控制和治療人體脂肪肝的藥物組合物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于傳統(tǒng)醫(yī)藥領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及甘草的精制提取物及其制劑和 應(yīng)用，特別適合于控制人體血脂和治療脂肪肝。
【背景技術(shù)】
[0002] 本發(fā)明人致力于甘草等中藥材的研究，在先開發(fā)了醇溶性且非水溶性的甘草提取 物，并將其與抗腫瘤藥物或降糖降脂藥物(如，枸杞)聯(lián)合施用，用于抗腫瘤或降糖降脂，如 可參見中國專利第201180007632號(hào)和第201280012972號(hào)。
[0003] 然而，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，由于甘草的品種不同，產(chǎn)地來源不同，各生產(chǎn)批次更是差別 巨大，醇溶性且非水溶性的甘草提取物的質(zhì)量非常不穩(wěn)定，所以在其現(xiàn)有技術(shù)的公開中通 常只能采用聯(lián)合施用的形式。
[0004] 本發(fā)明人并沒有自滿于該提取物聯(lián)合應(yīng)用后已經(jīng)能抗腫瘤或降糖降脂，而是進(jìn)一 步深耕，令人意外地開發(fā)了精制醇溶性且非水溶性的甘草提取物的方法，所得產(chǎn)物不受甘 草原料的多樣性的影響，能夠獲得檢測(cè)特征穩(wěn)定的甘草的精制提取物，盡管在一些適應(yīng)癥 方面療效有所倒退，但是在控制人體血脂和治療脂肪肝等方面卻療效確切并有所提高，可 以單獨(dú)給藥，而不必限于聯(lián)合施用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供新的甘草提取物，其是在現(xiàn)有的醇溶性且非水溶性的甘草 提取物基礎(chǔ)上精制而得的，質(zhì)量穩(wěn)定，療效確切，適合用于控制人體血脂和治療脂肪肝等。 另外，本發(fā)明的目的還在于提供基于該甘草提取物的藥物、制備方法和應(yīng)用等。
[0006] 具體而言，在第一方面，本發(fā)明提供了甘草的精制提取物，其由如下方法制備而 成：
[0007] (1)用水浸提甘草后，保留固體部分；
[0008] (2)用濃度大于85% (V/V)的醇浸提步驟（1)得到的固體部分，保留液體部分并干 燥；
[0009] (3)將步驟(2)得到的干燥產(chǎn)物用濃度為50~57% (V/V)的醇溶解后上樣于大孔吸 附樹脂層析柱，收集用濃度為59~70% (V/V)的醇洗脫的洗脫液并干燥;和，（4)將步驟(3) 得到的干燥產(chǎn)物用濃度為30~60% (V/V)的醇溶解后上樣于聚酰胺樹脂層析柱，用濃度為 30~60 % (V/V)的醇洗脫，收集洗脫液并任選干燥。
[0010] 在本文中，甘草(Radix Glycyrrhizae)可以各種來源的甘草，例如是烏拉爾甘草 或脹果甘草或它們的混合物?，F(xiàn)有技術(shù)相當(dāng)于執(zhí)行上述方法的步驟（1)和(2)，得到的甘草 提取物受到甘草的來源影響大，然而，本發(fā)明的方法克服該缺陷。因此，優(yōu)選本發(fā)明第一方 面的甘草精制提取物的HPLC檢測(cè)圖譜具有如圖1所示的三個(gè)特征峰。更優(yōu)選這三個(gè)特征峰 的比例也是穩(wěn)定的，例如，如圖1所示的這三個(gè)特征峰從左至右的峰面積之比為7~9:4~6: 150:170,在 8:5:160 左右。
[0011] 優(yōu)選在本發(fā)明第一方面的甘草精制提取物中，醇是甲醇和/或乙醇，優(yōu)選是乙醇。
[0012] 也優(yōu)選在本發(fā)明第一方面的甘草精制提取物中，步驟(2)中，濃度大于90%(V/V)， 優(yōu)選大于93% (V/V)，如95% (V/V)。
[0013]還優(yōu)選在本發(fā)明第一方面的甘草精制提取物中，步驟(3)中，溶解的醇的濃度為53 ~56% (V/V)，如55% (V/V);和/或，洗脫的醇得濃度為60~62% (V/V)，如60% (V/V)。
[0014] 另外優(yōu)選在本發(fā)明第一方面的甘草精制提取物中，步驟（4)中，濃度為40~50% (V/V)，優(yōu)選為43~48% (V/V)，如45% (V/V)。
