一種梔子苷的分離純化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明公開了一種梔子苷的分離純化方法，屬于梔子苷分離純化技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]梔子為梔子屬茜草科常綠灌木梔子的果實(shí)，為我國大宗傳統(tǒng)中藥材，入選中國衛(wèi)生部首批藥食兩用中藥材名錄，為國家中藥保護(hù)品種清開靈注射液、龍膽瀉肝片和茵膽平肝膠囊的主要藥效成分，是中醫(yī)臨床治療黃疸型肝炎的首選藥物和提取梔子天然色素的原料，盛產(chǎn)于閩、浙、贛、徽、湘等省山區(qū)。
[0003]梔子苷是從茜草科植物梔子的干燥成熟果實(shí)中運(yùn)用的高科技手段提取精制而成的結(jié)晶性產(chǎn)品，分子量為388，外觀為白色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)為148?150°C，易溶于水和甲醇、乙醇等親水性有機(jī)溶劑，難溶于乙醚、氯仿、四氯化碳等疏水性有機(jī)溶劑，主要成分的環(huán)烯醚萜苷類化合物具有利膽護(hù)肝、清熱解毒功能，廣泛用于中醫(yī)臨床治療黃疸型肝炎。
[0004]目前，梔子苷的分離純化主要有:鉛鹽沉淀法、活性炭除雜法、大孔樹脂吸附法。
[0005](I)鉛鹽沉淀法是利用中性醋酸鉛或醋酸鉛在水或稀醇溶液中能與許多物質(zhì)生產(chǎn)難溶的鉛鹽或絡(luò)鹽，通常將鉛鹽沉淀濾除，然后將沉淀懸于水或者稀醇中，通硫化氫氣體或硫酸鈉等試劑進(jìn)行脫鉛，即可回收提取物；
(2)活性炭除雜法是利用活性炭的物理吸附、化學(xué)吸附、氧化、催化氧化和還原等性能對提取物進(jìn)行雜質(zhì)吸附；
(3)大孔樹脂吸附是將梔子果粉碎然后用乙醇水溶液回流提取，得到粗提液，濃縮后直接上大孔樹脂柱，最后以一定濃度的乙醇為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集流出液使梔子苷得以純化，這種方法不僅無法去除極性稍強(qiáng)于梔子苷的環(huán)烯醚萜苷類成分，而且弱極性雜質(zhì)殘留很多;會使得內(nèi)孔殘留惰性溶劑高，預(yù)處理難度大，解吸不充分，影響分離效果，樹脂再生困難，生產(chǎn)成本增加。
[0006]以上三種方法中第一、二種方法工藝復(fù)雜、耗物過大、收得率低、而且大量使用有毒有害的試劑，如乙醚、氯仿、甲醇、丙酮、鉛鹽等，對于人體和環(huán)境都有危害，不符合食品、藥品的生產(chǎn)規(guī)范，第三種方法雜質(zhì)得到的梔子苷純度低，含有較多的雜質(zhì)。
[0007]我國梔子種植面積大，資源豐富，因此進(jìn)一步開展低成本、高品質(zhì)梔子系列產(chǎn)品的制備工藝研究，對實(shí)現(xiàn)梔子的綜合開發(fā)利用具有重大意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題:針對目前利用常用方法對梔子苷進(jìn)行分離純化時，雖可以將梔子苷進(jìn)行分離純化，但還是存在含有較多雜質(zhì)，導(dǎo)致收率低，純度低，且提取過程中工藝復(fù)雜，處理困難，需要使用大量的有毒試劑，對人體和環(huán)境造成危害的現(xiàn)狀，提供了一種將梔子青果榨汁后，用黃酒醇提，并透析濃縮，隨后將透析濃縮液經(jīng)過大孔樹脂柱吸附脫色，并用甲酯對其進(jìn)行結(jié)晶，之后將梔子苷晶體重新溶于乙酸乙酯中，再次進(jìn)行濃縮，最后將濃縮液加入冰水浴中，重新結(jié)晶后干燥，從而得到梔子苷的分離純化方法。該方法不僅操作簡便，無任何有毒試劑添加，綠色環(huán)保，而且制得的梔子苷粉末產(chǎn)品中無任何雜質(zhì)，使得純度純度>98%，產(chǎn)品收率>97%，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
