專利名稱：羥基紅花黃色素a在制備抗阿爾茨海默病藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及含有機有效成分的醫(yī)藥配制品，具體涉及羥基紅花黃色素A(Hydroxysafflor yellow A, HSYA)的藥物新用途。
背景技術：
輕基紅花黃色素A(HSYA)是傳統(tǒng)中草藥紅花(Carthamus tinctorius L.)的主要水溶性藥效單體成分，是具有單查爾酮苷類結構的化合物，結構式如下式(I )所示，分子式為C27H32O16，分子量為612. 53，為黃色或棕黃色粉末，易溶于水和乙醇水溶液。
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(I )現(xiàn)代藥理研究表明，HSYA具有多種藥理活性，概況起來講，目前已公開的文獻報道的藥理作用如下(I)對腦缺血損傷的保護作用(袁玉梅，錢曉東，曹恒斌.羥基紅花黃色素A抗腦缺血損傷作用研究進展.醫(yī)藥導報，2012，31 (8) :1045-1049;田京偉，傅風華，蔣王林，等.羥基紅花黃色素A對腦缺血所致大鼠腦線粒體損傷的保護作用.藥學學報，2004，39(10) :774-777.)(2)對心血管系統(tǒng)的保護作用(盛林，畢少杰，焦波，等.羥基紅花黃色素A對氧化低密度脂蛋白誘導的血管平滑肌細胞增殖的抑制作用.中國藥理學與毒理學雜志，2012，26 (2) : 194-199;靳宏光，姜琢，田宇丹.羥基紅花黃色素A對兔動脈粥樣硬化影響的實驗研究.上海中醫(yī)藥雜志，2011，45(4) :67-68;雌寶霞，金鳴，司南，等.羥基紅花黃色素A對血小板活化因子的拮抗作用.藥學學報，2002, 37 (9) :696.)(3)對神經(jīng)系統(tǒng)的保護作用(劉星苗，孫莉，梁浩，等.羥基紅花黃色素A對谷氨酸誘導損傷神經(jīng)元過氧化物酶體增殖物激活受體Y表達的影響.中國現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志，2012，12 (3) : 330-336; Zhu H, Wang Z, Ma C，Tian J, Fu F，Li C，Guo D, RoederE，Liu K. Neuroprotective effects of hydroxysafflor yellow A:1n vivo and invitrostudies. Planta Medj 2004，69:429-433.)(4)抗炎作用(Wu Y, Wang Lj Jin M，Zang BX. Hydroxysafflor yellow Aalleviates early inflammatoryresponse of bleomycin-1nduced mice lung injury.Biol Pharm Bull, 2012, 35:515-22;陳亭亭，杜玉娟，劉曉雷，等.羥基紅花黃色素A對腦缺血大鼠皮層炎癥信號轉導途徑相關因子的抑制作用.藥學學報，2008，43(6) :570-575.)(5)抗腫瘤作用(中國專利-專利號200810226990，發(fā)明名稱羥基紅花黃色素A在制備抗腫瘤藥物的新用途)(6)抗氧化作用(金鳴，李金榮，吳偉.紅花黃色素抗氧化作用的研究.中國中藥雜志，2012，29 (5) :447-448;許靜，蔡小軍.羥基紅花黃色素A抗晶狀體氧化損傷的實驗研究.眼科新進展，2008，28 (3) :190-194;逯素梅，劉魯華，孫濤，等.羥基紅花黃色素A抗谷氨酸氧化性神經(jīng)損傷的保護作用.山東大學學報(醫(yī)學版)，2008，46 (3) :232-236.)以上研究提示，HSYA具有保護心血管系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)，抗腦缺血損傷、抗氧化、抗腫瘤、抗炎等作用。目前，HSYA作為治療心腦血管疾病的藥物在臨床上應用，尚未見有將其應用于防治阿爾茨海默病(Alzheimer，s Disease, AD)的研究報道。