用于代謝病癥和疾病治療的組合物、應(yīng)用和方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及具有一種或多種活性（如葡萄糖降低活性）的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19（FGF19）的變體和融合體、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21（FGF21）的變體和融合體、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19（FGF19）和/或成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21（FGF21）的融合體，以及成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19（FGF19）和/或成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21（FGF21）蛋白質(zhì)和肽序列（和擬肽）的變體或融合體，和用于高血糖及其他病癥的治療的方法和在所述治療中的應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】用于代謝病癥和疾病治療的組合物、應(yīng)用和方法
[0001]相關(guān)申請(qǐng)
[0002]本專利申請(qǐng)主張2011年7月I日提交的專利申請(qǐng)序列號(hào)第61/504，128號(hào)和2011年8月4日提交的專利申請(qǐng)序列號(hào)第61/515，126號(hào)的優(yōu)先權(quán)，以上兩篇專利申請(qǐng)以其全部?jī)?nèi)容明確地作為參考并入本文。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003]本發(fā)明涉及具有葡萄糖降低活性的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19(FGF19)蛋白和肽序列(和擬肽)的變體和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19 (FGF19)和/或成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21 (FGF21)蛋白和肽序列(和擬肽)的融合體，以及成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19 (FGF19)和/或成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21 (FGF21)蛋白和肽序列(和擬肽)的融合體的變體，及其用于高血糖及其他病癥的治療的方法和在所述治療中的使用。
[0004]引言
[0005]糖尿病是由胰島素產(chǎn)生缺乏(I型)或者胰島素耐受或來(lái)自胰腺β細(xì)胞的胰島素產(chǎn)生不足(2型)所引起的衰竭性代謝疾病。β_細(xì)胞是產(chǎn)生和儲(chǔ)存胰島素以用于餐后釋放的?；瘍?nèi)分泌細(xì)胞。胰島素是有利于葡萄糖從血液向有需要的組織轉(zhuǎn)移的激素。糖尿病患者必須經(jīng)常監(jiān)控血糖水平并且多數(shù)患者需要每日注射多次胰島素以存活。然而，通過(guò)注射胰島素，這些患者很少能達(dá)到理想的葡萄糖水平(Turner，R.C.等人，JAMA281:2005 (1999))。此外，延長(zhǎng)的胰島素水平提高可以導(dǎo)致不利的副作用，如低血糖休克和身體對(duì)胰島素反應(yīng)的敏感性降低。因此，糖尿病患者仍會(huì)發(fā)展出長(zhǎng)期并發(fā)癥，如心血管疾病、腎病、 失明、神經(jīng)損傷和傷口愈合病癥(英國(guó)遠(yuǎn)景糖尿病研究(UK ProspectiveDiabetes Study, UKPDS)小組，Lancet352:837 (1998))。
[0006]已提議將肥胖癥治療手術(shù)作為糖尿病可能的治療。已假定手術(shù)后腸激素分泌的變化導(dǎo)致糖尿病病癥的改變。潛在的分子機(jī)制尚有待闡明，盡管已推測(cè)高血糖素樣肽I(GLP-1)作為可能的候選(Rubino, F.Diabetes Care32Suppl2: S368 (2009) )。FGF19 在遠(yuǎn)端小腸中高度表達(dá)，并且FGF19的轉(zhuǎn)基因過(guò)表達(dá)改善了葡萄糖的體內(nèi)平衡(Tomlinson, E.Endocrinologyl43 (5): 1741-7 (2002))。人FGF19的血清水平在胃旁路手術(shù)后升高。FGF19表達(dá)和分泌的提高可以至少部分解釋手術(shù)后所經(jīng)受的糖尿病緩解。
[0007]因此，需要人高血糖病癥(如糖尿病、前期糖尿病、胰島素抵抗、高胰島素血癥、葡萄糖耐受不良或代謝綜合征)以及與葡萄糖水平升高有關(guān)的其他病癥和疾病的替代治療。本發(fā)明滿足了該需要并提供了相關(guān)優(yōu)勢(shì)。
[0008]發(fā)明概述
[0009]本發(fā)明部分基于具有一種或多種活性(如葡萄糖降低活性)的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19 (FGF19)肽序列的變體、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19 (FGF19)和/或成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21 (FGF21)肽序列的融合體以及成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19 (FGF19)和/或成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21 (FGF21)肽序列的融合體(嵌合體)的變體。FGF19和/或FGF21肽序列的這些變體和融合體(嵌合體)包括不提高或誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌(HCC)形成或HCC腫瘤發(fā)生的序列。FGF19和/或FGF21肽序列的這些變體和融合體(嵌合體)還包括不誘導(dǎo)脂肪輪廓顯著提高或增加的序列。
[0010]在一種實(shí)施方式中，嵌合肽序列包括或由以下部分組成:具有至少7個(gè)氨基酸殘基的N末端區(qū)域，具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置的N末端區(qū)域，其中N末端區(qū)域具有DSSPL或DASPH序列；和具有FGF19部分的C末端區(qū)域，其中所述C末端區(qū)域具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置，其中所述C末端區(qū)域包括FGF19 (WGDPIRLRHLYTSG)的氨基酸殘基16-29，并且其中W殘基對(duì)應(yīng)于C末端區(qū)域的第一氨基酸位置。
[0011]在另一種實(shí)施方式中，嵌合肽序列包括或由以下部分組成:具有FGF21部分的N末端區(qū)域，其中所述N末端區(qū)域具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置，其中所述N末端區(qū)域具有GQV序列，并且其中所述V殘基對(duì)應(yīng)于N末端區(qū)域的最后氨基酸位置；和包括FGF19部分的C末端區(qū)域，所述C末端區(qū)域具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置，其中所述C末端區(qū)域包括FGF19 (RLRHLYTSG)的氨基酸殘基21-29，并且其中R殘基對(duì)應(yīng)于C末端區(qū)域的第一位置。
[0012]在其他實(shí)施方式中，嵌合肽序列包括或由任何以下部分組成:包含SEQIDN0:100[FGF21]的部分的N末端區(qū)域，其中所述N末端區(qū)域具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置，其中所述N末端區(qū)域包含SEQ ID N0:100[FGF21]的至少5個(gè)(或更多個(gè))連續(xù)的氨基酸，其包括氨基酸殘基GQV，并且其中所述V殘基對(duì)應(yīng)于N末端區(qū)域的最后氨基酸位置；和包含SEQ ID NO:99 [FGF19]的一部分的C末端區(qū)域，所述C末端區(qū)域具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置，其中所述C末端區(qū)域包含SEQ ID NO:99[FGF19] ,RLRHLYTSG，的氨基酸殘基21-29，并且其中R殘基對(duì)應(yīng)于C末端區(qū)域的第一位置。在具體的方面，N末端區(qū)域包含SEQ ID N0:100[FGF21]的至少6個(gè)連續(xù)的氨基酸(或更多個(gè)，例如，7、8、9、10、11、12、
13、14、15、16、17、18、19、20、20-25、25-30、30-40、40-50、50-75、75-100 個(gè)連續(xù)的氨基酸)，所述SEQ ID N0:100[FGF21]包括氨基酸殘基GQV。
[0013]在其他實(shí)施方式中，肽序列包括或由任何以下部分組成:與參照或野生型FGF19相比，具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、插入或缺失的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19 (FGF19)序列變體；與參照或野生型FGF21相比，具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、插入或缺失的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21 (FGF21)序列變體；融合至FGF21序列的部分的FGF19序列的部分；或融合至FGF21序列的部分的FGF19序列的部分，其中與參照或野生型FGF19和/或FGF21相比，F(xiàn)GF19和/或FGF21序列部分具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、插入或缺失。
[0014]在其他實(shí)施方式中，肽序列或嵌合肽序列包括或由以下部分組成:融合至SEQ IDN0:99[FGF19]的羧基末端氨基酸21-194的SEQ ID NO: 100[FGF21]的氨基末端氨基酸1-16，或者所述肽序列具有融合至SEQ ID NO: 100 [FGF21]的羧基末端氨基酸147-181的SEQ ID N0:99[FGF19]的氨基末端氨基酸1-147 (M41 )，或者所述肽序列具有融合至SEQID N0:100[FGF21]的羧基末端氨基酸17-181的SEQ ID N0:99[FGF19]的氨基末端氨基酸1-20(M44)，或者所述肽序列具有融合至SEQ ID N0:99[FGF19]的羧基末端氨基酸148-194的SEQ ID N0:100[FGF21]的氨基末端氨基酸1-146 (M45)，或者所述肽序列具有SEQ IDN0:99[FGF19]的氨基末端氨基酸1-20，其融合至SEQ ID NO: 100[FGF21]的內(nèi)部氨基酸
17-146，其融合至SEQ ID N0:99[FGF19]的羧基末端氨基酸148-194的(M46)。
[0015]在其他實(shí)施方式中，肽序列或嵌合肽序列具有對(duì)應(yīng)于SEQ ID N0:99[FGF19]的氨基酸16-20的WGDPI序列的WGDPI序列基序，或者具有對(duì)應(yīng)于FGF19的氨基酸16-20的FGF19WGDPI序列的取代、突變或缺失的WGDPI序列，或者WGDPI序列基序具有一個(gè)或多個(gè)取代、突變或缺失的氨基酸；或者其不同于具有取代FGF19在氨基酸16-20的WGDPI序列的GQV,⑶1、WGP1、WGDPV, WGD1、⑶P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA, WDP1、WGD1、WGDP或FGDPI中任一種的FGF19變體序列。[0016]在其他實(shí)施方式中，肽序列或嵌合肽序列具有包括或由氨基酸殘基VHYG組成的N末端區(qū)域，其中所述N末端區(qū)域包含氨基酸殘基DASPHVHYG，或其中所述N末端區(qū)域包含氨基酸殘基DSSPLVHYG，或其中所述N末端區(qū)域包含氨基酸殘基DSSPLLQ，或其中所述N末端區(qū)域包含氨基酸殘基DSSPLLQFGGQV。在具體的方面，G對(duì)應(yīng)于N末端區(qū)域的最后位置，或Q殘基是N末端區(qū)域的最后氨基酸位置，或V殘基對(duì)應(yīng)于N末端區(qū)域的最后位置。
[0017]在其他實(shí)施方式中，肽序列或嵌合肽序列具有包括或由RHPIP組成的N末端區(qū)域，其中R是N末端區(qū)域的第一氨基酸位置；或者HPIP(例如，其中HPIP是N末端區(qū)域的前4個(gè)氨基酸殘基)，其中H是N末端區(qū)域的第一氨基酸位置；或者RPLAF，其中R是N末端區(qū)域的第一氨基酸位置；或者PLAF，其中P是N末端區(qū)域的第一氨基酸位置；或者R，其中R是N末端區(qū)域的第一氨基酸位置，或者在N末端區(qū)域具有以下序列中的任一項(xiàng):MDSSPL、MSDSSPL、SDSSPL、MSSPL 或者 SSPL。
[0018]在其他實(shí)施方式中，肽序列或嵌合肽序列在N末端區(qū)域的第一位置具有“Μ”殘基、“R”殘基、“S”殘基、“H”殘基、“P”殘基、“L”殘基或“D”殘基。在替代性實(shí)施方式中，肽序列或嵌合肽序列在N末端區(qū)域的第一氨基酸位置不具有“Μ”殘基或“R”殘基。
[0019]在其他實(shí)施方式中，肽序列或嵌合肽序列在N末端區(qū)域的第一和第二位置具有MR序列，或在N末端區(qū)域的第一和第二位置具有RM序列，或在N末端區(qū)域的第一和第二位置具有RD序列，或在N末端區(qū)域的第一和第二位置具有DS序列，或在N末端區(qū)域的第一和第二位置具有MD序列，或在N末端區(qū)域的第一和第二位置具有MS序列，或在N末端區(qū)域的第一至第三位置具有MDS序列，或在N末端區(qū)域的第一至第三位置具有RDS序列，或在N末端區(qū)域的第一至第三位置具有MSD序列，或在N末端區(qū)域的第一至第三位置具有MSS序列，或在N末端區(qū)域的第一至第三位置具有DSS序列，或在N末端區(qū)域的第一至第四位置具有RDSS序列，或在N末端區(qū)域的第一至第四位置具有MDSS序列，或在N末端區(qū)域的第一至第五位置具有MRDSS序列，或在N末端區(qū)域的第一至第五位置具有MSSPL序列，或在N末端區(qū)域的第一至第六位置具有MDSSPL序列，或在N末端區(qū)域的第一至第七位置具有MSDSSPL序列。
[0020]在其他實(shí)施方式中，肽序列或嵌合肽序列在C-末端具有SEQ ID N0:99[FGF19]的氨基酸殘基30-194的添加，從而導(dǎo)致產(chǎn)生了在對(duì)應(yīng)于SEQ ID N0:99[FGF19]的約殘基194的C末端區(qū)域的最后位置的嵌合多肽。在其他實(shí)施方式中，嵌合肽序列或肽序列包含F(xiàn)GF19序列(例如，SEQ ID N0:99)的全部或部分，其位于所述肽的C末端，或者其中氨基末端“R”殘基從所述肽上缺失。
[0021]在更具體的實(shí)施方式中，嵌合肽序列或肽序列包括M1-M98變體肽序列中的任一種或M1-M98變體肽序列中任一種的子序列或片段，或者由其組成。
[0022]在其他具體的實(shí)施方式中，嵌合肽序列或肽序列具有長(zhǎng)度約20至約200個(gè)氨基酸殘基的N末端或C末端區(qū)域。在其他具體的實(shí)施方式中，嵌合肽序列或肽序列具有至少一個(gè)氨基酸缺失。在其他具體的實(shí)施方式中，嵌合肽序列或肽序列，或其子序列或片段從氨基末端、羧基末端或內(nèi)部具有 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20 或更多個(gè)氨基酸缺失。在具體的非限制性方面，氨基酸取代或缺失位于FGF19(AGPHVHYGWGDPI)的氨基酸位置8-20的任何位置處。
[0023]在更具體的實(shí)施方式中，嵌合肽序列或肽序列包括約5至10、10至20、20至30、30至40、40至50、60至70、70至80、80至90、90至100個(gè)或更多個(gè)氨基酸的氨基酸序列或由其組成。在更具體的實(shí)施方式中，嵌合肽序列或肽序列包括FGF19或FGF21的約5至10、10至 20、20 至 30、30 至 40、40 至 50、50 至 60、60 至 70、70 至 80、80 至 90、90 至 100 個(gè)或更多
個(gè)氨基酸的氨基酸序列或由其組成。
[0024]在其他具體的實(shí)施方式中，嵌合肽序列和肽序列具有具體的功能或活性。在一個(gè)方面，嵌合肽序列或肽序列維持或提高FGFR4介導(dǎo)的活性。在其他方面，嵌合肽序列或肽序列結(jié)合至成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4 (FGFR4)或激活FGFR4，或者不能可檢測(cè)地結(jié)合至成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4 (FGFR4)或激活FGFR4，或者以小于、相當(dāng)于或大于FGF19對(duì)FGFR4的結(jié)合親合力的親合力結(jié)合至FGFR4，或者以小于、相當(dāng)于或大于FGF19激活FGFR4的程度或量激活FGFR4。在其他方面，嵌合肽序列或肽序列與FGF19或在FGF19的氨基酸16-20處具有取代 WGDPI 序列的 GQV、⑶1、WGP1、WGDPV, WGD1、⑶P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA、WDP1、WGD1、WGDP或FGDPI的任一種的FGF19變體序列相比，具有降低的肝細(xì)胞癌(HCC)形成，和/或與FGF19或在FGF19的氨基酸16-20處具有取代WGDPI序列的 GQV、⑶1、WGP1、WGDPV, WGD1、⑶P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA,WDP1、WGD1、WGDP或FGDPI的任一種的FGF19變體序列相比，具有較大的葡萄糖降低活性，和/或與FGF19或在FGF19的氨基 酸16-20處具有取代WGDPI序列的GQV、⑶1、WGP1、WGDPV、WGD1、⑶P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA、WDP1、WGD1、WGDP 或 FGDPI 的任一種的FGF19變體序列相比，具有較低的脂質(zhì)增加活性，和/或與FGF19或在FGF19的氨基酸 16-20 處具有取代 WGDPI 序列的 GQV、⑶1、WGP1、WGDPV, WGD1、⑶P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA, WDP1、WGD1、WGDP 或 FGDPI 的任一種的 FGF19 變體序列相比，具有較低的甘油三酯、膽固醇、非HDL或HDL提高活性，和/或與FGF21相比具有較低的瘦肉(lean mass)減少活性。這些功能和活性可以在(例如)db/db小鼠中體外或體內(nèi)確定。
[0025]在其他實(shí)施方式中，嵌合肽序列和肽序列是分離或純化的，和/或嵌合肽序列和肽序列可以包括于組合物中。在一種實(shí)施方式中，嵌合肽序列或肽序列包括于藥物組合物中。這些組合物包括失活或其他活性成分的組合。在一種實(shí)施方式中，組合物(如藥物組合物)包括嵌合肽序列或肽序列和葡萄糖降低劑。
[0026]在其他實(shí)施方式中，提供了編碼嵌合肽序列或肽序列的核酸分子。這些分子還可以包括以可操作連接的表達(dá)控制元件，其使得編碼所述肽的核酸分子體外、在細(xì)胞中或體內(nèi)表達(dá)，或者包括包含所述核酸分子的載體(例如，病毒載體)。還提供了表達(dá)嵌合肽序列和肽序列的轉(zhuǎn)化的和宿主細(xì)胞。
[0027]還提供了包括任何嵌合肽序列或肽序列的施用或遞送的使用和治療方法。在具體的實(shí)施方式中，受試者的使用或治療方法包括以治療疾病或病癥有效的量施用本發(fā)明的嵌合肽或者肽序列至受試者，如患有通過(guò)本發(fā)明的肽序列可治療的疾病或病癥或具有患所述疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)的受試者。在其他實(shí)施方式中，方法包括施用本發(fā)明的嵌合肽或肽序列至受試者，如患有高血糖病癥(例如，糖尿病，如胰島素依賴型(I型)糖尿病、II型糖尿病或妊娠期糖尿病)、胰島素抵抗、高胰島素血癥、葡萄糖耐受不良或代謝綜合征的受試者，或者肥胖或具有不希望的體重的受試者。
[0028]在所述方法和使用的具體方面，將嵌合肽序列或肽序列以改善所述受試者中葡萄糖代謝的有效量施用于受試者。在更具體的方面，在施用之前，受試者的空腹血糖水平大于100mg/dl或者血紅蛋白Alc (HbAlc)水平高于6%。
[0029]在其他實(shí)施方式中，受試者的使用或治療方法意欲或?qū)е陆档偷钠咸烟撬?、提高的胰島素敏感度、降低的胰島素抵抗、降低的高血糖素、葡萄糖耐量或者葡萄糖代謝或體內(nèi)平衡的改善、改善的胰功能，或降低的甘油三酯、膽固醇、IDL、LDL或VLDL水平，或血壓降低、血管內(nèi)膜增厚降低，或者體重或體重增加降低。
[0030]還提供了分析和/或鑒別嵌合肽序列或肽序列的方法，如具有葡萄糖降低活性而無(wú)顯著肝細(xì)胞癌(HCC)活性的嵌合肽序列和肽序列。在一種實(shí)施方式中，方法包括:a)提供候選嵌合肽序列或肽序列；b)施用所述候選肽序列至測(cè)試動(dòng)物(例如，db/db小鼠);c)施用所述候選肽序列后，測(cè)量所述動(dòng)物的葡萄糖水平以確定所述候選肽序列是否降低葡萄糖水平。在具體的方面，還分析了嵌合肽序列或肽序列對(duì)動(dòng)物中HCC的誘導(dǎo)(例如，評(píng)價(jià)測(cè)試動(dòng)物的肝組織樣品)，或與HCC活性有關(guān)的標(biāo)志物的表達(dá)，其中候選肽具有葡萄糖降低活性并且無(wú)顯著HCC活性。這些方法將候選物鑒別為具有葡萄糖降低活性，任選地還無(wú)顯著肝細(xì)胞癌(HCC)活性。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0031]圖1示出了 FGF19和FGF21蛋白序列，和代表性變體序列，即變體M5、變體Ml、變體M2、變體M69、變體M3、 變體M48、變體M49、變體M50、變體M51、變體M52、變體M53和變體M70肽序列。還示出了 FGF21的3個(gè)其他等位(多晶型)形式，即M71、M72和M73。
[0032]圖2示出了 FGF21 (無(wú)陰影)和FGF19 (灰色陰影)蛋白序列之間的代表性域交換，以及所得的融合(嵌合)序列。用數(shù)字表明了融合體(嵌合體)中存在的來(lái)自FGF21和FGF19中每一個(gè)的氨基酸區(qū)域。對(duì)每一個(gè)嵌合序列示出了葡萄糖降低和脂肪升高。
[0033]圖3A-圖31示出了葡萄糖降低和體重?cái)?shù)據(jù)。在db/db小鼠中，A)變體M5 ；B)變體Ml ;C)變體M2和變體M69 ;D)變體M3 ;E)變體M48和變體M49 ;F)變體M51和變體M50 ；
G)變體M52肽；H)變體M53肽；和I)變體M70肽序列均具有葡萄糖降低(即抗糖尿病)活性。對(duì)小鼠注射表達(dá)FGF19、FGF21、所選變體的AAV載體，并且鹽水和GFP是陰性對(duì)照。
[0034]圖4A-圖41顯示注射了表達(dá)FGF19、FGF21或A)變體M5 ；B)變體Ml ；C)變體M2和變體M69 ；D)變體M3 ；E)變體M48和變體M49 ；F)變體M51和變體M50 ；G)變體M52肽；
H)變體M53肽；和I)變體M70肽序列的AAV載體的db/db小鼠的血清脂肪譜(甘油三酯、總膽固醇、HDL和非HDL)。與增加和提高脂肪的FGF19、M1、M2和M69相反，變體M5肽序列不增加或提高脂肪。所有變體的血清水平是相當(dāng)?shù)?。鹽水和GFP是陰性對(duì)照。
[0035]圖5A-圖51示出了 A)變體M5 ;B)變體Ml ;C)變體M2和變體M69 ;D)變體M3 ；E)變體M48和變體M49 ；F)變體M51和變體M50 ；G)變體M52 ；H)變體M53肽；和I)變體M70肽序列的肝細(xì)胞癌(HCC)相關(guān)數(shù)據(jù)。與FGF19相反，所有變體不會(huì)顯著提高或誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌(HCC)形成或HCC腫瘤發(fā)生。將HCC得分記錄為注射變體的小鼠的整個(gè)肝表面上的HCC小瘤的數(shù)目除以注射野生型FGF19的小鼠的HCC小瘤的數(shù)目。
[0036]圖6A-圖61示出了 A)變體M5 ;B)變體Ml ;C)變體M2和變體M69 ;D)變體M3 ；E)變體M48和變體M49 ；F)變體M51和變體M50 ；G)變體M52 ；H)變體M53肽；和I)變體M70肽序列的瘦肉或脂肪數(shù)據(jù)。與FGF21相反，除了 M2、M5和M69，變體肽序列降低瘦肉或脂肪。
[0037]圖7A-圖7B示出了圖示數(shù)據(jù)，其表明重組A)變體M5 ;和幻變體M69多肽的注射降低了 ob/ob小鼠中的血糖。
[0038]圖8示出了表明醛-酮還原酶家族I成員C18 (AkrlC18)和溶質(zhì)載體家族I成員
2(slcla2)的肝表達(dá)似乎與HCC活性有關(guān)。
[0039]說(shuō)明詳述
[0040]本發(fā)明提供了能夠降低或減少葡萄糖水平的嵌合肽序列和肽序列。在一種實(shí)施方式中，嵌合肽序列包括或由以下部分組成:具有至少7個(gè)氨基酸殘基的N末端區(qū)域，和具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置的N末端區(qū)域，其中N末端區(qū)域具有DSSPL或DASPH序列；和具有FGF19部分的C末端區(qū)域，和具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置的C末端區(qū)域，其中所述C末端區(qū)域包括FGF19 (WGDPIRLRHLYTSG)的氨基酸殘基16-29，并且W殘基對(duì)應(yīng)于C末端區(qū)域的第一氨基酸位置。
[0041]在另一種實(shí)施方式中，嵌合肽序列包括或由以下部分組成:具有FGF21部分的N末端區(qū)域，和具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置的N末端區(qū)域，其中N末端區(qū)域具有GQV序列并且V殘基對(duì)應(yīng)于N末端區(qū)域的最后氨基酸位置；和具有FGF19部分的C末端區(qū)域，和具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置的C末端區(qū)域，其中所述C末端區(qū)域包括FGF19(RLRHLYTSG)的氨基酸殘基21-29，并且R殘基對(duì)應(yīng)于C末端區(qū)域的第一氨基酸位置。
