一種提高免疫力的馬齒莧多糖脂質(zhì)體的制備及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)一種提高免疫力的馬齒莧多糖脂質(zhì)體的制備及其應(yīng)用法。油相與水相體積比為2：1，油相中，馬齒莧多糖、卵磷脂、膽固醇和VC的濃度分別為0.016g/ml、0.04g/ml、0.022g/ml和0.022g/ml；添加甘露醇、Tween20和蒸餾水的含量分別占水相總量的5%、5%和90%。將馬齒莧多糖、卵磷脂、膽固醇、VC溶解于濃度80%的乙醇中，在50～55℃水浴條件下至完全溶解；將制備的油相用注射器快速注入制備的水相中，通過(guò)磁力攪拌、混合均勻，經(jīng)減壓蒸發(fā)后，經(jīng)避光冷凍干燥獲得馬齒莧多糖脂質(zhì)體。制備方法及獲得產(chǎn)品具有生物利用度顯著增強(qiáng)，活性高，具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
【專利說(shuō)明】一種提高免疫力的馬齒莧多糖脂質(zhì)體的制備及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及脂質(zhì)體制備方法【技術(shù)領(lǐng)域】，具體的，本發(fā)明涉及一種提高免疫力的馬齒莧多糖脂質(zhì)體的制備及其應(yīng)用的【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]馬齒覽iPortuIaca oleracea L.)屬馬齒覓科一年生肉質(zhì)草本植物，在我國(guó)大部分地區(qū)均有分布。馬齒覓含有多種對(duì)人體有益的營(yíng)養(yǎng)成分和藥用成分，其性寒、味酸，富合不飽和脂肪酸、維生素C、E和胡蘿卜素，是我國(guó)衛(wèi)生部規(guī)定的78種藥食同源野生植物之一。以及蘋(píng)果酸、谷氨酸和天門冬氨酸、草酸等，鈣、磷、鐵、及鋅、銅等含量也較高。另外，還含有較多的鉀元素，其中有硝酸鉀、硫酸鉀、草酸氫鉀等多種鉀鹽。有抗菌消炎、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、增強(qiáng)免疫力、抗衰老等作用，具有清熱解毒、祛濕止帶功效，適用于濕熱下注、帶下色黃、黏稠味臭、小便短黃、口渴口苦、舌紅苔黃、脈滑者，亦可用于濕熱泄瀉、痢疾等。能驅(qū)蟲(chóng)功效，適用于小兒鉤蟲(chóng)病。并具有清熱解毒、止瀉痢、除腸垢、益氣補(bǔ)虛功效，適用于治療久痢。是一種保健價(jià)值很高的草本植物。而馬齒莧多糖是馬齒莧主要活性成分之一，不僅具有增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血糖、抗病毒、抗菌、抗氧化等功能，還具有抗衰老、抗凝血、降血脂、抗突變、抗輻射等作用。隨著對(duì)馬齒莧多糖藥理作用的研究，對(duì)馬齒莧多糖的開(kāi)發(fā)和利用越來(lái)越受到人們的廣泛關(guān)注。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)表明，經(jīng) 分離提純后的天然馬齒莧多糖目前面臨著三個(gè)方面的問(wèn)題，一是穩(wěn)定性差，易受光照、溫度、氧、PH等影響，易氧化分解；二是溶解性低；三是生物利用度低，由于其穩(wěn)定性差和溶解性低，從而降低了其生物活性，使其應(yīng)用受限。亟需加以解決天然馬齒莧多糖目前所面臨的問(wèn)題，如何利用高效載體來(lái)包裹馬齒莧多糖，使其不受外界因素的影響，提高其穩(wěn)定性和消化率，防止其生物活性降解，提高生物利用度，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對(duì)國(guó)內(nèi)外報(bào)道未有解決有關(guān)分離提純后的天然馬齒莧多糖目前面臨的問(wèn)題，未有關(guān)于馬齒莧多糖有效載體的研究現(xiàn)狀。本發(fā)明提供一種提高免疫力的馬齒莧多糖脂質(zhì)體的制備及其應(yīng)用，獲得馬齒莧多糖脂質(zhì)體制備的最佳工藝條件，制備的馬齒莧多糖脂質(zhì)體具有很好的緩釋效果，表現(xiàn)出更高的消化率、活性穩(wěn)定性和免疫活性，且對(duì)雙歧桿菌有顯著增殖作用，其生物利用度和穩(wěn)定性顯著提高，對(duì)于馬齒莧多糖產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
