眼病的治療的制作方法
【專利摘要】公開了用于治療特征在于血管不穩(wěn)定性、血管滲漏和新血管形成的眼病或病況的方法，所述眼病或病況是例如糖尿病黃斑水腫、年齡相關(guān)黃斑水腫、脈絡(luò)膜新生血管化、糖尿病視網(wǎng)膜病變、創(chuàng)傷、眼缺血和葡萄膜炎。
【專利說明】眼病的治療
[0001] 相關(guān)申請的交叉引用
[0002] 本申請要求2011年10月13日提交的美國臨時申請系列No. 61/546, 708的優(yōu)先 權(quán)。將美國臨時申請系列No. 61/546, 708的完整內(nèi)容通過引用并入本文。
[0003] 通過引用并入電子地提交的材料
[0004] 通過引用將其整體并入本文的是與其同時提交的和如下鑒定的計(jì)算機(jī)可讀序列 表：一個于2012年10月12日12:42口111創(chuàng)建的名稱為"233106-331562_569_1^8^叩_ ST25· txt"的 92KB ASCII (文本）文件。
[0005] 領(lǐng)域
[0006] 用于治療特征在于血管不穩(wěn)定性、血管滲漏和新血管形成例如眼部水腫、眼部新 生血管形成、糖尿病黃斑水腫、年齡相關(guān)性黃斑變性、脈絡(luò)膜新生血管化、糖尿病視網(wǎng)膜病 變、視網(wǎng)膜靜脈阻塞（中央或分枝）、眼缺血、眼創(chuàng)傷、手術(shù)誘發(fā)的水腫和葡萄膜炎的眼疾病 或病況的方法。
[〇〇〇7] 背景
[0008] 眼睛包括幾個結(jié)構(gòu)和功能上不同的血管床，所述血管床提供對于為視覺的維持是 至關(guān)重要的屈光要素。這些血管床包括視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜血管系統(tǒng)，其分別提供視網(wǎng)膜的內(nèi) 部和外部部分，和位于角膜周圍的角膜緣血管系統(tǒng)。損害這些血管床的正常結(jié)構(gòu)或功能的 損傷和疾病是視覺障礙和失明的首要原因。例如，糖尿病視網(wǎng)膜病變是影響視網(wǎng)膜血管系 統(tǒng)的最常見疾病，并且是美國工作年齡群體中視覺喪失的首要原因。繼發(fā)于損傷或疾病的 角膜的血管化是另一類可導(dǎo)致視覺的嚴(yán)重?fù)p害的眼血管疾病。
[0009] "黃斑變性"是用于幾個疾病綜合征的任一個的一般醫(yī)學(xué)術(shù)語，其牽涉因視網(wǎng)膜中 央的黃斑區(qū)的細(xì)胞和組織變性而引起的視力的逐漸喪失或損害。黃斑變性通常被表征為兩 種類型：非滲出性（干型）或滲出性（濕型）之一。雖然兩種類型都是雙向和進(jìn)行性的，但 每一個類型可反映不同的病理過程。年齡相關(guān)性黃斑變性（AMD)的濕型是脈絡(luò)膜新生血管 化的最常見形式并且是老年人中失明的首要原因。AMD影響數(shù)百萬60歲以上的美國人，并 且是老年人中新的失明的首要原因。
[〇〇1〇] 脈絡(luò)膜新生血管膜（CNVM)是與眾多種視網(wǎng)膜疾病相關(guān)，但最常見地與年齡相關(guān) 性黃斑變性關(guān)聯(lián)的問題。對于CNVM，源自脈絡(luò)膜（正好在視網(wǎng)膜底下的富含血管的組織層） 的異常血管生長穿過視網(wǎng)膜層。這些新血管非常脆并且容易破裂，從而引起血液和液體在 視網(wǎng)膜的層內(nèi)混合。
[〇〇11] 糖尿病（糖尿?。╠iabetes mellitus))是因胰腺不能產(chǎn)生胰島素或不能使用產(chǎn) 生的胰島素而引起代謝病。最常見類型的糖尿病是1型糖尿病（通常稱為青少年糖尿?。?和2型糖尿?。ㄍǔ７Q為成人發(fā)病型糖尿病）。1型糖尿病由身體因喪失胰島素生成細(xì)胞 而不能產(chǎn)生胰島素引起，并且目前需要人注射胰島素。2型糖尿病通常由胰島素抗性（其中 細(xì)胞不能恰當(dāng)?shù)厥褂靡葝u素的病況）引起。2型糖尿病同樣地可具有胰島素缺陷的組分。
