專利名稱：一種興安懸鉤子生物總堿的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
:本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種生物總堿的制備方法，特別是涉及一種利用大孔吸附樹脂-硅膠層析耦合法制備興安懸鉤子生物總堿的方法。
背景技術(shù)：
:懸鉤子Rubus corchorifolius Linn.f.,又名三月泡、四月泡、山拋?zhàn)印⒋毯J、山莓、饅頭菠、高腳菠、龍船泡、牛奶泡、樹莓、泡兒刺，系薔薇科Rosaceae，薔薇亞科懸鉤子屬Rubus, L中的一種落葉灌木。興安懸鉤子中含有油酸、亞油酸、亞麻酸、軟脂酸，山萘素苷、異鼠李素等黃酮類化合物，還含有萜類化合物、鞣質(zhì)和生物堿。懸鉤子生物總堿為興安懸鉤子果實(shí)提取物的有效成分，經(jīng)科學(xué)研究及臨床應(yīng)用證明，懸鉤子生物總堿具有對(duì)高脂飲食動(dòng)物模型中肝細(xì)胞脂肪變性及肝內(nèi)脂類聚集有明顯的改善或逆轉(zhuǎn)效果，并能降低血清總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量，升高高密度脂蛋白膽固醇含量，懸鉤子總生物堿對(duì)非酒精性脂肪肝有較好的治療作用，尤其針對(duì)單純性脂肪肝的藥效較佳。近年來，人們 發(fā)現(xiàn)天然植物興安懸鉤子果實(shí)中含有大量的生物堿，從中提取生物堿并且取得了可喜進(jìn)展，原料興安懸鉤子來源較廣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種興安懸鉤子生物總堿的制備方法；本發(fā)明目的還在于提供一種方便快捷、原料來源豐富、生產(chǎn)成本低廉、分離效果明顯、提取純度高的利用大孔吸附樹脂-硅膠層析耦合法富集純化懸鉤子生物總堿的方法。本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明興安懸鉤子生物總堿的制備方法包括如下步驟:將懸鉤子果洗凈，加入原料質(zhì)量15 20倍量的85% 100%甲醇回流提取120 180分鐘，濾過；濾液回收甲醇后濃縮至3 5波美得濃縮液，然后用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液PH值調(diào)至2.5 3，放置20 40分鐘后濾過；濾液上HPD400、HPD100,DM-130或AB-8廣譜型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5% 20%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50% 80%的甲醇洗脫，得生物總堿半成品洗脫液，生物總堿半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得生物總堿半成品；將所得生物總堿半成品上硅膠層析柱，并用丙酮:甲醇的體積比為I 3: I的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為5 7: I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得生物總堿洗脫液；將生物總堿洗脫液進(jìn)行精制得懸鉤子生物總堿，其含量在66 %以上。本發(fā)明興安懸鉤子生物總堿的制備方法包括如下步驟:稱取洗凈的懸鉤子果，加入原料質(zhì)量20倍量的85%甲醇回流提取180分鐘，濾過；濾液回收甲醇后濃縮至5波美得濃縮液，然后用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液pH值調(diào)至3，放置40分鐘后濾過；濾液上HPD400型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50%的甲醇洗脫，得生物總堿半成品洗脫液，生物總堿半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得生物總堿半成品；將所得生物總堿半成品上硅膠層析柱，并用丙酮:甲醇的體積比為1:1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為5: I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得生物總堿洗脫液；將生物總堿洗脫液進(jìn)行精制得懸鉤子生物總堿。所述大孔樹脂吸附步驟采用濕法裝柱，保留液面，將調(diào)pH值后的濾液通過吸附柱，流速每分鐘0.05ml/g樹脂。所述硅膠層析步驟采用濕法裝柱，保留液面，將半成品按重量1:1拌活化后硅膠，并將拌好的混合物至于硅膠柱上方，洗脫流速每分鐘0.lml/g硅膠。硅膠活化條件為，110攝氏度30分鐘。本發(fā)明中采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法進(jìn)行精制。按4g/100ml洗脫液加入針劑活性炭，25 40攝氏度攪拌20 40分鐘，濾過；濾液，回收混合試劑,濃縮干燥得中間體；中間體用7 9倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過:濾液放涼析出晶體，抽濾得懸鉤子生物總堿成
品本發(fā)明中精制過程包括如下步驟:按4g/100ml洗脫液加入針劑活性炭，25攝氏度攪拌40分鐘，濾過；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體；中間體用9倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過；濾液放涼析出晶體，抽濾得懸鉤子生物總堿成品。本發(fā)明中精制過程中成品用7倍甲醇重結(jié)晶，過濾母液，回收甲醇，濃縮干燥得生物總喊半成品。本發(fā)明應(yīng)用大孔吸附樹脂-硅膠層析耦合法富集純化懸鉤子生物總堿，對(duì)懸鉤子生物總堿的吸附選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大；原料來源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量45%以上的生物總堿半成品和含量66%以上的生物總堿終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對(duì)較低、提取純度低的缺點(diǎn)。本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹脂，不容于酸、堿及有機(jī)媒，對(duì)有機(jī)物選擇性較好，不受無機(jī)鹽類及強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響，可以通過物理吸附從溶液中有選擇地吸附生物總堿，吸附快、解析也快，吸附容量較大。本發(fā)明選用硅膠層析法純化并結(jié)合活性炭與重結(jié)晶精制，分離效果更佳。