老年癡呆癥是一種以進行性認知障礙和記憶力損害為主要臨床表現(xiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性疾病，是智能損害的綜合征。該病癥一般可分為阿爾茨海默病(AD)、腦血管性癡呆(VD)以及混合性癡呆(MD)三類。老年癡呆中阿爾茨海默病和血管性癡呆是兩大最主要的類型，患病率占所有癡呆的90%以上，其中AD約占半數(shù)，與另一種老年期常見的腦血管性癡呆在病因、發(fā)病機理和預后等方面有著本質區(qū)別。國外資料表明，在世界范圍內，每年因AD花費1000億美元。在西方國家AD已成為繼心臟病、腫瘤、腦中風之后的第4位致死原因。我國流行病學調查發(fā)現(xiàn)60歲以上人群的患病率高達4%-6%，按照我國60歲以上老年人口1. 67億計算，保守估計我國患病人數(shù)已超過650萬，占全世界所有患病人數(shù)的1/4，因此尋找有效治療和改善該病的藥物也成為一項迫在眉睫的任務。

發(fā)明內容
本發(fā)明要解決的技術問題是提供羥基紅花黃色素A的新用途，即在制藥中的新應用。上述在制藥中的新應用即為輕基紅花黃色素A (Hydroxysaffor yellow A, HSYA)在制備抗阿爾茨海默病藥物中的應用。上述應用中，所述藥物由羥基紅花黃色素A和醫(yī)學上可接受的輔料組成，其中，羥基紅花黃色素A在藥物中的質量百分含量為1% 66. 7%。所述藥物可以是注射劑、輸液或凍干粉針，也可以是常見的口服制劑，如片劑、膠囊或口服液。本發(fā)明所述的應用，其中所述的化合物羥基紅花黃色素A可按公開號為CN1475272A發(fā)明專利申請所述的方法從中草藥紅花(Carthamus tinctorius L.)中提取獲得，也可以由合成得到，還可在直接在市場上購買，如直接從上海彩佑實業(yè)有限公司購得。 阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性退行性變變性疾病，主要臨床相為癡呆綜合征，即在意識清醒的狀態(tài)下出現(xiàn)的持久的全面的智能減退，表現(xiàn)為記憶力、計算力、判斷力、注意力、抽象思維能力、語言功能減退，情感和行為障礙，獨立生活和工作能力喪失等。本發(fā)明所述的應用，其中所述的化合物羥基紅花黃色素A可顯著提高A β (25_35)損傷的PC12細胞的存活率，增加模型細胞內GSH含量、線粒體膜電位以及Bcl-2/Bax的比值，降低MDA含量、細胞內活性氧(ROS)的水平并減少DNA碎片的形成，從而通過保護細胞線粒體功能、抑制細胞異常凋亡、清除體內氧化應激所產生的自由基和抑制脂質過氧化等途徑，提高機體抗氧化能力，改善A β (25_35)所致的神經(jīng)細胞損傷，達到預防和/或治療AD的目的。以下實驗結果說明了羥基紅花黃色素A的新藥效，表明了本發(fā)明的有益效果。羥基紅花黃色素A (HSYA)對A β (25_35)誘導的PC12細胞損傷的保護作用的實驗材料與方法1.儀器與材料 Αβ (25_35)(Sigma-Aldrich公司，純度大于97%)，PC12細胞(購自中國科學院上海細胞庫)，MTT (sigma公司)，DMEM培養(yǎng)基(低糖)、胎牛血清、馬血清、青霉素及鏈霉素(Gibco產品)，DCFH-DA (購自Invitrogen公司),Bcl_2和Bax抗體(購自Santa Cruz生物技術公司),Rhodamine 123(購自Sigma-Aldrich公司)，丙二醒(MDA)試劑盒、谷胱甘肽(GSH)試劑盒、Cell Death Detection ELISAPluskit (購自南京建成生物研究所)。受試樣品羥基紅花黃色素A (HSYA)按公開號為CN 1475272A發(fā)明專利申請所述的方法從中草藥紅花(Carthamus tinctorius L.)中提取獲得,純度大于96%。