[0005]本發(fā)明采用的主要技術(shù)方案:
通過(guò)提供一種提高免疫力的馬齒莧多糖脂質(zhì)體的最佳制備方法，選用制備的脂質(zhì)體作為多糖的載體，利用其靶向性和淋巴定向性、緩釋性、細(xì)胞親和性與組織相容性、降低藥物毒性、保護(hù)藥物提高穩(wěn)定性等特點(diǎn)，延緩藥物在體內(nèi)的釋放，從而降低藥物的毒性，提高生物利用度。本發(fā)明以包封率為考察指標(biāo)，優(yōu)化制備馬齒莧多糖脂質(zhì)體的工藝，并從穩(wěn)定性、緩釋效果、生物利用度三個(gè)方面對(duì)馬齒莧多糖脂質(zhì)體進(jìn)行性能評(píng)價(jià)，為馬齒莧多糖產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用提供現(xiàn)實(shí)的科學(xué)依據(jù)。
[0006]本發(fā)明具體提供了一種提高免疫力的馬齒莧多糖脂質(zhì)體的制備方法，具體制備方法步驟如下。
[0007](I)選用主料為馬齒莧多糖，是將馬齒莧經(jīng)分離提純后的純度為84.31%的馬齒莧多糖，需在4°C下儲(chǔ)存?zhèn)溆?，輔料為卵磷脂和膽固醇、維生素C，選用卵磷脂和膽固醇作為壁材，脂藥比按照卵磷脂與馬齒莧多糖重量比計(jì)為2.5:1，壁材比按照卵磷脂與膽固醇重量比計(jì)為1.8:1，選用濃度為80%的乙醇作為油相的溶劑，馬齒莧多糖、卵磷脂與膽固醇作為油相的溶質(zhì)，其中，純度為84.31%的馬齒莧多糖的濃度為0.016g/ml，卵磷脂的濃度為
0.04g/ml,膽固醇的濃度為0.022g/ml,維生素C的濃度為0.022g/ml。
[0008](2)油相的制備:將上述步驟制備的馬齒莧多糖、卵磷脂、膽固醇、維生素C溶解于上述步驟選用的濃度80%的乙醇中，在50~55°C水浴條件下至完全溶解。
[0009](3)水相的制備:油相與水相之比按照體積比計(jì)比例為2:1 ;水相由冷凍保護(hù)劑、乳化劑、乳化劑和溶劑組成，其中，冷凍保護(hù)劑采用甘露醇，乳化劑采用TWeen20，溶劑采用蒸餾水,添加甘露醇的含量為水相總量的5%，添加Tween20的含量為水相總量的5%，添加蒸餾水的含量為水相總量的90%，將甘露醇、Tween20加入蒸餾水混勻至溶解。
[0010](4)將步驟(2)制備的油相用注射器快速注入步驟(3)制備的水相中。
[0011](5)將上述步驟(4)制備的馬齒莧多糖脂質(zhì)體溶液采取磁力攪拌，磁力攪拌速度40r/min,攪拌5min,使其混合均勻。
[0012](6)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā):在55°C溫度下經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓蒸發(fā)，確保乙醇完全蒸完。
[0013](7)冷凍干燥:將上述經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得到材料經(jīng)避光冷凍干燥12個(gè)小時(shí)以上，制備粉末即可獲得馬齒莧多糖脂質(zhì)體，包封率不低于95.7%。
[0014]同時(shí)，本發(fā)明提供一種提高免疫力的馬齒莧多糖脂質(zhì)體，通過(guò)上述提供的馬齒莧多糖脂質(zhì)體的制備方法獲得，制備的馬齒莧多糖脂質(zhì)體主要由油相和水相組成，油相與水相按體積比計(jì)比例為2:1，油相由馬齒莧多糖、卵磷脂、膽固醇、維生素C和濃度80%的乙醇組成，選用濃度為80%的乙醇作為油相的溶劑，馬齒莧多糖、卵磷脂與膽固醇作為油相的溶質(zhì)，其中，純度為84.31%的馬齒莧多糖的濃度為0.016g/ml，卵磷脂的濃度為0.04g/ml，膽固醇的濃度為0.022g/ml，維生素C的濃度為0.022g/ml ;水相由冷凍保護(hù)劑、乳化劑、乳化劑和溶劑組成，其中，冷凍保護(hù)劑采用甘露醇，乳化劑采用TWeen20，溶劑采用蒸餾水，添加甘露醇的含量為水相總量的5%，添加Tween20的含量為水相總量的5%，添加蒸餾水的含量為水相總量的90%。
