新噬菌體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了具有針對(duì)葡萄球菌菌株和尤其MRSA的有效抗菌活性的噬菌體。還提供了包含所述噬菌體的藥物組合物以及使用包含所述噬菌體的組合物治療細(xì)菌性感染的方法。
【專利說(shuō)明】新喔菌體
發(fā)明領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種葡萄球菌噬菌體K突變體，其在野生型葡萄球菌噬菌體K (登錄號(hào):AY176327.1)的核苷酸序列的一個(gè)或多個(gè)選定區(qū)域內(nèi)包含一個(gè)或多個(gè)突變，涉及所述噬菌體在治療細(xì)菌性感染中的用途，涉及包含所述噬菌體的藥物組合物并且涉及使用包含所述噬菌體的組合物治療細(xì)菌性感染的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來(lái)，廣泛使用基于化學(xué)的抗生素(如青霉素或四環(huán)素)形式的抗細(xì)菌劑已經(jīng)導(dǎo)致抗生素耐藥細(xì)菌菌株大幅度增加。賦予抗生素耐藥性的突變或編碼抗生素耐藥性酶如青霉素酶的基因正在世界范圍內(nèi)在病原菌中變得日益常見(jiàn)。例如，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) (MRSA)細(xì)菌是一種日益常見(jiàn)形式的感染,經(jīng)常在醫(yī)院因其他原因而手術(shù)期間獲得。MRSA感染是使用常規(guī)抗生素極端難以治療的。
[0003]一種用抗生素治療細(xì)菌性感染的替代性方案是用稱作噬菌體的病毒感染細(xì)菌。這種“噬菌體治療”首先在二十世紀(jì)早期開(kāi)發(fā)，但是在二十世紀(jì)四十年代抗生素取得進(jìn)展后在西方很少使用。
[0004]噬菌體對(duì)某些細(xì)菌細(xì)胞類型具有特異性。它們不能感染更復(fù)雜生物的細(xì)胞，原因在于關(guān)鍵胞內(nèi)結(jié)構(gòu)和細(xì)胞表面組分的差異。大部分噬菌體具有使它們與其靶細(xì)菌的表面上特定分子結(jié)合成為可能的結(jié)構(gòu)物，如尾絲。病毒DNA(通常裝在噬菌體頭部?jī)?nèi))或一些噬菌體中的RNA隨后被注射(通常經(jīng)尾部)至宿主細(xì)胞中。在嚴(yán)格裂解性噬菌體的情況下，使用宿主細(xì)胞的胞內(nèi)機(jī)制，注 射的病毒DNA/RNA繼續(xù)指導(dǎo)噬菌體子代的產(chǎn)生。在細(xì)胞周期結(jié)束時(shí)，宿主細(xì)胞被裂解作用殺死。
[0005]葡萄球菌噬菌體K是多樣性肌尾噬菌體科(Myoviridae)的成員。O’Flaherty
S.等人(J.Bacter1l.(2004)，186 (9) 2862-2871)的論文描述了攜帶118個(gè)推定性可讀框(ORF)的葡萄球菌噬菌體K的DNA基因組的序列。噬菌體K先前已經(jīng)表征為抗-MRSA噬菌體。O’Flaherty S.等人(Appl.Environ.Microb1l.(2005)，71 (4) 1836-1842)在金黃色葡萄球菌的不同耐藥性菌株上研究噬菌體K。
[0006]W02009/044163描述一種抗細(xì)菌組合物，所述抗細(xì)菌組合物以足夠高的濃度包含噬菌體K和/或噬菌體P68以便在不處于細(xì)菌中的情況下誘導(dǎo)裂解。
[0007]耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)可以造成全身性感染或膿腫和潰瘍，尤其在患病、年老或免疫受損的患者中。它日益成為院內(nèi)死亡的主要原因或促成院內(nèi)死亡。MRSA可以在無(wú)任何明顯疾病癥狀的情況下定居在醫(yī)生或來(lái)訪者的鼻腔中。然而，這些細(xì)菌可以從人擴(kuò)散至人，包括擴(kuò)散至患者。因此，殺死細(xì)菌有助于預(yù)防本病。
[0008]醫(yī)院目前利用醇類洗手液以幫助防止MRSA傳播。然而，這類醇洗液經(jīng)常不適用于敏感的鼻腔襯層或皮膚破損區(qū)域。因此，需要產(chǎn)生適于殺死細(xì)菌，如金黃色葡萄球菌和尤其MRSA的組合物。
[0009]本發(fā)明的目的是提供針對(duì)葡萄球菌菌株和尤其MRSA提供有效抗菌活性的替代性噬菌體。
[0010]發(fā)明概述
[0011]根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供一種葡萄球菌噬菌體K突變體，其在與野生型葡萄球菌曬菌體K (登錄號(hào):AY176327.1)的核苷酸序列相對(duì)應(yīng)的以下一個(gè)或多個(gè)區(qū)域內(nèi)包含一個(gè)或多個(gè)突變，所述區(qū)域選自:
[0012]a) ORF18和0RF19之間的區(qū)域；和/或
[0013]b)0RF41和0RF42之間的區(qū)域；和/或
[0014]c)0RF68;和 / 或
[0015]d) 0RF86/88/90內(nèi)的重疊區(qū)域；和/或
[0016]e)0RF92;和 / 或
[0017]f)0RF93;和 / 或
[0018]g)0RF96;和 / 或
[0019]h)ORF100
[0020]根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)方面，提供如本文定義的用于治療細(xì)菌性感染的噬菌體。
[0021]根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)方面，提供一種包含如本文定義的噬菌體及其可藥用載體的藥物組合物。
[0022]根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)方面提供治療細(xì)菌性感染的方法，所述方法包括施用如本文定義的組合物至感染的表面。
[0023]附圖簡(jiǎn)述
[0024]圖1:顯示實(shí)施例2中比較4種噬菌體(葡萄球菌噬菌體K、’Fred’、’Fred*’和’Fred*710’)的DNA序列的簡(jiǎn)圖。
[0025]圖2:在噬菌體’Fred’的測(cè)序DNA中鑒定的可讀框。方括號(hào)中的編號(hào)表示等同的葡萄球菌噬菌體K ORF。
[0026]發(fā)明詳述
[0027]根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供一種葡萄球菌噬菌體K突變體，其在與野生型葡萄球菌曬菌體K (登錄號(hào):AY176327.1)的核苷酸序列相對(duì)應(yīng)的以下一個(gè)或多個(gè)區(qū)域內(nèi)包含一個(gè)或多個(gè)突變，所述區(qū)域選自:
[0028]a) ORF18和0RF19之間的區(qū)域；和/或
[0029]b) 0RF41和0RF42之間的區(qū)域；和/或
[0030]c)0RF68;和 / 或
[0031]d) 0RF86/88/90內(nèi)的重疊區(qū)域；和/或
[0032]e)0RF92;和 / 或
[0033]f)0RF93jP/*
[0034]g)0RF96;和 / 或
[0035]h) ORF100
[0036]本文中對(duì)“葡萄球菌噬菌體K”的稱謂指如O’ Flaherty S.等人(J.Bacter1l.(2004)，186(9)2862-2871)中所述的充分表征類型的噬菌體。這類稱謂包括等同術(shù)語(yǔ)如“葡萄球菌噬菌體K”或“噬菌體K”。噬菌體K是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)針對(duì)廣泛類型的葡萄球菌菌株具有活性的噬菌體。[0037]已經(jīng)令人驚訝地發(fā)現(xiàn)噬菌體K衍生物的形成揭示出對(duì)野生型噬菌體K基因組的特定突變可以產(chǎn)生范圍更廣范圍的抗微生物作用。本發(fā)明的噬菌體突變體因此提供以下優(yōu)點(diǎn):使用單一類型噬菌體治療給定細(xì)菌物種內(nèi)范圍更廣的細(xì)菌菌株。
[0038]本文中對(duì)“突變體”的稱謂指相對(duì)于野生型噬菌體具有不同基因型的噬菌體。這種突變體也可以導(dǎo)致表型差異。
[0039]本文中對(duì)“突變”的稱謂指基因組序列的變化?？梢园炊喾N方式改變DNA序列，如通過(guò)點(diǎn)突變、插入、缺失和復(fù)制改變。當(dāng)將一種堿基替換為另一種堿基時(shí)，點(diǎn)突變出現(xiàn)。例如，當(dāng)將嘌呤堿基替換為不同的嘌呤堿基(即腺嘌呤(A)替換為鳥嘌呤(G)或反之亦然)或?qū)⑧奏A基替換為不同的嘧啶堿基(即胸腺嘧啶(T)替換為胞嘧啶(C)或反之亦然)時(shí)，為轉(zhuǎn)換點(diǎn)突變。在另一個(gè)例子中，當(dāng)將嘌呤替換為嘧啶或反之亦然，如將A替換為T或C，將G替換為T或C，將T替換為A或G，或?qū)替換為A或G時(shí)，為顛換點(diǎn)突變。 [0040]突變可以自發(fā)地造成或被誘導(dǎo)，例如通過(guò)化學(xué)品、輻射或病毒性感染誘導(dǎo)。誘導(dǎo)突變的一種方式是通過(guò)使用致突變化學(xué)劑，如羥胺。
[0041]本文中對(duì)“0RF”或“可讀框”的稱謂指相同可讀框中起始密碼子和終止密碼子之間的核苷酸序列的一部分。終止密碼子是充當(dāng)停止翻譯的信號(hào)的核苷酸三聯(lián)體。這包括DNA核苷酸序列“TGA”、“TGG”和“TAG”。已經(jīng)鑒定噬菌體K具有118個(gè)推定性0RF。