[0042]在其他實(shí)施方式中，肽序列包括或由以下部分組成:與參照或野生型FGF19相比，具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、插入或缺失的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19 (FGF19)序列變體。在其他實(shí)施方式中，肽序列包括或由以下部分組成:與參照或野生型FGF21相比，具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、插入或缺失的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21 (FGF21)序列變體。在其他實(shí)施方式中，肽序列包括或由以下部分組成:融合至FGF21序列部分的FGF19序列部分。在其他實(shí)施方式中，肽序列包括或由以下部分組成:融合至FGF21序列部分的FGF19序列部分，其中與參照或野生型FGF19和/或FGF21相比，F(xiàn)GF19和/或FGF21序列部分具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、插入或缺失。
[0043]本發(fā)明還提供了治療患有使用成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19(FGF19)和/或成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21 (FGF21)肽序列的變體和融合體可治療的代謝病癥或具有患所述病癥的風(fēng)險(xiǎn)的受試者的方法和使用。在一種實(shí)施方式中，方法包括以治療所述病癥有效的量用成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19 (FGF19)和/或成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21 (FGF21)肽序列的一個(gè)或多個(gè)變體或融合體接觸或施用于受試者。在另一種實(shí)施方式中，該方法包括以治療所述病癥有效的量用編碼成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19 (FGF19)和/或成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21 (FGF21)肽序列的一個(gè)或多個(gè)核酸分子(例如，與編碼所述肽序列的核酸可操縱地連接的表達(dá)控制元件，任選地包括載體)接觸或施用于受試者。
[0044]盡管為了實(shí)踐本發(fā)明，不需要理解本發(fā)明肽的潛在作用機(jī)制，但是不受任何特定理論或假設(shè)的束縛，據(jù)信本發(fā)明肽至少部分模擬了肥胖癥治療手術(shù)對(duì)(例如)葡萄糖體內(nèi)平衡和重量減輕的影響。相信肥胖癥治療手術(shù)后胃腸道激素分泌的變化(例如，高血糖素樣肽I (GLP-1))是(例如)糖尿病病癥解決的原因。FGF19在遠(yuǎn)端小腸中高度表達(dá)，并且FGF19的轉(zhuǎn)基因過(guò)表達(dá)改善了葡萄糖體內(nèi)平衡。由于在人中，胃旁路手術(shù)后FGF19的水平也會(huì)升高，因此升高的FGF19可能與肥胖癥治療手術(shù)后觀察到的糖尿病緩解有關(guān)。
[0045]代表性的參照或野生型FGF19序列如下所示:RPLAFSDAGPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (SEQ ID NO:99)。
[0046]代表性的參照或野生型FGF21序列如下所示:HPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS(SEQ ID N0:100)。圖1 中示出了 FGF21 等位變體(例如，M70、M71 和 M72)。
[0047]在本文中，術(shù)語(yǔ)“肽”、“蛋白質(zhì)”和“多肽”序列是可互換使用的以表示兩種或更多種氨基酸或“殘基”，其包括通過(guò)酰胺鍵或等價(jià)物共價(jià)連接的氨基酸的化學(xué)修飾和衍生物。形成全部或部分肽的氨基酸可以來(lái)自已知的21種天然存在的氨基酸，其通過(guò)它們的單字母縮寫或常用的三字母縮寫表示。在本發(fā)明的肽序列中，常規(guī)氨基酸殘基具有它們常規(guī)的含義。因此，“Leu”是亮氨酸，“l(fā)ie”是異亮氨酸，“Nle”是正亮氨酸等。 [0048]在本文中舉例說(shuō)明了與本文所述的參考FGF19和FGF21多肽不同的肽序列，所述肽序列體內(nèi)減少或降低葡萄糖(表1-8和圖1)。非限制性具體實(shí)例為具有融合至FGF19的羧基末端氨基酸21-194的FGF21的氨基末端氨基酸1_16的肽序列；具有融合至FGF21的羧基末端氨基酸147-181的FGF19的氨基末端氨基酸1_147的肽序列；具有融合至FGF21的羧基末端氨基酸17-181的FGF19的氨基末端氨基酸1_20的肽序列；具有融合至FGF19的羧基末端氨基酸148-194的FGF21的氨基末端氨基酸1_146的肽序列；和具有FGF19的氨基末端氨基酸1-20的肽序列，其融合至FGF21的內(nèi)部氨基酸17-146，其融合至FGF19的羧基末端氨基酸148-194。
[0049]其他具體的肽序列具有對(duì)應(yīng)于FGF19的氨基酸16_20的WGDPI序列的WGDPI序列基序，缺少對(duì)應(yīng)于FGF19的氨基酸16-20的WGDPI序列的WGDPI序列基序，或具有取代的(即突變的)對(duì)應(yīng)于FGF19的氨基酸16-20的FGF19WGDPI序列的WGDPI序列基序。
[0050]本發(fā)明具體的肽序列還包括不同于FGF19和FGF21 (例如，如本文所示)，和在氨基酸 16-20 處具有取代 FGF19WGDPI 序列的 GQV、⑶1、WGP1、WGDPV, WGD1、⑶P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA、WDP1、WGD1、WGDP 或 FGDPI 中任一項(xiàng)的 FGF19 變體序列的序列。因此，野生型FGF19和FGF21 (例如，本文中分別以SEQ ID N0S:99和100所示的)可以是排除序列，并且在FGF19的氨基酸16-20處具有取代WGDPI序列的GQV、⑶1、WGP1、WGDPV, WGD1、⑶P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA, WDP1、WGD1、WGDP 或FGDPI中的任一種的FGF19也可以排除。然而，這種排除不適用于序列具有(例如)融合至具有(例如)GQV、GQV、⑶I或GPI中任一種的FGF19的3個(gè)FGF21殘基，或者融合至WGP1、WGD1、⑶P1、WDP1、WGDI或WGDP中任一種的2個(gè)FGF21殘基的情況。
[0051]肽序列的具體非限制性實(shí)例包括本文中以M1-M98 (SEQ ID NO: 1_98)指明的序列變體的全部或部分或由它們組成。肽序列的更具體的非限制性實(shí)例包括如下所示的序列組的全部或部分或者由它們組成:0052]HPIPDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKG VHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLP MVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (FGF21 序列還可以在氨基末端包括 “R”殘基)，或其子序列或片段；或者
[0053]DSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVR YLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEP EDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK,或其子序列或片段；或者
[0054]RPLAFSDASPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVA IKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPM LPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK，或其子序列或片段；或者
[0055]RPLAFSDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVA IKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPM LPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK，或其子序列或片段；或者
[0056]DSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHS VRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPE EPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK,或其子序列或片段；或者
[0057]RDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVH SVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVP EEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M69),或其子序列或片段；或者
[0058]RDSSPLLQWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSV RYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEE PEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M52)，或其子序列或片段；或者
[0059]HPIPDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGV HSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMV PEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M5)，或其子序列或片段；
[0060]HPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVK TSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHSLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPAL PEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS (M71 )，或其子序列或片段；或者
[0061 ] HPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVK TSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPAP PEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS (M72)，或其子序列或片段；或者
[0062]HPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVK TSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPAL PEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVVQDELQGVGGEGCHMHPENCKTLLTDIDRTHTEKPVWDGITGE (M73),或其 子序列或片段；或者
[0063]RPLAFSDASPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVA IKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPM LPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (Ml),或其子序列或片段；或者
[0064]RPLAFSDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M2),或其子序列或片段；或者
[0065]RPLAFSDAGPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEILEDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M3),或其子序列或片段；或者
[0066]RDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M48)，或其子序列或片段；或者
[0067]RPLAFSDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M49),或其子序列或片段；或者
[0068]RHPIPDSSPLLQFGDQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEILEDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M50),或其子序列或片段；或者
[0069]RHPIPDSSPLLQFGGNVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M51),或其子序列或片段；或者
[0070]MDSSPLLQWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETD SMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M53)，或其子序列或片段；和
[0071]MRDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M70)，或者其子序列或片段，或者對(duì)于任何上述肽序列，R末端殘基可以缺失。
[0072]肽序列的其他具體非限制性實(shí)例包括或由以下部分組成:
[0073]HPIPDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK,或其子序列或片段；或者
[0074]DSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK,或其子序列或片段；
[0075]RPLAFSDASPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK,或其子序列或片段；
[0076]RPLAFSDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK,或其子序列或片段；
[0077]DSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK，或者其子序列或片段。
[0078]肽序列的其他具體非限制性實(shí)例在N-末端具有包括以下任一種的全部或部分或由其組成的肽序列:HPIPDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG (M5)；
[0079]DSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG (M6)；
[0080]RPLAFSDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG (M7)；
[0081]HPIPDSSPLLQWGDPIRLRHLYTSG (M8)；
[0082]HPIPDSSPLLQFGWGDPIRLRHLYTSG (M9)；
[0083]HPIPDSSPHVHYGffGDPIRLRHLYTSG (MlO)；
[0084]RPLAFSDAGPLLQffGDPIRLRHLYTSG (Mil)；
[0085]RPLAFSDAGPLLQFGffGDPIRLRHLYTSG (M12)；
[0086]RPLAFSDAGPLLQFGGQVRLRHLYTSG (M13)；
[0087]HPIPDSSPHVHYGGQVRLRHLYTSG (M14)；
[0088]RPLAFSDAGPHVHWGDPIRLRHLYTSG (M15)；
[0089]RPLAFSDAGPHVHWGDPIRLRHLYTSG (M16)；
[0090]RPLAFSDAGPHVGffGDPIRLRHLYTSG (M17)；
[0091]RPLAFSDAGPHYGffGDPIRLRHLYTSG (M18)；
[0092]RPLAFSDAGPVYGffGDPIRLRHLYTSG (M19)；
[0093]RPLAFSDAGPVHGffGDPIRLRHLYTSG (M20)；
[0094]RPLAFSDAGPVHYffGDPIRLRHLYTSG (M21)；
[0095]RPLAFSDAGPHVHGffGDPIRLRHLYTSG (M22)；
[0096]RPLAFSDAGPHHGffGDPIRLRHLYTSG (M23)；
[0097]RPLAFSDAGPHHYffGDPIRLRHLYTSG (M24)；
[0098]RPLAFSDAGPHVYffGDPIRLRHLYTSG (M25)；
[0099]RPLAFSDSSPLVHWGDPIRLRHLYTSG (M26)；
[0100]RPLAFSDSSPHVHWGDPIRLRHLYTSG (M22)；
[0101]RPLAFSDAGPHVffGDPIRLRHLYTSG (M28)；
[0102]RPLAFSDAGPHVHYffGDPIRLRHLYTSG (M29)；
[0103]RPLAFSDAGPHVHYAffGDPIRLRHLYTSG (M30)；
[0104]RHPIPDSSPLLQFGAQVRLRHLYTSG (M31)；
[0105]RHPIPDSSPLLQFGDQVRLRHLYTSG (M32)；
[0106]RHPIPDSSPLLQFGPQVRLRHLYTSG (M33)；
[0107]RHPIPDSSPLLQFGGAVRLRHLYTSG (M34)；
[0108]RHPIPDSSPLLQFGGEVRLRHLYTSG (M35)；
[0109]RHPIPDSSPLLQFGGNVRLRHLYTSG (M36)；
[0110]RHPIPDSSPLLQFGGQARLRHLYTSG (M37)；
[0111]RHPIPDSSPLLQFGGQIRLRHLYTSG (M38)；
[0112]RHPIPDSSPLLQFGGQTRLRHLYTSG (M39)；
[0113]RHPIPDSSPLLQFGWGQPVRLRHLYTSG (M40)；
[0114]DAGPHVHYGffGDPIRLRHLYTSG (M74)；VHYGffGDPIRLRHLYTSG (M75)；RLRHLYTSG (M77)；RHPIPDSSPLLQFGWGDPIRLRHLYTSG ；
[0115]RHPIPDSSPLLQWGDPIRLRHLYTSG ；
[0116]RPLAFSDAGPLLQFGffGDPIRLRHLYTSG ；
[0117]RHPIPDSSPHVHYGffGDPIRLRHLYTSG ；
[0118]RPLAFSDAGPLLQFGGQVRLRHLYTSG ；
[0119]RHPIPDSSPHVHYGGQVRLRHLYTSG ；
[0120]RPLAFSDAGPHVHYGGDIRLRHLYTSG ；
[0121]RDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG ；
[0122]RPLAFSDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG ；
[0123]RHPIPDSSPLLQFGAQVRLRHLYTSG ；
[0124]RHPIPDSSPLLQFGDQVRLRHLYTSG ；
[0125]RHPIPDSSPLLQFGPQVRLRHLYTSG ；
[0126]RHPIPDSSPLLQFGGAVRLRHLYTSG ；
[0127]RHPIPDSSPLLQFGGEVRLRHLYTSG ；
[0128]RHPIPDSSPLLQFGGNVRLRHLYTSG ；
[0129]RHPIPDSSPLLQFGGQARLRHLYTSG ；
[0130]RHPIPDSSPLLQFGGQIRLRHLYTSG ；
[0131]RHPIPDSSPLLQFGGQTRLRHLYTSG ；
[0132]RHPIPDSSPLLQFGWGQPVRLRHLYTSG ;并且對(duì)于任何上述肽序列，氨基末端R殘基可以缺失。
[0133]本發(fā)明的肽序列另外包括與FGF19或在FGF19的氨基酸16_20處具有取代WGDPI序列的 GQV、⑶ 1、WGP1、WGDPV、WGD1、⑶P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA、WDP1、WGD1、WGDP或FGDPI中任一項(xiàng)的FGF19變體序列相比，肝細(xì)胞癌(HCC)的誘導(dǎo)或形成降低或缺乏的那些。本發(fā)明的肽序列還包括與FGF19或在FGF19的氨基酸16-20處具有取代 WGDPI 序列的 GQV、⑶1、WGP1、WGDPV、WGD 1、⑶P 1、GP 1、WGQP1、WGAP 1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA, WDP1、WGD1、WGDP或FGDPI中任一項(xiàng)的FGF19變體序列相比，具有較高葡萄糖降低活性的那些。此外，本發(fā)明的肽序列包括與FGF19或在FGF19的氨基酸16-20處具有取代 WGDPI 序列的 GQV、⑶1、WGP1、WGDPV、WGD1、⑶P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDAI, WGDPA, WDP1、WGD1、WGDP或FGDPI中任一項(xiàng)的FGF19變體序列相比，具有較低脂肪(例如，甘油三酯、膽固醇、非HDL或HDL)提高活性的那些。
[0134]通常，本發(fā)明肽序列中氨基酸或殘基的數(shù)目總計(jì)將小于約250 (例如，其氨基酸或模擬物)。在多個(gè)具體的實(shí)施方式中，殘基數(shù)目包括約20多至約200個(gè)殘基(例如，其氨基酸或模擬物)。在其他實(shí)施方式中，殘基數(shù)目包括約50多至約200個(gè)殘基(例如，其氨基酸或模擬物)。在其他實(shí)施方式中，在長(zhǎng)度上殘基數(shù)目包括約100多至約195個(gè)殘基(例如，其氨基酸或模擬物)。
[0135]可以通過(guò)酰胺或通過(guò)非天然和非酰胺化學(xué)鍵連接氨基酸或殘基，其包括(例如)通過(guò)戊二醛、N-羥基琥珀酰亞胺酯、雙官能馬來(lái)酰亞胺或N，N’ - 二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)形成的那些。非酰胺鍵包括(例如)酮亞甲基、氨基亞甲基、烯烴、乙醚、硫醚等(參見(jiàn)，例如，Spatola in Chemistry and Biochemistry of Amino Acids.Peptides and Proteins.第7卷，第 267-357 頁(yè)(1983),“Peptide and Backbone Modifications, ^Marcel Decker, NY)。因此，當(dāng)本發(fā)明的肽包括FGF19序列的部分和FG21序列的部分時(shí)，所述兩部分不需要通過(guò)酰胺鍵將彼此連接在一起，但是可以通過(guò)任何其他化學(xué)部分連接或通過(guò)接頭部分結(jié)合在一起。
[0136]本發(fā)明還包括舉例說(shuō)明的肽序列(包括表1-8和圖1中所列的FGF19和FGF21變體和子序列，以及表1-8和圖1中所列的FGF19/FGF21融合體和嵌合體)的子序列、變體和修飾形式，只要上述子序列、變體和修飾形式保留了至少可檢測(cè)或可測(cè)量的活性或功能。例如，某些舉例說(shuō)明的變體肽在C-末端部分具有FGF19C-末端序列，PHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK,例如，在變體的“ TSG ”氣基酸殘基后。
[0137]另外，某些舉例說(shuō)明的變體肽(例如，在氨基末端具有FGF21序列全部或部分的那些)具有位于N-末端的“R”殘基，其可以省去。類似地，某些舉例說(shuō)明的變體肽包括位于N-末端的“M”殘基，其可以附加在或進(jìn)一步取代省去的殘基，如“R”殘基。更具體地，在多種實(shí)施方式中，N-末端的肽序列包括以下任一種:RDSS、DSS、MDSS或MRDSS。此外，在細(xì)胞中，當(dāng)“M”殘基鄰近“S”殘基時(shí)，可以切割“M”殘基從而使“M”殘基從肽序列上缺失，而當(dāng)“M”殘基鄰近“D”殘基時(shí)，“M”殘基不可以切割。因此，舉例來(lái)說(shuō)，在多種實(shí)施方式中，肽序列包括在N-末端具有以下殘基的那些:MDSSPL、MSDSSPL (切割成SDSSPL)和MSSPL (切割成 SSPD0
[0138]因此，本發(fā)明的“肽”、“多肽”和“蛋白質(zhì)”序列包括表1-8和圖1中所列的FGF19和FGF21變體和子序列以及表1-8和圖1中所列的FGF19/FGF21融合體和嵌合體的子序列、變體和修飾形式，只要所述子序列、變 體或修飾形式(例如，融合體或嵌合體)保留了至少可檢測(cè)的活性或功能。
[0139]如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“修飾”及其語(yǔ)法變化是指相對(duì)于參考組成(如肽序列)，組成偏離。這些修飾的肽序列、核酸及其他組成可以具有更大或更小的活性或功能，或者與參考未修飾的肽序列、核酸或其他組成相比，具有不同的功能或活性，或者可以在配制用于療法的蛋白質(zhì)中具有所期望的性質(zhì)(例如，血清半衰期)以引起用于在檢測(cè)測(cè)定中使用的抗體和/或用于蛋白質(zhì)純化。例如，可以修飾本發(fā)明的肽序列以提高血清半衰期，以提高蛋白質(zhì)的體外和/或體內(nèi)穩(wěn)定性等。
[0140]在本文中舉例說(shuō)明的肽序列的這些子序列、變體和修飾形式的具體實(shí)例(表1-8和圖1中所列的肽序列)包括氨基末端、羧基末端或內(nèi)部的一種或多種氨基酸的取代、缺失和/或插入/添加或從氨基末端、羧基末端或內(nèi)部開(kāi)始的一種或多種氨基酸的取代、缺失和/或插入/添加。一個(gè)實(shí)例是在肽序列內(nèi)用氨基酸殘基取代另一個(gè)氨基酸殘基。另一種是一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基從肽序列的缺失，或者一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基向肽序列中的插入或添加。