[0012] 糖尿病是造成許多疾病狀況的直接原因，包括眼的病況或疾病，包括為大多數(shù)發(fā) 達(dá)國家的視力喪失和失明的首要原因的糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR)和糖尿病黃斑水腫（DME)。 世界范圍內(nèi)數(shù)目不斷增加的糖尿病個體表明DR和DME在未來許多年將繼續(xù)為視力喪失和 相關(guān)功能障礙的主要貢獻(xiàn)者。
[0013] 糖尿病視網(wǎng)膜病變是糖尿病的并發(fā)生癥，其因?qū)ρ酆蟛浚ㄒ暰W(wǎng)膜）上的感光組織 的血管的破壞而引起。最初，糖尿病視網(wǎng)膜病變可以不產(chǎn)生癥狀或僅輕微的視覺問題。然 而，最后，糖尿病視網(wǎng)膜病變可導(dǎo)致失明。糖尿病視網(wǎng)膜病變可在具有1型糖尿病或2型糖 尿病的任何人中發(fā)生。
[0014] 在其最早階段，非增生性視網(wǎng)膜病變微動脈瘤在視網(wǎng)膜的很小的血管中發(fā)生。隨 著疾病進(jìn)展，更多的這些血管被破壞或阻塞，視網(wǎng)膜的這些區(qū)域向局部組織內(nèi)發(fā)送信號以 生長新的血管來提供營養(yǎng)。該階段稱為增生性視網(wǎng)膜病變。新血管沿著視網(wǎng)膜和沿著充滿 眼睛內(nèi)部的澄清的玻璃體凝膠表面生長。
[0015] 這些血管本身不引起病癥或視力喪失。然而，它們具有薄而脆的壁并且在沒有及 時治療的情況下，這些新血管可滲漏血液（全血或其組分），這可導(dǎo)致嚴(yán)重的視力喪失和甚 至失明。
[0016] 同樣地，液體可滲入黃斑的中央（眼的其中靈敏的向前直視時的視覺發(fā)生的部 分）。液體和相關(guān)蛋白質(zhì)開始沉積在黃斑上或黃斑下，從而引起患者的中央視覺被扭曲。該 病況稱為黃斑水腫。其可在糖尿病視網(wǎng)膜病變的任何階段發(fā)生，盡管其更可能隨著疾病進(jìn) 展而發(fā)生。約一半的具有增生性視網(wǎng)膜病變的人也具有黃斑水腫。
[0017] 葡萄膜炎是其中葡萄膜開始發(fā)炎的病況。眼呈現(xiàn)非常象網(wǎng)球的形狀，內(nèi)部中空，3 層不同的組織圍繞中央腔。最外面是鞏膜（眼的白膜），最里面是視網(wǎng)膜。鞏膜與視網(wǎng)膜 之間的中間層稱為葡萄膜。葡萄膜包含許多營養(yǎng)眼睛的血管。葡萄膜炎的并發(fā)癥包括青光 目艮、白內(nèi)障或新血管形成（新生血管形成）。
[0018] 滲出性（濕型）黃斑變性、糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病黃斑水腫、脈絡(luò)膜新生血 管膜、來自葡萄膜炎或眼創(chuàng)傷的并發(fā)癥的目前可獲的干預(yù)包括激光光凝療法、低劑量輻射 (遠(yuǎn)距放射療法）和新生血管膜的手術(shù)去除（玻璃體切除術(shù)）。激光療法具有有限的成功并 且選擇的最初對激光療法作出反應(yīng)的脈絡(luò)膜新生血管膜具有較高的疾病復(fù)發(fā)率。還存在因 激光療法引起的替在視力喪失。低劑量輻射已無效地用于誘導(dǎo)脈絡(luò)膜新生血管化的消退。 最近，血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)拮抗劑、雷珠單抗和阿柏西普已被批準(zhǔn)用于年齡相關(guān)性黃 斑變性、糖尿病黃斑水腫和視網(wǎng)膜靜脈阻塞（RV0)。
