一種鮟鱇魚皮膠原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鮟鱇魚皮膠原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物，由濃度為100-200mg/mL鮟鱇魚皮膠原蛋白肽溶液與濃度為20μg/mL氟苯尼考溶液按照3-4:1的體積比復配形成的復配溶液。本發(fā)明通過鮟鱇魚皮膠原蛋白肽與抗生素氟苯尼考聯(lián)用，協(xié)同發(fā)揮功效，對革蘭氏陰性菌有較佳地抗菌抑菌活性，同時達到降低抗生素用藥量，減少藥物殘留，避免或減少耐藥菌株產(chǎn)生的目的，提高了鮟鱇魚皮的經(jīng)濟附加值。
【專利說明】一種銨鱅魚皮膠原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種抗菌組合物，特別涉及一種鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物。
【背景技術】
[0002]在水產(chǎn)品加工過程中，下腳料約占原料魚的30%~55%，魚頭、魚皮、魚骨及其殘留魚肉等下腳料中膠原蛋白含量達209^50%不等。初步研究結果表明，水產(chǎn)膠原蛋白和多肽具有保護胃粘膜、抗?jié)冏饔?、抗過敏、降血壓、降膽固醇、抗衰老、促進傷口愈合、增強骨強度和預防骨質疏松、預防關節(jié)炎、促進角膜上皮創(chuàng)傷的修復和促進角膜上皮細胞的生長等多種生理活性功能(徐海菊，蔡健，陳江萍.水產(chǎn)膠原蛋白質的基本特性及其在食品加工中的應用[J].浙江農(nóng)業(yè)科學，2010，(2): 324-327)。
[0003]鮫錬魚屬冷溫性底層魚類，常棲伏海底，分布于北太平洋西部，我國產(chǎn)于東海北部、黃海及渤海。在鮫錬魚的加工中，大量魚皮被作為下腳料而廢棄，這不僅污染了環(huán)境，而且也是資源的浪費，再加上目前水產(chǎn)膠原蛋白及多肽本身固有的特性和及其在醫(yī)學、美容護膚、食品、化工及生物材料等方面的應用研究相對較少，限制其應用的范圍。為了提高鮫錬魚皮的經(jīng)濟附加值，需要人們不斷探索其新的生理活性，大力拓寬膠原蛋白肽的應用范圍。迄今有研究表明，牛骨膠原蛋白肽、鯰魚骨酶解物、低值魚蛋白多肽-鈣螯合物以及膠原蛋白金屬配合物具有抗菌活性。而到目前為止還沒有鮫錬魚多肽與抗生素協(xié)同的抗菌抑菌活性的研究報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物，通過鮫錬魚皮膠原蛋白肽與抗生素聯(lián)用，協(xié)同發(fā)揮功效，對革蘭氏陽性菌有較佳地抗菌抑菌活性，同時達到降低抗生素用藥量，減少藥物殘留，避免或減少耐藥菌株產(chǎn)生的目的，提高了鮫錬魚皮的經(jīng)濟附加值。
[0005]本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是:
一種鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物，所述鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗菌組合物為由濃度為100-200mg/mL鮫錬魚皮膠原蛋白肽溶液與濃度為20 u g/mL氟苯尼考溶液按照3-4:1的體積比復配形成的復配溶液。
