(22反式)-3β-羥基-膽甾-5,22-二烯-24-酮在神經(jīng)保護(hù)藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種化合物(22反式)-3β-羥基-膽甾-5,22-二烯-24-酮及其制備方法和用途。該化合物是從總狀蕨藻中采用提取、減壓濃縮、萃取、硅膠柱色譜法以及凝膠柱色譜法純化而得到的，其結(jié)構(gòu)是由理化常數(shù)測定及波譜數(shù)據(jù)分析而確定的。經(jīng)多次體外SH-SY5Y細(xì)胞損傷的神經(jīng)保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)證明：該化合物對β-淀粉樣蛋白25–35(Aβ25-35)損傷的SH-SY5Y細(xì)胞具有顯著的保護(hù)作用，可用于制備神經(jīng)保護(hù)劑和防止阿爾茨海默癥藥物。
【專利說明】(22反式）-3β-羥基-膽留-5, 22-二烯-24-酮在神經(jīng)保 護(hù)藥物中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種從總狀蕨藻中提?。?2反式）-3β-羥基-膽甾-5,22-二 烯-24-酮及其制備方法和用途；本發(fā)明還涉及該化合物為對Aβ25_35損傷的SH-SY5Y細(xì)胞 具有保護(hù)作用的活性成分，從而它可用于制備神經(jīng)保護(hù)藥物和防止阿爾茨海默癥藥物。

【背景技術(shù)】
[0002] 阿爾茨海默癥（Alzheimer，sdisease,AD)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性退行性 疾病，全世界超過3500萬人罹患此癥。其臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性記憶障礙、運(yùn)動障礙、認(rèn)知 障石尋等（Prince,M.eral,World Alzheimer Report 2013.,Alzheimer'sDisease International:London,UK, 2013;pp1-92)。我國現(xiàn)有AD患者約有 800 萬之多。由 于晚期AD患者生活不能自理，并常伴有嚴(yán)重的精神、神經(jīng)癥狀，不但嚴(yán)重降低了老年人的 生活質(zhì)量，還給家庭和社會帶來了沉重的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。AD作為老年期癡呆的主要類型， 是繼心臟病、癌癥、中風(fēng)之后的第四位死因。因此，對AD的防治已引起醫(yī)藥學(xué)界乃至全社會 的廣泛關(guān)注。針對AD進(jìn)行的新型先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn)及其作用機(jī)理的研究，已成為中西醫(yī)藥 學(xué)工作者致力研究的重要課題。
[0003]總狀藏藻 racefflosa(ForsskAl)J.Agardh系綠藻門（Chlorophyta) 綠藻綱（Chlorophyceae)管藻目（Siphonales)蕨藻科（Caulerpaceae)蕨藻屬 (CaWerjDa)海洋植物,主要分布于熱帶和亞熱帶海域,生長在潮間帶以下的巖石、珊瑚礁上 或者中、低潮帶的沙地上。在我國海域也有廣泛分布，主要集中于福建東山、臺灣、海南、西 沙、廣東沿海。國內(nèi)外研究表明，總狀蕨藻中含有倍半萜類、二萜類、留體類、甘油酯類、芳香 類、酰胺類及生物堿類等成分（Alarif,W.M.etal, 5bi7,Xir,Faier, 2010， 38(5-6), 548 - 557 ；Wang,H.etal,Botanica Marina,2007, 50(3), 185 - 190; Ayyad,S. -Ε.Ν.etal,Alexandria Journal of Pharmaceutical Sciences,1994, 8(3), 217-219;Anjaneyulu,A.S.R.etal,Journal of Natural Products,1992, 55(4)，496 - 499)。其中多數(shù)萜類化合物含有天然界罕見的1，4-二乙酰氧基(醛基)丁二烯 結(jié)構(gòu)片斷，而生物堿類則為結(jié)構(gòu)奇特的雙吲哚類化合物?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，從總狀蕨藻 中發(fā)現(xiàn)的次級代謝產(chǎn)物經(jīng)常表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗菌、抗炎、抗病毒、殺蟲、抗腫瘤及毒魚等多樣 的生物活性（Anjaneyulu,A.S.R.etal, 1991，30(9)，3041-3042; Anjaneyulu,A.S.R.etal,Journal of the Indian Chemical Society,1991, 68(8), 480;Capon,R.J.Phytochemistry,1983, 22(6), 1465-1467;Nielsen,P. G.etal,Phytochemistry,1982, 21(7), 1643 - 1645;Doty,M.S.etal,Nature, 1966， 211(5052)， 990)。
