專利名稱：一種色譜用蛋白a免疫吸附專用試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)工程領(lǐng)域，具體涉及一種色譜用蛋白A免疫吸附專用試劑
品.ο
背景技術(shù)：
葡萄球菌蛋白A (SPA)是一種從金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁分離的蛋白質(zhì)。SPA分子包括A、B、C、D、E五個(gè)同源結(jié)構(gòu)域，每個(gè)結(jié)構(gòu)域都可以和IgG自主結(jié)合。由于葡萄球菌蛋白A具有與大多數(shù)哺乳動(dòng)物IgG的Fc片段結(jié)合的能力，因此被廣泛地應(yīng)用于單克隆抗體、多克隆抗體的分離純化，并且已應(yīng)用到醫(yī)學(xué)治療中對(duì)體內(nèi)抗體水平過高的各種自身免疫性疾病患者進(jìn)行免疫吸附治療。目前有的產(chǎn)品包括 SepHarose-rPA和S印Harose-SPA。這兩種免疫吸附介質(zhì)在吸附呈飽和狀態(tài)后即不能再利用，我們的發(fā)明針對(duì)這兩種色譜的分析材料和蛋白A免疫吸附介質(zhì)，提供一套更為合理、簡(jiǎn)捷的再生利用的專用溶液的配制方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種色譜用蛋白A免疫吸附專用試劑盒，它包括儲(chǔ)存液、洗脫液、平衡液和預(yù)沖液，所述儲(chǔ)存液為0.01 %- 的疊氮鈉水溶液，所述洗脫液為pH 1.0 - PH3.0的檸檬酸-氯化鈉溶液，所述平衡液為PH6.4 - pH7. 4的磷酸鹽緩沖液，所述預(yù)沖液為PH7.0的0.9 %的氯化鈉溶液。平衡液即pH6.4 - pH7.4的磷酸鹽緩沖液的配制方法為每升平衡液中含檸檬酸25 - 33克，乙酸鈉5 - 60克，氯化鈉49 - 54克，磷酸氫二鈉29. 1克，磷酸二氫鉀2.6克。洗脫液即pHl. 0-pH3. 0的檸檬酸-氯化鈉溶液的配制方法為每升注射用生理鹽水中含6.6-10克檸檬酸，調(diào)節(jié)pH至1.0 - 3.0。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一
色譜柱和蛋白A免疫吸附介質(zhì)專用溶液的具體配制方法如下
(1 )貯存液(0.01 % - 1 %，1L)
稱取0. Ig - 1 Og疊氮鈉溶于1升注射用水中。( 2 )平衡液(ρΗ6·4 - ρΗ7. 4，IL )稱取檸檬酸三鈉25g - 33g ；乙酸鈉 54. 5g - 60g ；氯化鈉49g - 54g ；磷酸氫二鈉29. Ig ；磷酸二氫鉀2. 6g。定容至 IL，調(diào)節(jié) pH 至 6. 4 - 7. 4。( 3 )洗脫液(pHl.O - pH3. 0, IL )稱取6. 6g - IOg檸檬酸溶解于IL注射用生理鹽水中，調(diào)節(jié)PH至1.0 - pH3.0。( 4 )預(yù)沖液(IL )選用0.9 %注射用生理鹽水。
將貯存液注入色譜分析柱或蛋白A免疫吸附介質(zhì)中，可以保證色譜柱和蛋白A 免疫吸附介質(zhì)在2 - 8 °C環(huán)境中保存1年。色譜柱和蛋白A免疫吸附介質(zhì)吸附性能沒有降低。該貯存液功能是穩(wěn)定色譜柱和蛋白A免疫吸附介質(zhì)中的SPA和rPA，另-方面保證其中的無(wú)菌環(huán)境。試驗(yàn)表明0.01 %疊氮鈉可以有效殺滅細(xì)菌和酵母，并且抑制真菌的生長(zhǎng)。將黑曲霉、大腸桿菌、白色念珠菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌在0.1 %疊氮鈉培養(yǎng)，接種密度為IO5 / ml培養(yǎng)，在0，12，24小時(shí)和4，7，14，21和28天對(duì)菌群密度進(jìn)行檢測(cè)。0.01 %疊氮鈉可以直接殺滅其中的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，并且有效降低其他菌群的生長(zhǎng)密度。預(yù)沖液主要功能是將色譜柱和蛋白A免疫吸附介質(zhì)中的貯存液中沖洗掉。同時(shí)確保不破壞色譜柱和蛋白A免疫吸附介質(zhì)結(jié)構(gòu)，為色譜柱和蛋白A免疫吸附介質(zhì)將要進(jìn)行的吸附工作做準(zhǔn)備。