[0009]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
(1)采集500?600g7月初至8月初未成熟的梔子青果，放入清水中，反復(fù)搓洗，去除表面殘留的污物后，置于榨汁機(jī)中，榨汁15?25min，得果漿混合物；
(2)將上述得到的果漿混合物倒入IL的燒杯中，并向燒杯中加入果漿混合物質(zhì)量I?3倍的黃酒，放置在超聲振蕩儀中，在頻率為25?30KHz，功率為120?180W下振蕩反應(yīng)I?2h，待振蕩完成，過濾，除去濾渣，得到濾液；
(3)將上述得到的濾液放入索式抽提器中，抽提40?45min，收集濾液抽提液，并將其移入蒸餾裝置，在60?70°C下水浴加熱35?45min，蒸餾去除黃酒，得到梔子青果提取液；
(4)將上述得到的梔子青果提取液倒入經(jīng)反滲透膜制成的透析袋中，以水為媒介，對其進(jìn)行透析濃縮，直至透析袋中提取液體積變?yōu)樵畜w積1/3時，停止透析濃縮，得到梔子青果濃縮液；
(5)將上述得到的梔子青果濃縮液經(jīng)過非極性大孔樹脂柱，從大孔樹脂柱的頂部流入，控制流速為10?15mL/min，反復(fù)洗脫脫色3?5次，收集大孔樹脂柱底部流出的洗脫液，放入反應(yīng)釜中，并向反應(yīng)釜中加入洗脫液I?2倍質(zhì)量濃度為35%的甲酯溶液，混合均勻，于5?7°C冷藏，放置養(yǎng)晶、過濾，得梔子苷晶體；
(6)將上述得到的梔子苷晶體在室溫的條件下，加入梔子苷晶體體積2?3倍的質(zhì)量濃度為38%的乙酸乙酯，之后以5?10°C/min的速率提升溫度至80?100 °C，使其完全溶解，待溶解后，將溶解后的混合液放入濃縮罐中，降低罐內(nèi)壓力為1000?1200Pa，減壓濃縮直至濃縮罐內(nèi)混合液體積為原有體積I /3?I /2時，停止?jié)饪s，得二次濃縮液；
(7)將上述得到的二次濃縮液倒入IL的燒杯，置于4?5°C冰水浴中，靜置過夜，使其重結(jié)晶，得梔子苷晶體，隨后將得到的梔子苷晶體用無水乙醇淋洗3?5次，待淋洗結(jié)束，放入干燥箱中于90?95°C下干燥，粉碎后得分離純化后的梔子苷粉末產(chǎn)品。
[0010]所述的非極性大孔樹脂柱為HPD-100、D101、1300-1中的任意一種。
[0011]本發(fā)明的應(yīng)用方法是:取20?30g本發(fā)明制得的梔子苷粉末產(chǎn)品，向其中加入50?60mL去離子水，使其完全溶解，隨后再向其中加入I?2g矯味劑以及0.8?Ig防腐劑，待加入完畢，充分?jǐn)嚢杈鶆?，用質(zhì)量濃度為37%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值為7.2?7.5為止，接下來定容至500mL，并過濾后放于紫光燈下滅菌3?5h，最后通過分裝制成30mL/支的口服液。食用時，早晚各一支，即可，具有利膽護(hù)肝、清熱解毒功能，尤其適用于黃疸型肝炎患者。