[0004] (22 反式）-3β-羥基-膽甾-5, 22-二烯-24-酮，英文名為（2覽)-3,-hydroxy _cholesta-5, 22-dien-24-〇ne，分子式為C27H4202。（22 反式）-3β_ 輕基-膽留-5, 22-二 烯-24-酮為一種白色粉末，熔點(diǎn)114~116°C。鑒于該留體化合物支鏈的特異性，合成化學(xué) 家米用不同的合成方法對其進(jìn)行了全合成（Koch,P.etal，及/Beii/?ofe/a5bci<9i<9Chimique de France,1983, (7-8,Pt. 2), 189 - 194;Khripach,V.A.etal, Zhurnal Organicheskoi Khimii,1993, 29 (7), 1368 - 1371;崔建國等，中///丈學(xué)學(xué)液 (,2000, 39(2), 46 - 50;Litvinovskaya,R.P.etal,Russian Journal of Organic Chemistry (Translation of Zhurnal Organicheskoi Khimii), 2002, 38(3), 355 - 360;Morisaki,N.etal,Chemical & Pharmaceutical Bulletin,2002, 50(7)，935 - 940;Cui,J.-G.etal,汾eroiife, 2002，67(13-14), 1015-1019)。這 是首次在海洋藻類中分離得到（22反式）-3β-羥基-膽留-5, 22-二烯-24-酮。并且，迄 今為止，尚未見有關(guān)化合物（22反式）-3β-羥基-膽留-5, 22-二烯-24-酮的生物活性的 研究報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明在于提供一種化合物（22反式）-3β-羥基-膽甾-5, 22-二烯-24-酮及 其制備方法和用途。該化合物是從總狀蕨藻中采用提取、減壓濃縮、萃取、硅膠柱色譜法以 及凝膠柱色譜法純化而得到的（22反式）-3β-羥基-膽留-5, 22-二烯-24-酮，其結(jié)構(gòu)是 由理化常數(shù)測定及波譜數(shù)據(jù)分析而確定的。經(jīng)藥理試驗(yàn)研究表明，該化合物對Aβ25_35損傷 的SH-SY5Y細(xì)胞具有顯著的保護(hù)作用。
[0006] 因此，本發(fā)明的一個目的是提供一種從總狀蕨藻中制備化合物（22反式）-3β-羥 基-膽留-5, 22-二烯-24-酮的方法。
[0007] 本發(fā)明的另一個目的是提供化合物（22反式）_3β-羥基-膽甾-5, 22-二 烯-24-酮的用途。具體地說，該化合物對Aβ25_35損傷的SH-SY5Y細(xì)胞具有顯著的保護(hù)作 用，可用于制備神經(jīng)保護(hù)劑和防止阿爾茨海默癥的藥物。
[0008] 根據(jù)本發(fā)明的第一個目的，本發(fā)明提供一種從總狀蕨藻中采用提取、減壓濃縮、萃 取、硅膠柱色譜法以及凝膠柱色譜法制備化合物（22反式）_3β-羥基-膽留-5, 22-二 烯-24-酮的方法，具體步驟如下： 1) 制備提取物浸膏 將冷凍的總狀蕨藻(C )常溫下解凍，用乙醇按常規(guī)滲漉提取三次，每次滲漉 1天，得提取液，將提取液減壓濃縮回收乙醇，得粗浸膏； 2) 分離純化 (1) 將上述粗浸膏分散于水中成混懸液，將混懸液依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇 分別萃取三次，所得萃取液減壓濃縮分別得到石油醚提取浸膏、乙酸乙酯提取浸膏和正丁 醇提取浸膏； (2) 將乙酸乙酯浸膏進(jìn)行硅膠柱層析，以石油醚/丙酮梯度洗脫，收集的分離組分利 用硅膠薄層層析檢測，成份相同的分離組分合并、濃縮后得到A、B、C、D、E五個分離組分；其 中組分C即石油醚/丙酮體積比8:2和7:3洗脫部分經(jīng)S印hadexLH-20凝膠柱層析以二 氯甲烷/甲醇洗脫，硅膠柱層析以石油醚/二氯甲烷梯度體積比為7:3洗脫，反相高效液相 色譜法使用C18柱（10μm，250X10mm)，以甲醇：水=83:17 (V/V)作為流動相梯度洗脫， 流速為3111171^11，21〇11111波長下檢測】，得到化合物（22反式）-33-羥基-膽甾-5,22-二 烯-24-酮，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

【權(quán)利要求】
1. (22反式）-3 0 -輕基-膽留-5, 22-二烯-24-酮在制備保護(hù)經(jīng)A0 25_35損傷的 SH-SY5Y細(xì)胞的藥物中的用途。
2. (22反式）-3 0 -羥基-膽留-5, 22-二烯-24-酮在制備神經(jīng)保護(hù)藥物和防止阿爾 茨海默癥藥物的用途。
【文檔編號】A61P25/00GK104398523SQ201410608112
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月3日
【發(fā)明者】毛水春, 章海燕, 郭躍偉, 劉定權(quán) 申請人:南昌大學(xué)