[0015]通過(guò)上述工藝技術(shù)制備的馬齒莧多糖脂質(zhì)體在光照、pH、溫度下同條件同比馬齒莧多糖穩(wěn)定，且具有顯著的緩釋效果，制備的馬齒莧多糖脂質(zhì)體在小腸中的消化率為63.24%，同比馬齒莧多糖更易在小腸中消化，且在胃液中脂質(zhì)體表現(xiàn)出更高的穩(wěn)定性，生物利用度顯著增強(qiáng)，活性高。
[0016]進(jìn)一步，本發(fā)明提供了馬齒莧多糖脂質(zhì)體在雙歧桿菌中應(yīng)用，對(duì)雙歧桿菌有顯著增殖作用。
[0017]本發(fā)明提供了馬齒莧多糖脂質(zhì)體在乳酸菌中應(yīng)用，對(duì)乳酸菌有顯著增殖作用。
[0018]本發(fā)明提供了馬齒莧多糖脂質(zhì)體在制備酸奶中的應(yīng)用，對(duì)酸奶具有顯現(xiàn)凝乳性，能夠控制酸奶的酸度。
[0019]通過(guò)實(shí)施本發(fā)明具體的
【發(fā)明內(nèi)容】
，可以達(dá)到以下效果:
本發(fā)明選用壁材比按照卵磷脂與膽固醇重量比計(jì)為1.8:1，冷凍保護(hù)劑為甘露醇的脂質(zhì)體作為馬齒莧多糖的載體，利用其靶向性和淋巴定向性、緩釋性、細(xì)胞親和性與組織相容性、降低藥物毒性、保護(hù)藥物提高穩(wěn)定性等特點(diǎn)，延緩藥物在體內(nèi)的釋放，從而降低藥物的毒性，提高生物利用度。本發(fā)明以包封率為考察指標(biāo)，優(yōu)化馬齒莧多糖脂質(zhì)體的制備工藝，并從穩(wěn)定性、緩釋效果、生物利用度三個(gè)方面對(duì)馬齒莧多糖脂質(zhì)體進(jìn)行性能評(píng)價(jià)，制備的馬齒莧多糖脂質(zhì)體在光照、pH、溫度不同條件下同比馬齒莧多糖穩(wěn)定，且具有顯著的緩釋效果，馬齒莧多糖脂質(zhì)體在小腸中的消化率為63.24%，制備的馬齒莧多糖脂質(zhì)體同比馬齒莧多糖更易在小腸中消化，且在胃液中脂質(zhì)體表現(xiàn)出更高的穩(wěn)定性，生物利用度顯著增強(qiáng)，活性高，為提高馬齒莧多糖的生物學(xué)功效的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)，具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
[0020]【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】:
圖1為馬齒莧多糖脂質(zhì)體的制備工藝流程圖。
[0021]圖2為壁材比對(duì)脂質(zhì)體包封率的影響圖。
[0022]圖3為乙醇含量對(duì)脂質(zhì)體包封率的影響圖。
[0023]圖4為甘露醇的含量對(duì)脂質(zhì)體包封率的影響圖。
[0024]圖5為馬齒莧多糖脂質(zhì)體制備工藝優(yōu)化響應(yīng)面圖一。
[0025]圖6為馬齒莧多糖脂質(zhì)體制備工藝優(yōu)化響應(yīng)面圖二。
[0026]圖7為馬齒莧多糖脂質(zhì) 體制備工藝優(yōu)化響應(yīng)面圖三。
[0027]圖8為不同pH下多糖脂質(zhì)體和多糖對(duì)羥自由基的清除率曲線圖。
[0028]圖9為不同溫度下多糖脂質(zhì)體和多糖對(duì)羥自由基的清除率曲線圖。
[0029]圖10為不同光照天數(shù)下多糖脂質(zhì)體和多糖對(duì)羥自由基的清除率曲線圖。
[0030]圖11為多糖脂質(zhì)體和多糖的消化率曲線圖。
[0031]圖12為多糖濃度隨時(shí)間變化的曲線圖。
[0032]圖13為多糖脂質(zhì)體的包封率隨時(shí)間變化的曲線圖。
[0033]圖14為多糖脂質(zhì)體對(duì)雙歧桿菌生長(zhǎng)曲線的影響圖。