[0042]在一個(gè)實(shí)施方案中，突變出現(xiàn)在野生型葡萄球菌噬菌體K (登錄號(hào):AY176327.1)的相應(yīng)核苷酸序列的0RF96內(nèi)。已經(jīng)在噬菌體K中鑒定0RF96編碼一種推定性主要尾蛋白。
[0043]在又一個(gè)實(shí)施方案中，突變是野生型葡萄球菌噬菌體K(登錄號(hào):AY176327.1)的相應(yīng)核苷酸序列的是C105975T點(diǎn)突變。
[0044]將認(rèn)可來(lái)自本文的點(diǎn)突變將按以下注釋提到:(在野生型噬菌體K基因組中的堿基)(位置)(在噬菌體K突變體中的堿基)。例如，C105975T描述一個(gè)在野生型噬菌體K基因組中第105975位置處的胞嘧啶堿基已經(jīng)以噬菌體K突變體中的一個(gè)胸腺嘧啶堿基替換。這種突變導(dǎo)致將丙氨酸替換為纈氨酸殘基。
[0045]在又一個(gè)實(shí)施方案中，噬菌體還包含以下一個(gè)或多個(gè)點(diǎn)突變:野生型葡萄球菌噬菌體 K (登錄號(hào):AY176327.1)的相應(yīng)核苷酸序列的 C18554T、G40894A、G78197A、G99388C、G102111A、T103720C 和 / 或 A109329G。
[0046]C18554T突變出現(xiàn)在0RF18和0RF19之間的區(qū)域內(nèi)，從而將纈氨酸替換為甲硫氨酸殘基。G40894A突變出現(xiàn)在0RF41和0RF42之間的區(qū)域內(nèi)，未預(yù)測(cè)到氨基酸變化。G78197A突變出現(xiàn)在0RF68內(nèi)，導(dǎo)致甘氨酸被替換為精氨酸殘基。G99388C突變出現(xiàn)在其中0RF86、0RF88和0RF90重疊的區(qū)域內(nèi)，未預(yù)測(cè)到氨基酸變化。G102111A突變出現(xiàn)在0RF92內(nèi)，導(dǎo)致甘氨酸被替換為精氨酸殘基。T103720C突變出現(xiàn)在0RF93內(nèi)并且導(dǎo)致沉默置換。最后，A109329G出現(xiàn)在0RF100內(nèi)，導(dǎo)致賴氨酸被替換為谷氨酸殘基。
[0047]在一個(gè)實(shí)施方案中，噬菌體包含以下一個(gè)或多個(gè)點(diǎn)突變:野生型葡萄球菌噬菌體 K(登錄號(hào):ΑΥ176327.1)的相應(yīng)核苷酸序列的 C18554T、G40894A、G78197A、G99388C、G102111A、T103720C、C105975T和/A109329G。因而，噬菌體包含這些突變中以任何組合的
1、2、3、4、5、6、7或8個(gè)突變。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，噬菌體包含以下點(diǎn)突變:野生型葡萄球菌噬菌體K (登錄號(hào):ΑΥ176327.1)的相應(yīng)核苷酸序列的C18554T、G40894A、G78197A、G99388C、G102111A、T103720C、C105975T和 A109329G。[0048]在一個(gè)實(shí)施方案中，噬菌體還在核苷酸序列內(nèi)包含其他突變。這類“其他突變”包括各種類型突變的任一種，例如，點(diǎn)突變、缺失、重復(fù)或插入。
[0049]在一個(gè)實(shí)施方案中，其他突變包含野生型葡萄球菌噬菌體K(登錄號(hào):AY176327.1)的相應(yīng)核苷酸序列的第116111位置處的插入。
[0050]本文中對(duì)“插入”的稱謂指其中添加一個(gè)或多個(gè)額外核苷酸堿基至核苷酸序列的遺傳突變?？梢詫⒕哂兄辽僖粋€(gè)核苷酸的區(qū)段添加至核苷酸序列中，如至少1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000 或至少 9000 個(gè)堿基長(zhǎng)度。
[0051 ] 在一個(gè)實(shí)施方案中，插入是至少9000個(gè)堿基對(duì)長(zhǎng)度。在又一個(gè)實(shí)施方案中，插入是9547個(gè)堿基對(duì)長(zhǎng)度。
[0052]根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)方面，提供以登錄號(hào):NCMB41894保藏的噬菌體(金黃色葡萄球菌噬菌體K*710在此描述為Fred*710，根據(jù)布達(dá)佩斯條約在2011年11月3日與登錄號(hào)NCMB41893下的合適葡萄球菌宿主細(xì)胞一起保藏)。
[0053]根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)方面，提供用于治療細(xì)菌性感染的噬菌體。