Sff-CJ-1F超凈工作臺(蘇州凈化設備廠)，NU2600E型二氧化碳培養(yǎng)箱(美國Precision公司)，3K18低溫高速離心機(美國Sigma公司產品)，PM-30倒置顯微鏡一計算機圖像分析系統(tǒng)(日本Olympus公司)，勻漿器(上海實驗儀器廠)，MODEL E 960型酶標儀(Metertech Inc公司)，DYCZ-40B轉印電泳儀(北京市六一儀器廠)，XS1050精密電子天平(瑞士 MettlerToledo公司),631純水儀(德國Sartorius公司)。2.試劑配制A β (25_35)溶液的配制用無菌蒸餾水配制ImM A β (25_35)溶液，經(jīng)PBS稀釋成不同濃度后，參照文獻(XianYF, Lin ZX, Zhao M, Mao QQ, Ip SP, Che CT. Uncaria rhynchophyllaameliorates cognitive deficits induced byD-galactose in mice.PlantaMed, 2011，77:1977-1983;Xian YF, Lin ZX, Mao QQ, Zhao M, Hu Z,Ip SP.Bioassay-guidedisolation of neuroprotective compounds from Uncaria rhynchophyllaagainstbeta-amyIoid-1nduced neurotoxicity in PC12 cells. Evid Based ComplementAlternat Med, 2012:802625.)方法于37°C老化4天后備用。HSYA溶液的配制用HBSS將HSYA配制成濃度為8. 16mM的母液，O. 2μπι濾膜過濾除菌，并于-20°C保存，使用時用無血清DMEM培養(yǎng)液稀釋成20 μ M、40 μ M和80 μ M的三個濃度。3.細胞培養(yǎng)PC12細胞用含6%牛血清及6%馬血清的DMEM培養(yǎng)基(100U/ml青霉素，100 μ g/ml鏈霉素)，在37°C，5%C02,飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每2天更換一次培養(yǎng)基，3-4天傳代一次。取對數(shù)生長期細胞接種于培養(yǎng)板，用于不同實驗。4.分組與給藥I)正常組僅用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)PC12細胞，不加HSYA及A β (25_35)干預。2)模型組以Αβ (25_35)作用于PC12細胞。
3) HSYA保護組HSYA孵育PC12細胞2h后，再給予Αβ (25_35)作用24h，根據(jù)濃度梯度，HSYA保護組又分為20 μ M、40 μ M、80 μ M的三個濃度組。5.細胞活力檢測用MTT法檢測細胞存活率。取對數(shù)生長期的PC12細胞，用DMEM完全培養(yǎng)基配成單細胞溶液，以2Χ IO4個細胞/孔的密度接種于96孔板中，每孔100 μ 1，每組樣本設6個平行孔，將接種后的細胞培養(yǎng)板放入37°C，5%C02，飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，分別加入終濃度為20 μ Μ、40 μ M和80 μ M的HSYA預處理2h，再加入終濃度為20 μ M的A β (25_35)損傷24h后，加入10 μ I MTT(5mg/ml)繼續(xù)培養(yǎng)4h，吸去上清液，每孔加入DMS0150 μ I溶解紫色結晶，在570nm波長下用酶標儀測定各孔吸光度值(0D57Clnm)，按下式計算細胞存活率細胞存活率=實驗組(0D57Qnm) /空白對照組(0D57Qnm) X 100%。6. ROS 檢測 本實驗參照Hong and Joeph方法并有所改進，PC12細胞接種24h后，換液，分別加入終濃度為20 μ M、40 μ M、80 μ M的HSYA，空白對照組和A β (25_35)損傷組分別加入無血清DMEM 培養(yǎng)液，作用 2h 后，加入 Αβ (25_35) (20 μΜ)孵育 24h，再加入 DCFH-DA (10 μ Μ)，37°C 避光孵育30min，移出含有DCFH-DA的溶液，PBS洗滌，每孔熒光強度用酶標儀檢測(激發(fā)波長485nm,發(fā)射波長 538nm)。