[0141]取代、缺失或插入/添加的殘基數(shù)目為肽序列的一個(gè)或多個(gè)氨基酸(例如，1-3、3-5、5-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90、90-100、100-110、110-120、120-130、130-140、140-150、150-160、160-170、170-180、180-190、190-200、200-225,225-250或更多個(gè))。因此，F(xiàn)GF19或FGF21序列可以具有少數(shù)或多個(gè)取代、缺失或插入 / 添加的氨基酸(例如，1-3、3-5、5-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90、90-100、100-110、110-120、120-130、130-140、140-150、150-160、160-170、170-180、180-190、190-200、200-225、225-250 或更多個(gè))。另外，F(xiàn)GF19 氨基酸序列可以包括來(lái)自 FGF21 的約 1-3、3-5、5-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90、90-100、100-110、I10-120、120-130、130-140、140-150、150-160、160-170、170-180、180-190、190-200、200-225、225-250或更多個(gè)氨基酸的氨基酸序列或由其組成；或者FGF21氨基酸或序列可以包括來(lái)自FGF19的約1-3、3-5、5_10、10-20、20-30、30_40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90、90-100、100-110、110-120、120-130、130-140、140-150、150-160、160-170、170-180、180-190、190-200、200-225、225-250 或更多個(gè)氨基酸的氨基酸序列或由其組成。
[0142]具體的取代的例子包括用D-殘基取代L-殘基。因此，盡管以L-異構(gòu)體構(gòu)型列出了殘基，但是包括了在本發(fā)明的肽序列的任何具體或所有位置的D-氨基酸，除非D-異構(gòu)體導(dǎo)致序列不具有可檢測(cè)或可測(cè)量的功能。
[0143]其他具體的實(shí)例是非保守和保守取代。“保守取代”是用生物學(xué)、化學(xué)或結(jié)構(gòu)類似的殘基取代一個(gè)氨基酸。生物學(xué)類似是指取代與生物活性(例如，葡萄糖降低活性)相容。結(jié)構(gòu)類似是指氨基酸具有長(zhǎng)度類似的側(cè)鏈，如丙氨酸、甘氨酸和絲氨酸，或具有類似的大小，或維持了第一、第二或其他肽序列的結(jié)構(gòu)?；瘜W(xué)類似是指殘基具有相同電荷或者是親水性和疏水性的。具體實(shí)例包括用一個(gè)疏水性殘基(如異亮氨酸、纈氨酸、亮氨酸或蛋氨酸)取代另一個(gè)，或者用一個(gè)極性殘基取代另一個(gè)，如精氨酸取代賴氨酸、谷氨酸取代門冬氨酸，或谷氨酰胺取代天門冬酰胺、絲氨酸取代蘇氨酸等。常規(guī)測(cè)定可用于確定子序列、變體或修飾形式是否具有活性，例如，葡萄糖降低活性 。
[0144]在本文中舉例說(shuō)明的肽序列的子序列、變體和修飾形式的具體實(shí)例(例如，表1-8和圖1中所列的肽序列)對(duì)參考肽序列(例如，表1-8和圖1的任一個(gè)中的肽序列)具有50%-60%、60%-70%、70%-75%、75%-80%、80%-85%、85%-90%、90%-95% 或 96%、97%、98% 或 99% 的同一性。術(shù)語(yǔ)“同一性”和“同源性”及其語(yǔ)法變化是指兩種或更多種所提及的實(shí)體是相同的。因此，當(dāng)兩條氨基酸序列相同時(shí)，它們具有相同的氨基酸序列?！巴恍詤^(qū)域、區(qū)或域”是指兩種或更多種所提及的實(shí)體的一部分是相同的。因此，當(dāng)兩條氨基酸序列相對(duì)于一個(gè)或多個(gè)序列區(qū)域相同或同源時(shí)，它們?cè)谶@些區(qū)域中具有同一性。
[0145]可以使用本領(lǐng)域中已知的計(jì)算機(jī)程序和數(shù)學(xué)算法確定兩條序列之間的同一性程度。計(jì)算序列同一性(同源性)百分比的這些算法通常解釋比較區(qū)域內(nèi)的序列空缺和不匹配。例如，BLAST (例如，BLAST2.0)搜索算法(參見(jiàn)，例如，Altschul等人，J.Mol.Biol.215:403(1990)，通過(guò)NCBI公共可用)具有以下示例性搜索參數(shù):誤配_2 ;空缺空位(gap open) 5 ;空缺延伸(gap extension) 2。對(duì)于肽序列比較，BLASTP算法通常與計(jì)分矩陣(如PAM100、PAM250、BL0SUM62或BL0SUM50)組合使用。還使用FASTA (例如，F(xiàn)ASTA2和FASTA3)和SSEARCH序列比較程序?qū)ν恍猿潭榷?Pearson等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:2444 (1988) ；Pearson, Methods Mol Biol.132:185(2000)；和 Smith 等人，J.Mol.Biol.147:195 (1981))。還發(fā)展了使用 Delaunay 基拓?fù)涠ㄎ?Delaunay-basedtopological mapping)對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)相似性定量的程序(Bostick等人，Biochem BiophysRes Commun.304:320(2003))。[0146]在本發(fā)明的肽序列(包括在本文中舉例說(shuō)明的肽序列(例如，表1-8和圖1中所列的序列)的子序列、變體和修飾形式)中，“氨基酸”或“殘基”包括常規(guī)a-氨基酸和0氨基酸、a，a - 二取代氨基酸和N-取代氨基酸，其中至少一個(gè)側(cè)鏈?zhǔn)侨绫疚乃x的氨基酸側(cè)鏈部分。“氨基酸”還包括N-烷基a -氨基酸，其中N-末端氨基具有Cl至C6直鏈或支鏈烷基取代基。因此，術(shù)語(yǔ)“氨基酸”包括天然存在的蛋白質(zhì)氨基酸、非蛋白質(zhì)氨基酸、翻譯后修飾的氨基酸(例如，通過(guò)糖基化作用、磷酸化作用、酯或酰胺切割等)、酶修飾或合成的氨基酸、衍生化氨基酸、設(shè)計(jì)來(lái)模擬氨基酸的構(gòu)件或結(jié)構(gòu)、具有從天然存在部分修飾、衍生化的側(cè)鏈部分的氨基酸或者合成或非天然存在的氨基酸等的立體異構(gòu)體和修飾。修飾的和非常見(jiàn)的氨基酸包括在本發(fā)明的肽序列中(參見(jiàn),例如,在Synthetic Peptides:A User’ sGuide 中:Hruby 等人，Biochem.1.268:249 (1990);和 Toniolo C., Int.J.Peptide ProteinRes.35:287(1990))。 [0147]另外，包括了氨基酸的保護(hù)和修飾基團(tuán)。如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“氨基酸側(cè)鏈部分”包括任何氨基酸的任何側(cè)鏈，如術(shù)語(yǔ)“氨基酸”在本文中所定義的。因此，這包括天然存在的氨基酸中的側(cè)鏈部分。它還包括如本文所說(shuō)明的和本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的修飾的天然存在的氨基酸中的側(cè)鏈部分，如天然存在的蛋白質(zhì)氨基酸、非蛋白質(zhì)氨基酸、翻譯后修飾的氨基酸、酶修飾或合成的氨基酸、衍生化氨基酸、設(shè)計(jì)來(lái)模擬氨基酸的構(gòu)件或結(jié)構(gòu)等的立體異構(gòu)體和修飾中的側(cè)鏈部分。例如，本文所公開(kāi)的或本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的任何氨基酸的側(cè)鏈部分包括在該定義內(nèi)。
[0148]“氨基酸側(cè)鏈部分的衍生物”包括在氨基酸側(cè)鏈部分的定義內(nèi)。衍生化的氨基酸側(cè)鏈部分的非限制性實(shí)例包括，例如:(a)將一個(gè)或多個(gè)飽和或不飽和的碳原子添加到現(xiàn)有的烷基、芳基或芳烷基鏈中；(b)將側(cè)鏈中的碳用另一種原子，優(yōu)選地氧或氮取代；(C)向側(cè)鏈的碳原子添加末端基團(tuán)，其包括甲基(--ch3)、甲氧基(--och3)、硝基(--no2)、羥基(-0H)或氰基(一C=N); (d)對(duì)于包括羥基、硫醇或氨基的側(cè)鏈部分，添加適合的羥基、硫醇或氨基保護(hù)基；*(e)對(duì)于包括環(huán)狀結(jié)構(gòu)的側(cè)鏈部分，添加一個(gè)或多個(gè)直接連接或通過(guò)醚鍵連接的環(huán)取代基，其包括羥基、鹵素、烷基或芳基基團(tuán)。對(duì)于氨基，適合的保護(hù)基是技術(shù)人員所知的。所提供的這種衍生化作用在最終的肽序列中提供了所需的活性(例如，葡萄糖降低、改善的葡萄糖或脂代謝、抗糖尿病活性、無(wú)顯著HCC形成或腫瘤發(fā)生、無(wú)顯著的瘦肉或脂肪調(diào)節(jié)等)。
[0149]“氨基酸側(cè)鏈部分”包括所有這種衍生化作用，并且具體的非限制性實(shí)例包括:Y-氨基丁酸、12-氨基十二烷酸、a-氨基異丁酸、6-氨基己酸、4_(氨甲基)_環(huán)己烷羧酸、8-氨基辛酸、聯(lián)苯丙氨酸、Boc-叔丁氧羰基、苯甲基、苯甲?；⒐习彼?、二氨基丁酸、吡咯賴氨酸、二氨基丙酸、3，3-二苯基丙氨酸、鳥(niǎo)氨酸(orthonine)、瓜氨酸、
I,3- 二氫-2H-異吲哚羧酸、乙基、Fmoc-荷甲氧羰基、庚酰(CH3—(CH2)5-C(=0)—)、己酰(CH3- (CH2) 4-C (=0)-)、高精氨酸、高半胱氨酸、高賴氨酸、高苯丙氨酸、高絲氨酸、甲基、蛋氨酸亞砜、蛋氨酸砜、正纈氨酸(NVA)、苯基甘氨酸、丙基、異丙基、肌氨酸(SAR)、叔丁基丙氨酸和芐氧羰基。
[0150]單個(gè)氨基酸，其包括天然存在的蛋白質(zhì)氨基酸、非蛋白質(zhì)氨基酸、翻譯后修飾的氨基酸、酶合成的氨基酸、非天然存在的氨基酸(包括衍生化氨基酸)、來(lái)源于任何上述氨基酸的a，a 二取代氨基酸(即，a, a 二取代氨基酸，其中至少一個(gè)側(cè)鏈與其所來(lái)源的殘基的側(cè)鏈相同)、來(lái)源于任何上述氨基酸的(6-氨基酸(即，除了存在(6-碳以外，其他與其所來(lái)源的殘基相同的3-氨基酸)等的立體異構(gòu)體和修飾，包括所有上述氨基酸在本文中均可以稱為“殘基”。除了 a-氨基酸的側(cè)鏈部分之外，適合的取代基包括C1至C6直鏈或支鏈烷基。Aib是a，a-二取代氨基酸的實(shí)例。盡管可以使用常規(guī)L-和D-異構(gòu)體表示方法來(lái)表示a，a-二取代氨基酸，但是應(yīng)理解這些表示方法是為了方便，并且當(dāng)a位的取代基不同時(shí)，根據(jù)情況，這些氨基酸可以可互換地稱為來(lái)源于具有指定氨基酸側(cè)鏈部分的殘基的L-或D-異構(gòu)體的a, a-二取代氨基酸。因此，(S) _2_氨基_2_甲基-己酸可以被稱為來(lái)源于L-Nle (正亮氨酸)的a, a - 二取代氨基酸或來(lái)源于D-Ala的a, a-二取代氨基酸。類似地，Aib可以稱為來(lái)源于Ala的a, a-二取代氨基酸。當(dāng)提供a, a 二取代氨基酸時(shí)，應(yīng)理解為包括其所有(R)和(S)構(gòu)型。
[0151]“N-取代的氨基酸”包括任何氨基酸，其中氨基酸側(cè)鏈部分共價(jià)鍵鍵合到主鏈氨基上，任選地其中在a-碳位置中除了 H之外無(wú)取代基。肌氨酸是N-取代的氨基酸的實(shí)例。舉例來(lái)說(shuō)，肌氨酸可以稱為Ala的N-取代的氨基酸衍生物，其中肌氨酸的氨基酸側(cè)鏈部分和Ala是相同，即甲基。
[0152]本發(fā)明肽序列的共價(jià)修飾(包括在本文中舉例說(shuō)明的肽序列(例如，表1-8和圖1中所列的序列)的子序列、變體和修飾形式)包括在本發(fā)明中。一種類型的共價(jià)修飾包括將目標(biāo)氨基酸殘基與能夠與肽所選擇的側(cè)鏈或者N-或C-末端殘基反應(yīng)的有機(jī)衍生化試劑反應(yīng)。使用雙官能試劑的衍生化作用對(duì)于(例如)將肽交聯(lián)至不溶于水的載體基質(zhì)或表面從而在純化抗肽抗體的方法中使用來(lái)說(shuō)是有用的，并且反之亦然。常用的交聯(lián)劑包括，例如，1，1-雙(重氮乙?；?-2_苯乙烷、戊二醛、N-羥基琥珀酰亞胺酯(例如，與4-疊氮水楊酸的酯)、同型雙官能酰亞胺酯，其包括二琥珀酰亞胺酯，如3，3- 二硫雙(琥珀酰亞胺基丙酯)、雙官能馬來(lái)酰亞胺，如雙-N-馬來(lái)酰亞胺基-1，8-辛烷和試劑，如甲基_3-[(對(duì)疊氮苯基)二硫]丙亞氨酸酯。
[0153]其他修飾包括谷氨酰胺?；吞於０孵；鶜埢謩e脫酰胺為相應(yīng)的谷氨?；吞於滨；鶜埢?，脯氨酸和賴氨酸的羥基化作用、絲氨?；蛱K氨?；鶜埢牧u基的磷酸化作用、賴氨酸、精氨酸和組氨酸側(cè)鏈的a-氨基的甲基化作用(T.E.Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, ff.H.Freeman&C0.,SanFrancisco, pp.79-86 (1983) ), N末端胺的乙?；饔谩⑷魏蜟末端羧基的酰胺化等。
[0154]舉例說(shuō)明的肽序列和在本文中舉例說(shuō)明的肽序列(例如,表1-8和圖1中所列的序列)的子序列、變體和修飾形式還可以包括出于穩(wěn)定性的主鏈變化、衍生物和擬肽。術(shù)語(yǔ)“擬肽”包括作為殘基模擬物的分子(稱為“模擬物”)，其包括(但不限于)哌嗪核心分子、酮哌嗪核心分子和二氮雜卓核心分子。除非另作說(shuō)明，否則本發(fā)明的肽序列的氨基酸模擬物包括羧基和氨基兩者，和對(duì)應(yīng)于氨基酸側(cè)鏈的基團(tuán)，或者就甘氨酸的模擬物來(lái)說(shuō)，除了氫以外無(wú)側(cè)鏈。
[0155]舉例來(lái)說(shuō)，這些將包括模擬天然存在的氨基酸的空間排列、表面電荷分布、極性等，但不需要是氨基酸的化合物，其將賦予生物系統(tǒng)穩(wěn)定性。例如，脯氨酸可以被具有適合大小和取代作用的其他內(nèi)酰胺或內(nèi)酯取代；亮氨酸可以被烷基酮、N-取代酰胺取代，和使用烷基、烯基或其他取代基在氨基酸側(cè)鏈長(zhǎng)度中的變化，其他的對(duì)于技術(shù)人員可以是顯而易見(jiàn)的。進(jìn)行這些取代的基本元素是提供具有與用于設(shè)計(jì)分子的殘基大致相同的大小和電荷以及構(gòu)型的分子。通過(guò)在功能性(例如，葡萄糖降低)或其他測(cè)定中分析化合物并比較結(jié)構(gòu)活性關(guān)系，將對(duì)這些修飾進(jìn)行細(xì)化。這些方法屬于在藥物化學(xué)和藥物開(kāi)發(fā)領(lǐng)域工作的技術(shù)人員的范圍內(nèi)。
[0156]本發(fā)明肽序列(包括舉例說(shuō)明的肽序列(包括表1-8和圖1中所列的肽)的子序列、序列變體和修飾形式)的另一種類型的修飾是糖基化作用。如本文所使用的，“糖基化”廣泛地表示一種或多種糖(例如，碳水化合物)部分在蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或其他有機(jī)分子中的存在，或者向它們的添加或連接。在本文中，術(shù)語(yǔ)“去糖基化”的使用通常旨在表示一種或多種糖(例如，碳水化合物)部分的去除或缺失。另外，該短語(yǔ)包括天然蛋白質(zhì)的糖基化作用中的性質(zhì)變化，其包括所存在的多種糖(例如，碳水化合物)部分的類型和比例(量)的變化。
[0157]可以通過(guò)氨基酸殘基修飾，或通過(guò)添加在天然序列中可以或可以不存在的一個(gè)或多個(gè)糖基化作用位點(diǎn)來(lái)實(shí)現(xiàn)糖基化作用。例如，通常非糖基化殘基可以被可以糖基化的的殘基取代。可以通過(guò)改變氨基酸序列來(lái)實(shí)現(xiàn)糖基化作用位點(diǎn)的添加?？梢?例如)通過(guò)一個(gè)或多個(gè)絲氨酸或蘇氨酸殘基(對(duì)于0-連接的糖基化作用位點(diǎn))或者天門冬酰胺殘基(對(duì)于N-連接的糖基化作用位點(diǎn))的添加或取代來(lái)進(jìn)行肽序列的改變。在每種類型中存在的N-連接和0-連接的寡糖和糖殘基的結(jié)構(gòu)可以是不同的。通常在兩者上存在的一種類型的糖是N-乙酰神經(jīng)氨酸(在下文中稱為唾液酸)。唾液酸通常是N-連接和0-連接寡糖的末端殘基，并且借助于其負(fù)電荷，可以賦予糖蛋白酸性性質(zhì)。
[0158]任選地，可以通過(guò)核苷酸(例如，DNA)水平上的變化，具體地通過(guò)在預(yù)選的堿基處使編碼所述肽的DNA突變從而產(chǎn)生將翻譯為所需氨基酸的密碼子來(lái)改變本發(fā)明的肽序列。提高所述肽上碳水化合物部分?jǐn)?shù)目的另一種方法是通過(guò)糖苷與所述多肽的化學(xué)或酶促連接(參見(jiàn)，例如，在W087/05330中)?？梢酝ㄟ^(guò)除去潛在的糖基化作用位點(diǎn)，通過(guò)以化學(xué)和/或酶促方法去除糖基化作用，或通過(guò)取代編碼糖基化氨基酸殘基的密碼子來(lái)實(shí)現(xiàn)去糖基化作用?；瘜W(xué)去糖基化技術(shù)是已知的，并且可以通過(guò)使用多種內(nèi)糖苷酶和外糖苷酶來(lái)實(shí)現(xiàn)多肽上碳水化合物部分的酶促切割。
[0159]多種細(xì)胞系可以用于產(chǎn)生糖基化蛋白。一種非限制性實(shí)例是二氫葉酸還原酶(DHFR)缺陷型中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞，它是用于產(chǎn)生重組糖蛋白的常用宿主細(xì)胞。這些細(xì)胞不表達(dá)P -半乳糖苷a _2，6-涎基轉(zhuǎn)移酶，并且因此不會(huì)增加a -2，6鍵合至在這些細(xì)胞中產(chǎn)生的糖蛋白的N-連接寡糖的唾液酸。
[0160]另一種類型的修飾是在本發(fā)明的肽序列的N-和/或C-末端結(jié)合(例如，連接)一個(gè)或多個(gè)其他組分或分子，如另一種蛋白質(zhì)(例如，具有與主體蛋白質(zhì)異源的氨基酸序列的蛋白質(zhì))或載體分子。因此，示例性肽序列可以與另一種組分或分子結(jié)合。
[0161]在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的肽序列的氨基或羧基末端可以與免疫球蛋白Fe區(qū)(例如，人Fe)融合以形成融合結(jié)合物(或融合分子)。Fe融合結(jié)合物可以提高生物藥物的全身半衰期，并因此生物藥物產(chǎn)品可以具有延長(zhǎng)的活性或需要較低的施用頻率。Fe結(jié)合至沿血管排列的內(nèi)皮細(xì)胞中的新生兒Fe受體(FcRn)，并且一旦結(jié)合，F(xiàn)e融合分子受到保護(hù)而不會(huì)降解和再釋放到循環(huán)中，從而保持分子循環(huán)時(shí)間更長(zhǎng)。據(jù)信這種Fe結(jié)合是內(nèi)源IgG保持其長(zhǎng)血漿半衰期的機(jī)制。熟知并且批準(zhǔn)的Fe-融合藥物由連接到抗體Fe區(qū)的兩份生物藥物組成以改善藥物動(dòng)力學(xué)、溶解度和產(chǎn)生效率。最近，F(xiàn)e融合技術(shù)將一份生物藥物連接至抗體的Fe區(qū)， 從而與傳統(tǒng)的Fe-融合結(jié)合物相比，優(yōu)化了所述生物藥物的藥物動(dòng)力學(xué)和藥效性質(zhì)。
[0162]結(jié)合物修飾可用于產(chǎn)生保留了活性以及第二分子的額外或補(bǔ)充功能或活性的肽序列。例如，肽序列可以結(jié)合至分子，例如，以有利于體內(nèi)溶解度、存儲(chǔ)，或者體內(nèi)貨架半衰期或穩(wěn)定性、降低免疫原性、延緩或控制釋放等。其他功能或活性包括相對(duì)于非結(jié)合肽序列降低毒性的結(jié)合物，比非結(jié)合肽序列更有效地靶向細(xì)胞或器官類型的結(jié)合物，或進(jìn)一步對(duì)抗與本文所述的病癥或疾病(例如，糖尿病)有關(guān)的原因或作用的藥物。[0163]蛋白質(zhì)治療劑的臨床有效性可以受限于短血漿半衰期和對(duì)降解的敏感性。多種治療性蛋白的研究已表明多種修飾，包括將肽序列結(jié)合或連接到任何多種非蛋白質(zhì)聚合物，例如，聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧化烯(參見(jiàn)，例如，通常通過(guò)共價(jià)結(jié)合至蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)聚合物(例如，PEG)兩者的連接部分)可以延長(zhǎng)半衰期。這些PEG-結(jié)合的生物分子已顯示具有臨床有用的性質(zhì)，其包括更好的物理和熱穩(wěn)定性，保護(hù)抵抗對(duì)酶促降解的敏感性、提高的溶解度、更長(zhǎng)的體內(nèi)循環(huán)半衰期和降低的清除率、降低的免疫原性和抗原性和降低的毒性。
[0164]適合于結(jié)合至本發(fā)明的肽序列的PEG通常在室溫下可溶于水，并且具有通式R(O-CH2-CH2)nO-R,其中R是氫或保護(hù)基，如烷基或鏈烷醇基，并且其中n是從I至1，000的整數(shù)。當(dāng)R是保護(hù)基時(shí)，它通常具有I至8個(gè)碳。結(jié)合至所述肽序列的PEG可以是直鏈或支鏈的。支鏈PEG衍生物、“星形PEG”和多臂PEG均包括在本發(fā)明中。在本發(fā)明中使用的PEG的分子量不局限于任何具體的范圍，但是某些實(shí)施方式具有500至200，00之間的分子量，而其他實(shí)施方式具有4，000至10，000之間的分子量。
[0165]本發(fā)明包括結(jié)合物的組合物，其中PEG具有不同的“n”值，并因此多種不同的PEG以具體的比值存在。例如，一些組合物包含結(jié)合物的混合物，其中n=l、2、3和4。在一些組合物中，當(dāng)n=l時(shí)，結(jié)合物的百分比為18-25%，當(dāng)n=2時(shí)，結(jié)合物的百分比為50_66%，當(dāng)n=3時(shí)，結(jié)合物的百分比為12-16%，并且當(dāng)n=4時(shí)，結(jié)合物的百分比多至5%。這些組合物可以通過(guò)本領(lǐng)域中已知的反應(yīng)條件和純化方法產(chǎn)生。
[0166]PEG可以直接或間接(例如，通過(guò)中間物)結(jié)合至本發(fā)明的肽序列。例如，在一種實(shí)施方式中，PEG通過(guò)末端反應(yīng)基團(tuán)(“間隔臂”)結(jié)合。間隔臂是(例如)末端反應(yīng)基團(tuán)，其調(diào)節(jié)一個(gè)或多個(gè)肽序列和聚乙二醇的自由氨基或羧基之間的鍵。具有間隔臂的PEG可以結(jié)合至自由氨基，其包括可以通過(guò)用N-羥基琥珀酰亞胺活化聚乙二醇的琥珀酸酯來(lái)制備的N-羥基琥珀酰亞胺聚乙二醇?？梢越Y(jié)合至自由氨基的另一種活化的聚乙二醇是可以通過(guò)將聚乙二醇一甲基醚與氰尿酰氯反應(yīng)來(lái)制備的2，4-雙(0-甲氧基聚乙二醇)-6-氯-S-三嗪。結(jié)合至自由羧基的活化的聚乙二醇包括聚氧乙烯二胺。
[0167]可以通過(guò)多種常規(guī)方法進(jìn)行一種或多種本發(fā)明的肽序列與具有間隔臂的PEG的結(jié)合。例如，結(jié)合反應(yīng)可以使用4:1至30:1的試劑與蛋白質(zhì)的摩爾比，在pH5至10，在4°C至室溫的溫度下，在溶液中進(jìn)行30分鐘至20小時(shí)?？梢赃x擇反應(yīng)條件以指導(dǎo)反應(yīng)主要產(chǎn)生所需的取代度。一般地，低溫、低pH (例如，pH=5)和短反應(yīng)時(shí)間傾向于降低所連接的PEG的數(shù)目，而高溫、中性至高PH (例如，pH≥7)和更長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間傾向于提高所連接的PEG的數(shù)目?？梢允褂帽绢I(lǐng)域中已知的多種方法來(lái)終止反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，通過(guò)使反應(yīng)混合物酸化和在(例如)_20°C冷凍來(lái)終止反應(yīng)。
[0168]包括舉例說(shuō)明的肽序列(包括表1-8和圖1中所列的肽)的子序列、序列變體和修飾形式的本發(fā)明的肽序列還包括與大的、緩慢代謝的大分子的結(jié)合，所述大分子如蛋白質(zhì)；多糖，如瓊脂糖、瓊脂糖、纖維素、纖維素珠；聚合物氨基酸，如聚谷氨酸、聚賴氨酸；氨基酸共聚物；失活的病毒顆粒；失活的細(xì)菌毒素，如來(lái)自白喉、破傷風(fēng)、霍亂、白細(xì)胞毒素分子的類毒素；失活的細(xì)菌；和樹(shù)突狀細(xì)胞。如果需要，這些結(jié)合形式可以用于產(chǎn)生抗本發(fā)明的肽序列的抗體。
[0169]適合于結(jié)合的其他組分和分子包括(例如)甲狀腺球蛋白；白蛋白，如人血清白蛋白(HSA);破傷風(fēng)類毒素；白喉類毒素；聚氨基酸，如聚(D-賴氨酸:D-谷氨酸)；輪狀病毒的VP6多肽；流感病毒血球凝集素、流感病毒核蛋白；鑰孔血藍(lán)素(KLH);和乙型肝炎病毒核心蛋白和表面抗原；或上述的任意組合。
[0170]可以通過(guò)(例如)遺傳操縱實(shí)現(xiàn)白蛋白與本發(fā)明的肽序列的融合，從而編碼HSA (人血清白蛋白)或其片段的DNA與編碼肽序列的DNA連接。此后，可以用處于(例如)適合的質(zhì)粒形式的融合的核苷酸序列轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染適合的宿主，以表達(dá)融合多肽?？梢詮?例如)原核或真核細(xì)胞體外實(shí)現(xiàn)表達(dá)，或者從(例如)轉(zhuǎn)基因生物體內(nèi)實(shí)現(xiàn)。在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，融合蛋白的表達(dá)是在哺乳動(dòng)物細(xì)胞系中進(jìn)行的，例如，CHO細(xì)胞系。
[0171 ] 將靶標(biāo)蛋白或肽基因融合至白蛋白的其他方法包括稱為Albufuse? (NovozymesBiopharma A/S ;Denmark)的技術(shù),并且結(jié)合的治療性肽序列通常會(huì)更加有效并且在體內(nèi)的吸收更好。該技術(shù)已商業(yè)應(yīng)用于產(chǎn)生Albuferon? (Human Genome Sciences),用于治療丙型肝炎感染的白蛋白和干擾素a -2B的組合。
