專利名稱：一種蒲公英總黃酮的分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
:本發(fā)明屬于天然有機化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種蒲公英總黃酮的分離純化方法，特別是涉及種利用大孔吸附樹脂-硅膠層析耦合法富集純化蒲公英總黃酮的方法。
背景技術(shù)：
:蒲公英又稱尿床草,為菊科植物蒲公英Toraxacum mongoIicum Hand.Mazz.、堿地蒲公英Toraxacum borealisinense Kitam?；蛲瑢贁?shù)種植物的干燥全草。全草入藥，開花前連根采集，洗凈，曬干。蒲公英含有多種活性成分，如蒲公英留醇、蒲公英苦素、黃酮類、咖啡酸、綠原酸和多糖等。蒲公英總黃酮具有清熱解毒、消腫散結(jié)、利尿通淋功能，用于乳癰、瘰疬、療瘡、腫毒、咽痛、肺癰、腸癰、目赤、濕熱黃疸、熱淋澀痛，是國家頒布的藥食兩用品種之一。近年來，隨著藥品和保健食品的發(fā)展，蒲公英提取物的需求越來越大。對于蒲公英總黃酮的研究越來越多，李喜鳳，郝哲，杜云峰。蒲公英中總黃酮提取工藝的研究。時珍國醫(yī)國藥，2009，20(7):1695，1696對蒲公英總黃酮的提取工藝做了系統(tǒng)的研究。公開號為CN10198218IA的專利申請，其公開了一種蒲公英提取物的制備方法，產(chǎn)品含量高達(dá)90%以上，但該提取分離工藝，樹脂前處理試劑消耗較大，后期精制中的色譜成本較高，整體經(jīng)濟效益遠(yuǎn)不如本專利涉及的分離純化方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種蒲公英總黃酮的分離純化方法；本發(fā)明目的還在于提供一種方便快捷、原料來源豐富、生產(chǎn)成本低廉、分離效果明顯、提取純度高的利用大孔吸附樹脂-硅膠層析耦合法富集純化蒲公英總黃酮的方法。本發(fā)明目的是通過 如下技術(shù)方案實現(xiàn)的。本發(fā)明蒲公英總黃酮的分離純化方法包括如下步驟:將蒲公英全草粉碎成粗粉，加入粗粉質(zhì)量15 20倍量的85% 100%甲醇回流提取120 180分鐘，濾過；濾液回收甲醇后濃縮至3 5波美得濃縮液，然后用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液pH值調(diào)至2.5 3，放置20 40分鐘后濾過；濾液上HPD400、HPD100、DM-130或AB-8廣譜型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5% 20 %的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50 % 80 %的甲醇洗脫，得總黃酮半成品洗脫液，總黃酮半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得總黃酮半成品；將所得總黃酮半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為I 3:1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為5 7:1的丙酮與甲醇混合物洗脫，得總黃酮洗脫液；將總黃酮洗脫液進(jìn)行精制得蒲公英總黃酮，其含量在96%以上。本發(fā)明蒲公英總黃酮的分離純化方法包括如下步驟:稱取粉碎成粗粉的蒲公英全草，加入粗粉質(zhì)量20倍量的85%甲醇回流提取180分鐘，濾過；濾液回收甲醇后濃縮至5波美得濃縮液，然后用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液PH值調(diào)至3，放置40分鐘后濾過；濾液上HPD400型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50%的甲醇洗脫，得總黃酮半成品洗脫液，總黃酮半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得總黃酮半成品；將所得總黃酮半成品上硅膠層析柱，并用丙酮:甲醇的體積比為1:1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為5: I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得總黃酮洗脫液；將總黃酮洗脫液進(jìn)行精制得蒲公英總黃酮。所述大孔樹脂吸附步驟采用濕法裝柱，保留液面，將調(diào)pH值后的濾液通過吸附柱，流速每分鐘0.05ml/g樹脂。所述硅膠層析步驟采用濕法裝柱，保留液面，將半成品按重量1:1拌活化后硅膠，并將拌好的混合物至于硅膠柱上方，洗脫流速每分鐘0.lml/g硅膠。硅膠活化條件為，110攝氏度30分鐘。本發(fā)明中采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法進(jìn)行精制。按4g/100ml洗脫液加入針劑活性炭，25 40攝氏度攪拌20 40分鐘，濾過；濾液，回收混合試劑,濃縮干燥得中間體；中間體用7 9倍甲醇40攝氏度熱溶，濾·過；濾液放涼析出晶體，抽濾得蒲公英總黃酮成品。本發(fā)明中精制過程包括如下步驟:按4g/100ml洗脫液加入針劑活性炭，25攝氏度攪拌40分鐘，濾過；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體；中間體用9倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過；濾液放涼析出晶體，抽濾得蒲公英總黃酮成品。本發(fā)明中精制過程中成品用7倍甲醇重結(jié)晶，過濾母液，回收甲醇，濃縮干燥得總黃酮半成品。本發(fā)明應(yīng)用大孔吸附樹脂-硅膠層析耦合法富集純化蒲公英總黃酮，對蒲公英總黃酮的吸附選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大；原料來源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量45%以上的總黃酮半成品和含量96%以上的總黃酮終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對較低、提取純度低的缺點。本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機械強度高、抗污染能力強、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹脂，不容于酸、堿及有機媒，對有機物選擇性較好，不受無機鹽類及強離子低分子化合物存在的影響，可以通過物理吸附從溶液中有選擇地吸附總黃酮，吸附快、解析也快，吸附容量較大。本發(fā)明選用硅膠層析法純化并結(jié)合活性炭與重結(jié)晶精制，分離效果更佳。