[0015] 在第二方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明第一方面的甘草精制提取物的制備方法，其包 括：
[0016] (1)用水浸提甘草后，保留固體部分；
[0017] (2)用濃度大于85% (V/V)的醇浸提步驟（1)得到的固體部分，保留液體部分并干 燥；
[0018] (3)將步驟(2)得到的干燥產(chǎn)物用濃度為50~57% (V/V)的醇溶解后上樣于大孔吸 附樹脂層析柱，收集用濃度為59~70%(V/V)的醇洗脫的洗脫液并干燥;和，（4)將步驟(3) 得到的干燥產(chǎn)物用濃度為30~60% (V/V)的醇溶解后上樣于聚酰胺樹脂層析柱，用濃度為 30~60 % (V/V)的醇洗脫，收集洗脫液并任選干燥。
[0019] 優(yōu)選在本發(fā)明第二方面的制備方法中，醇是甲醇和/或乙醇，優(yōu)選是乙醇。
[0020] 也優(yōu)選在本發(fā)明第二方面的制備方法中，步驟(2)中，濃度大于90% (V/V)，優(yōu)選大 于 93%(V/V)，如 95%(V/V)。
[0021] 還優(yōu)選在本發(fā)明第二方面的制備方法中，步驟(3)中，溶解的醇的濃度為53~56% (V/V)，如55% (V/V);和/或，洗脫的醇得濃度為60~62% (V/V)，如60% (V/V)。
[0022]另外優(yōu)選在本發(fā)明第二方面的制備方法中，步驟(4)中，濃度為40~50 % (V/V)，優(yōu) 選為43~48% (V/V)，如45% (V/V)。
[0023] 在第三方面，本發(fā)明提供了藥物制劑，其包括本發(fā)明第一方面的甘草精制提取物 和藥學(xué)上可接受的輔料。在本文中，術(shù)語"藥學(xué)上可接受的輔料"包括藥學(xué)上可接受的載體、 賦形劑、稀釋劑等，它們與藥物活性成分相容。運(yùn)用藥學(xué)上可接受的輔料制備藥物制劑對(duì)本 領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是公知的。本發(fā)明的藥物制劑包含本發(fā)明第一方面的組合物作為活 性成分，將該組合物和藥學(xué)上可接受的輔劑（如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的載體、賦形 劑、稀釋劑和調(diào)味劑等）組合在一起，配制成各種制劑，優(yōu)選為固體制劑和液體制劑，如片 劑、丸劑、膠囊(包括持續(xù)釋放或延遲釋釋放形式）、粉劑(如凍干粉劑）、混懸劑、顆粒劑、酊 劑、糖漿劑、乳液劑、懸浮液、針劑等劑型以及各種緩釋劑型，從而適合各種給藥形式，例如 口服、非腸道注射、粘膜、肌肉、靜脈內(nèi)、皮下、眼內(nèi)、皮內(nèi)或經(jīng)過皮膚等的給藥形式，最優(yōu)選 是口服。在本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】中，本發(fā)明第三方面的藥物制劑是液體口服制劑。
[0024] 本發(fā)明第一方面的甘草精制提取物可以單獨(dú)應(yīng)用，也可以聯(lián)合其他藥物應(yīng)用。根 據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，枸杞對(duì)降糖降脂也有幫助，因此本發(fā)明第三方面的藥物制劑還可以包括枸杞。 [0025]在第四方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明第一方面的甘草精制提取物在制備用于預(yù)防或 治療脂肪性肝損傷的藥物中的應(yīng)用。在本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】中，脂肪性肝損傷是非酒精 性的脂肪性肝損傷。
[0026]在第五方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明第一方面的甘草精制提取物在制備用于預(yù)防 或治療肥胖或降低血脂水平的藥物中的應(yīng)用。在本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】中，肥胖是高脂飲 食導(dǎo)致的肥胖，和/或，血脂水平是高脂飲食導(dǎo)致的血脂水平。