具體實(shí)施方式
:實(shí)施例1:稱取懸鉤子果10kg，洗凈，加18倍量90%的甲醇回流提取140分鐘，濾過；濾液，回收甲醇，濃縮至4波美，用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液pH值調(diào)至2.8，放置40分鐘，濾過；濾液上HPD100型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用15%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用70%的甲醇洗脫，得生物總堿半成品洗脫液，生物總堿半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得生物總堿半成品；將所得生物總堿半成品上硅膠層析柱，并用丙酮:甲醇的體積比為2: I的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為6: I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得生物總堿洗脫液2L ;加入80g針劑活性炭，30攝氏度攪拌30分鐘，濾過；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體35g ;中間體用8倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過:濾液放涼析出晶體，抽濾得懸鉤子生物總堿成品20g,含量68%。實(shí)施例2:稱取懸鉤子果15kg，洗凈，加20倍量95%的甲醇回流提取160分鐘，濾過；濾液，回收甲醇，濃縮至5波美，用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液pH值調(diào)至3，放置40分鐘，濾過；濾液上HPD400型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用10%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用60%的甲醇洗脫，得生物總堿半成品洗脫液，生物總堿半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得生物總堿半成品；將所得生物總堿半成品上硅膠層析柱，并用丙酮:甲醇的體積比為1:1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為7: I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得生物總堿洗脫液3.5L ;加入140g針劑活性炭，40攝氏度攪拌40分鐘，濾過；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體60g ;中間體用9倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過:濾液放涼析出晶體，抽濾得懸鉤子生物總堿成品32g，含量66.3%。實(shí)施例3:稱取懸鉤子果20kg，洗凈，加15倍量87%的甲醇回流提取120分鐘，濾過；濾液，回收甲醇，濃縮至3波美，用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液pH值調(diào)至2.5，放置40分鐘，濾過；濾液上AB-8型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用80%的甲醇洗脫，得生物總堿半成品洗脫液，生物總堿半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得生物總堿半成品；將所得生物總堿半成品上硅膠層析柱，并用丙酮:甲醇的體積比為3: I的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為5: I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得生物總堿洗脫液5L ;加入200g針劑活性炭，25攝氏度攪拌20分鐘，濾過；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體70g ;中間體用8倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過:濾液放涼析出晶體，抽濾得懸鉤子生物總堿成品36g，含量67.5%。實(shí)施例4:
稱取懸鉤子果5kg，洗凈，加20倍量98%的甲醇回流提取160分鐘，濾過；濾液，回收甲醇，濃縮至3波美，用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液pH值調(diào)至2.6，放置40分鐘，濾過；濾液上DM-130型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50%的甲醇洗脫，得生物總堿半成品洗脫液，生物總堿半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得生物總堿半成品；將所得生物總堿半成品上硅膠層析柱，并用丙酮:甲醇的體積比為1:1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為7: I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得生物總堿洗脫液1200ml ;加入48g針劑活性炭，40攝氏度攪拌25分鐘，濾過；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體20g ;中間體用7倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過:濾液放涼析出晶體，抽濾得懸鉤子生物總堿成品12g，含量68.2%。