[0019] (RV0)是糖尿病視網(wǎng)膜病變后最常見的視網(wǎng)膜血管疾病。取決于被有效阻塞的視 網(wǎng)膜靜脈引流的區(qū)域，其被廣泛地分類為中央視網(wǎng)膜靜脈阻塞（CRV0)、半球形視網(wǎng)膜靜脈 阻塞（HRV0)或視網(wǎng)膜分枝靜脈阻塞（BRV0)。已觀察到這些疾病的每一種具有兩個亞型。 RV0的表現(xiàn)一般具有擁有由視網(wǎng)膜血管扭曲、視網(wǎng)膜出血（呈污點(diǎn)狀和呈火焰狀）、棉絮狀 滲出斑、視乳頭水腫和黃斑水腫組成的眼底發(fā)現(xiàn)的任意組合的可變無痛性視力喪失。在 CRV0中，將在眼底的所有4個象限中發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜出血，然而這些被嚴(yán)格限制于HRV0的上眼 底半球或下眼底半球。在BRV0中，出血主要被定位于通過視網(wǎng)膜靜脈的阻塞排放的區(qū)域。
[0020] 因此存在對治療特征在于血管不穩(wěn)定性、血管滲漏和新生血管形成的眼疾病的方 法的長期未滿足的重大需要。
[0021] 概述
[0022] 公開了結(jié)合人蛋白酪氨酸磷酸酶β (ΗΡΤΡβ)的細(xì)胞外部分并且抑制其的試劑。 還公開了用于治療特征在于血管不穩(wěn)定性、血管滲漏和新血管形成的眼疾病或病況（例如 眼部水腫、眼部新生血管形成、糖尿病黃斑水腫、年齡相關(guān)性黃斑變性、脈絡(luò)膜新生血管化、 糖尿病視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜靜脈阻塞（中央或分枝）、眼缺血、眼創(chuàng)傷、手術(shù)誘發(fā)的水腫和葡 萄膜炎）的方法。
[0023] 附圖簡述
[0024] 圖1.單克隆抗體R15E6識別內(nèi)皮細(xì)胞上的內(nèi)源ΗΡΤΡβ。（圖框A)利用對照抗 體（泳道1)、利用R15E6 (泳道2)或用抗-Tie2與抗-VEGFR2抗體（泳道3)的混合物免 疫沉淀內(nèi)皮細(xì)胞裂解物。通過SDS-PAGE分離免疫沉淀，將其轉(zhuǎn)移至PVDF膜，利用R15E6、 抗-Tie2和抗-VEGFR2抗體的混合物通過蛋白質(zhì)印跡探測。對于R15E6 (泳道2)而非對照 抗體（泳道1)，或抗-Tie2和抗-VEGFR2的混合物（泳道3)，看到與ΗΡΤΡ β -致的單個主 要高分子量條帶。對于R15E6(白色峰）或無第一抗體的對照（黑色峰），（圖框Β)將內(nèi)皮 細(xì)胞經(jīng)歷FACS分析。熒光的強(qiáng)烈偏移表明R15E6結(jié)合完整內(nèi)皮細(xì)胞表面上的ΗΡΤΡβ。
[0025] 圖2.單克隆抗體R15E6增強(qiáng)HUVEC中的Tie2受體活化。如和例4中所述測量人 內(nèi)皮細(xì)胞中的Tie2活化。R15E6劑量依賴性地增強(qiáng)基線和Angl-誘導(dǎo)的Tie2活化。
[0026] 圖3.是在一只眼中通過1 μ g或2 μ g的抗-VE-PTP細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域抗體治療的眼 對利用對照的另一只眼的類似治療的激光損傷后14天，C57BL/6小鼠的脈絡(luò)膜新生血管化 的平均面積的圖示。
[0027] 圖4.顯示在從P5至P12于75%的氧氣氛中密閉并且在P12當(dāng)小鼠返回至室內(nèi)空 氣時進(jìn)行抗-VE-PTP細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域抗體的玻璃體內(nèi)注射后，在P17天C57BL/6小鼠的視網(wǎng) 膜新血管形成平均面積（mm 2)。
[0028] 圖5顯示在媒介物或2 μ g的抗-VE-PTP細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域抗體的玻璃體內(nèi)注射后氧 誘發(fā)的視網(wǎng)膜病變模型中小鼠視網(wǎng)膜的代表性熒光顯微照片。