由于0.9 % NaCl與人體內(nèi)血液環(huán)境的pH環(huán)境，離子強(qiáng)度接近，進(jìn)行免疫吸附治療操作時(shí)，不會(huì)因?yàn)轭A(yù)沖液的使用失誤引起病人的危險(xiǎn)。洗脫液的目的是通過降低pH值使色譜柱和免疫吸附介質(zhì)中的SPA和IgG或 IgG復(fù)合物的結(jié)合力下降以達(dá)到洗脫目的。pHl.O - pH3.0的檸檬酸-氯化鈉可以在較短的時(shí)間內(nèi)完成洗脫。同時(shí)不會(huì)對(duì)SPA的結(jié)構(gòu)有很大的影響，保證色譜柱和免疫吸附介質(zhì)的高效再利用。本發(fā)明方案的平衡液是pH6.4 - pH7.4的磷酸鹽緩沖液。( 1 )選用此緩沖液可以在較短時(shí)間內(nèi)平衡SPA的帶電基團(tuán)，使其迅速恢復(fù)活性；
(2 )同時(shí)不會(huì)對(duì)SPA和其載體的結(jié)構(gòu)有影響；
(3 )同時(shí)此平衡液模擬了人體液內(nèi)環(huán)境的離子強(qiáng)度和pH值，加強(qiáng)了操作的安全性。實(shí)施例二
色譜柱和蛋白A免疫吸附介質(zhì)專用溶液的具體配制方法如下 (1 )貯存液(0.1 %, IL )稱取Ig疊氮鈉溶于1升注射用水中。( 2 )平衡液(pH7.4，lL )稱取檸檬酸三鈉25g ；乙酸鈉60g ；氯化鈉 49g ；磷酸氫二鈉29. Ig 磷酸二氫鉀2.6g。定容至IL，調(diào)節(jié)pH至7. 4。( 3 )洗脫液(pH3.0，lL)稱取6. 6g檸檬酸溶解于IL注射用生理鹽水中，調(diào)節(jié)pH至3. 0。( 4 )預(yù)沖液(IL)選用0.9 %注射用生理鹽水。使用本實(shí)施例的貯存液0. 1%疊氮鈉貯存免疫吸附介質(zhì)SPA - Sepharose在2 -8 V條件下1年，SPA - Sepharose活力保持100 %，未發(fā)生微生物污染。選用pH7.4平衡液，pH3.0洗脫液和0.9 %氯化鈉溶液做預(yù)沖液，經(jīng)過預(yù)沖-洗脫-平衡過程，循環(huán)使用999次，沒有發(fā)生SPA - Sepharose介質(zhì)活力下降，沒有發(fā)生SPA脫落。實(shí)施例三色譜柱和蛋白A免疫吸附介質(zhì)專用溶液的具體配制方法如下 (1 )貯存液(0.01 - 1 %，1L)稱取Ig - IOg疊氮鈉溶于1升注射用水中。( 2 )平衡液(ρΗ6·4，1L)稱取檸檬酸三鈉33g ；乙酸鈉54. 5g ；氯化鈉 49g，磷酸氫二鈉29. Ig 磷酸二氫鉀2.6g。定容至IL，調(diào)節(jié)pH至6. 4。( 3 )洗脫液(pH 1.0,1L)稱取IOg檸檬酸溶解于IL注射用生理鹽水中，調(diào)節(jié)pH至1. 0。( 4 )預(yù)沖液(IL)選用0.9 %注射用生理鹽水。
權(quán)利要求
1. 一種色譜用蛋白A免疫吸附專用試劑盒，它包括貯存液、洗脫液、平衡液和預(yù)沖液，其特征在于所述貯存液為0.01 % - 1 %的疊氮鈉水溶液；所述洗脫液為pHl.O -PH3.0的檸檬酸-氯化鈉溶液；所述平衡液為pH6.4 - pH7.4的磷酸鹽緩沖液；所述預(yù)沖液為PH7.0的0.9 %的氯化鈉溶液(1)所述平衡液配方為每升平衡液中含檸檬酸鈉25- 33克，乙酸鈉M.5 - 60 克，氯化鈉49 - 54克，磷酸氫二鈉29. 1克，磷酸二氫鉀2.6克；(2)所述洗脫液配制方法為每升注射用生理鹽水中加入6.6-10克檸檬酸，調(diào)節(jié)pH 至 1.0-3.0。
全文摘要
一種色譜用蛋白A免疫吸附專用試劑盒，本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明針對(duì)色譜柱和免疫吸附介質(zhì)的特征，為之提供了一套貯存、預(yù)沖、洗脫、平衡的溶液，以達(dá)到最大限度地重復(fù)利用色譜柱和免疫吸附介質(zhì)，使之產(chǎn)生更為高效的分析結(jié)果和使用效果。
文檔編號(hào)A61L33/00GK102478557SQ20101055355
公開日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2010年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月22日
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