權(quán)利要求
1.一種興安懸鉤子生物總堿的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟: 將懸鉤子果洗凈，加入原料質(zhì)量15 20倍量的85% 100%甲醇回流提取120 180分鐘，濾過；濾液回收甲醇后濃縮至3 5波美得濃縮液，然后用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液PH值調(diào)至2.5 3，放置20 40分鐘后濾過；濾液上HPD400、HPD100、DM-130或AB-8廣譜型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5% 20%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50% 80%的甲醇洗脫，得生物總堿半成品洗脫液，生物總堿半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得生物總堿半成品；將所得生物總堿半成品上硅膠層析柱，并用丙酮:甲醇的體積比為I 3: I的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為5 7: I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得生物總堿洗脫液；將生物總堿洗脫液進(jìn)行精制得懸鉤子生物總喊。
2.如權(quán)利要求1所述的興安懸鉤于生物總堿的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟: 稱取洗凈的懸鉤子果，加入原料質(zhì)量20倍量的85%甲醇回流提取180分鐘，濾過；濾液回收甲醇后濃縮至5波美得濃縮液，然后用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液pH值調(diào)至3，放置40分鐘后濾過；濾液上HPD400型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50%的甲醇洗脫，得生物總堿半成品洗脫液，生物總堿半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得生物總堿半成品；將所得生物總堿半成品上硅膠層析柱，并用丙酮:甲醇的體積比為1:1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為5: I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得生物總堿洗脫液；將生物總堿洗脫液進(jìn)行精制得懸鉤子生物總堿。
3.如權(quán)利要求1或2所述的興安懸鉤子生物總堿的制備方法，其特征在于該方法中所述大孔樹脂吸附步驟采用濕法裝柱，保留液面，將調(diào)PH值后的濾液通過吸附柱，流速每分鐘0.05ml/g樹脂。
4.如權(quán)利要求1或2所述的興安懸鉤子生物總堿的制備方法，其特征在于該方法中所述硅膠層析步驟采用濕法裝柱，保留液面，將半成品按重量1:1拌活化后硅膠，并將拌好的混合物至于硅膠柱上方，洗脫流速每分鐘0.lml/g硅膠。硅膠活化條件為，110攝氏度30分鐘。
5.如權(quán)利要求1或2所述的興安懸鉤子生物總堿的制備方法，其特征在于該方法中采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法進(jìn)行精制，按4g/100ml生物總堿洗脫液加入針劑活性炭，25 40攝氏度攪拌20 40分鐘，濾過；濾液回收混合試劑后濃縮干燥得中間體；中間體用7 9倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過:濾液放涼析出晶體，抽濾得懸鉤子生物總堿成品。
6.如權(quán)利要求5所述的興安懸鉤子生物總堿的制備方法，其特征在于該方法中精制過程包括如下步驟: 按4g/100ml洗脫液加入針劑活性炭，25攝氏度攪拌40分鐘，濾過；濾液，回收混合試齊U，濃縮干燥得中間體；中間體用9倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過:濾液放涼析出晶體，抽濾得懸鉤子生物總堿成品。
7.如權(quán)利要求6所 述的興安懸鉤子生物總堿的制備方法，其特征在于該方法中成品用7倍甲醇重結(jié)晶，過濾母液，回收甲醇，濃縮干燥得生物總堿半成品。
全文摘要
本發(fā)明公開一種興安懸鉤子生物總堿的制備方法，該方法是將懸鉤子果洗凈，加15倍量85％的甲醇回流提取120分鐘，濾過；濾液，回收甲醇，濃縮至3波美，用體積比1∶1的鹽酸∶水將濃縮液pH值調(diào)至2.5，放置20分鐘，濾過；濾液上廣譜型大孔樹脂吸附柱，收集洗脫液，回收甲醇，濃縮干燥得生物總堿半成品；將所得生物總堿半成品上硅膠層析柱，并以體積比3∶1的丙酮∶甲醇洗雜質(zhì)，繼用體積比7∶1的丙酮∶甲醇洗脫，收集洗脫液；將所收集到的生物總堿洗脫液進(jìn)行精制得懸鉤子生物總堿成品，其含量在65％以上。本發(fā)明方法的最大特點(diǎn)是利用大孔吸附樹脂-硅膠層析耦合方便快捷、原料來源豐富、生產(chǎn)成本低廉、分離效果明顯、提取純度高。
文檔編號(hào)A61P1/16GK103070941SQ20121059533
公開日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2012年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月13日
發(fā)明者姚德坤, 姚德利, 張亞紅, 姚航, 黃運(yùn)生, 吳海龍 申請(qǐng)人:大興安嶺林格貝有機(jī)食品有限責(zé)任公司