[0034]圖15為馬齒莧多糖及多糖脂質(zhì)體替代葡萄糖雙歧桿菌生長(zhǎng)曲線圖。
[0035]圖16為對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)曲線R的影響圖。
[0036]圖17為多糖脂質(zhì)體對(duì)雙歧桿菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期世代時(shí)間(G)比較圖。
[0037]圖18為多糖脂質(zhì)體對(duì)酸奶發(fā)酵過(guò)程中酸度變化圖。
[0038]圖19為多糖脂質(zhì)體對(duì)發(fā)酵過(guò)程中乳酸菌總數(shù)變化圖。
[0039]圖20為多糖脂質(zhì)體對(duì)發(fā)酵過(guò)程中雙歧桿菌數(shù)量變化圖。
【具體實(shí)施方式】
[0040]下面，舉實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明，但是，本發(fā)明并不限于下述的實(shí)施例。另外，在下述的說(shuō)明中，如無(wú)特別說(shuō)明，％皆指m/m質(zhì)量百分比。
[0041]采用的主要原輔材料及相關(guān)試劑材料:大豆卵磷脂、甘露醇、維生素C (上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司);膽固醇(北京歐博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司);Tween20 (天津市福晨化學(xué)試劑廠)；α —淀粉酶(北京奧博星生物技術(shù)有限公司);黃原膠(上海源葉生物技術(shù)有限公司);雙歧桿菌(從酸奶制品中分離);檸檬酸、檸檬酸鈉、鹽酸萘乙二胺、水楊酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、3，5- 二硝基水楊酸、吲哚試劑、亞硝酸鈉、硫酸亞鐵、雙氧水、苯酚、濃硫酸等均為A.R.級(jí)。
[0042]實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:昆明種小鼠，新疆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供；左旋咪唑片(山東仁和堂藥業(yè)有限公司)；印度墨汁(Cat.N0.18060);碳酸鈉，天津永晟精細(xì)化工有限公司，批號(hào):20111020 ;培養(yǎng)基:雙歧桿菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基；改良的MRS固體培養(yǎng)基。
[0043]采用的主要儀器設(shè)備:TDL-5_A系列離心機(jī)，海安亭科學(xué)儀器廠；79_2磁力攪拌器，江蘇省金壇市金城國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；FZ102-SIM真空冷凍干燥設(shè)備，德國(guó)西門子公司；512⑶紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)，上海分析儀器總廠；THZ-82水浴恒溫振蕩器，國(guó)華企業(yè)；F A2104S型精密電子天平，上海天平儀器廠；721分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠；DH-360型電熱恒溫箱，北京市永光明醫(yī)療儀器廠；TGL-16G冷凍離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；隔水式恒溫培養(yǎng)箱，上海一恒科技有限公司；5W-CJ-2FD超凈工作臺(tái)，上海灣迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；GMSX-280;類B型蒸汽式壓力滅菌鍋，北京市永光明醫(yī)療儀器廠；E200顯微鏡，Nikon ECLIPSE等。