[0172]另一種實(shí)施方式需要使用一種或多種人域抗體(dAb)。dAb是人抗體(IgG)最小的功能性結(jié)合單元并且具有良好的穩(wěn)定性和溶解度特征。該技術(shù)需要結(jié)合至HSA的dAb (借此形式“AlbudAb”;參見(jiàn)，例如，EP1517921B、W02005/118642 和 W02006/051288)和所關(guān)心的分子(例如，本發(fā)明的肽序列)。與當(dāng)前用于延長(zhǎng)肽的血清半衰期的技術(shù)相比，AlbudAb通常更小并且更易于在微生物表達(dá) 系統(tǒng)(如細(xì)菌或酵母)中產(chǎn)生。由于HSA的半衰期為約三周，因此所得的結(jié)合分子改善了半衰期。dAb技術(shù)的使用也可以提高所關(guān)心的分子的效力。
[0173]其他適合于結(jié)合的組分和分子包括適合于分離或純化的那些。具體的非限制性實(shí)例包括結(jié)合分子，如生物素(生物素-抗生物素蛋白特異性結(jié)合對(duì))、抗體、受體、配體、凝集素或包含固體載體的分子，所述載體包括(例如)塑料或聚苯乙烯珠、板或珠、磁性珠、測(cè)試條和膜。
[0174]純化方法(如陽(yáng)離子交換色層法)可以通過(guò)電荷差用于分離結(jié)合物，其有效地將結(jié)合物分成它們多種分子量。例如，可以加載陽(yáng)離子交換柱，然后用約20mM乙酸鈉(pH~4)清洗，然后用在PH3至5.5 (優(yōu)選地，pH~4.5)緩沖的線性(OM至0.5M) NaCl梯度洗脫?？梢允褂贸Ｒ?guī)方法(例如，質(zhì)譜法、SDS-PAGE或用于通過(guò)分子量分離分子實(shí)體的其他已知方法)通過(guò)分子量鑒別通過(guò)陽(yáng)離子交換色譜法獲得的部份的含量。然后，相應(yīng)地鑒別含有具有連接了所需個(gè)數(shù)的PEG的結(jié)合物的部分，并從未修飾的蛋白質(zhì)序列和具有連接了其他數(shù)目的PEG的結(jié)合物中純化。
[0175]在其他實(shí)施方式中，本發(fā)明的肽序列連接至化學(xué)試劑(例如，抗毒素或化療劑)，其包括(但不限于)細(xì)胞毒素劑，包括紅豆杉醇、細(xì)胞分裂抑素B，短桿菌肽D、絲裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、秋水仙堿、多柔比星、柔紅霉素及其類似物或同系物。其他化學(xué)試劑包括(例如)抗代謝物(例如，甲氨蝶呤、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥(niǎo)嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氨烯咪胺);烷化劑(例如，氮芥、卡莫司汀和洛莫司汀、環(huán)磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、鏈脲佐菌素、絲裂霉素C和順鉬);抗生素(例如，博來(lái)霉素);和抗有絲分裂劑(例如，長(zhǎng)春新堿和長(zhǎng)春堿)。可以使用本領(lǐng)域中已知的和本文所述的接頭技術(shù)將細(xì)胞毒素結(jié)合至本發(fā)明的肽。
[0176]其他適合于結(jié)合的組分和分子包括適合于在測(cè)定中檢測(cè)的那些。具體的非限制性實(shí)例包括可檢測(cè)標(biāo)記物，如放射性同位素(例如，125I ;35S、32P;33P)、產(chǎn)生可檢測(cè)產(chǎn)物的酶(例如，熒光素酶、3 -半乳糖苷酶、辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶)、熒光蛋白、生色蛋白、染料(例如，異硫氰酸熒光素)；熒光發(fā)射金屬(例如，152EU);化學(xué)發(fā)光化合物(例如，氨基苯二酰肼和吖啶鎗鹽);生物發(fā)光化合物(例如，螢光素);和熒光蛋白質(zhì)。間接標(biāo)記物包括結(jié)合至肽序列的標(biāo)記的或可檢測(cè)的抗體，其中所述抗體是可以檢測(cè)的。
[0177]在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的肽序列結(jié)合至放射性同位素以產(chǎn)生用作診斷或治療劑的細(xì)胞毒素放射性藥物(放射性免疫結(jié)合物)。這些放射性同位素的實(shí)例包括(但不限于)碘13銦⑴、乾90和镥m。用于制備放射性免疫結(jié)合物的方法是技術(shù)人員所知的?？缮藤?gòu)的放射性免疫結(jié)合物的實(shí)例包括替伊莫單抗、替坦(tiuxetan)和托西莫單抗。
[0178]本發(fā)明所包括的用于延長(zhǎng)本發(fā)明的肽序列的循環(huán)半衰期、提高穩(wěn)定性、降低清除率或改變免疫原性或變應(yīng)原性的其他方式和方法包括通過(guò)S化的肽序列修飾，其利用了連接至其他分子的羥乙基淀粉衍生物來(lái)修飾分子特征。在(例如)美國(guó)專利申請(qǐng)N0.2007/0134197 和 2006/0258607 中描述了 HES 化的多個(gè)方面。
[0179]用于修飾本發(fā)明的肽序列的任何上述組分和分子可以任選地通過(guò)接頭結(jié)合。適合的接頭包括“靈活接頭”，其通常具有足夠的長(zhǎng)度以允許修飾肽序列和連接的組分和分子之間進(jìn)行一些運(yùn)動(dòng)。接頭分子通常約6-50個(gè)原子長(zhǎng)。接頭分子還可以是(例如)芳基乙炔、含有2-10個(gè)單體單元的乙二醇低聚物、二胺、二酸、氨基酸或其組合?？梢匀菀椎剡x擇適合的接頭并且所述接頭可以具有任何適合的長(zhǎng)度，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、10-20、20-30、30-50個(gè)氨基酸(例如，甘氨酸)。
[0180]示例性的靈活接頭包括甘氨酸聚合物(G)n、甘氨酸-絲氨酸聚合物(例如，(GS) n、GSGGS1^P GGGSn，其中n是至少為I的整數(shù))、甘氨酸-丙氨酸聚合物、丙氨酸-絲氨酸聚合物以及其他靈活接頭。甘氨酸和甘氨酸-絲氨酸聚合物是相對(duì)非結(jié)構(gòu)化的，并因此可以用作組分之間的中性鏈。示例性的靈活接頭包括(但不限于)GGSG, GGSGG, GSGSG, GSGGG, GGGSG和 GSSSG。
[0181 ] 本發(fā)明的肽序列，包括表1-8和圖1中所列的FGF19和FGF21變體和子序列以及FGF19/FGF21融合體和嵌合體，以及表1_8和圖1中所列的序列的子序列、序列變體和修飾形式具有如本文所述的一種或多種活性。活性的一個(gè)實(shí)例的葡萄糖降低活性。活性的另一個(gè)實(shí)例是(例如)與FGF19相比，肝細(xì)胞癌(HCC)刺激或形成的降低?；钚缘钠渌麑?shí)例是(例如)與FGF21相比，脂肪(例如，甘油三酯、膽固醇、非HDL)或HDL增加活性的降低或下降?；钚缘牧硪粋€(gè)實(shí)例是(例如)與FGF21相比，瘦肉減少活性的降低或下降。活性的另一個(gè)實(shí)例是結(jié)合至成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-4 (FGFR4)，或激活FGFR4，例如，以與FGF19的結(jié)合親合力相當(dāng)或更大的FGFR4親合力結(jié)合至FGFR4的肽序列；和激活FGFR4的程度或量與FGF19激活FGFR4的相當(dāng)或更大的肽序列?；钚缘钠渌麑?shí)例包括例如與FGF19相比，醛-酮還原酶基因表達(dá)的下調(diào)或降低；與FGF21相比，Slcla2基因表達(dá)的上調(diào)或提高。[0182]更具體地，本發(fā)明的肽序列(包括表1-8和圖1中所列的FGF19和FGF21變體和子序列以及FGF19/FGF21融合體和嵌合體，以及表1_8和圖1中所列的序列的子序列、變體和修飾形式)包括具有以下活性的那些--與FGF19或在FGF19的氨基酸16-20處具有取代WGDPI 序列的 GQV、⑶1、WGP1、WGDPV, WGD1、⑶P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA, WDP1、WGD1、WGDP或FGDPI中任一項(xiàng)的FGF19變體序列相比，具有降低的肝細(xì)胞癌(HCC)形成的肽序列；與FGF19或在FGF19的氨基酸16-20處具有取代WGDPI序列的GQV、⑶ 1、WGP1、WGDPV, WGD1、⑶ P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA, WDP1、WGD1、WGDP或FGDPI中任一項(xiàng)的FGF19變體序列相比，具有更高的葡萄糖降低活性的肽序列；與FGF19或在FGF19的氨基酸16-20處具有取代WGDPI序列的GQV、⑶1、WGP1、WGDPV、WGD1、⑶P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA, WDP1、WGD1、WGDP 或 FGDPI 中任一項(xiàng)的FGF19變體序列相比，具有較低脂肪提高活性(例如，較低的甘油三酯、膽固醇、非HDL)或更高的HDL提高活性的肽序列；和與FGF21相比，具有較低瘦肉減少活性的肽序列。
[0183]更具體地，本發(fā)明的肽序列(包括表1-8和圖1中所列的FGF19和FGF21變體和子序列以及FGF19/FGF21融合體和嵌合體，以及表1_8和圖1中所列的序列的子序列、變體和修飾形式)包括具有以下活性的那些:結(jié)合至成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-4 (FGFR4)，或激活FGFR4的肽序列，如以與FGF19的結(jié)合親合力相當(dāng)或更大的FGFR4親合力結(jié)合至FGFR4的肽序列；激活FGFR4的程度或量與FGF19激活FGFR4的相當(dāng)或更大的肽序列；例如，與FGF19相比，下調(diào)或降低醛-酮還原酶基因表達(dá)的肽序列；和與FGF21相比，上調(diào)或提高溶質(zhì)載體家族I成員2 (Slcla2)基因表達(dá)的肽序列。
[0184]可以在動(dòng)物(如db/db小鼠)中確定活性，如，例如，肝細(xì)胞癌(HCC)形成或腫瘤發(fā)生、葡萄糖降低活性、脂質(zhì) 增加活性或瘦肉減少活性?？梢酝ㄟ^(guò)本文所公開(kāi)的(參見(jiàn)，例如，實(shí)施例1)或技術(shù)人員已知的測(cè)定來(lái)確定對(duì)與FGFR4的結(jié)合和FGFR4的激活的測(cè)量。
[0185]當(dāng)用于表示肽序列時(shí)，術(shù)語(yǔ)“結(jié)合”是指肽序列在分子水平上的相互作用。因此，結(jié)合至FGFR4的肽序列結(jié)合至FGFR4序列的全部或部分。使用本領(lǐng)域中已知的測(cè)定(例如，競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合、免疫沉淀法、ELISA、流式細(xì)胞術(shù)、免疫印跡)，特異性和選擇性結(jié)合可以不同于非特異性結(jié)合。
[0186]可以使用本領(lǐng)域中已知的方法產(chǎn)生和分離肽和擬肽?？梢允褂没瘜W(xué)法完整或部分地合成妝(參見(jiàn)，例如，Caruthers (1980) ? Nucleic Acids Res.Symp.Ser.215 ；Horn(1980)；and Banga, A.K., Therapeutic Peptides and Proteins.Formulation.Processing andDelivery Systems (1995) Technomic Publishing C0.，Lancaster, PA)。可以使用多種固相技術(shù)進(jìn)行妝合成(參見(jiàn)，例如，Roberge Science269:202 (1995) ；Merrifield, MethodsEnzymol.289:3 (1997))并且可以(例如)根據(jù)生產(chǎn)商的說(shuō)明書使用ABI431A肽合成儀(Perkin Elmer)實(shí)現(xiàn)自動(dòng)合成。還可以使用組合方法合成肽和肽模擬物?？梢允褂帽绢I(lǐng)域中已知的多種程序和方法合成引入合成殘基和多肽的模擬物(參見(jiàn)，例如，OrRanicSyntheses Collective Volumes, Gilman等人主編，John ffiley&Sons, Inc.，NY)?？梢酝ㄟ^(guò)化學(xué)修飾方法產(chǎn)生修飾的肽(參見(jiàn),例如，Belousov, Nucleic Acids Res.25:3440 (1997)；Frenkel,Free Radic.Biol.Med.19:373(1995)；和 Blommers, Biochemistry33:7886(1994))。還可以使用如寡核苷酸介導(dǎo)(定點(diǎn))突變、丙氨酸掃描和PCR基突變的方法來(lái)進(jìn)行肽序列的改變、衍生化、取代和修飾。定點(diǎn)突變(Carter等人，Nucl.AcidsRes.，13:4331(1986) ；Zoller 等人，Nucl.Acids Res.10:6487(1987))、盒式突變(Wells等人，Gene34:315 (1985))、限制-選擇突變(Wells 等人，Philos.Trans.R.Soc.LondonSerA317:415 (1986))和及其他技術(shù)可以用于克隆的DNA以產(chǎn)生本發(fā)明的肽序列、變體、融合體和嵌合體、及其改變、衍生化、取代和修飾。
[0187]“合成”或“產(chǎn)生”的肽序列是通過(guò)包括人為操縱在內(nèi)的任何方法所制備的肽。這些方法包括(但不限于)上述方法，如化學(xué)合成、DNA重組技術(shù)、大分子的生物化學(xué)或酶促片段以及上述方法的組合。
[0188]還可以修飾包括舉例說(shuō)明的肽序列(例如，表1-8和圖1中所列的序列)的子序列、序列變體和修飾形式的本發(fā)明的肽序列以形成嵌合分子。根據(jù)本發(fā)明，提供了包括異源域的肽序列。這些域可以添加到肽序列的氨基末端或羧基末端。還可以將異源域定位在肽序列內(nèi)，和/或作為另外一種選擇，側(cè)接至FGF19和/或FGF21來(lái)源的氨基酸序列。
[0189]術(shù)語(yǔ)“肽”還包括肽的二聚體或多聚體(低聚物)。根據(jù)本發(fā)明，還提供了舉例說(shuō)明`的肽序列的二聚體或多聚體(低聚物`)以及舉例說(shuō)明的肽序列(例如，表1-8和圖1中所列的序列)的子序列、變體和修飾形式。
[0190]本發(fā)明還提供了編碼本發(fā)明的肽序列的核酸分子，所述肽序列包括表1-8和圖1中所列的序列的子序列、序列變體和修飾形式，以及包含編碼所述肽的核酸的載體。因此，“核酸”包括編碼本文所公開(kāi)的舉例說(shuō)明的肽序列的那些，以及編碼舉例說(shuō)明的肽序列的功能性子序列、序列變體和修飾形式的那些，只要它們保留了至少可檢測(cè)或可測(cè)量的活性或功能。例如，本文所公開(kāi)的舉例說(shuō)明的肽序列(例如，表1-8和圖1中所列的序列)的子序列、變體或修飾形式保留了降低或減少葡萄糖、提供正常的葡萄糖體內(nèi)平衡，或減輕與體內(nèi)慢性或急性高血糖有關(guān)的組織病理學(xué)病癥等的一些能力。
[0191]核酸在本文中還可以稱為基因、多核苷酸、核苷酸序列、引物、寡核苷酸或探針，它是指含有天然或修飾的嘌呤和嘧啶的任意長(zhǎng)度的聚合物，所述聚合物是多核糖核苷酸或多脫氧核糖核苷酸或者混合的多核糖-多脫氧核糖核苷酸及其端基異構(gòu)形式。含有兩種或更多種嘌呤和嘧啶的聚合物通常通過(guò)磷脂鍵或其類似物連接。該術(shù)語(yǔ)可以可互換地使用以表示核酸的所有形式，其包括脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。核酸可以是單鏈、雙鏈或三鏈的、直鏈或環(huán)形的。核酸包括基因組DNA和cDNA。RNA核酸可以是剪接或非剪接mRNA、rRNA、tRNA或反義的。核酸包括天然存在的、合成的和核苷酸類似物和衍生物。
[0192]由于遺傳密碼的簡(jiǎn)并度，核酸分子包括相對(duì)于編碼本發(fā)明的肽序列的核酸分子的序列簡(jiǎn)并。因此，提供了編碼肽序列(包括在本文中舉例說(shuō)明的肽序列(例如，表1-8和圖1中所列的序列)的子序列、變體和修飾形式)的簡(jiǎn)并核酸序列。當(dāng)用于表示核酸序列時(shí)，術(shù)語(yǔ)“互補(bǔ)”是指所提及區(qū)域是100%互補(bǔ)的，即表現(xiàn)出100%的堿基配對(duì)而無(wú)錯(cuò)配。
[0193]可以使用任何多種已知的標(biāo)準(zhǔn)克隆和化學(xué)合成方法來(lái)產(chǎn)生核酸，并且可以通過(guò)定點(diǎn)突變或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他重組技術(shù)來(lái)有意地改變?？梢酝ㄟ^(guò)測(cè)序、凝膠電泳、UV光譜法確定多核苷酸的純度。
[0194]可以將核酸插入到其中所述核酸的表達(dá)受本文中稱作“表達(dá)盒”的“表達(dá)控制元件”的影響或調(diào)控的核酸構(gòu)件中。術(shù)語(yǔ)“表達(dá)控制元件”是指調(diào)控或影響可操作地連接其上的核酸序列的表達(dá)的一個(gè)或多個(gè)核酸序列元件。根據(jù)情況，表達(dá)控制元件可以包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、轉(zhuǎn)錄終止子、基因沉默子、蛋白質(zhì)編碼基因前的起始密碼子(例如，ATG)等。[0195] 可操縱地連接至核酸序列的表達(dá)控制元件控制核酸序列的轉(zhuǎn)錄和(根據(jù)情況)翻譯。術(shù)語(yǔ)“可操縱地連接”是指毗連，其中所提及的組分處于允許它們以其預(yù)定方式起作用的關(guān)系。通常，表達(dá)控制元件在基因的5’或3’末端是毗連的，但是還可以是內(nèi)含子。
[0196]表達(dá)控制元件包括組成性激活轉(zhuǎn)錄的元件，它是可誘導(dǎo)的(即，需要外部信號(hào)或刺激物進(jìn)行激活)或去阻遏的(即，需要信號(hào)來(lái)關(guān)閉轉(zhuǎn)錄；當(dāng)信號(hào)不在存在時(shí)，轉(zhuǎn)錄激活或“脫阻遏”)。本發(fā)明的表達(dá)盒還包括足以賦予特定細(xì)胞類型或組織(即，組織特異性控制元件)可控的基因表達(dá)的控制元件。通常，這些元件位于編碼序列的上游或下游(即5’和3’)。啟動(dòng)子通常位于編碼序列的5’位置。通過(guò)重組DNA或合成技術(shù)產(chǎn)生的啟動(dòng)子可用于提供本發(fā)明的多核苷酸的轉(zhuǎn)錄?！皢?dòng)子”通常表示足以指導(dǎo)轉(zhuǎn)錄的最小序列元件。
[0197]可以將核酸插入到質(zhì)粒中以用于向宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)化以及用于后續(xù)的表達(dá)和/或基因操縱。質(zhì)粒是可以在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定增殖的核酸；質(zhì)?？梢匀芜x地含有表達(dá)控制元件以驅(qū)使核酸的表達(dá)。對(duì)本發(fā)明來(lái)說(shuō)，載體與質(zhì)粒具有相同含義。質(zhì)粒和載體通常含有至少一個(gè)用于在細(xì)胞中增殖的復(fù)制起點(diǎn)和啟動(dòng)子。質(zhì)粒和載體還可以包括用于在宿主細(xì)胞中表達(dá)的表達(dá)控制元件，并因此對(duì)于(例如)編碼肽序列、在宿主細(xì)胞和生物(例如，需要治療的受試者)中表達(dá)肽序列，或者產(chǎn)生肽序列的核酸的表達(dá)和/或基因操縱是有用的。
[0198]如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“轉(zhuǎn)基因”是指已通過(guò)一定方式引入到細(xì)胞或生物中的多核苷酸。例如，具有轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞，所述轉(zhuǎn)基因已通過(guò)基因操縱或細(xì)胞“轉(zhuǎn)化”引入。已引入轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞或其子代被稱為“轉(zhuǎn)化的細(xì)胞”或“轉(zhuǎn)化株”。通常，轉(zhuǎn)化株的子代中包含轉(zhuǎn)基因，或者轉(zhuǎn)基因已成為由所述細(xì)胞發(fā)展成的生物的一部分?？梢詫⑥D(zhuǎn)基因插入到染色體DNA中，或者作為自復(fù)制質(zhì)粒、YAC、微型染色體等維持。
[0199]細(xì)菌系統(tǒng)啟動(dòng)子包括17和誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，如噬菌體入的pL、plac、ptrp、ptac(ptrp-lac雜交啟動(dòng)子)和四環(huán)素反應(yīng)性啟動(dòng)子。昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)啟動(dòng)子包括組成型或誘導(dǎo)型啟動(dòng)子(例如，蛻皮激素)。哺乳動(dòng)物細(xì)胞組成型啟動(dòng)子包括SV40、RSV、牛乳頭瘤病毒(BPV)和其他病毒啟動(dòng)子，或源于哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因組(例如，金屬硫蛋白IIA啟動(dòng)子；熱激啟動(dòng)子)或源于哺乳動(dòng)物病毒(例如，腺病毒晚期啟動(dòng)子；誘導(dǎo)型小鼠乳腺瘤病毒長(zhǎng)末端重復(fù))的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。作為另外一種選擇，逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組可以是遺傳修飾過(guò)的，以便引入并且指導(dǎo)肽序列在適合的宿主細(xì)胞中的表達(dá)。
[0200]由于本發(fā)明的方法和使用包括體內(nèi)遞送，因此表達(dá)系統(tǒng)還包括為了體內(nèi)使用而設(shè)計(jì)的載體。具體的非限制性實(shí)例包括腺病毒載體(美國(guó)專利N0.5700470和5731172)、腺伴隨病毒載體(美國(guó)專利N0.5604090)、單純皰疹病毒載體(美國(guó)專利N0.5501979)、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(美國(guó)專利 N0.5624820,5693508 和 5674703)、BPV 載體(美國(guó)專利 N0.5719054),CMV載體(美國(guó)專利N0.5561063)和細(xì)小病毒、輪狀病毒、諾沃克病毒和慢病毒載體(參見(jiàn)，例如，美國(guó)專利N0.6013516)。載體包括將基因遞送至腸道細(xì)胞，包括干細(xì)胞的那些(Croyle等A? Gene Ther.5:645 (1998) ；S.J.Henning, Adv.Drug Deliv.Rev.17:341 (1997),美國(guó)專利N0.5821235和6110456)。這些載體中的多數(shù)已批準(zhǔn)用于人類研究。
[0201]酵母載體包括組成型和誘導(dǎo)型啟動(dòng)子(參見(jiàn)，例如，Ausubel等人主編，CurrentProtocols in Molecular Biology,第 2 卷，第 13 章，Greene Publish.Assoc.&ffileyInterscience, 1988 ；Grant 等人，Methods in Enzymology, 153:516(1987), eds.ffu&Grossman ；Bitter Methods in Enzymology, 152:673 (1987), eds.Berger&Kimmel, Acad.Press, N.Y.:和 Strathern 等人，The Molecular Biology of theYeast Saccharomyces (1982) Cold Spring Harbor Press,第 I 和 II 卷)?？梢允褂萌鏏DH或LEU2的組成型酵母啟動(dòng)子或如GAL的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子(R.Rothstein, DNA Cloning.APractical Approach,第 11 卷，第 3 章，D.M.Glover, IRL Press, Wash., D.C., 1986)。能夠促進(jìn)外源核酸序列通過(guò)(例如)同源重組整合到酵母染色體上的載體是本領(lǐng)域已知的。當(dāng)插入的多核苷酸對(duì)于更常見(jiàn)的載體來(lái)說(shuō)太大時(shí)(例如，超過(guò)約12Kb)，通常使用酵母人工染色#(YAC)0
[0202]表達(dá)載體還可以含有賦予對(duì)選擇壓力的抗性的可選擇標(biāo)志物或可識(shí)別標(biāo)志物(例如，(6-半乳糖苷酶)，借此使得具有待選擇的載體的細(xì)胞能夠生長(zhǎng)和擴(kuò)增。作為另外一種選擇，可選擇標(biāo)志物可以位于第二載體上，所述載體與含有編碼肽序列的核酸的第一載體一起共轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞中。選擇系統(tǒng)包括(但不限于)單純皰疹病毒胸苷激酶基因(Wigler等人，Cellll:223 (1977))、次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因(Szybalska等人，Proc.Nat1.Acad.Sc1.USA48:2026 (1962))和腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Lowy等人，Cell22:817 (1980))基因，它們分別可以應(yīng)用于tk_、hgprt-或aprt-細(xì)胞。另外，可以將抗代謝物抗性用作選擇dhfr的基礎(chǔ),它能夠賦予對(duì)氨甲蝶呤的抗性(O’Hare等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA78:1527 (1981) ) ;gpt 基因，它能賦予對(duì)霉酚酸的抗性(Mulligan 等人，Proc.Natl.Acad.Sci USA78:2072 (1981));新霉素基因，它能賦予對(duì)氨基糖苷G-418的抗性(Colberre-Garapin等人，J.Mol.Biol.150:1 (1981));嘌呤霉素；以及潮霉素基因，它能賦予對(duì)潮霉素的抗性(Santerre等人，Gene30:147 (1984))。其他的可選擇基因包括trpB,它使得細(xì)胞能夠利用吲哚以取代色氨酸；hisD，它使得細(xì)胞能夠利用組胺醇以取代組氨酸(Hartman 等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:8047 (1988));和 ODC (鳥(niǎo)氨酸脫羧酶)，它能賦予對(duì)鳥(niǎo)氨酸脫羧酶抑制劑2-( 二氟甲基)-DL-鳥(niǎo)氨酸(DFMO)的抗性(McConlogue (1987)Tn: Current Communications in Molecular Biology,Cold Spring Harbor Laboratory)?
