一種水洗一次的革蘭染色二步法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種水洗一次的革蘭染色二步法，包括：在室溫下，將待檢材料均勻涂在玻片上，干燥，固定，再將初染劑滴加到涂片上，染色，傾去初染劑后直接滴加復(fù)染劑，染色，水洗一次，干后鏡檢，在涂片中央是染成紫色的革蘭陽(yáng)性菌和染成紅色的革蘭陰性菌。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明大大減少了染料和水的用量，并且縮短了初染和復(fù)染的時(shí)間，提高染色效率的同時(shí)節(jié)約了50%的染料和50%的水，適用于大批量的檢驗(yàn)操作。
【專利說(shuō)明】一種水洗一次的革蘭染色二步法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種革蘭染色法，特別是涉及一種水洗一次的革蘭染色二步法。
【背景技術(shù)】
[0002]革蘭染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶染色，而經(jīng)碘液媒染后，用酒精脫色，在一定條件下有的細(xì)菌此色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細(xì)菌分為兩大類，前者叫革蘭氏陽(yáng)性菌(G+)，后者叫革蘭氏陰性菌(G-)。為了觀察方便，脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅等進(jìn)行復(fù)染。陽(yáng)性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。有芽孢的桿菌和絕大多數(shù)和球菌，以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應(yīng)；弧菌，螺旋體和大多數(shù)致病性的無(wú)芽胞桿菌都呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。
[0003]革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌在化學(xué)組成和生理性質(zhì)上有很多差別，染色反應(yīng)不一樣。現(xiàn)在一般認(rèn)為革蘭氏陽(yáng)性菌體內(nèi)含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復(fù)合物，它與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合很牢，不易脫色，陰性菌復(fù)合物結(jié)合程度低，吸附染料差，易脫色，這是染色反應(yīng)的主要依據(jù)。另外，陽(yáng)性菌菌體等電點(diǎn)較陰性菌為低，在相同PH條件下進(jìn)行染色，陽(yáng)性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。所以染色時(shí)的條件要嚴(yán)格控制。例如，在強(qiáng)堿的條件下進(jìn)行染色，兩類菌吸附堿性染料都多，都可呈正反應(yīng)；PH很低時(shí)，則可都呈負(fù)反應(yīng)。此外，兩類菌的細(xì)胞壁等對(duì)結(jié)晶紫-碘復(fù)合物的通透性也不一致，陽(yáng)性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時(shí)間，脫色方法也應(yīng)嚴(yán)格控制。
[0004]傳統(tǒng)的革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作方法是:1)涂片固定，2)草酸銨結(jié)晶紫染I分鐘，3)水沖洗，4)加碘液覆蓋涂面染I分鐘，5)水洗，用吸水紙吸除水分，6)加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，30秒后水洗，吸去水分，
7)蕃紅染色液染10秒鐘后，自來(lái)水沖洗，干燥鏡檢。其中在初染、媒染、脫色、復(fù)染每一步驟之后都需要水洗除去染料，避免附著的染料對(duì)染色效果的影響，革蘭染色四步法效果好，但操作比較復(fù)雜，質(zhì)量控制不易進(jìn)行，難以做到標(biāo)準(zhǔn)化，同時(shí)消耗大量的染料和水，容易造成資源的浪費(fèi)和環(huán)境的污染。
[0005]目前在專利CN101126689B中公開(kāi)了一種水洗兩次的革蘭染色二步法，主要包括初染和復(fù)染兩步，在每一步驟之后同樣需要水洗除去附著的染料，該方法較傳統(tǒng)的革蘭氏染色四步法，操作更簡(jiǎn)便且方法可靠，但此方法同樣消耗較多的染料和水，并且初染和復(fù)染的時(shí)間較長(zhǎng)，不適于大批量的檢驗(yàn)操作。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是針對(duì)目前革蘭染色二步法染料和水消耗較大，染色時(shí)間較長(zhǎng)的問(wèn)題，提供一種水洗一次的革蘭染色二步法，該方法染料和水的用量小，初染和復(fù)染時(shí)間短，適用于大批量的檢驗(yàn)操作。
[0007]本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0008]一種水洗一次的革蘭染色二步法，包括:[0009]在室溫下，將待檢材料均勻涂在玻片上，干燥，固定，再將初染劑滴加到涂片上，染色，傾去初染劑后直接滴加復(fù)染劑，染色，水洗一次，干后鏡檢，在涂片中央是染成紫色的革蘭陽(yáng)性菌和染成紅色的革蘭陰性菌，
[0010]其中所述初染劑為含有質(zhì)量百分?jǐn)?shù)0.03125%結(jié)晶紫的水溶液；所述復(fù)染劑為含有以下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)組分的乙醇溶液，其中0.0625%堿性品紅、0.005%碘化鉀、0.001%碘。
