專利名稱：抗菌藥呋喃唑酮和呋喃西林的表面增強拉曼光譜檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及針對抗菌藥呋喃唑酮和呋喃西林的定性定量檢測方法，具體是指利用表面增強拉曼光譜方法檢測抗菌藥呋喃唑酮和呋喃西林，屬于飼料、食品、藥品檢測領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
近年來，抗菌藥濫用已成為全球關(guān)注的公共衛(wèi)生問題，其危害主要在于增強人體內(nèi)菌群的耐藥性，從而導(dǎo)致抗菌藥失效，同時抗菌藥在人體內(nèi)的積累也會產(chǎn)生一系列毒性效應(yīng)?？咕幉坏卺t(yī)療中被直接濫用，近年來隨著全球性食品貿(mào)易的快速增長和食品加工方式的變化，多種治療用抗菌藥被當(dāng)做預(yù)防、治療動植物疾病及其生長促進劑而被廣泛地用于家畜、水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)和植物栽培業(yè)中，導(dǎo)致在食品加工中通過相關(guān)途徑殘留于食品中，對人體造成極大的危害。目前，國內(nèi)外已經(jīng)發(fā)展了很多研究抗菌藥的檢測方法，主要可分為微生物法，免·疫法，液相色譜法，液相-質(zhì)譜聯(lián)用法，飛行時間質(zhì)譜法等等，但是這些方法存在耗時多、成本高、靈敏度低不足以達到國際標(biāo)準(zhǔn)的缺陷。表面增強拉曼光譜(SERS)檢測方法近年來在飼料、食品、藥品檢測領(lǐng)域發(fā)展迅速，應(yīng)用日益廣泛。本發(fā)明采用SERS方法檢測抗菌藥呋喃唑酮和呋喃西林，簡便、快速、成本低、靈敏度高，可以準(zhǔn)確快捷地提供檢測結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種操作簡便、成本低，可迅速定性定量分析抗菌藥呋喃唑酮和呋喃西林的表面增強拉曼檢測方法。本發(fā)明的技術(shù)方案如下(I)制備金膠采用檸檬酸三鈉還原氯金酸的方法將30mg氯金酸鉀溶于50ml超純水，加熱至沸騰后，迅速加入濃度為O. 1% 3. O %的檸檬酸三鈉溶液O. 5 5ml，繼續(xù)攪拌加熱2 60min，至顏色穩(wěn)定停止，得到合適粒徑的金溶膠；(2)設(shè)置激光拉曼光譜儀的掃描參數(shù)激發(fā)光源為785nm，儀器激光功率為50-300mw，掃描時間為2-15s ；(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作用丙酮將呋喃唑酮或呋喃西林分別配置濃度為1000，750，100，50，10，5，lppm的溶液，與步驟⑴中的金膠按I : 10的比例混合，并調(diào)節(jié)pH至
I.O 6. 0，進行拉曼光譜掃描，得到各濃度梯度溶液的表面增強拉曼光譜圖；確定呋喃唑麗的特征峰為 1611cm \ 1560cm \ 1488cm S 1472cm S 1397cm \ 1343cm 1I^Ocm \ 1173cm S102201^,97701^80601^775011-1用以定性;并以濃度為橫坐標(biāo)，以特征峰161 Icm^1峰高為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線用以定量；確定呋喃西林的特征峰為160201^1,1554cm-1,1456cm-1,1336cm-1,1162cm-1,966cm_1用以定性；并以并以濃度為橫坐標(biāo)，以特征峰160201^1峰高為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線用以定量；(4)實際樣品的表面增強拉曼光譜檢測將25g配合飼料用IOOml丙酮提取，過濾，定容至100ml，采用步驟(3)中的步驟，得到表面增強拉曼光譜圖；根據(jù)步驟(3)的特征峰，判定實際樣品中是否含有呋喃唑酮或呋喃西林；根據(jù)步驟(3)得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定配合飼料中呋喃唑酮或呋喃西林的含量。