[0006]鮫錬魚皮膠原蛋白肽具有的優(yōu)點為:易于吸收，不易誘導耐藥菌株的產(chǎn)生，還具有穩(wěn)定、水溶性好，對高等動物正常細胞幾乎無害，在體內(nèi)無殘留等特點，同時還具有較高的生物效價和營養(yǎng)價值。發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，單純的鮫錬魚皮膠原蛋白肽對革蘭氏陽性菌不具有抗菌抑菌活性，但是與特定的抗生素氟苯尼考復配，可以協(xié)同發(fā)揮功效，顯著增強氟苯尼考對革蘭氏陽性菌的抗菌抑菌活性，達到降低抗生素用藥量，減少藥物殘留，避免或減少耐藥菌株產(chǎn)生的目的，提高了鮫錬魚皮的經(jīng)濟附加值。此外，由于氟苯尼考屬于廣譜抗菌藥物，其本身對于革蘭氏陽性菌也具有一定地抗菌抑菌活性，因此，本發(fā)明的產(chǎn)品主要用于革蘭氏陰性菌的抗菌抑菌，同時也具有對于革蘭氏陽性菌的抗菌抑菌活性。控制鮫錬魚皮膠原蛋白肽與氟苯尼考的配比，在保證抗菌活性的前提在，能最大限度的起到協(xié)同增效作用。
[0007]作為優(yōu)選，所述鮫錬魚皮膠原蛋白肽的分子量在2000D以下。鮫錬魚皮膠原蛋白肽的分子量在2000D以下，不但易于被人體吸收利用，且其本身的活性也會更強，尤其是清除羥自由基的活性，與氟苯尼考配合，協(xié)同增效作用佳，產(chǎn)品的抗菌抑菌活性佳。
[0008]作為優(yōu)選，所述鮫錬魚皮膠原蛋白肽的制備方法步驟如下:
(I)選取鮫錬魚皮清洗浙干后，剪碎得魚皮碎片。
[0009](2)魚皮碎片放在稀堿溶液中浸泡24-30 h后用水洗滌，再加入正丁醇溶液去脂肪，攪拌20-28 h后用水洗滌至pH為中性并浙干。
[0010](3)將浙干的魚皮碎片用搗碎機搗碎，置于稀酸溶液中，加熱至45-90°C，并不斷攪拌抽提6-9 h，過濾后得到膠原蛋白粗提液。
[0011](4)向膠原蛋白粗提液中加入胃蛋白酶，胃蛋白酶用量為鮫錬魚皮重量的1%_2%，在超聲波輔助下，30-40°C溫度下酶解2-6 h ;然后加入風味蛋白酶，風味蛋白酶用量為鮫錬魚皮重量的0.1%-0.2%，調(diào)pH為6.5-7.5，在超聲波輔助下，40-55°C溫度下酶解5_7 h。
[0012]采用雙酶酶解，胃蛋白酶和風味蛋白酶作用于肽鍵的切割位點不同，兩者能協(xié)同作用即可切斷芳香族氨基酸的羧基形成的肽鍵又可內(nèi)切和外切以除去苦味和保證釋放寡肽，其釋放的高'值膠原蛋白肽的相對分子量較小，更能被人體吸收。超聲波可以起到乳化效應，能使雙酶和膠 原蛋白之間均勻地充分的混合和接觸，可以提高酶解速度和膠原蛋白妝的提取率。
[0013](5)酶解液滅酶，加活性炭攪拌后過濾，經(jīng)真空濃縮后，噴霧干燥得鮫錬魚皮膠原蛋白肽。用活性炭吸附進行脫苦脫色，不僅操作簡單，成本較低，而且效果好。
[0014]通過上述優(yōu)選的鮫錬魚皮膠原蛋白肽的制備方法獲得的產(chǎn)品，具有高F值的特點，無異味、色澤均一、易于人體吸收，具有較高的生物效價和營養(yǎng)價值。與氟苯尼考配合，協(xié)同增效作用佳。
[0015]高A值寡肽是一類由不高于9個氨基酸殘基所組成、支鏈氨基酸(Val、Leu、He)與芳香族氨基酸(Tyr、Phe、Trp)含量的物質的量之比即Z7值> 20的混合寡聚短肽聚合物。從現(xiàn)代營養(yǎng)學角度，與游離氨基酸相比，短肽的生物效價和營養(yǎng)價值比游離氨基酸更高。有研究報道高/^'值寡肽產(chǎn)品具有改善肝性腦病、醒酒、護肝等生理功能，生理功能，也可用于改善手術后和臥床病人的蛋白質營養(yǎng)狀況和運動后的營養(yǎng)補充劑。
[0016]作為優(yōu)選，步驟(2)中所述的稀堿溶液為0.25%-0.45%的NaOH溶液，每克鮫錬魚皮加25-45 mL所述的稀堿溶液。