[0203]根據(jù)本發(fā)明，提供了產(chǎn)生如本文所述的FGF19和/或FGF21的變體或融合體的轉(zhuǎn)化細(xì)胞(體外、離體和體內(nèi))和宿主細(xì)胞，其中FGF19和/或FGF21的變體或融合體的表達(dá)是通過(guò)編碼FGF19和/或FGF21的變體或融合體的核酸賦予的。表達(dá)本發(fā)明的肽序列的轉(zhuǎn)化細(xì)胞和宿主細(xì)胞通常包括編碼本發(fā)明的肽序列的核酸。在一種實(shí)施方式中，轉(zhuǎn)化細(xì)胞或宿主細(xì)胞是原核細(xì)胞。在另一種實(shí)施方式中，轉(zhuǎn)化細(xì)胞或宿主細(xì)胞是真核細(xì)胞。在多個(gè)方面，真核細(xì)胞是酵母或哺乳動(dòng)物(例如，人、靈長(zhǎng)類等)細(xì)胞。
[0204]如本文所使用的，“轉(zhuǎn)化”或“宿主”細(xì)胞是其中引入了核酸的細(xì)胞，所述核酸可以增殖和/或轉(zhuǎn)錄以用于編碼的肽序列的表達(dá)。該術(shù)語(yǔ)還包括宿主細(xì)胞的任何子代或亞克隆。
[0205]轉(zhuǎn)化細(xì)胞和宿主細(xì)胞包括，但不限于，微生物，如細(xì)菌和酵母；以及植物、昆蟲和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。例如，用重組噬菌體核酸、質(zhì)粒核酸或粘粒核酸表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的細(xì)菌；用重組酵母表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的酵母；用重組病毒表達(dá)載體(例如，花椰菜花葉病毒CaMV ;煙草花葉病毒TMV)感染的或用重組質(zhì)粒表達(dá)載體(例如，Ti質(zhì)粒)轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞系統(tǒng)；用重組病毒表達(dá)載體(例如，桿狀病毒)感染的昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)；和用重組病毒表達(dá)載體(例如,逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、牛痘病毒)感染的動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)，或?yàn)榱硕虝夯蚍€(wěn)定增殖或表達(dá)而工程改造的轉(zhuǎn)化的動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)。[0206]對(duì)于基因療法的使用和方法，轉(zhuǎn)化細(xì)胞可以在受試者中?？梢杂镁幋a如本文所述的本發(fā)明的肽序列的核酸體內(nèi)轉(zhuǎn)化受試者中的細(xì)胞。作為另外一種選擇，可以用轉(zhuǎn)基因或多核苷酸體外轉(zhuǎn)化細(xì)胞，然后再將所述細(xì)胞移植到受試者的組織中以使治療起效。作為另外一種選擇，可以用編碼FGF19和/或FGF21的變體或其融合/嵌合序列(或變體)(如包括FGF19的全部或部分或者包括FGF21的全部或部分的嵌合肽序列)的轉(zhuǎn)基因或多核苷酸轉(zhuǎn)化原代細(xì)胞分離株或建立的細(xì)胞系，然后任選地將其移植到受試者的組織中。
[0207]用于肽序列表達(dá)，具體地體內(nèi)表達(dá)的非限制性靶細(xì)胞包括胰腺細(xì)胞(胰島細(xì)胞)、肌細(xì)胞、粘膜細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞。這些內(nèi)分泌細(xì)胞可以提供FGF19和/或FGF21的變體或其融合/嵌合序列(或變體)，如包括FGF19的全部或部分或者包括FGF21的全部或部分的嵌合肽序列的可誘導(dǎo)的產(chǎn)生(分泌)。其他轉(zhuǎn)化細(xì)胞包括干細(xì)胞或其他多能或多潛能細(xì)胞，例如，分化成多種胰腺細(xì)胞(胰島細(xì)胞)、肌細(xì)胞、粘膜細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞的祖細(xì)胞。靶標(biāo)干細(xì)胞提供本發(fā)明的肽序列的長(zhǎng)期表達(dá)。
[0208]如本文所使用的，當(dāng)用于表示細(xì)胞時(shí)，術(shù)語(yǔ)“培養(yǎng)”是指細(xì)胞的體外生長(zhǎng)。這些細(xì)胞的具體實(shí)例是分離自受試者和在組織培養(yǎng)中生長(zhǎng)或適合于在組織培養(yǎng)中生長(zhǎng)的細(xì)胞。另一個(gè)實(shí)例是體外基因操縱并移植回到相同或不同的受試者中的細(xì)胞。
[0209]當(dāng)用于表示細(xì)胞時(shí)，術(shù)語(yǔ)“分離的”是指從其天然存在的體內(nèi)環(huán)境中分離的細(xì)胞?？梢匀藶榭刂啤芭囵B(yǎng)的”和“分離的”細(xì)胞，如遺傳轉(zhuǎn)化。這些術(shù)語(yǔ)包括細(xì)胞的任何子代，其包括由于細(xì)胞分裂期間發(fā)生的突變，可能與親本細(xì)胞不相同的子代細(xì)胞。該術(shù)語(yǔ)不包括全部人類。
[0210]可以引入編碼本發(fā)明的肽序列的核酸以用于向完整生物的細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)。包括非人轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的這些生物對(duì)于研究在完整動(dòng)物中的肽表達(dá)的影響以及治療益處是有用的。例如，如本文所公開(kāi)的，在小鼠中，F(xiàn)GF19和/或FGF21的變體或其融合/嵌合序列(或變體)(如包括如本文所說(shuō)明的FGF19的全部或部分或FGF21的全部或部分的嵌合肽序列)的產(chǎn)生降低了葡萄糖并且是抗糖尿病的。
[0211]發(fā)展了特定疾病(例如，糖尿病、退行性病癥、癌癥等)或?qū)Πl(fā)展特定疾病敏感的小鼠系也用于引入如本文所述的治療性蛋白以研究在疾病敏感小鼠中治療性蛋白表達(dá)的作用。對(duì)特定疾病或生理?xiàng)l件敏感的轉(zhuǎn)基因或遺傳動(dòng)物模型(如鏈脲佐菌素(STZ)-誘導(dǎo)的糖尿病(STZ)小鼠)是表達(dá)如本文所述的FGF19和/或FGF21的變體或其融合/嵌合序列(或變體)，如包括FGF19的全部或部分或者包括FGF21的全部或部分的嵌合肽序列的適合的靶標(biāo)。因此，根據(jù)本發(fā)明，提供了產(chǎn)生FGF19和/或FGF21的變體或其融合/嵌合序列(或變體)，如包括如本文所說(shuō)明的FGF19的全部或部分或FGF21的全部或部分的嵌合肽序列的非人轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，所述肽的產(chǎn)生在所述動(dòng)物中不是天然存在的，而是通過(guò)存在于所述動(dòng)物的體細(xì)胞或生殖細(xì)胞中的轉(zhuǎn)基因賦予的。
[0212]術(shù)語(yǔ)“轉(zhuǎn)基因動(dòng)物”是指體細(xì)胞或生殖細(xì)胞具有直接或間接通過(guò)亞細(xì)胞水平上有意的基因操縱(如通過(guò)微量注射或用重組病毒轉(zhuǎn)染)接受的遺傳信息的動(dòng)物。術(shù)語(yǔ)“轉(zhuǎn)基因”還包括得自如本文所述的遺傳操縱的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的細(xì)胞或組織(即“轉(zhuǎn)基因細(xì)胞”、“轉(zhuǎn)基因組織”)。在本文中，“轉(zhuǎn)基因動(dòng)物”不涵蓋通過(guò)經(jīng)典雜交育種或體外受精所產(chǎn)生的動(dòng)物，而是表示其中一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞接受核酸分子的動(dòng)物。就轉(zhuǎn)基因而言，本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可以是雜合的或純合的。在本領(lǐng)域中，用于產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(包括小鼠、綿羊、豬和青蛙)的方法是熟知的(參見(jiàn)，例如，美國(guó)專利 N0.5，721，367,5, 695，977,5, 650，298 和 5，614，396)，并且照此，這些方法是另外包括的。
[0213]肽序列、編碼肽序列的核酸、表達(dá)肽序列的載體和轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞包括分離和純化的形式。當(dāng)用作本發(fā)明組分的修飾語(yǔ)時(shí)，術(shù)語(yǔ)“分離的”是指組分基本上完全或至少部分從環(huán)境中的一種或多種組分中分離。一般地，當(dāng)分離時(shí)，在自然界中存在的組分基本不含在自然界中通常與它們相關(guān)的一種或多種材料，例如，一種或多種蛋白質(zhì)、核酸、脂肪、碳水化合物或細(xì)胞膜。術(shù)語(yǔ)“分離的”不排除組分的替代物理形式，如變體、修飾或衍生化形式、融合體和嵌合體、多聚體/寡聚體等，或者在宿主細(xì)胞中表達(dá)的形式。術(shù)語(yǔ)“分離的”也不排除其中存在組分的形式(例如，藥物組合物、合并組合物等)，其中任一種均是人為產(chǎn)生的。
[0214]當(dāng)不含一種或多種其他材料(如污染物或不期望的物質(zhì)或材料)中的一些、大量或者大部分或全部時(shí)，“分離的”組分還可以是“純化的”。本發(fā)明的肽序列通常在自然界中是未知的或者認(rèn)為是不存在的。然而，對(duì)于在自然界中確實(shí)存在的組分，分離的組分通常將不含一些、大量或者大部分或全部其他材料，所述材料通常在自然界中是與所述組分有關(guān)的。因此，在自然界中也存在的分離的肽序列不包括在數(shù)百萬(wàn)種其他序列中存在的多肽或多核苷酸，如(例如)蛋白質(zhì)文庫(kù)的蛋白質(zhì)或者基因組或cDNA文庫(kù)中的核酸?！凹兓摹苯M分包括與一種或多種其他失活或活性分子的組合。例如，本發(fā)明的肽序列與另一種藥物或試劑(如，例如，葡萄糖降低藥物或治療劑)混合。
[0215]當(dāng)用作肽序列、編碼肽序列的核酸等的修飾語(yǔ)時(shí)，如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“重組”是指已經(jīng)通過(guò)通常在自然界中不存在的方式(例如，體外)操縱(即工程改造)的組分。重組肽的具體實(shí)例將是通過(guò)用編碼所述肽序列的核酸轉(zhuǎn)染的細(xì)胞表達(dá)本發(fā)明的肽序列的情況。重組核酸的具體實(shí)例將是以下情況:編碼肽序列的核酸(例如，基因組或cDNA)克隆至質(zhì)粒，其具有或不具有在生物的基因組中 所述基因通常鄰接的5’、3’或內(nèi)含子區(qū)。重組肽或核酸的另一個(gè)實(shí)例是雜交或融合序列，如包含F(xiàn)GF19的部分和FGF21的部分的嵌合肽序列。
[0216]根據(jù)本發(fā)明，提供了本發(fā)明的肽序列的組合物和混合物，所述肽序列包括舉例說(shuō)明的肽序列(包括表1-8和圖1中所列的FGF19和FGF21變體和子序列，以及表1_8和圖1中所列的FGF19/FGF21融合體和嵌合體)的子序列、變體和修飾形式。在一種實(shí)施方式中，混合物包括一種或多種肽序列和可藥用載體或賦形劑。在另一種實(shí)施方式中，混合物包括一個(gè)或多個(gè)肽序列和輔助藥物或治療劑，如抗糖尿病或葡萄糖降低藥物或治療劑。下文中說(shuō)明了藥物和治療劑的實(shí)例。還提供了組合，如可藥用載體或賦形劑中的一種或多種肽序列與一種或多種抗糖尿病或葡萄糖降低藥物或治療劑的組合。本發(fā)明的肽序列與另一種藥物或試劑(如葡萄糖降低藥物或治療劑)的這些組合在(例如)根據(jù)本發(fā)明用于(例如)受試者治療的方法和使用中是有用的。
[0217]組合還包括本發(fā)明的肽序列或核酸向顆?；蚓酆衔锏膿饺?，所述聚合物如聚酯、碳水化合物、聚胺酸、水凝膠、聚乙烯基吡咯烷酮、亞乙基-乙烯基乙酸酯、甲基纖維素、羧甲基纖維素、硫酸魚精蛋白或丙交酯/乙交酯共聚物、聚交酯/乙交酯共聚物或乙酸乙烯酯共聚物；在通過(guò)凝聚技術(shù)或通過(guò)界面聚合(例如，分別通過(guò)使用羥甲基纖維素或明膠-微膠囊或者聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊)制備的微膠囊中的包埋；在膠體藥物遞送和分散系統(tǒng)中摻入，所述系統(tǒng)如大分子復(fù)合物、納米膠囊、微球體、珠和脂質(zhì)基體系(例如，N-脂?；鏝-月桂酰基、N-油?；?，脂肪胺如十二烷胺、油酰胺等，參見(jiàn)美國(guó)專利N0.6638513)，其包括(例如)水包油乳劑、膠束、混合膠束和脂質(zhì)體。
[0218]包括如本文所述的舉例說(shuō)明的肽序列(包括表1-8和圖1中所列的FGF19和FGF21變體和子序列，以及表1-8和圖1中所列的FGF19/FGF21融合體和嵌合體)的子序列、變體和修飾形式的本發(fā)明的肽可以用于調(diào)節(jié)葡萄糖代謝并且有利于葡萄糖從血液向主要代謝器官(如瘦肉、肝和脂肪)的輸送。這些肽序列可以足以或有效地恢復(fù)葡萄糖耐量和/或改善或提供正常葡萄糖體內(nèi)平衡的量產(chǎn)生。
[0219]如本文所公開(kāi)的，多種FGF19和FGF21變體以及融合肽序列向小鼠的施用成功地降低了葡萄糖水平。此外，與FGF19相反，某些肽序列在小鼠中不刺激或誘導(dǎo)HCC形成或腫瘤發(fā)生。因此，本發(fā)明的肽(包括舉例說(shuō)明的肽序列(包括表1-8和圖1中所列的FGF19和FGF21變體和子序列，以及表1-8和圖1中所列的FGF19/FGF21融合體和嵌合體)的子序列、變體和修飾形式)通過(guò)直接或間接體內(nèi)方法或通過(guò)離體方法(例如，施用變體或融合肽、編碼所述變體或融合肽的核酸，或表達(dá)所述變體或融合肽的轉(zhuǎn)化細(xì)胞或基因療法載體)向動(dòng)物的施用可以用于治療多種病癥。
[0220]因此， 本發(fā)明包括體外、離體和體內(nèi)(例如，在受試者上或中)方法和使用?？梢允褂帽疚乃龅谋景l(fā)明的肽序列中的任一種實(shí)踐這些方法和使用。
[0221]根據(jù)本發(fā)明，提供了治療患有病癥或具有患病癥風(fēng)險(xiǎn)的受試者的方法。在多種實(shí)施方式中，方法包括向受試者施用對(duì)治療病癥有效的量的肽序列，如表1-8和圖1中所列的FGF19或FGF21的變體、融合體或嵌合體，或者表1_8和圖1中所列的FGF19或FGF21的變體、融合體或嵌合體的子序列、變體或修飾形式。
[0222]使用本發(fā)明的肽、以及方法和使用可治療、可預(yù)防等的示例性病癥包括代謝疾病和病癥。疾病和病癥的非限制性實(shí)例包括:1.葡萄糖利用病癥和與之有關(guān)的后遺癥，包括糖尿病(I型和2型)、妊娠期糖尿病、高血糖、胰島素抵抗、異常葡萄糖代謝、“糖尿病前期”(空腹血糖受損(IFG)或葡萄糖耐量受損(IGT))以及與高血糖病癥有關(guān)或由高血糖病癥產(chǎn)生的其他生理病癥，其包括(例如)組織病理學(xué)變化，如胰腺3 -細(xì)胞破壞。對(duì)于治療，本發(fā)明的肽序列可以施用于空腹血糖(FPG)水平大于約100mg/dl的受試者。本發(fā)明的肽序列還可以用于其他高血糖相關(guān)病癥，其包括腎損害(例如，腎小管損害或腎病)、肝變性、眼損害(例如，糖尿病性視網(wǎng)膜病或白內(nèi)障)和糖尿病足病癥；2.血脂異常及其后遺癥,如(例如)動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈病、腦血管病癥等；3.可能與代謝綜合征有關(guān)的其他病癥，如肥胖和體重升高(包括其共病病癥，如(但不限于)非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和多囊卵巢綜合征(PCOS))，并且還包括血栓形成、高凝血和血栓前狀態(tài)(動(dòng)脈和靜脈)、高血壓、心血管疾病、中風(fēng)和心力衰竭；4.其中涉及炎性反應(yīng)的病癥或病癥，其包括動(dòng)脈粥樣硬化、慢性炎性腸疾病(例如，克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎)、哮喘、紅斑狼瘡、關(guān)節(jié)炎或其他炎癥性風(fēng)濕性病癥；5.細(xì)胞周期或細(xì)胞分化過(guò)程的病癥，如脂肪細(xì)胞腫瘤、脂肪瘤樣癌，其包括(例如)脂肪肉瘤、實(shí)體瘤和贅生物；6.中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)退行性疾病和/或脫髓鞘病癥和/或涉及神經(jīng)炎性過(guò)程的神經(jīng)疾病和/或其他外周神經(jīng)病，其包括阿爾茨海默氏病、多發(fā)性硬化、帕金森氏病、進(jìn)行性多灶性白質(zhì)腦病和格林-巴利綜合征；
7.皮膚和皮膚學(xué)病癥和/或傷口愈合過(guò)程的病癥，其包括紅斑-鱗屑性皮膚?。缓?.其他病癥，如X綜合征、骨關(guān)節(jié)炎和急性呼吸窘迫綜合征。
[0223]如本文所使用的，當(dāng)用于表示受試者的病癥時(shí)，術(shù)語(yǔ)“高血糖的”或“高血糖癥”是指受試者血液中存在的短暫或長(zhǎng)期異常高葡萄糖水平。該病癥可以由葡萄糖代謝或吸收中的延遲所引起，從而受試者表現(xiàn)出在正常受試者中不存在的葡萄糖耐受不良或葡萄糖升高的狀態(tài)(例如，在具有發(fā)展糖尿病風(fēng)險(xiǎn)的葡萄糖不耐糖尿病前期受試者中，或者在糖尿病受試者中)。血糖量正常的空腹血糖(FPG)水平小于約100mg/dl，對(duì)于葡萄糖代謝受損，空腹血糖水平在約100至126mg/dl,對(duì)于糖尿病，空腹血糖水平大于約126mg/dl。
[0224]如本文所公開(kāi)的，本發(fā)明包括預(yù)防(例如，在易患特定病癥的受試者中)、延遲、減緩或抑制肥胖癥或不適當(dāng)?shù)捏w重(例如，與年齡、性別、種族等相當(dāng)?shù)倪m合的匹配受試者相t匕，大于正常體重指數(shù)或“BMI”)的發(fā)展、發(fā)病或治療(例如，改善)所述疾病的方法。因此，在多種實(shí)施方式中，本發(fā)明用于(例如)治療肥胖癥或不適當(dāng)?shù)捏w重(包括肥胖癥的共病病癥，例如，阻塞性睡眠呼吸暫停)、關(guān)節(jié)炎、癌癥(例如，乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌和結(jié)腸癌)、膽結(jié)石或高血糖的方法包括以對(duì)于治療肥胖癥或不適當(dāng)?shù)捏w重有效的量接觸或施用如本文所述的本發(fā)明的肽(例如，如表1-8或圖1中所示的FGF19和/或FGF21的變體或融合體)。在具體的方面，受試者的體重指數(shù)大于25，例如，25-30、30-35、35-40，或大于40。
[0225]此外，本發(fā)明包括預(yù)防(例如，在易患特定病癥的受試者中)、減緩或抑制LDL、VLDL、甘油三酯或膽固醇不期望的血清/血漿水平或異常升高的發(fā)展，延緩其發(fā)病或治療所述疾病的方法，上述情況均可以單獨(dú)和組合導(dǎo)致(例如)斑塊形成、血管狹窄或阻塞，以及高血壓、中風(fēng)和冠狀動(dòng)脈病風(fēng)險(xiǎn)的提高。這些病癥可以由于(例如)遺傳傾向性或飲食造成。
[0226]術(shù)語(yǔ)“受試者”是指動(dòng)物。通常，所述動(dòng)物是將受益于使用本發(fā)明的肽序列的治療的哺乳動(dòng)物。具體實(shí)例包括靈長(zhǎng)類(例如，人)、狗、貓、馬、牛、豬和綿羊。
[0227]受試者包括患有病癥(例如，高血糖病癥，如糖尿病)的那些，或者未患病癥但可以具有發(fā)展所述病癥的風(fēng)險(xiǎn)的受試者，例如，F(xiàn)PG水平大于100mg/dl(例如，在約100至126mg/dl之間)的糖尿病前期受試者。具有發(fā)展病癥風(fēng)險(xiǎn)的受試者包括(例如)飲食可以有助于急性或慢性高血糖(例如，糖尿病)、不適當(dāng)?shù)捏w重或肥胖癥的發(fā)展的那些，以及對(duì)急性或慢性高血糖、或不適當(dāng)?shù)捏w重或肥胖癥的發(fā)展可能具有家族史或遺傳傾向性的那些。
[0228]如本文所公開(kāi)的，治療方法包括在受試者中以對(duì)于實(shí)現(xiàn)所需結(jié)局或結(jié)果有效的量接觸或施用如本文所述的本發(fā)明的肽(例如，如表1-8或圖1中所示的FGF19和/或FGF21的變體或融合體)。導(dǎo)致所需結(jié)局或結(jié)果的治療包括在受試者中降低、減輕或防止病癥的一種或多種癥狀的嚴(yán)重性或頻率，例如，受試者病癥的改善或者“有益作用”或“治療作用”。因此，治療可以短期(例如，1-6、6-12或12-14小時(shí))、中期(例如，1-6,6-12,12-24或24-48天)或長(zhǎng)期(例如，1-6、6-12、12-24、24-48周或者大于24-48周)降低或減輕或防止病癥的一種或多種癥狀的嚴(yán)重性或頻率，穩(wěn)定或抑制病癥的發(fā)展或惡化，并且在一些情況下，逆轉(zhuǎn)所述病癥。因此,就高血糖病癥而言,例如，治療可以降低或減少血糖，改善葡萄糖耐量，改善葡萄糖代謝，提供正常葡萄糖體內(nèi)平衡，降低或減少胰島素抵抗，降低或減少胰島素水平，或者減輕、預(yù)防、改善或逆轉(zhuǎn)代謝綜合征或與高血糖病癥(如糖尿病)有關(guān)或由它所引起的組織病理學(xué)變化。
[0229]例如，肽序列、方法或使用可以將FPG水平大于100mg/dl (例如，約100至125mg/dl之間，或者大于125mg/dl)的一個(gè)或多個(gè)受試者中的葡萄糖降低或減少5_10%、10_20%、20-30%或30-50%或者更多，或者(例如)從大于200mg/dl降低或減少至小于200mg/dl，從大于150mg/dl降低或減少至小于150mg/dl,從大于125mg/dl降低或減少至小于125mg/dl等。另外，肽序列、方法或使用可以降低或減少(例如)基線HbAIc水平大于約5%、6%、7%、8%、9%或10%，具體地5%、6%或7%的糖尿病前期或糖尿病(例如，2型)受試者的葡萄糖。
[0230]與高血糖病癥有關(guān)的組織病理學(xué)變化的改善的非限制性實(shí)例包括(例如)降低、抑制、減少或阻止以下情況:胰腺細(xì)胞(例如，(6-細(xì)胞)的破壞或變性、腎損害(如腎小管鈣化或腎病)、肝變性、眼損害(例如，糖尿病性視網(wǎng)膜病、白內(nèi)障)、糖尿病足、粘膜(如口腔和齒銀)潰瘍、牙周炎、過(guò)量出血、損傷或創(chuàng)口的緩慢或延遲愈合(例如，導(dǎo)致糖尿病合并癰的那些)、皮膚感染及其他皮膚病癥、心血管和冠心病、周圍性血管疾病、中風(fēng)、血脂異常、高血壓、肥胖癥，或者發(fā)展任何上述疾病的風(fēng)險(xiǎn)。不適當(dāng)?shù)捏w重或肥胖癥的改善可以包括(例如)體重減輕(如通過(guò)BMI等反映的)或相關(guān)癥狀的改善，如甘油三酯、膽固醇、LDL或VLDL水平的降低，血壓降低、血管內(nèi)膜增厚減少、心血管疾病或中風(fēng)風(fēng)險(xiǎn)的降低或減少，安靜時(shí)心率的降低等 。
[0231]對(duì)于使用和/或?qū)τ谥委熓茉囌?，“有效量”或“足夠量”是指以單劑量或多劑量單?dú)或與一種或多種其他組分(治療劑，如用于高血糖的藥物或治療)、治療、規(guī)程或治療方案試劑結(jié)合，提供任何時(shí)間期限(短期、中期或長(zhǎng)期)的可檢測(cè)反應(yīng)，所需的結(jié)局或者對(duì)受試者任何可測(cè)量或可檢測(cè)程度或?qū)τ谌魏螘r(shí)間期限(例如，數(shù)小時(shí)、數(shù)天、數(shù)月、數(shù)年或治愈)的客觀或主觀益處。這些量通常對(duì)于將病癥，或所述病癥的一種、多種或全部不利癥狀、后果或并發(fā)癥改善至可測(cè)量的程度是有效的，盡管認(rèn)為降低或抑制所述病癥的發(fā)展或惡化是令人滿意的結(jié)局。
[0232]如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“改善”表示受試者病癥的改善，病癥嚴(yán)重性的降低或病癥發(fā)展或惡化的抑制(例如，穩(wěn)定病癥)。就高血糖病癥(例如，糖尿病、胰島素抵抗、葡萄糖耐受不良、代謝綜合征等)而言，例如，改善可以是血糖的降低或減少、胰島素抵抗的降低、高血糖素的降低、葡萄糖耐量或葡萄糖代謝或體內(nèi)平衡的改善。如本文所述，高血糖病癥的改善還可以包括改善的胰功能(例如，抑制或防止P細(xì)胞/胰島的破壞或提高(6-細(xì)胞數(shù)目和/或功能)，與所述病癥有關(guān)或者由所述病癥產(chǎn)生的病理的降低，如受影響的組織或器官的組織病理學(xué)改善。就不適當(dāng)?shù)捏w重或肥胖癥而言，例如，改善可以是重量增加的減少、體重減輕(例如，如通過(guò)降低的BMI所反映的)或與不適當(dāng)?shù)捏w重或肥胖癥有關(guān)的病癥的改善，例如，如本所述(例如，血糖、甘油三酯、膽固醇、LDL或VLDL水平的降低或減小、血壓降低、血管內(nèi)膜增厚的減少等)。
[0233]因此，治療益處或改善不必需是與病癥或疾病有關(guān)的任一種、大部分或全部癥狀、并發(fā)癥、后果或潛在原因的完全去除。因此，當(dāng)在一段時(shí)間內(nèi)(數(shù)小時(shí)、數(shù)天、數(shù)周、數(shù)月等)，存在短期、中期或長(zhǎng)期的受試者病癥發(fā)展性改善，或者發(fā)生、頻率、嚴(yán)重性、發(fā)展或持續(xù)時(shí)間的部分降低，或者所述病癥或疾病的一種或多種相關(guān)不利癥狀或并發(fā)癥或后果或潛在原因、惡化或發(fā)展(例如，穩(wěn)定病癥、病癥或疾病的一種或多種癥狀或并發(fā)癥)的抑制或逆轉(zhuǎn)，則實(shí)現(xiàn)了滿意的終點(diǎn)。