[0054]噬菌體用作細(xì)菌性感染治療是特別有利的，因?yàn)樗鼈兪亲晕覐?fù)制型的，單個(gè)噬菌體可以借助其復(fù)制能力作為殺死過(guò)程的重要部分，殺死成百萬(wàn)個(gè)宿主細(xì)菌的群體。通過(guò)殺死細(xì)菌，噬菌體單純地自我復(fù)制直至它們已經(jīng)從個(gè)體或環(huán)境消除這些細(xì)菌。只要感染存在，它們就繼續(xù)增殖并發(fā)展。
[0055]根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)方面，提供一種包含如本文描述的噬菌體及其可藥用載體的藥物組合物。
[0056]本發(fā)明的藥物組合物可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法產(chǎn)生和/或是可商業(yè)獲得的。藥物組合物可以處于洗劑、乳膏劑、油膏劑、糊劑、凝膠劑、泡沫劑或蒸汽的形式。這類形式特別適于局部施用劑。
[0057]在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包含其他噬菌體，如P68。包含這類噬菌體K和P68組合的藥物組合物可以根據(jù)W02009/044163中描述的方法制備。
[0058]在又一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物是局部施用劑。
[0059]本文中對(duì)“局部施用劑”的稱謂指可以施用至體表的藥物。許多細(xì)菌性感染，如MRSA，借助皮膚從人傳播至人；因此有利的是具有處于可以施用至體表(如皮膚)的藥物形式的藥物組合物。
[0060]局部施用劑可以增稠以形成特別有利的制劑，因?yàn)樗鼈凁じ接诜胖迷摬牧系钠つw區(qū)域，因此允許局限化高濃度的噬菌體引入特定區(qū)域。該制劑也可以包含以下一種或多種:水、防腐劑、活性表面活性劑、乳化劑、抗氧化物質(zhì)或溶劑。
[0061]在一個(gè)實(shí)施方案中，局部施用包括施用至哺乳動(dòng)物的鼻腔。
[0062]已經(jīng)發(fā)現(xiàn)某些細(xì)菌性感染，如MRSA，定居在鼻腔內(nèi)的粘膜表面上。目前由醫(yī)院使用的醇洗液經(jīng)常不適用于敏感的鼻腔襯層或皮膚破損區(qū)域。因此有利的是具有處于施用至鼻腔的局部施用劑形式的藥物組合物。
[0063]基于石蠟和基于羊毛脂的乳膏劑是本領(lǐng)域熟知的并且特別可用于施用產(chǎn)品至鼻腔。也可以使用其他增稠劑，如聚合物增稠劑。
[0064]在藥物組合物中使用噬菌體K具有其他優(yōu)點(diǎn)。噬菌體K借助細(xì)菌細(xì)胞壁中所含的大量磷壁酸識(shí)別并結(jié)合至革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。自二十世紀(jì)七十年代以來(lái)已知抵抗噬菌體K的金黃色葡萄球菌突變體缺少核糖醇磷壁酸(Shaw D.R.D.等人，J.B1l.Chem.(1970) 245 (19) 5101-5106)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)胞壁磷壁酸的缺少減少與上皮細(xì)胞的相互作用，因?yàn)榱妆谒釣榧?xì)菌結(jié)合至上皮細(xì)胞(如經(jīng)鼻細(xì)胞)所需(Weidenmaier C等人，Int.J.MedicalMicrob1l (2008) 298，505-513)。因此如果磷壁酸存在，噬菌體K應(yīng)當(dāng)與細(xì)菌結(jié)合。然而，如果細(xì)菌通過(guò)減少細(xì)胞壁中的磷壁酸突變成抵抗噬菌體K，則這應(yīng)當(dāng)降低細(xì)菌結(jié)合鼻細(xì)胞的能力并且因此有助于降低用噬菌體K治療后剩余的任何細(xì)菌的毒力(Xia，Guoqing等A , Wall Teichoic Acid-Dependent Adsorpt1n of Staphylococcal Siphovirus andMyovirus, Journal of Bacter1logy, 193 (15),第 4006_4009 頁(yè)，2011 年 8 月)。
[0065]在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包含如本文所述的噬菌體，所述噬菌體是葡萄球菌屬細(xì)菌的病原體。
[0066]本文中對(duì)“病原體”的稱謂指噬菌體能夠結(jié)合和感染的特定細(xì)菌。葡萄球菌已經(jīng)形成具有抗生素耐藥性的菌株，因此對(duì)能夠用抗生素替代品治療這些感染存在需要，如通過(guò)使用本發(fā)明的噬菌體。