7.MDA、GSH 含量測定以IOOmm的細胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)細胞，實驗設正常對照組、A β (25_35)模型組及HSYA保護組(20μΜ、40μΜ、80μΜ)五組。藥物作用終止時收集細胞，HBSS漂洗2次，收集到離心管中，IOOOrpm離心5min，500mlHBSS懸浮細胞于EP管中，超聲波破碎儀破碎細胞(振幅14 μ m,超聲處理5次,每次8s,間隔10s) ；4000rpm離心30min,取上清液,分別按照南京建成生物工程研究所提供的丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)測定試劑盒說明書進行各步驟反應，應用722型紫外可見分光光度計，測定各組細胞內MDA和GSH含量。其中，MDA試劑盒采用硫代巴比妥酸(Thibabituric Acid, TBA)法測定MDA含量，丙二醛可與硫代巴比妥酸縮合，形成紅色產物，在532nm處有最大吸收峰。GSH測定試劑盒利用二硫代二硝基苯甲酸與巰基化合物反應時能產生一種黃色化合物，在412nm處有最大吸收峰，可進行比色定量測定。8. DNA碎片含量測定以2X IO4個細胞/孔的密度漿細胞接種于96孔板中，每孔100 μ 1，每組樣本設6個平行孔，將接種后的細胞培養(yǎng)板放入37°C，5%C02，飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，分別加入終濃度為20 μ Μ、40 μ M和80 μ M的HSYA預處理2h，再加入終濃度為20 μ M的Αβ (25_35)損傷24h后，棄上清液，加入200 μ I裂解液，室溫下裂解30min，將此96孔板于200 Xg離心IOmin,取上清液,依Elisa試劑盒說明書進行各步驟反應,用酶標儀于405nm處測定各組細胞內DNA碎片的含量。9.細胞膜電位(MMP)測定以2X IO4個細胞/孔的密度漿細胞接種于96孔板中，每孔100 μ 1，每組樣本設6個平行孔，將接種后的細胞培養(yǎng)板放入37°C，5%C02，飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，分別加入終濃度為20 μ Μ、40 μ M和80 μ M的HSYA預處理2h，再加入終濃度為20 μ M的 A β (25_35)損傷 24h 后，加入 Rhodamine 123 (5mg/L), 37 °C 避光孵育 30min,移出含有Rhodamine 123的溶液，HBSS洗滌2次，每孔熒光強度用酶標儀檢測(激發(fā)波長488nm，發(fā)射波長 510nm)。10.免疫印跡分析收獲IOOmm的細胞培養(yǎng)皿中培養(yǎng)的PC12細胞，用NonidetP-40裂解液提取細胞蛋白，采用改良Lowry法測定細胞蛋白質含量。取蛋白樣品30-40 μ g，與5X上樣緩沖液4:1體積混合,95°C加熱5min使蛋白變性。將處理后的蛋白樣品慢慢加入加樣孔中，并在其中一個泳道加5μ I預染蛋白分子量Marker。80V恒壓電泳，當?shù)鞍讟悠酚局翝饪s膠與分離膠交界處時，改為IOOV恒壓電泳。待溴酚藍線泳至距膠邊緣處時，停止電泳。參照分子量Marker，切下分離膠所需部分，浸入轉膜液備用。取下PVDF膜，標記承載蛋白的一面，浸于TBST中，洗膜3次，每次5min。將PVDF膜浸于5%脫脂奶粉中，室溫封閉2h。將PVDF膜浸于TBST中，洗膜3次，每次lOmin。取出PVDF膜，浸入用TBST稀釋的一抗，室溫孵育lh。將PVDF膜浸于TBST中，洗膜3次，每次lOmin。加入各抗體對應的辣根酶標記的二抗(Bax用山羊抗免IgG，i3-actin、Bcl-2用山羊抗小鼠IgG)，室溫孵育2h。將PVDF膜浸于TBST 中，洗膜3次,每次lOmin?；瘜W發(fā)光,顯影,定影。條帶分析，使用Image Pro-Plus軟件分析目的條帶灰度值，比較各組蛋白表達差異。