一種高效分離純化Diosmin的方法
【技術(shù)領域】
[0001 ]本發(fā)明設及一種高效分離純化Diosmin的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] Diosmin(又名，香葉木巧)為黃酬巧類化合物，具有較強的生理功能，能夠增強靜 脈的張力，治療靜脈淋己功能不全等相關疾病;還能夠減少微循環(huán)渺滯，改善淋己回流，減 輕水腫，具有治療手術(shù)后水腫、糖尿病并發(fā)癥、前列腺增生及肛腸常見疾病的功效；同時，香 葉木巧還具有多數(shù)黃酬類化合物的抗氧化活性，在實驗中發(fā)現(xiàn)其對于福射引起的氧化損傷 有較強的修復作用;近年來在癌癥預防及治療方面?zhèn)涫荜P注。
[0003] 目前國際上應用的Diosmin為合成品，國內(nèi)分離純化工藝不成熟，進口Diosmin價 格昂貴，現(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)蓬子菜中含有豐富的香葉木巧，蓬子菜原料資源豐富，在民間藥用歷史 悠久，具有清熱桂濕、活血止癢的功效，近十余年來臨床應用不同劑型治療下肢靜脈炎療效 顯著。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的是為了解決現(xiàn)有Diosmin分離純度低，進口價格昂貴的問題，而提供一 種高效分離純化D i O Sm i n的方法。
[0005 ]本發(fā)明的一種高效分離純化D i O Sm i n的方法按W下步驟進行：
[0006] -、樣品預處理：取干燥的蓬子菜，用濃度為70%的乙醇溶液回流提取2次，每次 1.化~2.化，第一次提取的料液比為1:10，第二次提取的料液比為1:8，將2次的提取液過 濾，減壓濃縮回收乙醇溶液，得到浸膏；
[0007] 二、一次分離純化:將步驟二得到的浸膏溶于水，得到一次上樣液，所述的一次上 樣液中浸膏的濃度為800mg/L~900mg/L，用一次上樣液對AB-8大孔吸附樹脂柱進行上樣吸 附，吸附條件為：溫度為15~25 °C，流速為1.5BV/h~2.5BV/h，一次上樣液的量為8BV~ 10BV，完成吸附;完成吸附后進行脫附，脫附條件為：W濃度為50%的乙醇溶液為脫附劑，流 速為0.8BVA~1.2BVA，脫附劑的量為4BV~她V，完成脫附，得到Diosmin-次純化液；
[000引=、二次分離純化處理:將步驟二得到的Diosmin-次純化液加水稀釋，得到二次 上樣液，所述的二次上樣液中步驟二得到的Diosmin-次純化液的濃度為1150mg/L~ 1250mg/L，然后用二次上樣液對聚酷胺柱進行上樣吸附，吸附條件為:溫度為15~25°C，流 速為3.5BVA~4.5BVA，二次上樣液的量為8BV~IOBV，完成吸附;完成吸附后進行脫附，脫 附條件為：W濃度為30 %的乙醇溶液為脫附劑，流速為0.8BVA~1.2BVA，脫附劑的量為 4BV~她V，完成脫附，得到Diosmin。
[0009] 本發(fā)明利用大孔樹脂在蓬子菜中首次富集、分離、并純化了含量較大、純度較高的 Diosmin(香葉木巧），工藝路線成熟，成本低，溶劑毒副作用小，回收率高，適于工業(yè)化生產(chǎn)。 本發(fā)明有W下的優(yōu)點：
[0010] 1、大孔吸附樹脂具有良好的吸附性能，對于天然產(chǎn)物的分離純化應用廣泛且分離 效果良好，本發(fā)明中對Diosmin(香葉木巧)的分離純度可達98%。
[0011] 2、蓬子菜原料資源豐富，在民間藥用歷史悠久，價格低廉。
[0012] 3、本發(fā)明方法簡單可行、經(jīng)濟效益良好，有利于推廣和應用。
[0013] 4、本發(fā)明的產(chǎn)品純度高，有望解決Diosmin(香葉木巧)純品靠進口，價格高昂等問 題。
【附圖說明】
[0014] 圖1為A:環(huán)境對照組(未福射）、B: 20mGy福射對照組和E: 2000mGy福射對照組中小 鼠肝臟中的化-ZnSOD在福射后轉(zhuǎn)錄水平效果對比圖；
[001引圖2為B: 20mGy福射對照組、C: 20mGy福射給藥組（喂食實施例1產(chǎn)品）和D: 20mGy福 射陽性給藥組中小鼠肝臟中的化-ZnSOD在福射后轉(zhuǎn)錄水平效果對比圖；
[0016] 圖3為E : 2000mGy福射對照組、F: 2000mGy福射給藥組（喂食實施例1產(chǎn)品）和G: 2000mGy福射陽性給藥組中小鼠肝臟中的化-ZnSOD在福射后轉(zhuǎn)錄水平效果對比圖。