[0067]葡萄球菌屬包括形成特征性“葡萄樣”簇集的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。
[0068]在又一個(gè)實(shí)施方案中，曬菌體是金黃色葡萄球菌的病原體。
[0069]在又一個(gè)實(shí)施方案中，曬菌體是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的病原體。MRSA是已經(jīng)變得抵抗甲氧西林和其他相關(guān)抗生素的金黃色葡萄球菌菌株。MRSA感染在其中患者特別易于感染的醫(yī)院和護(hù)理室中是特別令人擔(dān)憂的。在整個(gè)護(hù)理體系中推薦限制使用抗生素、有助于對(duì)抗抗生素耐藥性菌株形成，并且通過(guò)使用本發(fā)明的噬菌體治療提供了一種合適的替代。
[0070]根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)方面提供治療細(xì)菌性感染的方法，所述方法包括施用如本文所述的組合物至感染的表面。
[0071]在一個(gè)實(shí)施方案中，該表面是哺乳動(dòng)物的皮膚。在又一個(gè)實(shí)施方案中，該表面是粘膜或襯層，例如在哺乳動(dòng)物鼻腔或口腔內(nèi)的粘膜或襯層。
[0072]現(xiàn)在將僅以舉例方式，參考以下實(shí)施例描述本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。
[0073]實(shí)施例1:表征新噬菌體
[0074]a)三種噬菌體DNA的Roche454FLX文庫(kù)制備和測(cè)序
[0075]以下三份噬菌體DNA樣品用于表征研究中:
[0076]’ Fred’衍生自野生型葡萄球菌噬菌體K ；
[0077]通過(guò)選擇能夠在葡萄球菌噬菌體K對(duì)其無(wú)效的菌株上增殖的自發(fā)突變體，’ Fred*’衍生自’Fred’ ；并且
[0078]通過(guò)其在葡萄球菌噬菌體K對(duì)其無(wú)效的菌株上增殖的能力，’Fred*710’衍生自 ’ Fred*，。
[0079]接收每種噬菌體的約10 μ g DNA,沉淀在醇中。
[0080]根據(jù)制造 商的標(biāo)準(zhǔn)方案(Roche/454LifeSciences, Branford, CTOMO5,美國(guó))實(shí)施454FLX測(cè)序的文庫(kù)生成。例如，通過(guò)霧化成尺寸范圍400bp至900bp的片段，將高分子噬菌體DNA隨機(jī)剪切。將這些片段平端化并且通過(guò)連接，將454A和B連接物連同乳液PCR和測(cè)序所需的相應(yīng)MID (多重標(biāo)示符)添加至片段的末端。隨后通過(guò)熒光測(cè)定法測(cè)量所得片段文庫(kù)的濃度，將文庫(kù)以等量混合并且使用Roche/454Titanium化學(xué)，在GS FLX上的1/8微微量滴定平板(picotiterplate，PTP)上測(cè)序?？傆?jì)獲得105773個(gè)序列讀出，平均讀出長(zhǎng)度為349.29個(gè)核苷酸，總計(jì)36.9Mb序列數(shù)據(jù)。
[0081]b)序列裝配
[0082]隨后分選各個(gè)曬菌體的序列讀出并使用Roche/454Newbler軟件以默認(rèn)設(shè)置裝配(454Life Sciences Corporat1n，軟件發(fā)布 2.3 (091027_1459))。
[0083]表1中描述Newbler裝配的結(jié)果。
【權(quán)利要求】
1.一種葡萄球菌噬菌體K突變體，其在與野生型葡萄球菌噬菌體κ(登錄號(hào):ΑΥ176327.1)的核苷酸序列相對(duì)應(yīng)的以下一個(gè)或多個(gè)區(qū)域內(nèi)包含一個(gè)或多個(gè)突變，所述區(qū)域選自: a)ORF18和ORF19之間的區(qū)域；和/或 b)0RF41和0RF42之間的區(qū)域；和/或
c)0RF68 ;和 / 或 d)0RF86/88/90內(nèi)的重疊區(qū)域；和/或
e)0RF92 ;和 / 或
f)0RF93 ;和 / 或
g)0RF96 ;和 / 或