結果分析1. HSYA對A β (25_35)損傷的PC12細胞的保護作用細胞存活率采用MTT法檢測。本研究表明，模型組PC12細胞加入Αβ (25_35)(20 μΜ)孵育24h后，細胞存活率較正常對照組顯著降低，為正常對照組的62. 2%。與模型組相比，HSYA (20 μ Μ、40 μ Μ、80 μ Μ)保護組，能劑量依賴性地減少PC12細胞損傷，細胞存活率顯著提高，分別為正常對照組的70. 2%,80. 9%和91. 5%。實驗數(shù)據(jù)以Mean土SEM(η=6)表示，采用SPSS17. O統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，以組別為橫坐標，以細胞相對存活率％為縱坐標，繪制條形圖。不同濃度HSYA抗Αβ (25_35)導致PC12細胞神經(jīng)損傷的保護作用結果見條形圖1。2. HSYA對A β (25_35)損傷的PC12細胞內ROS的影響活性氧(ROS)在Αβ (25_35)介導的細胞死亡過程中有著重要作用，通過DCFH-DA熒光探針測定胞內ROS水平可評價HSYA在Αβ (25_35)誘導細胞產生氧化應激中的作用。實驗表明，PC12細胞暴露在Αβ (25_35) (20 μΜ)中24h后，細胞內ROS水平明顯增加，為正常組的247. 3% ;不同濃度HSYA (20、40、80μΜ)干預后，劑量依賴性地緩解胞內熒光強度的增加，其中40和80μ M的HSYA作用最為顯著，細胞內ROS水平分別下降至正常組的179. 5%和122. 8%。實驗數(shù)據(jù)以Mean土SEM(η=6)表示，采用SPSS17. O統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，以組別為橫坐標，以ROS相對水平％為縱坐標，繪制條形圖。不同濃度HSYA對A β (25_35)誘導PC12細胞產生ROS水平的影響結果見條形圖2。3.HSYA對Αβ (25_35)損傷的PC12細胞GSH、MDA含量的影響GSH是體內重要抗氧化劑和自由基清除劑，其含量的高低反映機體對自由基的清除能力；MDA是自由基引發(fā)脂質過氧化分解的最終產物，亦是導致AD神經(jīng)元變性壞死的重要誘因。本研究結果表明，模型組細胞內MDA含量明顯增加、GSH含量明顯降低，分別為正常組的186. 4%和61. 5% ;HSYA20、40、80yM保護組可顯著減少MDA含量、增加GSH含量，提示HSYA能有效清除體內氧化應激所產生的自由基，抑制脂質過氧化，提高機體抗氧化能力，從而改善Αβ (25_35) (20 μ Μ)所致的氧化應激損傷。實驗數(shù)據(jù)以Mean土SEM(η=6)表示,采用SPSS17. O統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，分別以組別為橫坐標，以MDA相對含量％、GSH相對含量％為縱坐標，繪制條形圖。不同濃度HSYA對Αβ (25_35)誘導PC12神經(jīng)細胞內MDA、GSH含量的影響見條形圖3和條形圖4。4. HSYA對Αβ (25_35)損傷的PC12細胞內DNA碎片含量的影響細胞凋亡的一個重要特征是DNA的過度片段化。本研究結果表明，PC12細胞暴露在Αβ (25_35) (20 μΜ)中24h后，胞內DNA碎片的含量顯著增加，為正常組的207. 0% ;不同濃度肥￥4(20、40、80^)干預后，其含量劑量依賴性地降低，其中40和80 μ M HSYA作用最為顯著，分別為正常組的139. 9%和136. 0%。實驗數(shù)據(jù)以Mean 土 SEM (η=6)表示，采用SPSS17. O統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，以組別為橫坐標，以DNA碎片相對含量％為縱坐標，繪制條形圖。不同濃度HSYA對Αβ (25_35)誘導PC12神經(jīng)細胞內DNA碎片含量的影 響見條形圖5。