[0011]在傳統(tǒng)的革蘭染色方法和改進(jìn)的二步染色法中，由于所用染料量較多，水洗被認(rèn)為是不可缺少的一步，因?yàn)橥ㄟ^(guò)水洗可除去附著在涂片上的染料，避免對(duì)染色效果的影響，然而發(fā)明人經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，使用稀釋的染色液，減少染料的用量，省去初染后的水洗步驟對(duì)染色效果沒(méi)有影響，染色效果仍與已知的方法一樣好。
[0012]本發(fā)明優(yōu)選地，所述初染劑的滴加量為I?4ml，初染劑染色時(shí)間為10?50秒；所述復(fù)染劑的滴加量為0.8?2ml，復(fù)染劑染色時(shí)間為I?5秒。
[0013]本發(fā)明更優(yōu)選為所述初染劑的滴加量為2ml，初染劑染色時(shí)間為30秒，所述復(fù)染劑的滴加量為1ml，復(fù)染劑染色時(shí)間為2秒。
[0014]優(yōu)選地，所述涂在玻片上的待檢材料的直徑為1.0?2.0cm0
[0015]本發(fā)明中，所述待檢材料優(yōu)選為細(xì)菌培養(yǎng)物或送檢分泌物。
[0016]本發(fā)明的水洗一次革蘭染色二步法具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0017]1.與現(xiàn)有的水洗兩次革蘭染色二步法相比，本發(fā)明的方法省略了初染后的水洗一步，簡(jiǎn)化了操作步驟，方法更為簡(jiǎn)便并且染色效果和水洗兩次革蘭染色二步法一樣，該方法與現(xiàn)有技術(shù)相比可節(jié)約50%的水。
[0018]2.該方法大大減少了染料的用量，并且縮短了初染和復(fù)染的時(shí)間，提高染色效率的同時(shí)節(jié)約了 50%的染料，減少了對(duì)環(huán)境的污染。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0020]本發(fā)明中所使用的玻片、初染劑、復(fù)染劑以及用于鏡檢的儀器均采用常規(guī)的材料和設(shè)備，鏡檢的方法采用現(xiàn)有技術(shù)中的常規(guī)檢測(cè)方法。
[0021]實(shí)施例1
[0022]取潔凈的玻片，在室溫下，將細(xì)菌培養(yǎng)物均勻涂在玻片上，干燥，固定，其中涂片的直徑為1.0cm，再滴加Iml由含有0.03125%結(jié)晶紫水溶液配成的初染劑到涂片上，染色10秒，傾去初染劑后不水洗，直接滴加0.8ml由含有0.0625%堿性品紅、0.005%碘化鉀、0.001%碘的乙醇溶液配成的復(fù)染劑，染色I(xiàn)秒后水洗，干后鏡檢，在涂片中央可見(jiàn)到染成紫色的革蘭陽(yáng)性菌和染成紅色的革蘭陰性菌，對(duì)比鮮明。
[0023]實(shí)施例2
[0024]取潔凈的玻片，在室溫下，將送檢分泌物均勻涂在玻片上，干燥，固定，其中涂片的直徑為1.5cm,再滴加2ml由含有0.03125%結(jié)晶紫水溶液配成的初染劑到涂片上，染色30秒，傾去初染劑后不水洗，直接滴加Iml由含有0.0625%堿性品紅、0.005%碘化鉀、0.001%碘的乙醇溶液配成的復(fù)染劑，染色2秒后水洗，干后鏡檢，在涂片中央可見(jiàn)到染成紫色的革蘭陽(yáng)性菌和染成紅色的革蘭陰性菌，對(duì)比鮮明。
[0025]實(shí)施例3
[0026]取潔凈的玻片，在室溫下，將送檢分泌物均勻涂在玻片上，干燥，固定，其中涂片的直徑為2.0cm，再滴加4ml由含有0.03125%結(jié)晶紫水溶液配成的初染劑到涂片上，染色50秒，傾去初染劑后不水洗，直接滴加2ml由含有0.0625%堿性品紅、0.005%碘化鉀、0.001%碘的乙醇溶液配成的復(fù)染劑，染色5秒后水洗，干后鏡檢，在涂片中央可見(jiàn)到染成紫色的革蘭陽(yáng)性菌和染成紅色的革蘭陰性菌，對(duì)比鮮明。
[0027]以上所述，僅為本發(fā)明較佳【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限與此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種水洗一次的革蘭染色二步法，包括: 在室溫下，將待檢材料均勻涂在玻片上，干燥，固定，再將初染劑滴加到涂片上，染色，傾去初染劑后直接滴加復(fù)染劑，染色，水洗一次，干后鏡檢，在涂片中央是染成紫色的革蘭陽(yáng)性菌和染成紅色的革蘭陰性菌， 其中所述初染劑為含有質(zhì)量百分?jǐn)?shù)0.03125%結(jié)晶紫的水溶液； 所述復(fù)染劑為含有以下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)組分的乙醇溶液，其中0.0625%堿性品紅、0.005%碘化鉀、0.001%碘。
2.如權(quán)利要求1所述的水洗一次的革蘭染色二步法，其特征在于，所述初染劑的滴加量為I?4ml，初染劑染色時(shí)間為10?50秒；所述復(fù)染劑的滴加量為0.8?2ml，復(fù)染劑染色時(shí)間為I?5秒。
3.如權(quán)利要求2所述的水洗一次的革蘭染色二步法，其特征在于，所述初染劑的滴加量為2ml，初染劑染色時(shí)間為30秒，所述復(fù)染劑的滴加量為1ml，復(fù)染劑染色時(shí)間為2秒。
4.如權(quán)利要求1所述的水洗一次的革蘭染色二步法，其特征在于，所述涂在玻片上的待檢材料的直徑為1.0?2.0cm0
5.如權(quán)利要求1所述的水洗一次的革蘭染色二步法，其特征在于，所述待檢材料為細(xì)菌培養(yǎng)物或送檢分泌物。
【文檔編號(hào)】G01N1/30GK103674660SQ201210336839
【公開(kāi)日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2012年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2012年9月12日
【發(fā)明者】葉元康 申請(qǐng)人:無(wú)錫飛伊生物科技有限公司