[0027] 在第六方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明第一方面的甘草精制提取物在制備用于降低炎 癥因子水平的藥物中的應(yīng)用。在本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】中，炎癥因子水平是高脂飲食導(dǎo)致 的炎癥因子水平。所述炎癥因子包括TNF-α、IL-6和/或MCP-I。
[0028] 本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明的甘草精制提取物能夠有效地控制人體血脂和/ 或體重，并能改善脂肪肝癥狀;另外，本發(fā)明的甘草精制提取物的質(zhì)量穩(wěn)定，品質(zhì)特征幾乎 不受甘草來源的影響。
[0029] 本發(fā)明引用了現(xiàn)有公開文獻(xiàn)，這些文獻(xiàn)是為了更清楚地描述本發(fā)明，它們的全文 內(nèi)容均納入本文之中，就好像它們的全文已經(jīng)在本文中重復(fù)敘述過一樣。
[0030] 為了便于理解，以下將通過具體的附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行描述。需要特別指 出的是，這些描述僅僅是示例性的描述，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍的限制。利用本發(fā)明實(shí)施例 所述的方法，也可以獲得本發(fā)明其他的技術(shù)方案。依據(jù)本說明書的論述，本發(fā)明的許多變 化、改變對(duì)所屬領(lǐng)域技術(shù)人員來說都是顯而易見了。
【附圖說明】
[0031] 圖1顯示了本發(fā)明的甘草精制提取物的HPLC檢測(cè)結(jié)果。
[0032]圖2顯示了各藥物對(duì)非酒精性脂肪性肝損傷模型大鼠體重的試驗(yàn)結(jié)果，其中，###p 〈0.001，相對(duì)于正常對(duì)照組;*p〈0.05，相對(duì)于模型組。
[0033]圖3顯示了各藥物對(duì)非酒精性脂肪性肝損傷模型大鼠肝臟指數(shù)的試驗(yàn)結(jié)果。圖4顯 示了各藥物對(duì)非酒精性脂肪性肝損傷模型大鼠血清游離脂肪酸的試驗(yàn)結(jié)果，其中，###P〈 0.001，相對(duì)于正常對(duì)照組;*P〈〇. 05，相對(duì)于模型組。
[0034] 圖5、圖6分別顯示了各藥物對(duì)非酒精性脂肪性肝損傷模型大鼠肝功能（轉(zhuǎn)氨酶 △1^、451')的試驗(yàn)結(jié)果，其中，###?〈0.001，相對(duì)于正常對(duì)照組；*?〈0.05，**?〈0.01，***?〈 0.001，相對(duì)于模型組。
【具體實(shí)施方式】
[0035] 具體實(shí)施例中的植物原料和化學(xué)試劑均為從市場(chǎng)渠道購買的常規(guī)材料，其中藥理 實(shí)驗(yàn)遵循了 CFDA的相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)指引。
[0036]實(shí)施例1甘草精提取物的制備
[0037] 取甘草50g，加入水250mL，于85 °C浸泡7小時(shí)，冷卻至室溫，濾紙過濾，棄去濾液;濾 渣再加入水250mL，于85 °C浸泡7小時(shí)，冷卻至室溫，濾紙過濾，棄去濾液;然后，濾渣再加入 水250mL，于85 °C浸泡7小時(shí)，冷卻至室溫，濾紙過濾，棄去濾液。
[0038] 然后，濾渣加入95 % (v/v)的乙醇200mL，85°C回流提取2小時(shí)，冷卻置室溫，濾紙過 濾，保留濾液;濾渣再加入95% (v/v)的乙醇200mL，85°C回流提取2小時(shí)，冷卻置室溫，濾紙 過濾，保留濾液;然后，濾渣再加入95 % (v/v)的乙醇200mL，85°C回流提取2小時(shí)，冷卻置室 溫，濾紙過濾，保留濾液。合并三次濾液，60°C減壓濃縮后于烘箱中60°C干燥，得甘草粗提取 物 A(編號(hào) Z018)4.023g。
[0039] 將4.023g甘草粗提取物A用55%(v/v)的乙醇70mL在超聲條件下溶解。AB-8型大孔 吸附樹脂層析柱（樹脂ll〇g，柱體積460mL;可購自北京元寶山色譜科技有限公司）用55% (v