[0234]因此，就通過(guò)本發(fā)明的肽序列可治療的病癥而言,足以改善病癥的肽的量將取決于所述病癥的類型、嚴(yán)重性和程度或持續(xù)時(shí)間、所需要的治療效果或結(jié)局，并且可以容易地由技術(shù)人員確定。適合的量還將取決于個(gè)體受試者(例如，在受試者中的生物利用率、性別、年齡等)。例如，受試者中正常葡萄糖體內(nèi)平衡的短期或部分恢復(fù)可以降低胰島素注射的劑量或頻率，盡管尚未達(dá)到胰島素的完全免除。[0235]可以通過(guò)(例如)測(cè)量一種或多種相關(guān)生理作用來(lái)確定有效量。在就高血糖病癥而言的具體非限制性實(shí)例中，血糖的降低或減少或者葡糖耐量試驗(yàn)中的改善可以用于確定本發(fā)明的肽序列(包括舉例說(shuō)明的肽序列(例如，表1-8和圖1中所列的序列)的子序列、序列變體和修飾形式)的量對(duì)于治療高血糖病癥是否有效。在另一個(gè)具體的非限制性實(shí)例中，有效量是足以降低或減少任何FPG水平(例如，基線水平)的量，其中，例如，足以將大于200mg/dl的FPG水平降低至小于200mg/dl的量、足以將175mg/dl至200mg/dl之間的FPG水平降低至小于施用前水平的量、足以將150mg/dl至175mg/dl之間的FPG水平降低至小于施用前水平的量、足以將125mg/dl至150mg/dl之間的FPG水平降低至小于施用前水平等的量(例如，將FPG水平降低至小于125mg/dl、小于120mg/dl、小于115mg/dl、小于110mg/dl等)。就HbAIc水平而言，有效量包括足以將水平降低或減少超過(guò)約10%至9%、超過(guò)約9%至8%、超過(guò)約8%至7%、超過(guò)約7%至6%、超過(guò)約6%至5%等的量。更具體地，HbAIc水平降低或減少約 0.1%、0.25%,0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、1.5%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、33%、35%、40%、45%、50%或以上是根據(jù)本發(fā)明的有效量。在就不適當(dāng)?shù)捏w重或肥胖癥而言的另一個(gè)具體的非限制性實(shí)例中，有效量是足以降低或減少受試者體重指數(shù)(BMI)、降低或減少葡萄糖、降低或減少甘油三酯、脂肪、膽固醇、脂肪酸、LDL和/或VLDL的血清/血漿水平的量。在其他具體非限制性實(shí)例中，量是足以將任何上述參數(shù)降低或減少(例如)約 0.1%、0.25%,0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、1.5%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、33%、35%、40%、45%、50% 或以上的量。
[0236]本發(fā)明用于治療受試者的方法和使用適用于預(yù)防法以預(yù)防受試者中的病癥，如高血糖病癥或不適當(dāng)?shù)捏w重或肥胖癥的發(fā)展。作為另外一種選擇，方法和使用可以在受試者的治療期間或之后實(shí)施。例如，在使用(例如)胰島素或另一種葡萄糖降低藥物或治療劑治療受試者以降低葡萄糖之前、期間或之后，本發(fā)明的方法或使用可以，例如，可以將本發(fā)明的肽序列施用于受試者。另外，可以將組分(如本發(fā)明的肽序列)與另一種藥物或試劑(如，例如，葡萄糖降低藥物或治療劑)混合。
[0237]相應(yīng)地，本發(fā)明用于治療受試者的方法和使用可以在另一種治療之前、基本同時(shí)或之后實(shí)施，并且可以補(bǔ)充其他形式的療法。補(bǔ)充療法包括其他葡萄糖降低治療，如胰島素、胰島素敏感性增強(qiáng)劑和其他藥物治療、飲食改變(低糖、低脂肪等)、重量減輕手術(shù)(通過(guò)胃旁路術(shù)、胃切除術(shù)減少胃容積)、胃束帶術(shù)、胃氣球術(shù)、胃袖狀切除術(shù)等。例如，本發(fā)明用于治療高血糖或胰島素抵抗病癥的方法或使用可以與在受試者中降低葡萄糖或提高胰島素靈敏度的藥物或其他藥物組合物結(jié)合使用。用于治療糖尿病的藥物包括(例如)雙胍和磺脲類(例如，甲苯磺丁脲、氯磺丙脲、醋酸己脲、妥拉磺脲、格列本脲和格列吡嗪)、噻唑烷二酮類(羅格列酮、吡格列酮)、GLP_1類似物、二肽基肽酶-4 (DPP-4)抑制劑、溴隱亭制劑(例如，膽汁酸螯合劑(例如，考來(lái)維侖))和胰島素(丸劑和基本類似物)、具有或不具有噻唑烷二酮(TZD)的二甲雙胍(例如，鹽酸二甲雙胍)和SGLT-2抑制劑。食欲抑制藥物也是熟知的并且可以與本發(fā)明的方法結(jié)合使用。可以在本發(fā)明的方法和使用之前、同時(shí)或之后施用補(bǔ)充療法。
[0238]本發(fā)明的肽序列包括舉例說(shuō)明的肽序列(表1-8和圖1中所列的序列)的子序列、序列變體和修飾形式，并且可以配制成單位劑量或單位劑量形式。在具體的實(shí)施方式中，肽序列處于對(duì)治療(例如)由于高血糖而需要治療的受試者有效的量。示例性單位劑量的范圍為約 25-250、250-500、500-1，000、I, 000-2，500 或 2，500-5000,5, 000-25000、25, 000-50, OOOng ；約 25-250、250-500、500-1000、1000-2500 或 2,500-5,000、
5,000-25, 000,25, 000-50,000 u g ；和約 25-250、250-500、500_1，000、1，000-2，500 或2，500-5000,5, 000-25, 000,25, 000-50，OOOmg0
[0239]可以作為單一劑量或多劑量(例如，以有效或足夠的量)施用包括舉例說(shuō)明的肽序列(表1-8和圖1中所列的序列)的子序列、序列變體和修飾形式在內(nèi)的本發(fā)明的肽序列以提供預(yù)期效果。示例性劑量范圍為約25-250、250-500、500-1，000,1, 000-2，500或2，500-5，000,5, 000-25，000、25000-50000pg/kg ；約 50-500,500-5, 000,5, 000-25，000 或25, 000-50, OOOng/kg ；和約 25-250、250-500、500_1，000、1，000-2，500 或 2,500-5,000、5，000-25, 000,25, 000-50, 000g/kgo可以(例如)連續(xù)數(shù)天每天多次、隔天、每周或間歇(例如，每周兩次、每1、2、3、4、5、6、7或8周I次，或每2、3、4、5或6個(gè)月I次)施用單劑量或多劑量。
[0240]可以施用包括舉例說(shuō)明的肽序列(表1-8和圖1中所列的序列)的子序列、變體和修飾形式在內(nèi)的本發(fā)明的肽序列，并且可以通過(guò)任何途徑通過(guò)全身、部位或局部施用實(shí)施方法。例如，可以腸胃外(例如，皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或腹膜內(nèi))、口服(例如，吞服、口腔或舌下)、吸入劑、皮內(nèi)、腔內(nèi)、顱內(nèi)、經(jīng)皮(局部)、經(jīng)粘膜或直腸施用肽序列?？梢酝ㄟ^(guò)(微)包封的遞送系統(tǒng)施用包括舉例說(shuō)明的肽序列(表1-8和圖1中所列的序列)的子序列、變體和修飾形式在內(nèi)的本發(fā)明的肽序列和包括藥物組合物的本發(fā)明的方法，或者可以將其包裹在用于施用的植入物中。
[0241]本發(fā)明還提供了“藥物組合物”，其包括本發(fā)明的肽序列(或序列)，所述序列包括舉例說(shuō)明的肽序列(表1-8和圖1中所列的序列)的子序列、變體和修飾形式和一種或多種藥物可用的或生理學(xué)可用的稀釋劑、載體或賦形劑。在具體的實(shí)施方式中，肽序列或序列以治療可用的量存在。藥物組合物可以根據(jù)本發(fā)明的方法和使用來(lái)使用。因此，例如，藥物組合物可以離體或體內(nèi)施用至受試者以實(shí)踐本發(fā)明的治療方法和使用。
[0242]可以配制本發(fā)明的藥物組合物以適合于預(yù)期的方法或施用途徑；在本文中說(shuō)明了示例性的施用途徑。另外，藥物組合物還可以包含本文所公開(kāi)的或技術(shù)人員已知的其他治療活性劑或化合物(例如，葡萄糖降低劑)，它們可以在如本文所述的多種疾病或病癥的治療或預(yù)防中使用。
[0243]藥物組合物通常包含治療有效量的至少一種本發(fā)明的肽序列(包括舉例說(shuō)明的肽序列(表1-8和圖1中所列的序列)的子序列、變體和修飾形式)和一種或多種藥物和生理學(xué)可用的配制試劑。適合的藥物可用或生理學(xué)可用的稀釋劑、載體或賦形劑包括但不限于，抗氧化劑(例如，抗壞血酸和硫酸氫鈉)、防腐劑(例如，苯甲醇、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、羥基苯酸乙酯或正丙酯)、乳化劑、助懸劑、分散劑、溶劑、填充劑、膨脹劑、緩沖劑、載體、稀釋劑和/或佐劑。例如，適合的載體可以是生理鹽水溶液或檸檬酸鹽緩沖鹽水，其可能補(bǔ)充了在腸胃外施用藥物組合物中常見(jiàn)的其他材料。中性緩沖鹽水或與血清白蛋白混合的鹽水是其他的示例性載體。本領(lǐng)域那些技術(shù)人員將容易地分辨可以在本發(fā)明中所使用的藥物組合物和劑量形式中使用的多種緩沖劑。典型的緩沖劑包括但不限于，藥物可用的弱酸、弱堿或其混合物。緩沖液組分還包括水溶性材料，如磷酸、酒石酸、乳酸、丁二酸、檸檬酸、乙酸、抗壞血酸、門冬氨酸、谷氨酸及其鹽。[0244]載體中的主要溶劑在本質(zhì)上可以是水性或非水性的。另外，所述載體可以含有用于改變或維持藥物組合物的pH、滲透性、粘度、無(wú)菌性或穩(wěn)定性的其他藥物可用賦形劑。在某些實(shí)施方式中，藥物可用的載體是水性緩沖液。在其他實(shí)施方式中，載體包含(例如)氯化鈉和/或檸檬酸鈉。
[0245]本發(fā)明的藥物組合物可以含有用于改變或維持本發(fā)明的肽的釋放速率的其他藥物可用的配制試劑。這些配制試劑包括技術(shù)人員已知用于制備緩釋制劑的那些物質(zhì)。有關(guān)藥物和生理學(xué)可用的配制試劑的其他參考，參見(jiàn)，例如，Remington’s PharmaceuticalSciences,第 18 版(1990，Mack Publishing C0., Easton, Pa.18042),第 1435-1712頁(yè),The Merck Index,第 12 版(1996，Merck Publishing Group, ffhitehouse, NJ)；和Pharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms (1993, Technonic PublishingC0.，Inc.，Lancaster, Pa.)。適合于施用的其他藥物組合物在本領(lǐng)域中是已知的并且適用于本發(fā)明的方法和組合物。
[0246]藥物組合物可以作為溶液、混懸液、凝膠、乳濁液、固體或者脫水或冷凍干燥的粉末保存在無(wú)菌小瓶中。這些組合物可以作為即可使用的形式、使用前需要復(fù)原的的冷凍干燥形式、使用前需要稀釋的液體形式或其他可用形式存儲(chǔ)。在一些實(shí)施方式中，藥物組合物在單次使用容器(例如，單次使用的小瓶、安瓿瓶、注射器或自動(dòng)注射器(類似于(例如)EpiPen?)沖提供，而在其他實(shí)施方式中提供了多次使用容器(例如，多次使用的小瓶)。任何藥物傳送裝置可以用于遞送本發(fā)明的肽，其包括植入物(例如，可植入的泵)和導(dǎo)管系統(tǒng)，這兩者均是技術(shù)人員已知的。通常皮下或肌內(nèi)施用的積存注射也可以用于在限定的一段時(shí)間內(nèi)釋放本發(fā)明的肽。積存注射通常是固體基或油基的，并且通常包含至少一種本文所述的配制組分。技術(shù)人員熟悉積存注射的可能配制和使用。
[0247]可以將藥物組合物配制成適于其預(yù)定施用途徑。因此，藥物組合物包括適合于通過(guò)以下途徑施用的載體、稀 釋劑或賦形劑，所述途徑包括腸胃外(例如，皮下(s.c.)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或腹膜內(nèi))、皮內(nèi)、口服(例如，吞服)、吸入、腔內(nèi)、顱內(nèi)和透皮(局部)。
[0248]藥物組合物可以處于無(wú)菌可注射水性或油性混懸液的形式?？梢允褂帽疚乃_(kāi)的或技術(shù)人員已知的適合的分散劑或潤(rùn)濕劑和助懸劑來(lái)配制這種混懸液。無(wú)菌可注射制劑也可以是處于無(wú)毒腸胃外可用的稀釋劑或溶劑中的無(wú)菌可注射溶液或混懸液，例如，作為1，3-丁二醇中的溶液?？梢允褂玫目捎玫南♂寗?、溶劑和分散介質(zhì)包括水、林格氏溶液、等滲氯化鈉溶液、克列莫佛ELTM (BASF, Parsippany, NJ)或磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇)及其適合的混合物。另外，通常將無(wú)菌固定油劑用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此目的，可以使用任何溫和的固定油，包括合成的甘油單酯或甘油二酯。此外，脂肪酸(如油酸)在可注射劑的制備中得到使用。可以通過(guò)包含延遲吸收的試劑(例如，單硬脂酸鋁或明膠)來(lái)實(shí)現(xiàn)具體可注射制劑的延長(zhǎng)吸收。
[0249]藥物組合物可以處于適合于口服使用的形式，例如，作為片劑、膠囊、錠劑、糖錠、水性或油性混懸液、可分散性粉劑或微粒、乳濁液、固體或軟膠囊、或者糖漿、溶液、微珠或酏劑?？梢愿鶕?jù)本領(lǐng)域?qū)τ谒幬锝M合物制備已知的任何方法來(lái)制備設(shè)計(jì)用于口服使用的藥物組合物。這些組合物可以含有一種或多種試劑，如甜味劑、調(diào)味劑、著色劑和防腐劑，以提供藥物學(xué)精美并且適口的制劑。含有本發(fā)明的肽的片劑可以與適合于片劑制備的無(wú)毒藥物可用的賦形劑混合。這些賦形劑包括(例如)稀釋劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；成粒劑和崩解劑，例如，玉米淀粉或海藻酸；粘合劑，例如，淀粉、明膠或阿拉伯膠；和潤(rùn)滑劑，例如，硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。
[0250]適合于口服的片劑、膠囊等可以是未涂覆的并且可以通過(guò)已知技術(shù)涂覆它們以延遲在胃腸道中的崩解和吸收，并借此提供在較長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)的持續(xù)作用。例如，可以使用延遲材料，如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。它們還可以通過(guò)本領(lǐng)域中已知的技術(shù)涂覆以形成用于緩釋的滲透性治療片劑。其他試劑包括生物可降解或生物相容性顆?；蚓酆衔?，如聚酯、聚胺酸、水凝膠、聚乙烯基吡咯烷酮、聚酐、聚乙醇酸、乙烯基乙酸亞乙基酯、甲基纖維素、羧甲基纖維素、硫酸魚精蛋白或丙交酯/乙交酯共聚物、聚交酯/乙交酯共聚物或乙酸乙烯酯共聚物，以控制所施用的組合物的遞送。例如，口頭試劑可以包埋在通過(guò)凝聚技術(shù)或通過(guò)界面聚合(例如，分別通過(guò)使用羥甲基纖維素或明膠-微膠囊或者聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊)制備的微膠囊中，或膠體藥物遞送系統(tǒng)中。膠體分散系統(tǒng)包括大分子復(fù)合物、納米膠囊、微球體、微珠和脂質(zhì)基系統(tǒng)，其包括水包油乳劑、膠束、混合膠束和脂質(zhì)體。用于制備這些制劑的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的并且是可商購(gòu)的。
[0251]用于口服使用的制劑也可作為硬明膠膠囊存在，其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如，碳酸鈣、磷酸鈣、高嶺土或微晶纖維素)混合，或作為軟明膠膠囊存在，其中活性成分與水或油性介質(zhì)(例如，花生油、液體石蠟或橄欖油)混合。
[0252]水懸液含有與適合于水懸液生產(chǎn)的賦形劑混合的活性物質(zhì)。這些賦形劑是助懸劑，例如，羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃芪膠和阿拉伯樹(shù)膠；分散劑或潤(rùn)濕劑可以是天然存在的磷脂，例如，卵磷脂，或者環(huán)氧烷與脂肪酸的縮合產(chǎn)物，例如，聚氧乙烯硬脂酸酯，或者環(huán)氧乙烷與長(zhǎng)鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物，例如，十七乙烯氧基鯨蠟醇，或者環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產(chǎn)物，如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯，或者環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和已糖醇酐的偏酯的縮合產(chǎn)物，例如，聚乙烯山梨糖醇酐單油酸酯。水懸劑還可以含有一種或多種防腐劑。
[0253]可以通過(guò)將活性成分懸浮在植物油(例如，花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)或礦物油(如液體石蠟)中來(lái)配制油性懸液。油性懸液可以含有增稠劑，例如蜂蠟、固體石蠟或鯨蠟醇?？梢约尤胩鹞秳?如以上所說(shuō)明的那些)和調(diào)味劑以提供適口的口服制劑。
[0254]適合于通過(guò)加入水來(lái)制備水懸劑的可分散性粉劑和微粒提供了與分散劑或潤(rùn)濕劑、助懸劑以及一種或多種防腐劑相混合的活性成分。在本文中舉例說(shuō)明了適合的分散劑或潤(rùn)濕劑以及助懸劑。
[0255]本發(fā)明的藥物組合物還可以處于水包油乳化劑的形式。油相可以是植物油(例如，橄欖油或花生油)或礦物油(例如液體石蠟)或這些油劑的混合物。適合的乳化劑可以是天然存在的膠，例如，阿拉伯樹(shù)膠或黃芪膠；天然存在的磷脂，例如，黃豆、卵磷脂，以及衍生自脂肪酸的酯或偏酯；已糖醇酐，例如，山梨糖醇酐單油酸酯；和偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如，聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯。
[0256]藥物組合物還可以包括載體以保護(hù)所述組合物不被快速降解或從體內(nèi)消除，如緩釋制劑，其包括植入物、脂質(zhì)體、水凝膠、前體藥物和微囊密封的遞送系統(tǒng)。例如，可以單獨(dú)使用延遲材料(如單硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯)或與蠟結(jié)合使用?？梢酝ㄟ^(guò)包含延遲吸收的試劑(例如，單硬脂酸鋁或明膠)來(lái)實(shí)現(xiàn)可注射藥物組合物的延長(zhǎng)吸收?？赏ㄟ^(guò)多種抗菌和抗真菌劑(例如對(duì)羥基苯甲酸酯類、氯代丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等)防止微生物的作用。
[0257]本發(fā)明還包括處于用于直腸施用的栓劑形式的本發(fā)明的肽?？梢酝ㄟ^(guò)將本發(fā)明的肽與在常溫下為固體而在直腸溫度下為液體并因此將在直腸中融化以釋放藥物的適合的無(wú)刺激賦形劑混合來(lái)制備栓劑。這些材料包括(但不限于)可可脂和聚乙二醇。
[0258]根據(jù)本發(fā)明，提供了鑒別具有葡萄糖降低活性但無(wú)明顯肝細(xì)胞癌(HCC)活性的肽(或如本文所述的子序列、變體或修飾形式)的方法。在一種實(shí)施方式中，方法包括:篩選(例如，測(cè)定或測(cè)量)肽序列(或如本文所述的子序列、變體或修飾形式)的葡萄糖降低活性；和篩選(例如，測(cè)定或測(cè)量)肽序列(或如本文所述的子序列、變體或修飾形式)的HCC活性或者與HCC活性有關(guān)的標(biāo)志物的表達(dá)。借此，具有葡萄糖降低活性并且具有降低的或沒(méi)有HCC活性的肽鑒別了所述肽。在具體的方面，與HCC活性有關(guān)的標(biāo)志物包括脂質(zhì)譜——與FGF19相比，具有較低脂肪提高活性的肽表明所述肽具有降低的或者不具有HCC活性；或者與HCC活性有關(guān)的標(biāo)志物包括醛-酮還原酶基因表達(dá)一與FGF19相比，下調(diào)或降低醛-酮還原酶基因表達(dá)的肽表明所述肽具有降低的或者不具有HCC活性；或者指示HCC活性的標(biāo)志物包括Slcla2基因表達(dá)——與FGF19相比，上調(diào)或提高Slcla2基因表達(dá)的肽表明所述肽具`有降低的或者不具有HCC活性。
[0259]在本文中，術(shù)語(yǔ)“測(cè)定”和“測(cè)量”及其語(yǔ)法變化是可互換使用的并且表示定性或定量確定，或者定性和定量確定兩者。當(dāng)這些術(shù)語(yǔ)用于表示檢測(cè)時(shí)，考慮了測(cè)定相對(duì)量的任何含義，其包括本文所述和本領(lǐng)域中已知的多種方法。例如，可以通過(guò)RNA印跡法、免疫印跡法、免疫沉淀測(cè)定或通過(guò)測(cè)量所表達(dá)的蛋白(例如，醛酮還原酶或Slcla2)的活性、功能或量來(lái)測(cè)定或測(cè)量基因表達(dá)。
[0260]作為最常見(jiàn)的肝癌類型的HCC的風(fēng)險(xiǎn)因素包括2型糖尿病(可能由肥胖癥加劇)。根據(jù)糖尿病的持續(xù)時(shí)間以及治療規(guī)程，2型糖尿病中HCC的風(fēng)險(xiǎn)更大(非糖尿病風(fēng)險(xiǎn)的約
2.5至約7倍)。
[0261]可以在HCC的篩選和診斷中使用多種方法并且這些方法對(duì)于技術(shù)人員是熟知的。HCC的指示物包括腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)，如升高的甲胎蛋白(AFP)或右旋-Y-羧基-凝血酶原(DCP)水平。多種不同的掃描和成像技術(shù)也是有用的，其包括超聲、CT掃描和MRI。對(duì)于本發(fā)明，通過(guò)(例如)定量動(dòng)物模型(如db/db小鼠)中HCC瘤的形成，施用肽，與野生型FGF19的HCC瘤的形成進(jìn)行比較，可以體內(nèi)確定肽(例如，候選肽)是否表現(xiàn)出誘導(dǎo)HCC的跡象的評(píng)價(jià)。宏觀地，肝癌可以是瘤狀的，其中腫瘤(它們是圓形至橢圓形、灰色或綠色、被很好的圍繞但未包封)表現(xiàn)為一個(gè)大塊或多個(gè)小塊。作為另外一種選擇，HCC可以作為浸潤(rùn)性腫瘤存在，它是彌漫性的并且未充分圍繞并經(jīng)常浸潤(rùn)門靜脈。
[0262]通常在一種或多種上述技術(shù)的結(jié)果表明HCC可能存在后，進(jìn)行肝組織樣品的病理評(píng)價(jià)。因此，本發(fā)明的方法還可以包括評(píng)價(jià)來(lái)自在HCC研究中有用的體內(nèi)動(dòng)物模型(例如，db/db小鼠)的肝組織樣品以確定肽序列是否表現(xiàn)出誘導(dǎo)HCC的跡象。通過(guò)顯微評(píng)價(jià)，病理學(xué)家可以確定HCC的四種一般結(jié)構(gòu)和細(xì)胞類型(形狀)中的一種是否存在(即纖維板層、假腺管型(腺狀)、多形態(tài)(巨細(xì)胞)和透明細(xì)胞)。
[0263]本發(fā)明還包括抗體及其片段的產(chǎn)生和使用，所述抗體及其片段結(jié)合本發(fā)明的肽序列，所述肽序列包括舉例說(shuō)明的肽序列(包括表1-8和圖1中所列的肽)的子序列、序列變體和修飾形式。[0264]如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“抗體”(Ab)和“免疫球蛋白”(Ig)表示具有相同結(jié)構(gòu)特性的糖蛋白。盡管抗體對(duì)抗原顯示出結(jié)合特異性，但是免疫球蛋白包括抗體和可能缺少抗原特異性的其他抗體樣分子兩者。
[0265]術(shù)語(yǔ)“抗體”包括完整的單克隆抗體、多克隆抗體、由至少兩個(gè)完整抗體所形成的多重特異性抗體(例如，雙重特異性抗體)和包括Fab和F (ab) ’ 2的抗體結(jié)合片段，只要它們表現(xiàn)出所需的生物活性即可?；镜目贵w結(jié)構(gòu)單元包含四聚體，并且每個(gè)四聚體由兩對(duì)相同的多肽鏈組成，每對(duì)具有一條“輕”鏈(約25kDa)和一條“重”鏈(約50-70kDa)。每條鏈的氨基末端部分包括主要負(fù)責(zé)抗原識(shí)別的約100至110個(gè)或更多個(gè)氨基酸的可變區(qū)。相反，每條鏈的羧基末端部分定義了主要負(fù)責(zé)效應(yīng)子功能的恒定區(qū)。人的輕鏈分為K和\輕鏈，而人的重鏈分為i1、5、Y、a或e ,并且分別將抗體同型定義為IgM、IgD、IgA和IgE。通過(guò)重組DNA技術(shù)，或通過(guò)完整抗體的酶促或化學(xué)切割產(chǎn)生了結(jié)合片段。結(jié)合片段包括Fab、Fab’、F(ab’ )2, Fv 和單鏈抗體。
[0266]每條重鏈在一端具有可變域(VH)，隨后是多個(gè)恒定域。每條輕鏈在一端具有可變域(VL)并且在它的另一端具有恒定域；輕鏈的恒定域與重鏈的第一恒定域?qū)?yīng)，而輕鏈可變域與重鏈可變域?qū)?yīng)。在輕鏈和重鏈內(nèi)，可變區(qū)和恒定區(qū)通過(guò)具有約12個(gè)或更多個(gè)氨基酸的“J”區(qū)連接，其中重鏈還包括具有約10個(gè)或更多個(gè)氨基酸的“D”區(qū)?？贵w鏈均顯示出通過(guò)三個(gè)高變區(qū)(也稱為互補(bǔ)決定區(qū)或CDR)連接的相對(duì)保守的框架區(qū)(FR)的相同一般結(jié)構(gòu)。來(lái)自每對(duì)的兩條鏈的CDR通過(guò)框架區(qū)排列，使得能夠結(jié)合至特異性表位。從N末端至C末端，輕鏈和重鏈均包含域FRl、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。
[0267]完整的抗體具有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，并且除了在雙功能或雙重特異性抗體中之外，所述兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)是相同的。雙重特異性或雙功能抗體是具有兩個(gè)不同的重鏈/輕鏈對(duì)和兩個(gè)不同的結(jié)合位點(diǎn)的人工 雜交抗體?？梢酝ㄟ^(guò)多種方法(包括雜交瘤融合或Fab’片段連接)產(chǎn)生雙重特異性抗體。
[0268]如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”是指得自基本均一的抗體群體的抗體，即除了可以少量存在的可能的天然突變之外，組成所述群體的各個(gè)抗體是相同的。單克隆抗體是高度特異的，并且針對(duì)單個(gè)抗原位點(diǎn)。與包括針對(duì)不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制備相反，每個(gè)單克隆抗體針對(duì)抗原上的單個(gè)決定簇。