5. HSYA對A β (25_35)損傷的PC12細胞內MMP的影響線粒體膜電位(MMP)的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件。Rhodaminel23是一種可透過細胞膜的陽離子熒光染料，在正常細胞中能夠依賴線粒體的跨膜電位進入線粒體基質而將細胞著色，細胞發(fā)生凋亡時線粒體膜電位的下降，使得進入線粒體內的Rhl23染料減少，故而所檢測到的熒光變弱，通過熒光信號的強弱來檢測線粒體膜電位的變化和凋亡的發(fā)生。本研究結果表明，PC12細胞暴露在Αβ (25_35)(20 1^)中2411后，麗？明顯下降(為正常組的69.0%)，造成細胞通透性增加，引發(fā)細胞凋亡；不同濃度HSYA (20、40、80μΜ)干預后，劑量依賴性地升高細胞ΜΜΡ，抑制細胞凋亡，其中40和80 μ M HSYA作用最為顯著，對細胞有顯著保護作用。實驗數(shù)據(jù)以Mean土SEM(η=6)表示，采用SPSS17. O統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，以組別為橫坐標，以MMP相對水平％為縱坐標，繪制條形圖。不同濃度HSYA對A β
(25-35)
所致PC12細胞線粒體膜電位變化的影響見條形圖6。6. HSYA 對 Αβ (25_35)損傷的 PC12 細胞的 Bcl_2、Bax 和 Bax / Bcl_2 的影響B(tài)cl家族是細胞凋亡過程中的一類調節(jié)因子，家族中抗凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax的平衡對細胞是否進入凋亡通路起著重要的作用。本實驗結果表明Αβ (25_35)明顯上調細胞內Bax的表達，同時下調Bcl-2蛋白水平，使Bcl-2/Bax的比值降低(為正常組的48. 8%)，促進細胞凋亡；用濃度為20、40、80 μ M的HSYA預保護細胞2h，均能顯著抑制Αβ (25_35)誘導的細胞凋亡，降低Bax的表達、上調Bcl-2蛋白水平，從而提高細胞內Bcl_2/Bax的比值(分別為正常組的62. 8%,89. 8%和80. 4%)，改善由Αβ (25_35)誘導的PC12細胞的過度凋亡。采用凝膠成像系統(tǒng)對免疫印跡法所得膠片進行拍照，得凝膠電泳圖7 ;并用凝膠圖象處理系統(tǒng)分析目標帶的分子量和凈光密度值，實驗數(shù)據(jù)以Mean土SEM(η=6)表示，采用SPSS17. O統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，以組別為橫坐標，以Bax / Bcl-2相對表達量％為縱坐標，繪制條形圖8。不同濃度HSYA對Αβ (25_35)所致PC12細胞內Bcl_2、Bax和β-actin表達變化的影響見電泳圖7。不同濃度HSYA對Αβ (25_35)所致PC12細胞內Bax / Bcl-2表達變化的影響見條形圖8。


圖1為顯示不同濃度HSYA抗Αβ (25_35)導致PC12細胞神經(jīng)損傷效果的條形圖。圖2為顯示不同濃度HSYA抑制Αβ (25_35)誘導PC12細胞產生ROS效果的條形圖。圖3為顯示不同濃度HSYA抑制Αβ (25_35)誘導PC12細胞產生MDA效果的條形圖。
圖4為顯示不同濃度HSYA恢復A β (25_35)抑制PC12細胞產生GSH效果的條形圖。圖5為顯示不同濃度HSYA抑制A β (25_35)誘導PC12細胞產生DNA碎片效果的條形圖。圖6為顯示不同濃度HSYA恢復Αβ (25_35)降低PC12細胞膜電位效果的條形圖。圖7為顯示不同濃度HSYA對Αβ (25_35)所致PC12細胞內Bcl-2, Bax和β -actin表達變化影響的電泳圖。圖8為顯示不同濃度HSYA對A β (25_35)所致PC12細胞內Bax / Bcl-2表達變化影響的條形圖。上述圖1 6和圖8中，相關條形圖中標注符號的含義分別是#表示與正常組比較有顯著性差異p〈0. 001 ;*表示與模型組比較有顯著性差異P〈0. 05 ;**表示與模型組比 較有非常顯著性差異p〈0.01 ;***表示與模型組比較有極顯著性差異P〈0. 001。