[0012]本發(fā)明的有益效果是:
(1)本發(fā)明方法簡單，操作簡便，無任何有毒試劑添加，綠色環(huán)保，提高了梔子苷分離純化的效率，使得產(chǎn)品收率>97 %，適合工業(yè)化生產(chǎn)；
(2)本發(fā)明所制梔子苷粉末產(chǎn)品中無任何雜質(zhì)，且純度>98%，具有現(xiàn)代中成藥“三高”、“三小”和“三便”等優(yōu)點(diǎn)，具有較大推廣性。
【具體實(shí)施方式】
[0013]首先采集500?600g7月初至8月初未成熟的梔子青果，放入清水中，反復(fù)搓洗，去除表面殘留的污物后，置于榨汁機(jī)中，榨汁15?25min，得果漿混合物;然后將上述得到的果漿混合物倒入IL的燒杯，并燒杯中加入果漿混合物質(zhì)量I?3倍的黃酒，放置在超聲振蕩儀中，在頻率為25?30KHz，功率為120?180W下振蕩反應(yīng)I?2h，待振蕩完成，過濾，除去濾渣，得到濾液;隨后將上述得到的濾液放入索式抽提器中，抽提40?45min，收集濾液抽提液，并將其移入蒸餾裝置，在60?70°C下水浴加熱35?45min，蒸餾去除黃酒，得到梔子青果提取液;接下來將上述得到的梔子青果提取液倒入經(jīng)反滲透膜制成的透析袋中，以水為媒介，對其進(jìn)行透析濃縮，直至透析袋中提取液體積變?yōu)樵畜w積1/3時，停止透析濃縮，得到梔子青果濃縮液;將上述得到的梔子青果濃縮液經(jīng)過非極性大孔樹脂柱，從大孔樹脂柱的頂部流入，控制流速為10?15mL/min，反復(fù)洗脫脫色3?5次，收集大孔樹脂柱底部流出的洗脫液，放入反應(yīng)釜中，并向反應(yīng)釜中加入洗脫液I?2倍質(zhì)量濃度為35%的甲酯溶液，混合均勻，于5?7°C冷藏，放置養(yǎng)晶、過濾，得梔子苷晶體;隨后將上述得到的梔子苷晶體在室溫的條件下，加入梔子苷晶體體積2?3倍的質(zhì)量濃度為38%的乙酸乙酯，之后以5?10°C/min的速率提升溫度至80?100°C，使其完全溶解，待溶解后，將溶解后的混合液放入濃縮罐中，降低罐內(nèi)壓力為1000?1200Pa，減壓濃縮直至濃縮罐內(nèi)混合液體積為原有體積1/3?1/2時，停止?jié)饪s，得二次濃縮液;最后將上述得到的二次濃縮液倒入IL的燒杯，置于4?5°C冰水浴中，靜置過夜，使其重結(jié)晶，得梔子苷晶體，隨后將得到的梔子苷晶體用無水乙醇淋洗3?5次，待淋洗結(jié)束，放入干燥箱中于90?95°C下干燥，粉碎后得分離純化后的梔子苷粉末產(chǎn)品O
[0014]所述的非極性大孔樹脂柱為HPD-100、D101、1300-1中的任意一種。
[0015]實(shí)例I
首先采集500g7月初至8月初未成熟的梔子青果，放入清水中，反復(fù)搓洗，去除表面殘留的污物后，置于榨汁機(jī)中，榨汁15min，得果漿混合物;然后將上述得到的果漿混合物倒入IL的燒杯，并向燒杯中加入果漿混合物質(zhì)量I倍的黃酒，放置在超聲振蕩儀中，在頻率為25KHz，功率為120W下振蕩反應(yīng)Ih，待振蕩完成，過濾，除去濾渣，得到濾液;隨后將上述得到的濾液放入索式抽提器中，抽提40min，收集濾液抽提液，并將其移入蒸餾裝置，在60°C下水浴加熱35min，蒸餾去除黃酒，得到梔子青果提取液;接下來將上述得到的梔子青果提取液倒入經(jīng)反滲透膜制成的透析袋中，以水為媒介，對其進(jìn)行透析濃縮，直至透析袋中提取液體積變?yōu)樵畜w積1/3時，停止透析濃縮，得到梔子青果濃縮液;將上述得到的梔子青