[0017]作為優(yōu)選，步驟(2)中所述的正丁醇溶液中正丁醇的體積百分含量為7-10%，每克鮫錬魚皮加25-45 mL所述的正丁醇溶液。
[0018]作為優(yōu)選，步驟(3)中所述的稀酸溶液的質量分數(shù)為0.2-0.4%的者檸檬酸溶液，每克鮫錬魚皮加55-75 mL所述的稀酸溶液。
[0019]作為優(yōu)選，步驟(4)中超聲條件為:超聲波頻率為25-40 kHz，功率為100-400 W。
[0020]作為優(yōu)選，步驟(5)中加入活性碳在40_60°C攪拌1-3 h。
[0021]本發(fā)明的有益效果是:
1、通過鮫錬魚皮膠原蛋白肽與抗生素氟苯尼考聯(lián)用，協(xié)同發(fā)揮功效，對革蘭氏陽性菌有較佳地抗菌抑菌活性，同時達到降低抗生素用藥量，減少藥物殘留，避免或減少耐藥菌株產(chǎn)生的目的，提高了鮫錬魚皮的經(jīng)濟附加值。
[0022]2、由于氟苯尼考屬于廣譜抗菌藥物，其本身對于革蘭氏陽性菌也具有一定地抗菌抑菌活性，因此，本發(fā)明的產(chǎn)品主要用于革蘭氏陰性菌的抗菌抑菌，同時也具有對于革蘭氏陽性菌的抗菌抑菌活性。
[0023]3、鮫錬魚皮膠原蛋白肽具有易于吸收，不易誘導耐藥菌株的產(chǎn)生，還具有穩(wěn)定、水溶性好，對高等動物正常細胞幾乎無害，在體內(nèi)無殘留等特點，同時還具有較高的生物效價和營養(yǎng)價值。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1是鮫錬魚皮膠原蛋白肽及協(xié)同抗生素以不同配比方式配制的復配液的抗菌效果比較。
[0025]圖2是大腸桿菌正常生長曲線和復配液抑制曲線對比。
【具體實施方式】
[0026]下面通過具體實施例，并結合附圖，對本發(fā)明的技術方案作進一步的具體說明。
[0027]本發(fā)明中，若非特指，所采用的原料和設備等均可從市場購得或是本領域常用的。下述實施例中的方法，如無特別說明，均為本領域的常規(guī)方法。
[0028]實施例1:
一種鮫錬魚皮膠 原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物，所述鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗菌組合物為由濃度為lOOmg/mL鮫錬魚皮膠原蛋白肽溶液與濃度為20 u g/mL氟苯尼考溶液按照3:1的體積比復配形成的復配溶液。
[0029]實施例2:
一種鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物，所述鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗菌組合物為由濃度為200mg/mL鮫錬魚皮膠原蛋白肽溶液與濃度為20 u g/mL氟苯尼考溶液按照4:1的體積比復配形成的復配溶液。鮫錬魚皮膠原蛋白肽的分子量在2000D以下。
[0030]
鮫錬魚皮膠原蛋白肽的制備方法如下:
方法1:
取洗凈后的鮫錬魚皮1000 g用剪刀剪切成約長寬為2 cmX2 cm碎片(魚皮能充分接觸溶液又保證了碎片不易過小而導致流失)后。
[0031]在鮫錬魚皮碎片中加入25L質量分數(shù)為0.45% NaOH溶液，浸泡24 h后用水洗滌至PH為中性，再加入35 L體積百分含量為9%的正丁醇溶液，攪拌28 h后用水洗滌至pH為中性并浙干(提高了膠原蛋白的品質)。
[0032]將已浙干的鮫錬魚皮碎片搗碎(搗碎魚皮碎片以使膠原蛋白能充分溶于提取液，提高魚皮的提取率)，加入55 L質量分數(shù)為0.4%的檸檬酸溶液，加熱至55°C，并不斷攪拌抽提6 h，過濾后得到膠原蛋白粗提液。