[0029] 圖6.顯示在從P5至P12于75%的氧氣氛中密閉，隨后在P12返回至室內(nèi)空氣，在 第P12、14和16天皮下施用lmg/kg的抗-VE-PTP細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域抗體后，第P17天的C57BL/6 小鼠的視網(wǎng)膜新血管形成的平均面積（mm 2)。
[0030] 圖7.顯示在從P5至P12于75%氧氣氛中密閉，隨后在P12返回至室內(nèi)空氣，在第 P12、14和16天皮下施用2mg/kg的抗-VE-PTP細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域抗體后，第P17天的C57BL/6 小鼠的視網(wǎng)膜新血管形成的平均面積（mm 2)。
[0031] 詳述
[0032] 一般定義
[0033] 在下面的本說明書和權(quán)利要求中，參考許多經(jīng)定義具有下列含義的術(shù)語：
[0034] 術(shù)語"ΗΡΤΡβ-Ε⑶結(jié)合劑"和"特異性結(jié)合劑"在本文中可互抑制使用，并且是 指特異性結(jié)合ΗΡΤΡβ及其變體和衍生物（如本文中定義的）的細(xì)胞外部分，抑制ΗΡΤΡβ 的Tie2去磷酸化酶活性的分子。
[0035] 如本文中所用，除非另有所指，否則"試劑"是批"ΗΡΤΡ β結(jié)合劑"。
[0036] "特異性結(jié)合ΗΡΤΡ β -Ε⑶"是指本發(fā)明的特異性結(jié)合劑識別ΗΡΤΡ β的細(xì)胞外結(jié)構(gòu) 域的表位并且以高于其它相關(guān)和/或不相關(guān)分子的結(jié)合親和力結(jié)合所述表位的能力。特異 性結(jié)合劑優(yōu)選結(jié)合蛋白質(zhì)和/或大分子的復(fù)雜混合物中的ΗΡΤΡβ。特異性結(jié)合劑優(yōu)選具 有對于ΗΡΤΡ β的選擇性。"選擇性的"意指相較于其它相關(guān)和/或不相關(guān)分子對于ΗΡΤΡ β 具有顯著更大的活性，而不是對于其它分子完全無活性的試劑。例如，選擇性試劑可顯示相 較于對其它相關(guān)或不相關(guān)分子對ΗΡΤΡ β的10倍、100倍或1000倍的選擇性。
[0037] 術(shù)語"抗-ΗΡΤΡ β -Ε⑶抗體"是指結(jié)合ΗΡΤΡ β的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的抗體或抗體片段。 抗-ΗΡΤΡ β -Ε⑶抗體是一種類型的本文中定義的ΗΡΤΡ β -Ε⑶結(jié)合劑。
[0038] 術(shù)語"VE-PTP"是指ΗΡΤΡβ的小鼠直系同源物。
[〇〇39] 除非另有所指，否則本文中所有百分比、比率和比例按重量計(jì)算。除非另有所指， 否則所有溫度以攝氏度（°c)表示。
[0040] 范圍在本文中可表達(dá)為從特定值至另一個特定值，終點(diǎn)包括在范圍內(nèi)。例如對于 從"lmg至50mg"的范圍，包括lmg和50mg的特定值。先行詞"約"表示值為近似的。例如， 對于從"約lmg至約50mg"的范圍，表示值為近似值。此外，當(dāng)表達(dá)這樣的范圍時，范圍包括 范圍"從lmg至50mg"。還應(yīng)理解，范圍的每一個的終點(diǎn)與另一個終點(diǎn)顯著相關(guān)，并且不依 賴于另一個終點(diǎn)。例如范圍"從lmg至50mg"包括范圍"從30mg至40mg"。
