0.6g/kg及奧貝膽酸4mg/kg；藥物組合2組，每日給予門鳥氨酸0.6g/kg及奧貝膽酸1mg/kg；藥物組合3組，每日給予門鳥氨酸0.6g/kg及奧貝膽酸0.6mg/kg；藥物組合4組，每日給予門鳥氨酸0.6g/kg及吡格列酮5mg/kg；藥物組合5組，每日給予門鳥氨酸0.6g/kg及吡格列酮3mg/kg；藥物組合6組，每日給予門鳥氨酸0.6g/kg及吡格列酮2mg/kg；以上各組動物給予鹽水溶液或藥物2周后，處死動物，取出部分肝組織(左葉)，使組織在2∶1氯仿/甲醇溶液(10ml)中勻漿，并將其過濾到15ml玻璃離心管中。再添加5ml的2∶1氯仿/甲醇溶液，然后添加2.5ml的0.9％nacl。徹底混合后，在10℃下，以2,000g離心提取物5分鐘，棄去水層后，在氮氣下干燥有機(jī)層，并通過稱重來評估總脂質(zhì)含量，elisa試劑盒分析肝組織中積聚的甘油三酯的量，檢測結(jié)果示于表1中。表1：受試物對肥胖小鼠肝脂質(zhì)含量和甘油三酯的影響由結(jié)果中可看出模型組小鼠肝臟脂肪明顯增多，而不同組合比例的藥物聯(lián)用給予模型小鼠后，小鼠肝臟脂肪明顯減少，這說明本發(fā)明的藥物組合比單方給藥效果更優(yōu)，而且降低組合藥物的劑量仍然能達(dá)到相同的效果，且本發(fā)明藥物組合中奧貝膽酸的用量最少可達(dá)到奧貝膽酸：門鳥氨酸為1：1000，羅格列酮的用量最少可達(dá)到羅格列酮：門鳥氨酸為1：300，除此，本發(fā)明藥物組合相比單方給藥劑量低。實施例2：對高脂飲食誘導(dǎo)肥胖小鼠的肝功能的影響動物分組和處理同實施例1，各組動物處死前，取血離心后收集血清樣本，分別用alt檢測試劑盒和ast檢測試劑盒測量各組小鼠血清中的轉(zhuǎn)氨酶。組別alt(u/l)ast(u/l)正常對照30.5±24.245.8±8.5模型組254.1±32.3437.1±36.6陽性對照166.8±26.2353.5±31.2藥物組合1137.3±18.9335.2±24.9藥物組合2143.2±23.8325.3±15.1藥物組合3134.6±16.3341.2±13.6藥物組合4138.7±20.3328.4±18.2藥物組合5128.5±14.7334.3±12.1藥物組合6140.4±12.8340.5±24.3表2：受試物對肥胖小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶的影響由結(jié)果中可看出模型組小鼠血清alt、ast含量與正常對照組相比大幅度升高，而給予了不同藥物組合比例的小鼠血清alt、ast含量與模型組相比明顯下降，結(jié)果說明本發(fā)明中門鳥氨酸與相關(guān)活性藥物聯(lián)合在對大鼠脂肪肝的治療能產(chǎn)生較好的效果，而且降低組合藥物的劑量仍然能達(dá)到相同的效果，除此，本發(fā)明藥物組合相比單方給藥劑量低。實施例3：制備門鳥氨酸組合物顆粒劑取等質(zhì)量的門鳥氨酸和奧貝膽酸，加入處方量的甘露醇、阿斯巴甜、枸櫞酸及烯吡咯烷酮-k30水溶液，攪拌均勻，16目制粒，干燥，14目整粒，即得。當(dāng)前第1頁12