[0033]向膠原蛋白粗提液中加入胃蛋白酶，胃蛋白酶加入量為鮫錬魚皮重量1%，在超聲波頻率為40 kHz，功率為100 W，溫度為35°C下進行酶解4 h ;調(diào)pH為6.5，加入風味蛋白酶量為鮫錬魚皮重量0.15%，在超聲波輔助下(超聲波頻率為40 kHz，功率為100 W)設置溫度為50°C酶解6 h。
[0034]對所得的酶解液加熱至95°C，并保持7 min滅酶，滅酶所得酶解液中加入活性碳脫苦脫色，并在40°C攪拌I h后過濾除去活性碳，再將脫苦脫色后的濾液置于真空旋轉蒸發(fā)器中進行真空濃縮，最后噴霧干燥，所得到的鮫錬魚皮高/^'值膠原蛋白肽的重量、純度及Z7值如表1所示。
[0035]
對比方法1:制備條件與方法I完全一致，不同之處在于，未在超聲波條件下進行酶解，所得到的鮫錬魚皮膠原蛋白肽的重量、純度及/^'值如表1所示。
[0036]
方法2:
取洗凈后的鮫錬魚皮1000 g用剪刀剪切成約長寬為2 cmX2 cm碎片后。
[0037]在鮫錬魚皮碎片中加入45 L質量分數(shù)為0.25% NaOH溶液，浸泡30 h后用水洗滌至PH為中性，再加入45L體積百分含量為7%的正丁醇溶液，攪拌20 h后用水洗滌至pH為中性并浙干。
[0038]將已浙干的鮫錬魚皮碎片搗碎，加入75 L質量分數(shù)為0.2%的檸檬酸溶液，加熱至90°C，并不斷攪拌抽提9 h，過濾后得到膠原蛋白粗提液。
[0039]向膠原蛋白粗提液中加入胃蛋白酶，胃蛋白酶加入量為鮫錬魚皮重量1.5%，在超聲波頻率為25 kHz，功率為400 W，溫度為40°C下進行酶解2 h ;調(diào)pH為7，加入風味蛋白酶量為鮫錬魚皮重量0.2%，在超聲波輔助下(超聲波頻率為25 kHz，功率為400 W)設置溫度為55°C酶解5 h。`
[0040]對所得的酶解液加熱至95°C，并保持7 min滅酶，滅酶所得酶解液中加入活性碳脫苦脫色，并在60°C攪2 h后過濾除去活性碳，再將脫苦脫色后的濾液置于真空旋轉蒸發(fā)器中進行真空濃縮，最后噴霧干燥，所得到的鮫錬魚皮高/^'值膠原蛋白肽的重量、純度及A值如表1所示。
[0041]
對比方法2:制備條件與方法2完全一致，不同之處在于，未在超聲波條件下進行酶解，所得到的鮫錬魚皮膠原蛋白肽的重量、純度及/^'值如表1所示。
[0042]
方法3:
取洗凈后的鮫錬魚皮1000 g用剪刀剪切成約剪成長寬為2 cmX2 cm碎片后。
[0043]在鮫錬魚皮碎片中加入35 L質量分數(shù)為0.35% NaOH溶液，浸泡30 h后用水洗滌至PH為中性，再加入25L體積百分含量為10%的正丁醇溶液，攪拌26 h后用水洗滌至pH為中性并浙干。
[0044]將已浙干的鮫錬魚皮碎片搗碎，中加入60 L質量分數(shù)為0.3%的檸檬酸溶液，加熱至45°C，并不斷攪拌抽提7h，過濾后得到膠原蛋白粗提液。
[0045]向膠原蛋白粗提液中加入胃蛋白酶，胃蛋白酶加入量為鮫錬魚皮重量2%，在超聲波頻率為40kHz，功率為100 W，溫度為30°C下進行酶解6 h ;調(diào)pH為7.5，加入風味蛋白酶量為鮫錬魚皮重量0.1%，在超聲波輔助下(超聲波頻率為40 kHz，功率為100 W)設置溫度為40°C酶解7h。
[0046]對所得的酶解液加熱至95°C,并保持7 min滅酶,滅酶所得酶解液中加入活性碳脫苦脫色，并在50°C攪拌3 h后過濾除去活性碳，再將脫苦脫色后的濾液置于真空旋轉蒸發(fā)器中進行真空濃縮，最后噴霧干燥，獲得鮫錬魚皮高/^'值膠原蛋白肽的重量、純度及/^'值如表1所示。
[0047]
對比方法3:制備條件與方法例3完全一致，不同之處在于，未在超聲波條件下進行酶解，所得到的鮫錬魚皮膠原蛋白肽的重量、純度及/^'值如表1所示。