[0041] "有效量"意指對于改善或預(yù)防待治療的患者的障礙或延長存活期是有效的活性 劑或試劑的組合的量。有效量可根據(jù)本領(lǐng)域已知的因素例如待治療的人或動物的疾病狀 態(tài)、年齡、性別和體重而變化。雖然特定的給藥方案可描述于本文中的實(shí)施例中，但本領(lǐng)域 技術(shù)人員將理解，給藥方案可被改變來提供最佳治療反應(yīng)。例如，可每日施用若干分份劑量 或可按治療狀況的緊急性所顯示的，相應(yīng)地減少劑量。此外，可按達(dá)到治療量所必需的頻率 施用本公開內(nèi)容的組合物。治療有效量的測定完全在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)，特別 地根據(jù)本文中提供詳細(xì)公開內(nèi)容。
[0042] 如本文中所用，術(shù)語"抑制"或"抑制（inhibiting) "是指活性的統(tǒng)計(jì)上顯著且可 測量的減少，優(yōu)選相對于對照至少約10%的減少，更優(yōu)選約50%或更多的減少，更優(yōu)選約 80 %或更多的減少。
[〇〇43] 如本文中所用，術(shù)語"增加"或"增強(qiáng)"是指活性的顯著且可測量的增加，優(yōu)選相對 于對照至少約10 %的增加，更優(yōu)選約50 %或更多的增加，更優(yōu)選約80 %或更多的增加。
[0044] "HPTP貝塔"或"ΗΡΤΡβ "在本文中可互換使用，并且是人蛋白酪氨酸磷酸酶β的 縮寫。
[0045] 如本文中所用，"受試者"意指個體。因此，"受試者"可包括家養(yǎng)動物（例如，貓、 狗等）、家畜（例如，牛、馬、豬、綿羊、山羊等）、實(shí)驗(yàn)室動物（例如，小鼠、兔、大鼠、豚鼠等） 和鳥類。"受試者"還可包括哺乳動物例如靈長類動物或人。"受試者"和"患者"在本文中 可互換使用。優(yōu)選地受試者是人。
[0046] "減少"或該單詞的其它形式例如"減小"或"減少"意指事件或特征（例如，血管 滲漏）的下降。應(yīng)理解，這通常與與一些標(biāo)準(zhǔn)或表達(dá)的值相關(guān)，換句話說，其是相對的，但對 于提及的標(biāo)準(zhǔn)或相對值不總是必需的。
[0047] 術(shù)語"治療"、"醫(yī)治"、"醫(yī)療"等是指獲得期望的藥理學(xué)和/或生理學(xué)效應(yīng)例如緩 和宿主的疾病或障礙，和/或減少、抑制或消除與障礙（例如，眼部水腫）相關(guān)的特定特征 或事件。因此，術(shù)語"治療"包括，防止障礙在宿主中發(fā)生，特別地當(dāng)宿主易于獲得疾病時 但還未被診斷患有疾病時；抑制障礙；和/或逆轉(zhuǎn)障礙。在本發(fā)明的方法用于預(yù)防障礙的范 圍內(nèi)，應(yīng)理解術(shù)語"患者"不需要疾病狀態(tài)完全被阻止。相反地，如本文中所用，術(shù)語預(yù)防 是指本領(lǐng)域技術(shù)人員鑒定易患障礙的群體，以便可在疾病發(fā)作之前施用本發(fā)明的化合物的 能力。術(shù)語無意指疾病狀態(tài)被完全避免。
[0048] 除非另有所指，否則糖尿病視網(wǎng)膜病變包括非增生性視網(wǎng)膜病變和增生性視網(wǎng)膜 病變的所有階段。
[〇〇49] 在本說明書的整個描述和權(quán)利要求中，單詞"包含"及該單記號的其它形式例如 "包括"和"含有"意指包括但不限于以及無意排除，例如其它衍生物、組分、整體或步驟。
[0050] 如說明書和所附權(quán)利要求中所用，除非另外明確地指定，否則單數(shù)形式"一個/ 一 種（a)"、"一個/ 一種（an)"和"所指物（the)"包括復(fù)數(shù)所指物。因此，例如，"一種（a)組 合物"包括一種組合物或兩種或更多種這樣的組合物的混合物。
[0051] "任選的"或"任選地"意指隨后描述的事件或情況可以發(fā)生或可以不發(fā)生，并且描 述包括其中事件或情況發(fā)生的情況以及其中其不發(fā)生的情況。