[0044]本發(fā)明中選用的所有試劑和儀器都為本領(lǐng)域熟知選用的，但不限制本發(fā)明的實(shí)施，其他本領(lǐng)域熟知的一些試劑和設(shè)備都可適用于本發(fā)明以下實(shí)施方式的實(shí)施。
[0045]實(shí)施例一:馬齒莧多糖脂質(zhì)體的制備
參見(jiàn)附圖1，制備提高免疫力的馬齒莧多糖脂質(zhì)體具體步驟如下。
[0046](I)選用主料為馬齒莧多糖，是將馬齒莧經(jīng)分離提純后的純度為84.31%的馬齒莧多糖，需在4°C下儲(chǔ)存?zhèn)?用，輔料為卵磷脂和膽固醇、維生素C，選用卵磷脂和膽固醇作為壁材，脂藥比按照卵磷脂與馬齒莧多糖重量比計(jì)為2.5:1，壁材比按照卵磷脂與膽固醇重量比計(jì)為1.8:1，選用濃度為80%的乙醇作為油相的溶劑，馬齒莧多糖、卵磷脂與膽固醇作為油相的溶質(zhì)，其中，純度為84.31%的馬齒莧多糖的濃度為0.016g/ml，卵磷脂的濃度為
0.04g/ml,膽固醇的濃度為0.022g/ml,維生素C的濃度為0.022g/ml。
[0047](2)油相的制備:將上述步驟制備的馬齒莧多糖、卵磷脂、膽固醇、維生素C溶解于上述步驟選用的濃度80%的乙醇中，在50~55°C水浴條件下至完全溶解。
[0048](3)水相的制備:油相與水相之比按照體積比計(jì)比例為2:1 ;水相由冷凍保護(hù)劑、乳化劑、乳化劑和溶劑組成，其中，冷凍保護(hù)劑采用甘露醇，乳化劑采用TWeen20，溶劑采用蒸餾水,添加甘露醇的含量為水相總量的5%，添加Tween20的含量為水相總量的5%，添加蒸餾水的含量為水相總量的90%，將冷凍保護(hù)劑甘露醇、乳化劑TWeen20加入蒸餾水混勻至溶解。
[0049](4)將步驟(2)制備的油相用注射器快速注入步驟(3)制備的水相中。
[0050](5)將上述步驟(4)制備的馬齒莧多糖脂質(zhì)體溶液采取磁力攪拌，磁力攪拌速度40r/min,攪拌5min,使其混合均勻。
[0051](6)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā):在55°C溫度下經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓蒸發(fā)，確保乙醇完全蒸完。
[0052](7)冷凍干燥:將上述經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得到材料經(jīng)避光冷凍干燥12個(gè)小時(shí)以上，制備粉末即可獲得馬齒莧多糖脂質(zhì)體，包封率不低于95.7%。
[0053]實(shí)施例二:馬齒莧多糖脂質(zhì)體的制備
參見(jiàn)附圖1，制備提高免疫力的馬齒莧多糖脂質(zhì)體具體步驟如下。[0054](I)選用主料為馬齒莧多糖，是將馬齒莧經(jīng)分離提純后的純度為84.31%馬齒莧多糖，用量為0.Sg，需在4°C下儲(chǔ)存?zhèn)溆?，輔料為卵磷脂和膽固醇、維生素C，選用卵磷脂和膽固醇作為壁材，選用卵磷脂2.0g，膽固醇1.lg，添加維生素C量為1.lg，濃度為80%的乙醇50ml ο
[0055](2)油相的制備:將上述步驟制備的馬齒莧多糖、卵磷脂、膽固醇、維生素C溶解于濃度為80%的乙醇中，在50~55°C水浴條件下至完全溶解。
[0056](3)水相的制備:油相與水相之比按照體積比計(jì)比例為2:1 ;水相的制備中，冷凍保護(hù)劑采用甘露醇1.25ml，乳化劑采用Tween20為1.25ml，溶劑采用蒸餾水22.5ml，將冷凍保護(hù)劑甘露醇、乳化劑Tween20加入蒸餾水混勻至溶解。
[0057](4)將步驟(2)制備的油相用注射器快速注入步驟(3)制備的水相中。
[0058](5)將上述步驟(4)制備的馬齒莧多糖脂質(zhì)體溶液采取磁力攪拌，磁力攪拌速度40r/min,攪拌5min,使其混合均勻。
[0059](6)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā):在55°C溫度下經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓蒸發(fā)，確保乙醇完全蒸完。