[0269]“中和抗體”是能夠消除或顯著降低它所結(jié)合的靶標(biāo)抗原的效應(yīng)子功能的抗體分子。
[0270]可以通過(guò)完整抗體的酶促或化學(xué)切割產(chǎn)生抗體結(jié)合片段。用木瓜蛋白酶消化抗體導(dǎo)致產(chǎn)生了兩個(gè)相同的抗原結(jié)合片段(也稱為“Fab”片段)，和無(wú)抗原結(jié)合活性的“Fe”片段。用胃蛋白酶消化抗體導(dǎo)致產(chǎn)生了 F(ab’)2片段，其中抗體分子的兩個(gè)臂仍保持連接并包含兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。F (ab’) 2片段具有交聯(lián)抗原的能力。
[0271]術(shù)語(yǔ)“Fab”是指包含輕鏈恒定域和重鏈CHl域的抗體片段。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“Fv”是指保留抗原識(shí)別和抗原結(jié)合位點(diǎn)兩者的抗體的最小片段。在雙鏈Fv種類中，該區(qū)域由一條重鏈可變域和一條輕鏈可變域通過(guò)非共價(jià)結(jié)合形成的二聚體構(gòu)成。在單鏈Fv種類中，可通過(guò)柔性肽接頭將一條重鏈可變域和一條輕鏈可變域共價(jià)連接，從而可使輕鏈和重鏈以類似于雙鏈Fv種類中的結(jié)構(gòu)的“二聚”結(jié)構(gòu)結(jié)合。它處于這種構(gòu)象:每個(gè)可變域的三個(gè)⑶R相互作用以限定VH-VL 二聚體的表面上的抗原結(jié)合位點(diǎn)。總之，6個(gè)⑶R為抗體提供了抗原結(jié)合特異性，即使是單個(gè)可變域(或只包含3個(gè)對(duì)抗原特異的CDR的Fv的一半)也具有識(shí)別和結(jié)合抗原的能力。
[0272]術(shù)語(yǔ)“互補(bǔ)決定區(qū)”或“CDR”是指免疫學(xué)受體的部分，它與特異性配體接觸并確定了它的特異性。術(shù)語(yǔ)“高變區(qū)”是指導(dǎo)致抗原結(jié)合的抗體的氨基酸殘基。高變區(qū)通常包含來(lái)自“互補(bǔ)決定區(qū)”或“⑶R”的氨基酸殘基和/或來(lái)自“高變區(qū)”的那些殘基。
[0273]如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“表位”是指蛋白質(zhì)抗原上抗體的結(jié)合位點(diǎn)。表位決定簇通常由分子的化學(xué)活性表面基團(tuán)組成，如氨基酸或糖側(cè)鏈，以及特異性立體結(jié)構(gòu)以及電荷特性。據(jù)稱當(dāng)解離常數(shù)≤I PM，優(yōu)選地≤IOOnM,并且最優(yōu)選地≤IOnM時(shí)，抗體結(jié)合抗原。平衡常數(shù)(“KD”)提高是指表位和抗體之間的親合力較低，而平衡常數(shù)降低是指表位和抗體之間的親合力較高。Kd “不大于”某個(gè)量的抗體是指抗體將以給定的Kd或更強(qiáng)烈地結(jié)合至表位。而Kd描述表位和抗體的結(jié)合特征，“效價(jià)”描述抗體本身對(duì)抗體功能的有效性。平衡常數(shù)和效價(jià)之間不必需存在相關(guān)性；因此，例如，相對(duì)低的Kd不能自動(dòng)表示高效價(jià)。
[0274]與抗體有關(guān)的術(shù)語(yǔ)“選擇性結(jié)合”不表示抗體僅結(jié)合至單一物質(zhì)，而是抗體對(duì)第一物質(zhì)的Kd小于抗體對(duì)第二物質(zhì)的Kd。只結(jié)合至表位的抗體僅結(jié)合至該單一表位。
[0275]當(dāng)施用于人時(shí)，含有嚙齒類(鼠或大鼠)的可變區(qū)和/或恒定區(qū)的抗體有時(shí)與(例如)從體內(nèi)快速清除或通過(guò)身體抵抗抗體而產(chǎn)生的免疫應(yīng)答有關(guān)。為了避免嚙齒類來(lái)源的抗體的使用，可以通過(guò)將人抗體功能引入到嚙齒類中來(lái)產(chǎn)生完全人抗體，從而使嚙齒類產(chǎn)生完全人抗體。除非在本文中具體指出，否則“人”和“完全人”抗體可以在本文中可互換地使用。當(dāng)區(qū)別僅部分為人的抗體與完整或完全人抗體時(shí)，術(shù)語(yǔ)“完全人”可以是有用的。技術(shù)人員了解產(chǎn)生完全人抗體的多種方法。
[0276]為了解決可能的 人抗小鼠抗體反應(yīng)，可以使用嵌合抗體或另外的人源化抗體。嵌合抗體具有人恒定區(qū)和鼠可變區(qū)，并且照此，可以在一些患者中觀察到人抗嵌合抗體反應(yīng)。因此，有利的是提供抗多聚體酶的完全人抗體，以避免可能的人抗小鼠抗體或者人抗嵌合抗體反應(yīng)。
[0277]可以通過(guò)(例如)通過(guò)技術(shù)人員已知的技術(shù)的雜交瘤細(xì)胞系的產(chǎn)生來(lái)制備完全人單克隆抗體。其他制備方法包括編碼用于適合的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞(如CHO細(xì)胞)的轉(zhuǎn)化的特定抗體的序列的使用。轉(zhuǎn)化可以是通過(guò)用于將多核苷酸引入到宿主細(xì)胞中的任何已知方法，其包括(例如)將多核苷酸包裝到病毒(或病毒載體)中并用病毒(或載體)或通過(guò)本領(lǐng)域中已知的轉(zhuǎn)染程序轉(zhuǎn)導(dǎo)宿主細(xì)胞。用于將異源多核苷酸引入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的方法在本領(lǐng)域中是熟知的并且包括葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、磷酸鈣沉淀、聚凝胺介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、原生質(zhì)體融合、電穿孔、多核苷酸在脂質(zhì)體中的封裝和DNA向核中的直接微量注射。作為用于表達(dá)的宿主可用的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系在本領(lǐng)域中是熟知的并且包括(但不限于)CHO細(xì)胞、HeLa細(xì)胞和人肝細(xì)胞癌細(xì)胞。
[0278]可以診斷和/或治療性使用抗體。例如，通過(guò)檢測(cè)本發(fā)明的一種或多種肽在受試者中的水平并將檢測(cè)水平與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照水平或先前(例如，在任何疾病之前)在受試者中確定的基線水平相比較，可以將抗體用作診斷劑。抗體可以用作治療劑以調(diào)節(jié)本發(fā)明的一種或多種肽的活性，借此對(duì)病癥或病癥產(chǎn)生作用。
[0279]本發(fā)明提供了試劑盒，其包括(但不限于)包裝在適合的包裝材料中的本發(fā)明的肽序列，其任選地與其一種或多種治療劑、組分和藥物組合物結(jié)合。試劑盒任選地包括商標(biāo)或包裝說(shuō)明，其包括組分說(shuō)明或者其中組分的體外、體內(nèi)或離體使用的說(shuō)明。示例性說(shuō)明包括減小或降低血糖、高血糖治療、糖尿病治療等的說(shuō)明。
[0280] 試劑盒可以含有這些組分中的一些，例如，單獨(dú)的兩種或更多種肽序列，或肽序列與另一種治療有用組分(例如，抗糖尿病藥物，如促胃液素化合物)的組合。
[0281]術(shù)語(yǔ)“包裝材料”是指安放試劑盒組分的物理結(jié)構(gòu)。包裝材料可以維持組分無(wú)菌，并且可以由常用于這些目的的材料(例如，紙、波紋纖維、玻璃、塑料、箔片、安瓿瓶、小瓶、管等)制備。
[0282]本發(fā)明的試劑盒可以包括標(biāo)簽或插頁(yè)。標(biāo)簽或插頁(yè)包括“印刷品”，例如，單獨(dú)的或粘貼在組分、試劑盒或包裝材料(例如，箱)上的或連接到(例如)含有試劑盒組分的安瓿瓶、管或小瓶上的紙或紙板。標(biāo)簽或插頁(yè)還可以包括計(jì)算機(jī)可讀的媒介，如磁盤(例如，硬盤、記錄卡、存儲(chǔ)磁盤)、光盤，如CD-或DVD-ROM/RAM、DVD、MP3、磁帶，或者電存儲(chǔ)媒介，如RAM和R0M，或者這些的混合，如磁性/光學(xué)存儲(chǔ)媒介、閃存媒介或存儲(chǔ)類卡。
[0283]標(biāo)簽或插頁(yè)可以包括其中的一種或多種組分、劑量、活性成分的臨床藥理學(xué)(包括作用機(jī)理、藥物動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué))的識(shí)別信息。標(biāo)簽或插頁(yè)可以包括標(biāo)識(shí)生產(chǎn)商信息、批號(hào)、生產(chǎn)商地址和日期的信息。
[0284]標(biāo)簽或插頁(yè)可以包括可以使用試劑盒組分的病癥、病癥、疾病或癥狀的信息。標(biāo)簽或插頁(yè)可以包括對(duì)臨床醫(yī)師或?qū)κ茉囌咴诜椒?、治療?guī)程或治療方案中使用一種或多種試劑盒組分的說(shuō)明。說(shuō)明可以包括劑量、頻率或持續(xù)時(shí)間以及實(shí)施本文所述的任何方法、治療規(guī)程或治療方案的說(shuō)明。示例性說(shuō)明包括如本文所述的治療或肽序列的使用的說(shuō)明。因此，本發(fā)明的試劑盒還可以包括實(shí)施本文所述的發(fā)明的任何方法和使用(包括治療方法和使用)的標(biāo)簽或說(shuō)明。
[0285]標(biāo)簽或插頁(yè)可以包括組分可以提供的任何益處的信息，如預(yù)防或治療益處。標(biāo)簽或插頁(yè)可以包括有關(guān)可能的不良副作用的信息，如警告受試者或臨床醫(yī)師不適合使用特定組分的情況。當(dāng)受試者已經(jīng)、將要或者正在進(jìn)行可能與所述組分不相容的一種或多種其他藥物治療，或者受試者已經(jīng)、將要或者正在經(jīng)歷將會(huì)與所述組分不相容的另一種治療規(guī)程或治療方案時(shí)，也可以發(fā)生不良副作用，并且因此，說(shuō)明可以包括有關(guān)這些不相容性的信肩、O
[0286]本發(fā)明的試劑盒還可以包括其他組分。試劑盒的每種組分可以包裝在單個(gè)容器內(nèi)并且可以將所有多個(gè)容器放置在單個(gè)包裝內(nèi)。本發(fā)明的試劑盒可以設(shè)計(jì)用于冷藏。本發(fā)明的試劑盒還可以設(shè)計(jì)含有本發(fā)明的肽序列，或者含有編碼肽序列的核酸。試劑盒中的細(xì)胞可以維持在適合的儲(chǔ)存條件下直至使用。
[0287]除非另外定義，否則本文中所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)的含義與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義相同。盡管可以在本發(fā)明的實(shí)踐或測(cè)試中使用與本文所述那些相似或等同的方法和材料，但是在本文中描述了適合的方法和材料。
[0288]本文中引用的所有專利申請(qǐng)、專利公開(kāi)、專利及其他參考文獻(xiàn)、GenBank引用和ATCC引用均以它們的全部?jī)?nèi)容作為參考并入。在矛盾的情況下，將以本說(shuō)明書(包括定義)為準(zhǔn)。除非在上下文中明確說(shuō)明，否則如本文所使用的，單數(shù)形式的“一個(gè)”、“和”以及“所述”包括復(fù)數(shù)對(duì)象。因此，例如，提及“肽序列”或“治療”包括多個(gè)這些序列、治療等。
[0289]如本文所使用的，在整個(gè)文檔中，數(shù)值通常以范圍的形式存在。除非在上下文中明確表示，否則范圍形式的使用僅是為了方便和簡(jiǎn)潔，并不應(yīng)將其視作對(duì)本發(fā)明范圍刻板的限制。因此，除非上下文明確說(shuō)明，否則范圍的使用明確地包括了所有可能的子范圍，該范圍內(nèi)所有單個(gè)數(shù)值，并且所有數(shù)值或數(shù)值范圍包括這些范圍內(nèi)的整數(shù)和數(shù)值的分?jǐn)?shù)或范圍內(nèi)的整數(shù)。不考慮范圍的寬度并且在本專利文獻(xiàn)的整個(gè)上下文中，該構(gòu)成是適用的。因此，例如，提到范圍 90-100% 包括 91-99%、92-98%、93-95%、91-98%、91-97%、91-96%、91-95%、91-94%、91-93% 等。提到范圍 90-100% 還包括 91%、92%、93%、94%、95%、95%、97% 等，以及91.1%、91.2%、91.3%、91.4%、91.5% 等，92.1%、92.2%, 92.3%, 92.4%, 92.5% 等。
[0290]另外，提到范圍1-3、3-5、5-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90,90-100,100-110、110-120、120-130、130-140、140-150、150-160、160-170、170-180、180-190、190-200、200-225、225-250 包括 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20 等。在其他實(shí)例中，提到范圍 25-250、250-500、500-1000、1000-2500 或者2500-5000,5000-25, 000,5000-50, 000包括其中的或涵蓋這些數(shù)值的任何數(shù)值或范圍，例如，25、26、27、28、29.? ? 250、251、252、253、254.? ? ? 500、501、502、503、504......等。
[0291]另外如本文所使用的，在整個(gè)該文檔中公開(kāi)了一系列范圍。一系列范圍的使用包括上下限的組合以提供另一個(gè)范圍。不考慮范圍的寬度并且在本專利文獻(xiàn)的整個(gè)上下文中，該構(gòu)成是適用的。因此，例如，提到一系列范圍，如5-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-75、75-100、100-150，包括范圍，如 5-20、5-30、5-40、5-50、5-75、5-100、5_150 和 10-30、10-40、10-50、10-75、10-100、10-150 和 20-40、20-50、20-75、20-100、20_150 等
[0292]為了簡(jiǎn)潔，在本文中使用了某些縮寫。一個(gè)實(shí)例是單字母縮寫以代表氨基酸殘基。氨基酸以及它們相應(yīng)的三字母 和單字母縮寫如下所示:
[0293]
【權(quán)利要求】
1.一種嵌合肽序列，包含: a)包含至少7個(gè)氨基酸殘基的N末端區(qū)域，所述N末端區(qū)域具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置，其中，所述N末端區(qū)域包含DSSPL或DASPH ;和 b)包含SEQID N0:99[FGF19]的一部分的C末端區(qū)域，所述C末端區(qū)域具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置，其中，所述C末端區(qū)域包含SEQ ID N0:99[FGF19]的氨基酸殘基16-29，WGDPIRLRHLYTSG，其中所述W殘基對(duì)應(yīng)于C末端區(qū)域的第一氨基酸位置。
2.一種嵌合肽序列，包含: a)包含SEQID N0:100[FGF21]的一部分的N末端區(qū)域，所述N末端區(qū)域具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置，其中，所述N末端區(qū)域包含氨基酸殘基GQV，并且其中所述V殘基對(duì)應(yīng)于N末端區(qū)域的最后氣基酸位直；和 b)包含SEQID N0:99[FGF19]的一部分的C末端區(qū)域，所述C末端區(qū)域具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置，其中，所述C末端區(qū)域包含SEQ ID N0:99[FGF19]的氨基酸殘基21-29，RLRHLYTSG，并且其中所述R殘基對(duì)應(yīng)于C末端區(qū)域的第一位置。
3.一種嵌合肽序列，包含: a)包含SEQID N0:100[FGF21]的一部分的N末端區(qū)域，所述N末端區(qū)域具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置，其中，所述N末端區(qū)域包含SEQ ID N0:100[FGF21]的至少5個(gè)連續(xù)的氨基酸，其中SEQ ID N0:100[FGF21]包含氨基酸殘基GQV，并且其中所述V殘基對(duì)應(yīng)于N末端區(qū)域的最后氨基酸位置；和 b)包含SEQID N0:99[FGF19]的一部分的C末端區(qū)域，所述C末端區(qū)域具有第一氨基酸位置和最后氨基酸位置，其中，所述C末端區(qū)域包含SEQ ID N0:99[FGF19]的氨基酸殘基21-29，RLRHLYTSG,并且其中所述R殘基對(duì)應(yīng)于C末端區(qū)域的第一位置。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的肽序列，其中，所述N末端區(qū)域包含SEQID NO: 100[FGF21]的至少6個(gè)連續(xù)的氨基酸，所述SEQ ID N0:100[FGF21]包含氨基酸殘基GQV。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的肽序列，其中，所述N末端區(qū)域包含SEQID NO: 100[FGF21]的至少7個(gè)連續(xù)的氨基酸，所述SEQ ID N0:100[FGF21]包含氨基酸殘基GQV。
6.一種肽序列，包含或由任何以下部分組成: a)與參照或野生型FGF19相比，具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、插入或缺失的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19 (FGF19)序列變體； b)與參照或野生型FGF21相比，具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、插入或缺失的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21 (FGF21)序列變體； c)融合至FGF21序列的部分的FGF19序列的部分；或 d)融合至FGF21序列的部分的FGF19序列的部分，其中，與參照或野生型FGF19和/或FGF21相比，F(xiàn)GF19和/或FGF21序列部分具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、插入或缺失。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的肽序列，其中，所述肽序列具有融合至SEQID NO:99[FGF19]的羧基末端氨基酸21-194的SEQ ID NO: 100[FGF21]的氨基末端氨基酸1_16 ;或者其中所述肽序列具有融合至SEQ ID NO: 100[FGF21]羧基末端氨基酸147-181的SEQ IDNO:99[FGF19]的氨基末端氨基酸1-147 (M41);或者其中所述肽序列具有融合至SEQ IDN0:100[FGF21]的羧基末端氨基酸17-181的SEQ ID NO:99[FGF19]的氨基末端氨基酸1_20(M44);或者其中所述肽序列具有融合至SEQ ID NO:99[FGF19]羧基末端氨基酸148-194的SEQ ID N0:100[FGF21]的氨基末端氨基酸1-146 (M45);或者其中所述肽序列具有SEQ IDN0:99[FGF19]的氨基末端氨基酸1_20，其中SEQ ID N0:99[FGF19]的氨基末端氨基酸1_20融合至 SEQ ID N0:100[FGF21]的內(nèi)部氨基酸 17-146，SEQ ID NO: 100[FGF21]的內(nèi)部氨基酸17-146融合至SEQ ID NO:99[FGF19]的羧基末端氨基酸148-194 (M46)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、2或6所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列具有對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:99[FGF19]的氨基酸16-20的WGDPI序列的WGDPI序列基序。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列維持或提高FGFR4介導(dǎo)的活性。
10.根據(jù)權(quán)利要求1、2或6所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列具有對(duì)應(yīng)于FGF19的氨基酸16-20的FGF19WGDPI序列的取代、突變或缺少的WGDPI序列基序。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述WGDPI序列具有一個(gè)或多個(gè)取代、突變或缺少的氨基酸。
12.根據(jù)權(quán)利要求1、2或6所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列不同于在氨基酸 16-20 處具有取代 FGF19WGDPI 序列的 GQV、⑶1、WGP1、WGDPV、WGD1、ffl)P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA, WDP1、WGD1、WGDP 或 FGDPI 中任一項(xiàng)的 FGF19 變體序列。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，N末端或C末端區(qū)域的長(zhǎng)度為約20至約200個(gè)氨基酸殘基。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合肽序列，其中，所述N末端區(qū)域包含氨基酸殘基VHYG，其中所述N末端區(qū)域包含氨基酸殘基DASPHVHYG，或者其中所述N末端區(qū)域包含氨基酸殘基DSSPLVHYG。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的嵌合肽序列，其中，所述G對(duì)應(yīng)于所述N末端區(qū)域的最后位置。
16.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的嵌合肽序列，其中，所述N末端區(qū)域包含氨基酸殘基DSSPLLQ，并且其中所述Q殘基是所述N末端區(qū)域的最后氨基酸位置。
17.根據(jù)權(quán)利要求15或16所述的嵌合肽序列，其中，所述N末端區(qū)域還包含:RHPIP，其中R是所述N末端區(qū)域的第一氨基酸位置；或HPIP，其中H是所述N末端區(qū)域的第一氨基酸位置；或RPLAF，其中R是所述N末端區(qū)域的第一氨基酸位置；或PLAF，其中P是所述N末端區(qū)域的第一氨基酸位置；或1其中R是所述N末端區(qū)域的第一氨基酸位置。
18.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列包含M1-M98變體肽序列中的任一種或所述M1-M98變體肽序列中任一種的子序列或片段，或者由其組成。
19.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列包含以下序列中的任一種或由其組成:
RDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M69)；
RDSSPLLQWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M52)；HPIPDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSV RYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEE PEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M5)；HPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPE SLLQLKALKPGVIQILGVKTSR FLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHSLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEP PGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS (M71)；HPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPE SLLQLKALKPGVIQILGVKTSR FLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPAPPEP PGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS (M72)；HPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPE SLLQLKALKPGVIQILGVKTSR FLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEP PGILAPQPPDVGSSDPLSMVVQDELQGVGGEGCHMHPENCKTLLTDIDRTHTEKPVWDGITGE (M73)；RPLAFSDASPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKG VHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPM VPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (Ml)；RPLAFSDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKG VHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPM VPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M2)；RPLAFSDAGPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKG VHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEILEDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPM VPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M3)；RDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYL CMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPED LRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M48)；RPLAFSDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVH SVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVP EEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M49)；RHPIPDSSPLLQFGDQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHS VRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEILEDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPE EPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M50)；RHPIPDSSPLLQFGGNVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHS VRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPE EPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M51)；MDSSPLLQWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYL CMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPED LRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M53);和MRDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDS16MDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M70)，或上述肽序列中任一種的子序列或片段，或者其中所述R末端殘基缺失的上述肽序列中的任一種。