具體實施方式
:實施例1:稱取蒲公英全草10kg，粉碎成粗粉，加18倍量90%的甲醇回流提取140分鐘，濾過；濾液，回收甲醇，濃縮至4波美，用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液pH值調(diào)至2.8，放置40分鐘，濾過；濾液上HPD100型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用15%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用70%的甲醇洗脫，得總黃酮半成品洗脫液，總黃酮半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得總黃酮半成品；將所得總黃酮半成品上硅膠層析柱，并用丙酮:甲醇的體積比為2: I的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為6: I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得總黃酮洗脫液2L ;加入80g針劑活性炭，30攝氏度攪拌30分鐘，濾過；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體35g ;中間體用8倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過；濾液放涼析出晶體，抽濾得蒲公英總黃酮成品20g，含量98%。實施例2:稱取蒲公英全草15kg，粉碎成粗粉，加20倍量95%的甲醇回流提取160分鐘，濾過；濾液，回收甲醇，濃縮至5波美，用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液pH值調(diào)至3，放置40分鐘，濾過；濾液上HPD400型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用10 %的甲醇洗雜質(zhì)，然后用60%的甲醇洗脫，得總黃酮半成品洗脫液，總黃酮半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得總黃酮半成品；將所得總黃酮半成品上硅膠層析柱，并用丙酮:甲醇的體積比為1:1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為7: I的丙醇與甲醇混合物洗脫，得總黃酮洗脫液3.5L ;加入140g針劑活性炭，40攝氏度攪拌40分鐘，濾過；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體60g ;中間體用9倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過；濾液放涼析出晶體，抽濾得蒲公英總黃酮成品32g，含量96.3%。實施例3:稱取蒲公英全草20kg，粉碎成粗粉，加15倍量87%的甲醇回流提取120分鐘，濾過；濾液，回收甲醇，濃縮至3波美，用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液pH值調(diào)至
2.5，放置40分鐘，濾過；濾液上AB-8型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用80%的甲醇洗脫，得總黃酮半成品洗脫液，總黃酮半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得總黃酮半成品；將所得總黃酮半成品上硅膠層析柱，并用丙酮:甲醇的體積比為3: I的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為5: I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得總黃酮洗脫液5L ;加入200g針劑活性炭，25攝氏度攪拌20分鐘，濾過；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體70g ;中間體用8倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過；濾液放涼析出晶體，抽濾得蒲公英總黃酮成品36g，含量97.5%。

實施例4:稱取蒲公英全草5kg，粉碎成粗粉，加20倍量98%的甲醇回流提取160分鐘，濾過；濾液，回收甲醇，濃縮至3波美，用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液pH值調(diào)至
2.6，放置40分鐘，濾過；濾液上DM-130型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50%的甲醇洗脫，得總黃酮半成品洗脫液，總黃酮半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得總黃酮半成品；將所得總黃酮半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為1:1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為7: I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得總黃酮洗脫液1200ml ;加入48g針劑活性炭，40攝氏度攪拌25分鐘，濾過；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體20g ;中間體用7倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過；濾液放涼析出晶體，抽濾得蒲公英總黃酮成品12g，含量98.2%。