圖I為IOppm呋喃唑酮丙酮溶液的表面增強拉曼圖譜、標(biāo)準(zhǔn)品常規(guī)拉曼圖譜、本底拉曼圖譜。圖2為呋喃唑酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線，橫坐標(biāo)為呋喃唑酮溶液濃度的對數(shù)，縱坐標(biāo)為特征峰1008CHT1的峰高的對數(shù)。圖3為IOppm呋喃西林丙酮溶液的表面增強拉曼圖譜、標(biāo)準(zhǔn)品常規(guī)拉曼圖譜、本底拉曼圖譜。圖4為呋喃西林的標(biāo)準(zhǔn)曲線，橫坐標(biāo)為呋喃西林溶液濃度的對數(shù)，縱坐標(biāo)為特征峰1162CHT1的峰高的對數(shù)。·
具體實施例方式下面結(jié)合實例對本發(fā)明做進一步詳細(xì)說明，但本發(fā)明并不僅僅局限于下述實施例。如下實例中，采用如下條件(I)制備金膠采用檸檬酸三鈉還原氯金酸的方法將30mg氯金酸鉀溶于50ml超純水，加熱至沸騰后，迅速加入濃度為O. 1% 3. O %的檸檬酸三鈉溶液O. 5 5ml，繼續(xù)攪拌加熱2 60min，至顏色穩(wěn)定時停止，得到合適粒徑的金溶膠。(2)設(shè)置激光拉曼光譜儀的掃描參數(shù)激發(fā)光源為785nm，儀器激光功率為50-300mw，掃描時間為2-15s。實施例I用丙酮將呋喃唑酮配置成濃度為1000，750，100，50，10，5，Ippm的溶液，分別與金膠按I : 10的比例混合，并用IM HNO3溶液或IM NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至I. O 6. 0，進行拉曼光譜掃描，得到各濃度梯度溶液的表面增強拉曼光譜圖；并將丙酮與金溶膠混合進行拉曼檢測，得到本底拉曼譜圖；將呋喃唑酮溶液表面增強拉曼譜圖扣除本底拉曼譜圖后與呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)品的常規(guī)拉曼光譜圖進行對比，確定特征峰為160201^1,1554cm-1,1456cm-1,1326cm-1,1242cm-1,1162CHT1，968CHT1用以定性；并以濃度為橫坐標(biāo)，以特征峰1008CHT1峰高為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線用以定量；得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程為Y = O. 1716X+3. 248，相關(guān)系數(shù)為O. 9906，線性良好，可用于測定樣品中的呋喃唑酮含量。實施例2用丙酮將呋喃西林配置成濃度為1000，750，100，50，10，5，Ippm的溶液，分別與金膠按I : 10的比例混合，并用IM HNO3溶液或IM NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至I. O 6. 0，進行拉曼光譜掃描，得到各濃度梯度溶液的表面增強拉曼光譜圖；并將丙酮與金溶膠混合進行拉曼檢測，得到本底拉曼譜圖；將呋喃西林溶液表面增強拉曼譜圖扣除本底拉曼譜圖后與呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)品的常規(guī)拉曼光譜圖進行對比，確定特征峰為160201^1,1556cm-1,1484cm-1,1388cm 1J 1336cm S 1008cm S 968cm 1用以定性；并以濃度為橫坐標(biāo)，以特征峰1162cm 1峰高為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線用以定量；得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程為Y = O. 1707X+3. 034，相關(guān)系數(shù)為O. 9903，線性良好，可用于測定樣品中的呋喃西林含量。
實施例3準(zhǔn)確稱取2g配合飼料樣品，加入50ml丙酮，在65 °C水浴中超聲萃取15min,3500r/min離心lOmin。取上清液5ml旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干,用丙酮定容至2ml,用于拉曼檢測呋喃唑酮。共做三個平行樣，分析結(jié)果見表I ;通過分析可知，平行樣品的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 2. 453%。表I配合飼料樣品中呋喃唑酮的檢測結(jié)果
權(quán)利要求