具體實施例方式例I (注射劑)取羥基紅花黃色素A15g，加入氯化鈉9g，加水至1000ml，用lmol/ml氫氧化鈉溶液調整pH至4. 5-7. O,過濾，濾液灌封在5ml的安瓿瓶中，100°C滅菌30min，貼簽，包裝即得。本品可靜脈注射或肌肉注射，每次一瓶，每日一次，14天為一療程，可連續(xù)使用1-2療程。例2(凍干粉針劑)稱取40g甘露醇，置于適當容器內，加入200ml注射用水，加入針用炭O. 2g(0. l%w/v),加熱至80°C,攪拌30min, O. 22um微孔濾膜過濾,濾液備用。稱取80g輕基紅花黃色素A,加注射用水至1000ml,攪拌使輕基紅花黃色素A完全溶解?；旌狭u基紅花黃色素A溶液及甘露醇溶液，補加注射用水至2000ml，用O. 22um微孔濾膜過濾，分裝，裝量為每支含羥基紅花黃色素A 80mg,冷凍干燥。真空壓塞，軋蓋，貼簽，包裝即得。本品可靜脈注射，取上述注射用羥基紅花黃色素A —支加入250ml注射用生理鹽水中，緩慢靜脈滴注，每日I次，14天為一療程。例3 (片劑)取羥基紅花黃色素A20g，加入乳糖48g、淀粉I IOg混合均勻，用7%的淀粉漿30g作為粘合劑、濕法制粒，烘干，加入顆粒量3%的硬脂酸鎂6. 24g，混勻，然后用沖壓裝置將顆粒壓制成600片片劑，即得治療老年癡呆的片劑。該片劑口服，每次2-3片，一日3次，15-20天為一療程，可連續(xù)使用2-3療程。例4 (膠囊劑)取羥基紅花黃色素A 50g,加入乳糖48g、淀粉IlOg混合均勻，用7%的淀粉漿30g作為粘合劑、濕法制粒，烘干，過20目篩整粒，于相對濕度低于74%的環(huán)境中裝填于3號空膠囊中，每粒膠囊平均內容物重123mg，即得防治AD的膠囊劑。該膠囊劑口服，一日3次，每次2-3粒，15-20天為一療程，可連續(xù)使用2-3療程。例5( 口服液)按無菌法操作，將羥基紅花黃色素A IOg溶于適量水中(約30ml)，攪拌至完全溶解,倒入IOOOml燒杯中，再加入甘油120ml混合，加蒸餾水至400ml，作為I液。取尼泊金乙酯約O. 5g，精密稱定，倒入500ml燒杯中，加入約200ml蒸餾水，加熱至尼泊金乙酯全部溶于水中，作為II液。將II液緩緩加入I液中，邊加邊攪拌，再定容至1000ml，攪拌均勻，過濾，無菌條件下灌裝于IOmlA型口服液瓶中即得。每日口服2瓶(20ml)，分1-2次服用，連 服I周。
權利要求
1.羥基紅花黃色素A在制備抗阿爾茨海默病藥物中的應用。
2.根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于，所述藥物由羥基紅花黃色素A和醫(yī)學上可接受的輔料組成，其中，羥基紅花黃色素A在藥物中的質量百分含量為1% 66. 7%。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的應用，其特征在于，所述藥物是注射劑、凍干粉針、片劑、 膠囊或口服液。
全文摘要
本發(fā)明涉及羥基紅花黃色素A在制備抗阿爾茨海默病藥物中的應用。本發(fā)明所述的藥物由羥基紅花黃色素A和醫(yī)學上可接受的輔料組成，其中，羥基紅花黃色素A在藥物中的質量百分含量為1%～66.7%。本發(fā)明所述藥物中的化合物羥基紅花黃色素A可顯著提高Aβ(25-35)損傷的PC12細胞的存活率，增加模型細胞內GSH含量、線粒體膜電位以及Bcl-2/Bax的比值，降低MDA含量、細胞內活性氧(ROS)的水平并減少DNA碎片的形成，從而通過保護細胞線粒體功能、抑制細胞異常凋亡、清除體內氧化應激所產生的自由基和抑制脂質過氧化等途徑，提高機體抗氧化能力，改善Aβ(25-35)所致的神經(jīng)細胞損傷，達到預防和/或治療阿爾茨海默病的目的。
文檔編號A61P25/28GK103006633SQ201210492450
公開日2013年4月3日 申請日期2012年11月27日 優(yōu)先權日2012年11月27日
發(fā)明者徐洋, 蘇子仁, 賴小平, 林志秀, 冼彥芳, 陳建南, 孔松芝, 謝慶鳳 申請人:廣東省中醫(yī)院