[0052] "特異性結(jié)合ΗΡΤΡ β "是指本發(fā)明的試劑相較于針對其它相關(guān)和/或不相關(guān)分子 以更高的親和力識別和結(jié)合ΗΡΤΡβ的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的能力。試劑優(yōu)選具有對于ΗΡΤΡβ的 選擇性。"特異性的"意指試劑相較于針對其它相關(guān)和/或不相關(guān)分子具有顯著更大的針對 ΗΡΤΡ β的活性，而非對其它分子完全無活性。例如，選擇性試劑相較于針對其它相關(guān)或不相 關(guān)分子針對于ΗΡΤΡ β可顯示10倍、100倍或1000倍的選擇性。
[0053] 術(shù)語"表位"是指能夠被試劑在試劑的抗原結(jié)合區(qū)域的一個或多個上識別并且結(jié) 合的任何分子的任意部分。表位通常由不同的可識別的表面基團(tuán)例如氨基酸、糖、脂質(zhì)、磷 酰基或磺?；M成，并且在某些實(shí)施方案中，可具有特殊三維結(jié)構(gòu)特征，和/或特殊電荷特 征。如本文中所用，表位可以為構(gòu)象或線性的。
[0054] "肽體"是包含連接至至少一個肽的抗體Fc結(jié)構(gòu)域的分子。肽體的產(chǎn)生通常描述 于 TO2002/24782 中。
[0055] "片段"是指試劑的一部分。片段可保留期望的試劑的生物活性，可被認(rèn)為是試劑 本身。例如，其中氨基末端和/或羧基末端和/或內(nèi)部氨基酸殘基被缺失的截斷的蛋白質(zhì) 是蛋白質(zhì)的片段，免疫球蛋白分子的Fab是免疫球蛋白的片段。還可通過直接連接（例如， 肽或二硫鍵）或通過接頭將這樣的片段連接至另一個分子。
[〇〇56] "蛋白質(zhì)"在本文中可與肽和多肽互換使用。
[0057] 本發(fā)明的肽包括但不限于具有約3至75個氨基酸，或約5至約50個氨基酸，或約 10至約25個氨基酸的氨基酸序列。肽可以是天然存在的或人造氨基酸序列。
[0058] 本發(fā)明的蛋白質(zhì)可通過本領(lǐng)域公知的方法，例如使用標(biāo)準(zhǔn)直接技術(shù)例如通過固相 合成來獲得。如果基因序列是已知的或可推導(dǎo)時，則可通過標(biāo)準(zhǔn)重組法產(chǎn)生蛋白質(zhì)。蛋白 質(zhì)可以以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種方法來分離或純化。標(biāo)準(zhǔn)純化法包括利用鹽、電泳、層 析技術(shù)等的沉淀。
[0059] 可將試劑共價地或非共價地綴合至媒介物。術(shù)語"媒介物"是指阻止試劑的降解 和/或增加其半衰期、減小其毒性、減小其免疫原性或增加其生物活性的分子。示例性媒介 物包括但不限于免疫球蛋白的Fc結(jié)構(gòu)域和聚合物，例如：聚乙二醇（PEG)、多聚賴氨酸、葡 聚糖、脂質(zhì)、膽固醇基團(tuán)（例如類固醇）；碳水化合物或寡糖；或任何天然或合成蛋白質(zhì)或結(jié) 合補(bǔ)救受體的肽。
[0060] "衍生物"包括已以一些與插入、缺失或置換變體不同的方式化學(xué)修飾的那些結(jié)合 齊IJ。例如，當(dāng)結(jié)合劑是蛋白質(zhì)時，可用氨基例如NH2給羧基末端封端。
[0061] 在一些實(shí)施方案中，將一個或多個分子連接在一起形成試劑。例如，可通過接頭連 接抗體片段。一般而言，接頭的化學(xué)結(jié)構(gòu)不是至關(guān)重要的，因?yàn)槠渲饕米鏖g隔。在一個實(shí) 施方案中，接頭由通過肽鍵連接在一起的氨基酸組成。在另一個實(shí)施方案中，接頭是非肽接 頭例如非空間位阻的Ci-C；烷基。在另一個實(shí)施方案中，接頭是PEG接頭。還應(yīng)理解，接頭 可被插入分子上的許多位置中。