h)0RF100。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的噬菌體，其中所述突變出現(xiàn)在野生型葡萄球菌噬菌體K(登錄號(hào):AY176327.1)的相應(yīng)核苷酸序列的0RF96內(nèi)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的噬菌體，其中所述突變是野生型葡萄球菌噬菌體K(登錄號(hào):AY176327.1)的相應(yīng)核苷酸序列的C105975T點(diǎn)突變。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的噬菌體，其還包含以下一個(gè)或多個(gè)點(diǎn)突變:野生型葡萄球菌噬菌體 K (登錄號(hào):AY176327.1)的相應(yīng)核苷酸序列的 C18554T、G40894A、G78197A、G99388C、G102111A、T103720C 和 / 或 A109329G。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的噬菌體，其中所述突變包括以下一個(gè)或多個(gè)點(diǎn)突變:野生型葡萄球菌噬菌體K(登錄號(hào):AY176327.1)的相應(yīng)核苷酸序列的C18554T、G40894A、G78197A、G99388C、G102111A、T103720C、C105975T 和 /A109329G。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的噬菌體，其還在核苷酸序列內(nèi)包含其他突變。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的噬菌體，其中所述其他突變包括野生型葡萄球菌噬菌體K(登錄號(hào):AY176327.1)的相應(yīng)核苷酸序列的在第116111位置處的插入。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的噬菌體，其中所述插入是至少9000個(gè)堿基對(duì)長(zhǎng)度。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的噬菌體，其中所述插入是9547個(gè)堿基對(duì)長(zhǎng)度。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的噬菌體，以登錄號(hào):NCMB41894保藏。
11.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的噬菌體，用于治療細(xì)菌性感染。
12.藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的噬菌體及其可藥用載體。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的藥物組合物，其包含其他噬菌體。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物組合物，其中所述其他噬菌體是Ρ68。
15.根據(jù)權(quán)利要求12至14中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，所述藥物組合物為局部施用。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其中所述局部施用包括施用至哺乳動(dòng)物的鼻腔。
17.根據(jù)權(quán)利要求12至16中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述噬菌體是葡萄球菌屬(Staphylococcus)細(xì)菌的病原體。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的藥物組合物，其中所述噬菌體是金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的病原體。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的藥物組合物，其中所述噬菌體是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的病原體。
20.治療細(xì)菌性感染的方法，包括施用根據(jù)權(quán)利要求12至19中任一項(xiàng)所述的組合物至感染的表面。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述表面是哺乳動(dòng)物的皮膚。
22.根據(jù)權(quán)利要求 21所述的方法，其中所述表面是襯于哺乳動(dòng)物鼻腔內(nèi)的粘膜。
【文檔編號(hào)】A61P31/04GK104039955SQ201280054559
【公開(kāi)日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2012年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2011年11月7日
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