20.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的嵌合肽序列，其中，所述N末端區(qū)域包含氨基酸殘基DSSPLLQFGGQV，并且其中所述V殘基對(duì)應(yīng)于所述N末端區(qū)域的最后位置。
21.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，氨基酸殘基HPIP是所述N末端區(qū)域的前4個(gè)氨基酸殘基。
22.根據(jù)權(quán)利要求1_3、6或9中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述N末端區(qū)域的第一位置是R殘基，或其中所述N末端區(qū)域的第一位置是M殘基，或其中所述N末端區(qū)域的第一和第二位置是MR序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一和第二位置是RM序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一和第二位置是RD序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一和第二位置是DS序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一和第二位置是MD序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一和第二位置是MS序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一至第三位置是MDS序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一至第三位置是RDS序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一至第三位置是MSD序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一至第三位置是MSS序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一至第三位置是DSS序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一至第四位置是RDSS序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一至第四位置是MDSS序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一至第五位置是MRDSS序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一至第五位置是MSSPL序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一至第六位置是MDSSPL序列，或其中所述N末端區(qū)域的第一至第七位置是MSDSSPL 序列。
23.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述C末端區(qū)域的最后位置對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:99[FGF19]的大約殘基194。
24.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列包含以下序列或由其組成:
HPIPDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK,或其子序列或片段；或者
DSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLP LSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK,或其子序列或片段；
RPLAFSDASPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK,或其子序列或片段；
RPLAFSDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK,或其子序列或片段；
DSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK，或其子序列或片段。
25.根據(jù)權(quán)利要求18、19或24所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，它的子序列或片段在氨基末端、羧基末端或內(nèi)部具有 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多個(gè)氨基酸缺失。
26.根據(jù)權(quán)利要求1、2或6所述的嵌合肽序列，其中，所述N末端區(qū)域或所述C末端區(qū)域包含約 5 至 10、10 至 20、20 至 30、30 至 40、40 至 50、60 至 70、70 至 80、80 至 90、90 至100或更多個(gè)氨基酸的氨基酸序列或由其組成。
27.根據(jù)權(quán)利要求3或6所述的肽序列，其中，所述FGF19序列部分，或所述FGF21序列部分包含F(xiàn)GF19或FGF21的約5至10、10至20、20至30、30至40、40至50、50至60、60至70、70至80、80至90、90至100或更多個(gè)氨基酸的氨基酸序列或由其組成。
28.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述N末端區(qū)域，或所述C末端區(qū)域，或所述FGF19序列部分，或所述FGF21序列部分通過(guò)接頭或間隔臂連接。
29.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列的N-末端包含以下序列中的任一種或由其組成:
HPIPDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG (M5)；
DSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG (M6)；
RPLAFSDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG (M7)；
HPIPDSSPLLQWGDPIRLRHLYTSG (M8)；
HPIPDSSPLLQFGWGDPIRLRHLYTSG (M9)；
HPIPDSSPHVHYGffGDPIRLRHLYTSG (MlO)；
RPLAFSDAGPLLQffGDPIRLRHLYTSG (Mll)；
RPLAFSDAGPLLQFGffGDPIRLRHLYTSG (M12)；
RPLAFSDAGPLLQFGGQVRLRHLYTSG (M13)；
HPIPDSSPHVHYGGQVRLRHLYTSG (M14)；
RPLAFSDAGPHVHWGDPIRLRHLYTSG (M15)；
RPLAFSDAGPHVHWGDPIRLRHLYTSG (M16)；
RPLAFSDAGPHVGffGDPIRLRHLYTSG (M17)；
RPLAFSDAGPHYGffGDPIRLRHLYTSG (M18)；
RPLAFSDAGPVYGffGDPIRLRHLYTSG (M19)；
RPLAFSDAGPVHGffGDPIRLRHLYTSG (M20)；
RPLAFSDAGPVHYffGDPIRLRHLYTSG (M21)；
RPLAFSDAGPHVHGffGDPIRLRHLYTSG (M22)；
RPLAFSDAGPHHGffGDPIRLRHLYTSG (M23)；
RPLAFSDAGPHHYffGDPIRLRHLYTSG (M24)；
RPLAFSDAGPHVYffGDPIRLRHLYTSG (M25)；
RPLAFSDSSPLVHWGDPIRLRHLYTSG (M26)；
RPLAFSDSSPHVHWGDPIRLRHLYTSG (M22)；
RPLAFSDAGPHVffGDPIRLRHLYTSG (M28)；
RPLAFSDAGPHVHYffGDPIRLRHLYTSG (M29)；
RPLAFSDAGPHVHYAffGDPIRLRHLYTSG (M30)；RHPIPDSSPLLQFGAQVRLRHLYTSG (M31)；
RHPIPDSSPLLQFGDQVRLRHLYTSG (M32)；
RHPIPDSSPLLQFGPQVRLRHLYTSG (M33)；
RHPIPDSSPLLQFGGAVRLRHLYTSG (M34)；
RHPIPDSSPLLQFGGEVRLRHLYTSG (M35)；
RHPIPDSSPLLQFGGNVRLRHLYTSG (M36)；
RHPIPDSSPLLQFGGQARLRHLYTSG (M37)；
RHPIPDSSPLLQFGGQIRLRHLYTSG (M38)；
RHPIPDSSPLLQFGGQTRLRHLYTSG (M39)；
RHPIPDSSPLLQFGWGQPVRLRHLYTSG (M40)；
DAGPHVHYGffGDPIRLRHLYTSG (M74)；VHYGffGDPIRLRHLYTSG (M75) ；RLRHLYTSG (M77);或者任何上述肽序列，其中所述氨基末端R殘基缺失。
30.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列的N-末端包含以下序列中的任一種或由其組成:
RHPIPDSSPLLQFGWGDPIRLRHLYTSG ；
RHPIPDSSPLLQWGDPIRLRHLYTSG ；
RPLAFSDAGPLLQFGffGDPIRLRHLYTSG ；
RHPIPDSSPHVHYGffGDPIRLRHLYTSG ；
RPLAFSDAGPLLQFGGQVRLRHLYTSG ；
RHPIPDSSPHVHYGGQVRLRHLYTSG ；
RPLAFSDAGPHVHYGGDIRLRHLYTSG ；
RDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG ；
RPLAFSDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG ；
RHPIPDSSPLLQFGAQVRLRHLYTSG ；
RHPIPDSSPLLQFGDQVRLRHLYTSG ；
RHPIPDSSPLLQFGPQVRLRHLYTSG ；
RHPIPDSSPLLQFGGAVRLRHLYTSG ；
RHPIPDSSPLLQFGGEVRLRHLYTSG ；
RHPIPDSSPLLQFGGNVRLRHLYTSG ；
RHPIPDSSPLLQFGGQARLRHLYTSG ；
RHPIPDSSPLLQFGGQIRLRHLYTSG ；
RHPIPDSSPLLQFGGQTRLRHLYTSG ； RHPIPDSSPLLQFGWGQPVRLRHLYTSG ;或者任何上述肽序列，其中，所述氨基末端R殘基缺失。
31.根據(jù)權(quán)利要求29或30所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列還包含SEQID NO:99[FGF19]的氨基酸殘基30-194在C-末端的添加，其導(dǎo)致產(chǎn)生了嵌合多肽。
32.根據(jù)權(quán)利要求29或30中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列還包含如下所示的 FGF19 序列的全部或部分:PHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK,其位于所述肽的 C-末端，或者其中所述氨基末端“R”殘基從所述肽上缺失。
33.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列的子序列，其中，所述子序列具有至少一個(gè)氨基酸缺失。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的子序列，其中，所述子序列在氨基末端、羧基末端或內(nèi)部具有 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20 或更多個(gè)氨基酸缺失。
35.根據(jù)權(quán)利要求6所述的肽序列，其中，參照或野生型FGF19序列如下所示:
RPLAFSDAGPHVHYGffGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (SEQ ID NO:99)。
36.根據(jù)權(quán)利要求6所述的肽序列，其中，參照或野生型FGF21序列如下所示:
RHPIPD SSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPE SLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS (SEQ ID NO:100)。
37.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述N末端區(qū)域的第一氨基酸位置是“M”殘基、“R”殘基、“S”殘基、“H”殘基、“P”殘基、“L”殘基或“D”殘基，或者其中所述肽序列在所述N末端區(qū)域的第一氨基酸位置不具有“M”殘基或“R”殘基。
38.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述N末端區(qū)域包含下列序列中的任一種:MDSSPL、MSDSSPL、SDSSPL、MSSPL或者SSPL。
39.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，與FGF19或在FGF19 的氨基酸 16-20 處具有取代 WGDPI 序列的 GQV、⑶1、WGP1、WGDPV, WGD1、⑶P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA、WDP1、WGD1、WGDP 或 FGDPI 中任一項(xiàng)的 FGF19 變體序列相比，所述肽序列具有降低的肝細(xì)胞癌(HCC)形成。
40.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，與FGF19或在FGF19 的氨基酸 16-20 處具有取代 WGDPI 序列的 GQV、⑶1、WGP1、WGDPV, WGD1、⑶P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA、WDP1、WGD1、WGDP 或 FGDPI 中任一項(xiàng)的 FGF19 變體序列相比，所述肽序列具有更高的葡萄糖降低活性。
41.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，與FGF19或在FGF19 的氨基酸 16-20 處具有取代 WGDPI 序列的 GQV、⑶1、WGP1、WGDPV, WGD1、⑶P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA、WDP1、WGD1、WGDP 或 FGDPI 中任一項(xiàng)的 FGF19 變體序列相比，所述肽序列具有較低的脂質(zhì)增加活性。
42.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中與FGF19或在FGF19 的氨基酸 16-20 處具有取代 WGDPI 序列的 GQV、⑶1、WGP1、WGDPV, WGD1、⑶P1、GP1、WGQP1、WGAP1、AGDP1、WADP1、WGDA1、WGDPA、WDP1、WGD1、WGDP 或 FGDPI 中任一項(xiàng)的 FGF19 變體序列相比，所述肽序列具有較低的甘油三酯、膽固醇、非HDL或HDL提高活性。
43.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，與FGF21相比，所述肽序列具有較低的瘦肉減少活性。
44.根據(jù)權(quán)利要求39至43中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，在db/db小鼠中確定肝細(xì)胞癌(HCC)形成、葡萄糖降低活性、脂質(zhì)增加活性或瘦肉減少活性。
45.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列結(jié)合至成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4 (FGFR4)或激活FGFR4，或者不能可檢測(cè)地結(jié)合至成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4 (FGFR4)或激活FGFR4。
46.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列以小于、相當(dāng)于或大于FGF19對(duì)FGFR4的結(jié)合親和力的親合力結(jié)合至FGFR4。
47.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列以小于、相當(dāng)于或大于FGF19激活FGFR4的程度或量激活FGFR4。
48.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)氨基酸取代、缺失或插入。
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述氨基酸缺失位于N-或C-末端,或者內(nèi)部。
50.根據(jù)權(quán)利要求48所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述氨基酸取代或缺失位于FGF19的氨基酸位置8-20 (AGPHVHYGffGDPI)的任何位置處。
51.根據(jù)權(quán)利要求1-3或6中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中，所述肽序列包含一個(gè)或多個(gè)L-氨基酸、D-氨基酸、非天然存在的氨基酸，或者氨基酸模擬物、衍生物或類似物。
52.—種組合物,其包含根據(jù)權(quán)利要求1-51中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列。
53.一種藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-51中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列。
54.一種藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-51中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，和葡萄糖降低劑。
55.根據(jù)權(quán)利要求1-51中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列，其中所述肽序列是分離或純化的。
56.編碼根據(jù)權(quán)利要求1-51中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列的核酸分子。
57.根據(jù)權(quán)利要求56所述的核酸分子，還包含可操縱連接的表達(dá)控制元件，其使得編碼所述肽的核酸分子在體外、細(xì)胞中或體內(nèi)表達(dá)。
58.包含根據(jù)權(quán)利要求56或57所述的核酸分子的載體。
59.根據(jù)權(quán)利要求58所述的載體，其中，所述載體包含病毒載體。
60.表達(dá)根據(jù)權(quán)利要求1-51中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列的轉(zhuǎn)化細(xì)胞或宿主細(xì)胞。
61.一對(duì)患有可通過(guò)根據(jù)權(quán)利要求1-51中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列治療的疾病或病癥或者具有患所述疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)的受試者進(jìn)行治療的方法，包括以治療所述病癥有效的量向受試者施用所述嵌合肽序列或肽序列。
62.根據(jù)權(quán)利要求61所述的方法，其中，所述疾病或病癥包括高血糖病癥、胰島素抵抗、高胰島素血癥、葡萄糖耐受不良或代謝綜合征。
63.根據(jù)權(quán)利要求62所述的方法，其中，所述高血糖病癥包括糖尿病。
64.根據(jù)權(quán)利要求62所述的方法，其中，所述高血糖病癥包括胰島素依賴型(I型)糖尿病、II型糖尿病或妊娠期糖尿病。
65.根據(jù)權(quán)利要求61所述的方法，其中，所述病癥包括肥胖癥或不適當(dāng)?shù)捏w重。
66.—種改善有需要的受試者中葡萄糖代謝的方法，包括以有效改善所述受試者中葡萄糖代謝的量向所述受試者施用根據(jù)權(quán)利要求1-51中任一項(xiàng)所述的嵌合肽序列或肽序列。
67.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法，其中，所述受試者的空腹血糖水平大于100mg/dl或者血紅蛋白Alc (HbAlc)水平高于6%。
68.根據(jù)權(quán)利要求63或67所述的方法，其中，所述方法導(dǎo)致降低的葡萄糖水平、提高的胰島素敏感度、降低的胰島素抵抗、降低的高血糖素、葡萄糖耐量或者葡萄糖代謝或體內(nèi)平衡的改善、改善的胰功能、降低的甘油三酯、膽固醇、IDL、LDL或VLDL水平、血壓降低、血管內(nèi)膜增厚降低，或者體重或體重增加降低。
69.一種鑒別具有葡萄糖降低活性但無(wú)顯著肝細(xì)胞癌(HCC)活性的肽序列的方法，包括: a)提供候選妝序列； b)將所述候選肽序列施用于測(cè)試動(dòng)物； c)施用所述候選肽序列后，測(cè)量所述動(dòng)物的葡萄糖水平，以確定所述候選肽序列是否降低葡萄糖水平；和 d)分析所述候選肽序列在所述動(dòng)物中的HCC誘導(dǎo)，或與HCC活性有關(guān)的標(biāo)志物的表達(dá)， 其中，具有葡萄糖降低活性但無(wú)顯著HCC活性的候選肽借此將所述候選肽序列鑒別為具有葡萄糖降低活性但無(wú)顯著肝細(xì)胞癌(HCC)活性的肽序列。
70.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中，所述測(cè)試動(dòng)物是db/db小鼠。
71.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，還包括評(píng)價(jià)來(lái)自所述測(cè)試動(dòng)物的肝組織樣品以確定所述候選肽序列是否表現(xiàn)出誘導(dǎo)HCC的跡象。
72.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中，與HCC活性有關(guān)的標(biāo)志物包括脂肪譜，并且其中與FGF19相比，較低的脂肪提高活性表明所述肽不具有顯著的HCC活性。
73.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中，與HCC活性有關(guān)的標(biāo)志物包括醛酮還原酶基因表達(dá)，并且其中與FGF19相比，上調(diào)或提高醛-酮還原酶基因表達(dá)表明所述肽不具有顯著的HCC活性。
74.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中，指示HCC活性的標(biāo)志物包括Slcla2基因表達(dá)，并且其中與FGF21相比，下調(diào)或降低Slcla2基因表達(dá)表明所述肽不具有顯著的HCC活性。
【文檔編號(hào)】A61P3/10GK103649127SQ201280032887
【公開(kāi)日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2012年6月29日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月1日
【發(fā)明者】雷·靈, 達(dá)林·A·琳霍特 申請(qǐng)人:恩格姆生物制藥公司