[〇〇62] 試劑的變體包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。如本文中所用，"變體"或"變型"意指具有 這樣的蛋白質(zhì)或核苷酸序列的試劑，所述蛋白質(zhì)或核苷酸序列與非變體試劑的蛋白質(zhì)或核 苷酸序列大體相似，并且共有非變體試劑的類似活性?？梢砸愿鞣N方式改變蛋白質(zhì)或核苷 酸序列以產(chǎn)生本發(fā)明包括的變體，包括置換、缺失、截斷、插入和其它修飾。用于這樣的操作 的方法在本領(lǐng)域是公知的。參見，例如，Current Protocols in Molecular Biology (和最近 的資料）Ausubel 等人編輯（1996)，John Wiley and Sons，New York :Methods in Molecular Biology，第 182 卷，In vitro Mutagenesis Protocols，第 2 版，Barman 編輯（2002)，Humana Press，以及本文中引用的參考資料。例如，變體包括其中將氨基酸殘基插入結(jié)合劑的已知 氨基酸序列，從所述氨基酸序列缺失氨基酸殘基，和/或?qū)被釟埢脫Q進(jìn)入所述氨基 酸序列的肽和多肽。在一個實(shí)施方案中，氨基酸的置換是保守的，因?yàn)槠渥畹拖薅鹊馗淖冏?體的生物化學(xué)性質(zhì)。在其它實(shí)施方案中，變體可以是全長蛋白質(zhì)的活性片段、化學(xué)修飾蛋白 質(zhì)、通過添加親和或附加表位、或熒光或其它標(biāo)記部分修飾的蛋白質(zhì)，無論是通過蛋白質(zhì)的 體內(nèi)或體外酶促處理，通過化學(xué)修飾還是通過使用修飾氨基酸進(jìn)行的蛋白質(zhì)合成獲得的。 [〇〇63] 本文中還涉及融合蛋白。通過使用已知方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠制備本發(fā)明 的蛋白質(zhì)的融合蛋白；即，盡管與天然形式不同，但可以是有用的。例如，融合伴侶可以是信 號（或前導(dǎo)）多肽序列，其可共翻譯地或翻譯后地指導(dǎo)蛋白質(zhì)從其合成位置至另一位置的 轉(zhuǎn)移（例如，酵母α因子前導(dǎo)序列）?；蛘?，其可被添加來促進(jìn)本發(fā)明的純化或鑒定（例 如，多聚-His、Flag肽或熒光蛋白）。
[0064] 標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可用于重組DNA、寡核苷酸合成以及組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化（例如，電穿孔、月旨 轉(zhuǎn)染）?？砂凑罩圃焐痰恼f明書或如本領(lǐng)域中通常實(shí)現(xiàn)的或如本文中所描述的，進(jìn)行酶促 反應(yīng)和純化技術(shù)。通常按照本領(lǐng)域中已知的和在整個本說明書中引用和論述的各種一般 和更專門的參考資料中所描述的常規(guī)方法進(jìn)行技術(shù)和方法。除非提供具體定義，否則與本 文中描述的分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)和醫(yī)學(xué)及藥物化學(xué)結(jié)合使用的命名法以及所述分析化 學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)和醫(yī)學(xué)及藥物化學(xué)的實(shí)驗(yàn)室方法和技術(shù)是本領(lǐng)域中已知的和通常使用的 命名法以及實(shí)驗(yàn)室方法和技術(shù)。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可用于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、配制、遞送 以及患者的治療。
[0065] 序列表
[0066] 表 1.