【權利要求】
1.一種鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物，其特征在于:所述鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗菌組合物為由濃度為100-200mg/mL鮫錬魚皮膠原蛋白肽溶液與濃度為20 u g/mL氟苯尼考溶液按照3-4:1的體積比復配形成的復配溶液。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物，其特征在于:所述鮫錬魚皮膠原蛋白肽的分子量在2000D以下。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的一種鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物，其特征在于:所述鮫錬魚皮膠原蛋白肽的制備方法步驟如下: (1)選取鮫錬魚皮清洗浙干后，剪碎得魚皮碎片； (2)魚皮碎片放在稀堿溶液中浸泡24-30h后用水洗滌，再加入正丁醇溶液去脂肪，攪拌20-28 h后用水洗滌至pH為中性并浙干； (3)將浙干的魚皮碎片用搗碎機搗碎，置于稀酸溶液中，加熱至45-90°C，并不斷攪拌抽提6-9 h，過濾后得到膠原蛋白粗提液； (4)向膠原蛋白粗提液中加入胃蛋白酶，胃蛋白酶用量為鮫錬魚皮重量的1%_2%，在超聲波輔助下，30-40°C溫度下酶解2-6 h ;然后加入風味蛋白酶，風味蛋白酶用量為鮫錬魚皮重量的0.1%-0.2%，調(diào)pH為6.5-7.5，在超聲波輔助下，40-55°C溫度下酶解5-7 h ； (5)酶解液滅酶，加活性炭攪拌后過濾，經(jīng)真空濃縮后，噴霧干燥得鮫錬魚皮膠原蛋白肽。
4.根據(jù)權利要求3所述的一種鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物，其特征在于:步驟(2)中所述的稀堿溶液為0.25%-0.45%的NaOH溶液，每克鮫錬魚皮加25-45 mL所述的稀堿溶液。
5.根據(jù)權利要求3所述的一種鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物，其特征在于:步驟(2)中所述的正丁醇溶液中正丁醇的體積百分含量為7-10%，每克鮫錬魚皮加25-45 mL所述的正丁醇溶液。
6.根據(jù)權利要求3所述的一種鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物，其特征在于:步驟(3)中所述的稀酸溶液的質量分數(shù)為0.2-0.4%的者檸檬酸溶液，每克鮫錬魚皮加55-75 mL所述的稀酸溶液。
7.根據(jù)權利要求3所述的一種鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物，其特征在于:步驟(4)中超聲條件為:超聲波頻率為25-40 kHz，功率為100-400 W。
8.根據(jù)權利要求3所述的一種鮫錬魚皮膠原蛋白肽抗革蘭氏陰性菌組合物，其特征在于:步驟(5)中加 入活性碳在40-60°C攪拌1-3 h。
【文檔編號】A61K38/39GK103611154SQ201310593713
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月22日 優(yōu)先權日:2013年11月22日
【發(fā)明者】萬婧, 周向陽, 江玲麗, 相興偉, 周秀錦, 邵宏宏, 胡興娟 申請人:中華人民共和國舟山出入境檢驗檢疫局