【具體實施方式】
【具體實施方式】 [0017] 一:本實施方式的一種高效分離純化Diosmin的方法按W下步驟進 行：
[0018] 一、樣品預處理：取干燥的蓬子菜，用濃度為70%的乙醇溶液回流提取2次，每次 1.化~2.化，第一次提取的料液比為1:10，第二次提取的料液比為1:8，將2次的提取液過 濾，減壓濃縮回收乙醇溶液，得到浸膏；
[0019] 二、一次分離純化:將步驟二得到的浸膏溶于水，得到一次上樣液，所述的一次上 樣液中浸膏的濃度為800mg/L~900mg/L，用一次上樣液對AB-8大孔吸附樹脂柱進行上樣吸 附，吸附條件為：溫度為15~25 °C，流速為1.5BV/h~2.5BV/h，一次上樣液的量為8BV~ 10BV，完成吸附;完成吸附后進行脫附，脫附條件為：W濃度為50%的乙醇溶液為脫附劑，流 速為0.8BVA~1.2BVA，脫附劑的量為4BV~她V，完成脫附，得到Diosmin-次純化液；
[0020] =、二次分離純化處理:將步驟二得到的Diosmin-次純化液加水稀釋，得到二次 上樣液，所述的二次上樣液中步驟二得到的Diosmin-次純化液的濃度為1150mg/L~ 1250mg/L，然后用二次上樣液對聚酷胺柱進行上樣吸附，吸附條件為:溫度為15~25°C，流 速為3.5BVA~4.5BVA，二次上樣液的量為8BV~IOBV，完成吸附;完成吸附后進行脫附，脫 附條件為：W濃度為30 %的乙醇溶液為脫附劑，流速為0.8BVA~1.2BVA，脫附劑的量為 4BV~她V，完成脫附，得到Diosmin。
[0021 ]【具體實施方式】二:本實施方式與【具體實施方式】一不同的是:步驟一中取干燥的蓬 子菜，用濃度為70%的乙醇溶液回流提取2次，每次化。其他步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一 相同。
[0022]【具體實施方式】本實施方式與【具體實施方式】一或二不同的是：步驟二中所述的 AB-8大孔吸附樹脂柱制備方法如下:①取AB-8大孔吸附樹脂用濃度為95%的乙醇溶液浸泡 24h進行溶脹，然后將溶脹后的AB-8大孔吸附樹脂置于圓底燒瓶內(nèi)，用濃度為95%的乙醇溶 液回流洗脫地~化，然后進行濕法裝柱；②裝柱后用濃度為95%的乙醇溶液Wl. 5BVA~ 2.5BVA的流速通過樹脂層至流出液加水不變白色混濁為止;③用水W2BVA的流速通過樹 脂層洗盡乙醇溶液;④用濃度為5 %的HCl溶液W4BV~6BV體積和4BVA~6BVA流速淋洗， 然后用蒸饋水洗至流出液抑值為6~7;⑤用濃度為2%的化Cl溶液W4BV~6BV體積和4BVA ~6BVA流速淋洗，然后用蒸饋水洗至流出液pH值為7~8,得到AB-8大孔吸附樹脂柱。其他 步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一或二相同。
【具體實施方式】 [0023] 四：本實施方式與一至=之一不同的是：步驟二中所 述的一次上樣液中浸膏的濃度為850mg/L。其他步驟及參數(shù)與一至S之一相 同。
【具體實施方式】 [0024] 五:本實施方式與一至四之一不同的是：步驟二中所 述的吸附條件為:溫度為20°C，流速為2BVA，一次上樣液的量為9BV，完成吸附。其他步驟及 參數(shù)與一至四之一相同。
【具體實施方式】 [0025] 六:本實施方式與一至五之一不同的是：步驟二中所 述的脫附條件為：W濃度為50%的乙醇溶液為脫附劑，流速為IBVA，脫附劑的量為5BV，完 成脫附。其他步驟及參數(shù)與一至五之一相同。
【具體實施方式】 [0026] 屯:本實施方式與一至六之一不同的是：步驟=中所 述的聚酷胺柱制備方法如下:①取聚酷胺用濃度為95%的乙醇溶液浸泡2地進行溶脹，然后 將溶脹后的聚酷胺置于圓底燒瓶內(nèi)，用濃度為95%的乙醇溶液回流洗脫4h~化，然后進行 濕法裝柱;②裝柱后用濃度為95%的乙醇溶液W3BV~4BV體積和3BVA~4BVA的流速通過 聚酷胺層至流出液蒸干后無殘渣為止；③用濃度為5 %的化0扣容液W2BV~2.5BV體積和 2BVA~2.5BVA的流速通過聚酷胺層進行洗脫;④用蒸饋水WIBV體積和IBVA的流速通過 聚酷胺層進行洗脫;④用濃度為10 %的醋酸水溶液W2BV~2.5BV體積和2BVA~2.5BVA流 速淋洗，然后用蒸饋水洗至流出液pH值為中性;得到聚酷胺柱。其他步驟及參數(shù)與具體實施 方式一至六之一相同。
【具體實施方式】 [0027] 八:本實施方式與一至屯之一