【權(quán)利要求】
1. 一種用于治療或防止眼障礙的方法，包括給受試者施用包含有效量的ΗΡΤΡ β-Era 結(jié)合劑或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物還包含藥學(xué)上可接受的載體。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的方法，其中所述眼障礙是眼部新生血管形成、眼 部水腫、視網(wǎng)膜水腫、視網(wǎng)膜新生血管形成、糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病黃斑水腫、年齡相關(guān) 性黃斑變性、脈絡(luò)膜新生血管化、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、視網(wǎng)膜分枝靜脈阻塞、眼創(chuàng)傷、手術(shù) 誘發(fā)的水腫、手術(shù)誘發(fā)的新生血管形成、囊樣黃斑水腫、眼缺血、非增生性視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng) 膜血管瘤樣增生、黃斑毛細(xì)血管擴(kuò)張或葡萄膜炎。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述眼障礙是視網(wǎng)膜水腫。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述眼障礙是視網(wǎng)膜新生血管形成。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述眼障礙是糖尿病視網(wǎng)膜病變。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述眼障礙是糖尿病黃斑水腫。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述ΗΡΤΡβ-ECD結(jié)合劑是結(jié)合 ΗΡΤΡβ的細(xì)胞外部分的抗體、蛋白質(zhì)、肽、適體、肽體、adnectin或核酸。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述ΗΡΤΡ β -ECD結(jié)合劑是單克隆抗 體或其抗原結(jié)合片段，或多克隆抗體或其抗原結(jié)合片段。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述ΗΡΤΡ β -ECD結(jié)合劑是單克隆抗體或其抗原 結(jié)合片段。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述ΗΡΤΡβ-ECD結(jié)合劑是：由雜 交瘤細(xì)胞系A(chǔ)TCC No. ΡΤΑ-7680產(chǎn)生的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述ΗΡΤΡ β -ECD結(jié)合劑具有與由 雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)TCC No. ΡΤΑ-7680產(chǎn)生的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段的生物特征相同或 基本上相同的生物特征。
13. 根據(jù)權(quán)利要求9至12中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述ΗΡΤΡ β -ECD結(jié)合劑是抗體的 抗原結(jié)合片段，其中所述抗原結(jié)合片段是：F(ab' )2、Fab、Fab的二聚體、Fv、Fv的二聚體或 scFv的二聚體。
14. 根據(jù)權(quán)利要求9至12中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述ΗΡΤΡ β -ECD結(jié)合劑是抗體的 抗原結(jié)合片段，其中所述抗原結(jié)合片段為F(at/ )2、Fab的二聚體、Fv的二聚體或scFv的 二聚體。
15. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述ΗΡΤΡ β-ECD結(jié)合劑是蛋白質(zhì)、肽、適體、肽 體、核酸或adnectin。
16. 根據(jù)權(quán)利要求1至15中任一項(xiàng)所述的方法，其中給所述受試者施用的ΗΡΤΡ β -ECD 結(jié)合劑或其藥學(xué)上可接受的鹽的劑量為按受試者的重量計(jì)約〇. 〇lmg/kg至約500mg/kg。
17. 根據(jù)權(quán)利要求1至15中任一項(xiàng)所述的方法，其中給受試者施用的ΗΡΤΡ β -ECD結(jié)合 劑或其藥學(xué)上可接受的鹽的劑量為按受試者的重量計(jì)約〇. lmg/kg至約10mg/kg。
18. 根據(jù)權(quán)利要求16或權(quán)利要求17所述的方法，其中每日1次、每周3次、每周2次、 每周1次、每月3次、每月2次、每月1次和每二月1次施用劑量。
19. 根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一項(xiàng)所述的方法，其中將所述ΗΡΤΡ β -E⑶結(jié)合劑綴合至 媒介物。
20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述媒介物是PEG。
21. 根據(jù)權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所述的方法，其中通過眼內(nèi)注射施用所述 ΗΡΤΡβ -ECD 結(jié)合劑。
22. 根據(jù)權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所述的方法，其中通過皮下注射施用所述 ΗΡΤΡβ -ECD 結(jié)合劑。
23. 根據(jù)權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所述的方法，其中通過靜脈內(nèi)注射施用所述 ΗΡΤΡβ -ECD 結(jié)合劑。
【文檔編號】A61K39/395GK104066448SQ201280054482
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2012年10月15日 優(yōu)先權(quán)日:2011年10月13日
【發(fā)明者】K.彼得斯, R.沙爾維茨 申請人:阿爾皮奧治療學(xué)股份有限公司