權(quán)利要求
1.一種蒲公英總黃酮的分離純化方法，其特征在于該方法包括如下步驟: 將蒲公英全草粉碎成粗粉，加入機粉質(zhì)量15 20倍量的85% 100%甲醇回流提取120 180分鐘,濾過；濾液回收甲醇后濃縮至3 5波美得濃縮液,然后用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液pH值調(diào)至2.5 3，放置20 40分鐘后濾過；濾液上HPD400、HPD100, DM-130或AB-8廣譜型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5% 20%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50% 80%的甲醇洗脫，得總黃酮半成品洗脫液，總黃酮半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得總黃酮半成品；將所得總黃酮半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為I 3: I的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為5 7: I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得總黃酮洗脫液；將總黃酮洗脫液進(jìn)行精制得蒲公英總黃酮。
2.如權(quán)利要求1所述的蒲公英總黃酮的分離純化方法，其特征在于該方法包括如下步驟: 稱取粉碎成粗粉的蒲公英全草，加入粗粉質(zhì)量20倍量的85%甲醇回流提取180分鐘，濾過；濾液回收甲醇后濃縮至5波美得濃縮液，然后用體積比1:1的鹽酸:水溶液將濃縮液PH值調(diào)至3，放置40分鐘后濾過；濾液上HPD400型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5 %的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50 %的甲醇洗脫，得總黃酮半成品洗脫液，總黃酮半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得總黃酮半成品；將所得總黃酮半成品上硅膠層析柱，并用丙酮:甲醇的體積比為1:1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮:甲醇的體積比為5: I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得總黃酮洗脫液；將總黃酮洗脫液進(jìn)行精制得蒲公英總黃酮。
3.如權(quán)利要求1或2所述的蒲公英總黃酮的分離純化方法，其特征在于該方法中所述大孔樹脂吸附步驟采用濕法裝柱，保留液面，將調(diào)PH值后的濾液通過吸附柱，流速每分鐘0.05ml/g 樹脂。
4.如權(quán)利要求1或2所述的蒲公英總黃酮的分離純化方法，其特征在于該方法中所述硅膠層析步驟采用濕法裝柱，保留液面，將半成品按重量1:1拌活化后硅膠，并將拌好的混合物至于硅膠柱上方，洗脫流速每分鐘0.lml/g硅膠。硅膠活化條件為，110攝氏度30分鐘。
5.如權(quán)利要求1或2所述的蒲公英總黃酮的分離純化方法，其特征在于該方法中采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法進(jìn)行精制，按4g/100ml總黃酮洗脫液加入針劑活性炭，25 40攝氏度攪拌20 40分鐘，濾過；濾液回收混合試劑后濃縮干燥得中間體；中間體用7 9倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過:濾液放涼析出晶體，抽濾得蒲公英總黃酮成品。
6.如權(quán)利要求5所述的蒲公英總黃酮的分離純化方法，其特征在于該方法中精制過程包括如下步驟: 按4g/100ml洗脫液加入針劑活性炭，25攝氏度攪拌40分鐘，濾過；濾液，回收混合試齊U，濃縮干燥得中間體；中間體用9倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過:濾液放涼析出晶體，抽濾得蒲公英總黃酮成品。
7.如權(quán)利要求6所述的蒲公英總黃酮的分離純化方法，其特征在于該方法中成品用7倍甲醇重結(jié)晶，過濾母液，回收甲醇，濃縮干燥得總黃酮半成品。
全文摘要
本發(fā)明公開一種蒲公英總黃酮的分離純化方法，該方法為將蒲公英全草粉碎成粗粉，加15倍量85％的甲醇回流提取120分鐘，濾過；濾液，回收甲醇，濃縮至3波美，用體積比1∶1的鹽酸∶水將濃縮液pH值調(diào)至2.5，放置20分鐘，濾過；濾液上廣譜型大孔樹脂吸附柱，收集洗脫液，回收甲醇，濃縮干燥得總黃酮半成品；將所得總黃酮半成品上硅膠層析柱，并以體積比3∶1的丙酮∶甲醇洗雜質(zhì)，繼用體積比7∶1的丙酮∶甲醇洗脫，收集洗脫液；將所收集到的總黃酮洗脫液進(jìn)行精制得蒲公英總黃酮成品，其含量在96％以上。本發(fā)明方法的最大特點是利用大孔吸附樹脂-硅膠層析耦合方便快捷、原料來源豐富、生產(chǎn)成本低廉、分離效果明顯、提取純度高。
文檔編號A61K36/288GK103070899SQ20121059530
公開日2013年5月1日 申請日期2012年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月13日
發(fā)明者姚德坤, 姚德利, 張亞紅, 姚航, 黃運生, 吳海龍 申請人:大興安嶺林格貝有機食品有限責(zé)任公司