1.抗菌藥呋喃唑酮和呋喃西林的表面增強拉曼光譜檢測方法，其特征在于該方法包括如下步驟 (1)制備金膠采用檸檬酸三鈉還原氯金酸的方法將30mg氯金酸鉀溶于50ml超純水，加熱至沸騰后，迅速加入檸檬酸三鈉溶液，繼續(xù)攪拌加熱，至顏色穩(wěn)定時停止，得到合適粒徑的金溶膠； (2)設(shè)置激光拉曼光譜儀的掃描參數(shù)激發(fā)光源為785nm，儀器激光功率為50-300mw，掃描時間為2-15s ； (3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作用丙酮將呋喃唑酮或呋喃西林分別配置濃度為1000，750，100，50，10，5，Ippm的溶液，與步驟(I)中的金膠按I 10的比例混合，并調(diào)節(jié)pH至I. O 6. 0，進行拉曼光譜掃描，得到各濃度梯度溶液的表面增強拉曼光譜圖；根據(jù)呋喃唑酮或呋喃西林的定性特征峰進行定性；并以濃度為橫坐標(biāo)，呋喃唑酮或呋喃西林的定量特征峰的峰高為縱坐標(biāo)，制作對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線用以定量； (4)實際樣品的表面增強拉曼光譜檢測將25g配合飼料用IOOml有機溶劑提取，過濾，定容至100ml，采用步驟(3)中的步驟，得到表面增強拉曼光譜圖；根據(jù)對應(yīng)的定性特征峰，判定實際樣品中是否含有呋喃唑酮或呋喃西林；根據(jù)步驟(3)得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定配合飼料中呋喃唑酮或呋喃西林的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求書I中所述的抗菌藥呋喃唑酮和呋喃西林的表面增強拉曼光譜檢測方法，其特征在于所述步驟(I)中，檸檬酸三鈉溶液的濃度為O. 1% 3. O %，加入量為O.5 5. Oml ;加熱溫度為100 200°C ;加熱時間為2 60min。
3.根據(jù)權(quán)利要求書I中所述的抗菌藥呋喃唑酮呋喃西林的表面增強拉曼光譜檢測方法，其特征在于所述步驟(3)中，pH調(diào)節(jié)劑為IM HNO3溶液或IM NaOH溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求書I中所述的抗菌藥呋喃唑酮呋喃西林的表面增強拉曼光譜檢測方法，其特征在于所述步驟(3)和(4)中，呋喃唑酮的定性特征峰為ΙΘΙΙαιι θΟαιΓ1，1488cm \ 1472cm、1397cm、1343cm 1^BOcm、1173cm、1022cm、977cm、806cm、775CHT1 ;定量特征峰為161 IcnT1。
5.據(jù)權(quán)利要求書I中所述的抗菌藥呋喃唑酮呋喃西林的表面增強拉曼光譜檢測方法，其特征在于所述步驟(3)和(4)中，呋喃西林的定性特征峰為160201^,15540^1,1456cm \ 1336cm S 1162cm S 966cm 1 ;定量特征峰為 1602cm、
6.根據(jù)權(quán)利要求書I中所述的抗菌藥呋喃唑酮和呋喃西林的表面增強拉曼光譜檢測方法，其特征在于所述步驟步驟(4)中，所述提取用的有機溶劑為丙酮。
全文摘要
本發(fā)明利用表面增強拉曼光譜檢測抗菌藥呋喃唑酮和呋喃西林。采用檸檬酸三鈉還原氯金酸鉀的方法制備金溶膠；將含有呋喃唑酮或呋喃西林的丙酮溶液與金溶膠混合，調(diào)節(jié)pH至1.0～6.0，采用激發(fā)光源為785nm的激光拉曼光譜儀進行掃描，得到拉曼圖譜；將1611，1560，1488，1472，1397，1343，1260，1173，1022，977，806，775cm-1作為鑒別呋喃唑酮的定性特征峰，1602，1554，1456，1336，1162，966cm-1為鑒別呋喃西林胡定性特征峰；同時分別以1611cm-1、1602cm-1的峰高定量測定呋喃唑酮、呋喃西林。該方法便捷、快速、準(zhǔn)確、成本低，可在食品、藥物檢測領(lǐng)域推廣使用。
文檔編號G01N21/65GK102879381SQ20121041775
公開日2013年1月16日 申請日期2012年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月29日
發(fā)明者謝云飛, 竺芯宇, 吉薇, 郇楠, 陳婷, 姚衛(wèi)蓉, 汪何雅, 錢和 申請人:江南大學(xué)