[0060](7)冷凍干燥:將上述經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得到材料經(jīng)避光冷凍干燥12個(gè)小時(shí)以上，制備粉末即可獲得馬齒莧多糖脂質(zhì)體，包封率不低于95.7%。
[0061]實(shí)施例三:馬齒莧多糖脂質(zhì)體制備工藝參數(shù)的確定與優(yōu)化
取0.lg/mL的實(shí)施例一制 備的馬齒覓多糖脂質(zhì)體溶液2mL, 3000r/min下離心5min,取上清液定容至10mL，用0.45 μ m微孔濾膜過(guò)濾，作為游離藥物測(cè)定液。取0.lg/mL的馬齒莧多糖脂質(zhì)體溶液2mL，稀釋至10mL，用0.45 μ m微孔濾膜過(guò)濾，作為總量測(cè)定液。分別精密量取上述2種測(cè)定液各2mL，于490nm處測(cè)定吸光度km。馬齒莧多糖脂質(zhì)體包封率按照以下公式計(jì)算:
包封率(％) =1-A游/A總X 100%
其中，A總為制劑中藥物總量，A游為制劑中游離藥物量。
[0062]壁材比對(duì)馬齒莧多糖脂質(zhì)體包封率的影響:在乙醇濃度為75%，甘露醇含量為2%的條件下，考察不同壁材比[m (卵磷脂):m(膽固醇)]對(duì)脂質(zhì)體包封率的影響，結(jié)果參見(jiàn)附圖2。
[0063]由附圖2可知，多糖脂質(zhì)體載量一定的情況下，在高濃度范圍內(nèi)，逐漸增大卵磷脂用量可提高脂質(zhì)體的包封率，當(dāng)進(jìn)一步增加卵磷脂比例時(shí)，包封率降低，這可能與脂質(zhì)體雙分子層包埋芯材機(jī)制有關(guān)，膽固醇用量相對(duì)較高時(shí)能夠增加脂質(zhì)體膜的剛性和致密度，水合過(guò)程中能增強(qiáng)脂質(zhì)體膜的穩(wěn)定性，提高包封率。所以，選用壁材比卵磷脂與膽固醇為1.8:I較為合適。
[0064]乙醇含量對(duì)脂質(zhì)體包封率的影響:選用壁材比卵磷脂與膽固醇為1.8:1，甘露醇含量為2%的條件下，不同乙醇含量對(duì)脂質(zhì)體包封率的影響，結(jié)果見(jiàn)附圖3。
[0065]由附圖3可知，提高乙醇濃度包封率逐漸增大，當(dāng)高于80%時(shí)脂質(zhì)體的包封率呈下降趨勢(shì)，可能是因?yàn)闈舛冗^(guò)高的乙醇會(huì)對(duì)卵磷脂和膽固醇造成破壞。因此，最適乙醇濃度為80%。
[0066]甘露醇含量對(duì)脂質(zhì)體包封率的影響:選用壁材比卵磷脂與膽固醇為1.8:1，乙醇濃度為80%的條件下，不同甘露醇含量對(duì)脂質(zhì)體包封率的影響，結(jié)果見(jiàn)附圖4。
[0067]由附圖4可知，甘露醇用量在5.0%時(shí)馬齒莧多糖脂質(zhì)體的包封率最高。當(dāng)用量低于5.0%時(shí)，不能很好地保護(hù)脂質(zhì)體使多糖在冷凍干燥過(guò)程中出現(xiàn)滲漏現(xiàn)象；含量高于
5.0%時(shí)，使脂質(zhì)體膜上形成孔洞，多糖滲漏，影響包封效果。綜合考慮，甘露醇最適使用量為
5.0%。
[0068]馬齒莧多糖脂質(zhì)體的制備響應(yīng)曲面優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果與分析
釆用統(tǒng)計(jì)軟件Minitab 15.0中的響應(yīng)曲面法，建立三因素三水平的Box-Behnken模型，以卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比(SPC/CH)、乙醇百分比、甘露醇的使用量比為影響因素，分別以Xp X2、X3表示。根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)自變量因素編碼及水平見(jiàn)表1。自變量的編碼值1、0、一 I分別代表自變量的高、中、低水平。包封率為響應(yīng)值，由Y表示。
[0069]表1三因素三水平中心組合試驗(yàn)方案及結(jié)果
運(yùn)行序I標(biāo)準(zhǔn)序I(X1)壁材比|(x2)乙醇含量/% I(X3)甘露醇含量/% I包封率/%
【權(quán)利要求】
1.一種提高免疫力的馬齒莧多糖脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，具體制備方法步驟如下: (1)選用主料為馬齒莧多糖，是將馬齒莧經(jīng)分離提純后的純度為84.31%的馬齒莧多糖，需在4°C下儲(chǔ)存?zhèn)溆?，輔料為卵磷脂和膽固醇、維生素C，選用卵磷脂和膽固醇作為壁材，脂藥比按照卵磷脂與馬齒莧多糖重量比計(jì)為2.5:1，壁材比按照卵磷脂與膽固醇重量比計(jì)為1.8:1，選用濃度為80%的乙醇作為油相的溶劑，馬齒莧多糖、卵磷脂與膽固醇作為油相的溶質(zhì)，其中，純度為84.31%的馬齒莧多糖的濃度為0.016g/ml，卵磷脂的濃度為 0.04g/ml,膽固醇的濃度為0.022g/ml,維生素C的濃度為0.022g/ml ； (2)油相的制備:將上述步驟制備的馬齒莧多糖、卵磷脂、膽固醇、維生素C溶解于上述步驟選用的濃度80%的乙醇中，在50~55°C水浴條件下至完全溶解； (3)水相的制備:油相與水相按照體積比計(jì)比例為2:1;水相由冷凍保護(hù)劑、乳化劑、乳化劑和溶劑組成，其中，冷凍保護(hù)劑采用甘露醇，乳化劑采用TWeen20，溶劑采用蒸餾水，添加甘露醇的含量為水相總量的5%，添加Tween20的含量為水相總量的5%，添加蒸餾水的含量為水相總量的90%，將冷凍保護(hù)劑甘露醇、乳化劑TWeen20加入蒸餾水混勻至溶解； (4)將步驟(2)制備的油相用注射器快速注入步驟(3)制備的水相中； (5)將上述步驟(4)制備的馬齒莧多糖脂質(zhì)體溶液采取磁力攪拌，磁力攪拌速度40r/min,攪拌5min,使其混合均勻； (6)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā):在55°C溫度下經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓蒸發(fā)，確保乙醇完全蒸完； (7)冷凍干燥:將上述經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得到材料經(jīng)避光冷凍干燥12個(gè)小時(shí)以上，制備粉末即可獲得馬齒莧多糖脂質(zhì)體，包封率不低于95.7%。
2.一種如權(quán)利要求1所述的馬齒莧多糖脂質(zhì)體的制備方法獲得的馬齒莧多糖脂質(zhì)體，其特征在于，制備的馬齒莧多糖脂質(zhì)體由油相和水相組成，油相與水相之比按照體積比計(jì)比例為2:1，油相由馬齒莧多糖、卵磷脂、膽固醇、維生素C和濃度80%的乙醇組成，選用濃度為8 O %的乙醇作為油相的溶劑，馬齒莧多糖、卵磷脂與膽固醇作為油相的溶質(zhì)，其中，純度為84.31%的馬齒莧多糖的濃度為0.016g/ml，卵磷脂的濃度為0.04g/ml，膽固醇的濃度為0.022g/ml，維生素C的濃度為0.022g/ml ;水相由冷凍保護(hù)劑、乳化劑、乳化劑和溶劑組成，其中，冷凍保護(hù)劑采用甘露醇，乳化劑采用TWeen20，溶劑采用蒸餾水，添加甘露醇的含量為水相總量的5%，添加Tween20的含量為水相總量的5%，添加蒸餾水的含量為水相總量的 90%ο
3.如權(quán)利要求2所述的馬齒莧多糖脂質(zhì)體在雙歧桿菌中應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求2所述的馬齒莧多糖脂質(zhì)體在乳酸菌中應(yīng)用。
5.如權(quán)利要求2所述的馬齒莧多糖脂質(zhì)體在制備酸奶中應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K47/10GK103520108SQ201310502273
【公開(kāi)日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年10月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月23日
【發(fā)明者】敬思群, 王俠 申請(qǐng)人:新疆源森康樂(lè)生物科技有限公司