專利名稱:核酸或免疫色譜法用試劑組合物、核酸或免疫色譜法測(cè)定方法及核酸或免疫色譜法測(cè)定 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及核酸色譜法或免疫色譜法中使用的試劑組合物、使用其的核酸色譜法或免疫色譜法測(cè)定方法、及包含其的核酸色譜法或免疫色譜法測(cè)定用試劑盒。
背景技術(shù):
以往,在核酸色譜法或免疫色譜法測(cè)定中,為了提高靈敏度,慣用方法是增加涂布到固相上的抗體、核酸的量或者增加與標(biāo)記物結(jié)合的抗體、核酸的量。但是,存在以下問題:若增加抗體、核酸等反應(yīng)體,則容易產(chǎn)生非特異性的反應(yīng),此夕卜,若為少量則得不到充分的靈敏度。在核酸色譜法或免疫色譜法中,出于各種目的而使用各種試劑成分。進(jìn)行以下嘗試:添加聚陰離子等水溶性高分子化合物、無機(jī)鹽類、表面活性劑等添加物,來抑制非特異性的反應(yīng)、或者提高靈敏度(專利文獻(xiàn)I 11)。但是,所有添加物的組合均尚未充分達(dá)成非特異性反應(yīng)的抑制或靈敏度、色譜載體上的展開性的提高。現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)1:日本特開2001-21560號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2:日本特開2006-215044號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)3:日本特開2006-317226號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)4:日本特開2007-121204號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)5:日本特開2007-121205號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)6:日本特開2007-322310號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)7:日本特開2009-52945號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)8:日本特開2010-14507號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)9:日本特開2010-19794號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)10:日本特開2010-44094號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)11:日本特表2010-50055號(hào)小冊(cè)子
發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問題本發(fā)明的課題在于,在進(jìn)行核酸色譜法或免疫色譜法測(cè)定時(shí),通過降低由分析對(duì)象物以外的成分的非特異性反應(yīng)產(chǎn)生的結(jié)合,且提高分析對(duì)象物的分散能力而將色譜載體上的展開性優(yōu)化,同時(shí)促進(jìn)特異性反應(yīng),從而即使使用低濃度的分析對(duì)象物也能夠進(jìn)行準(zhǔn)確且迅速的判斷。用于解決問題的方案
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn),通過使用特定的添加劑的組合可解決上述的課題,從而達(dá)成本發(fā)明。本發(fā)明為一種核酸色譜法或免疫色譜法用試劑組合物,其含有重均分子量為8000以上的水溶性高分子化合物、2價(jià)或3價(jià)的金屬的鹽、非離子性表面活性劑、及水溶性非質(zhì)子性有機(jī)化合物。本發(fā)明為一種核酸色譜法或免疫色譜法測(cè)定方法,其包括使用上述的核酸色譜法或免疫色譜法用試劑組合物將待測(cè)物展開的工序。本發(fā)明為一種核酸色譜法或免疫色譜法測(cè)定用試劑盒,其包含上述的色譜法用試劑組合物作為待測(cè)物的展開液。發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明,在進(jìn)行核酸色譜法或免疫色譜法測(cè)定時(shí),通過降低由分析對(duì)象物以外的成分的非特異性反應(yīng)產(chǎn)生的結(jié)合,且提高分析對(duì)象物的分散能力,同時(shí)促進(jìn)特異性反應(yīng),從而即使使用低濃度的分析對(duì)象物也能夠進(jìn)行準(zhǔn)確且迅速的判斷。
圖1是核酸色譜法測(cè)定的簡(jiǎn)略工序圖。圖2是核酸色譜法測(cè)定用試劑盒的簡(jiǎn)略圖。圖3是表示核酸色譜法測(cè)定的測(cè)定原理的簡(jiǎn)略圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的核酸色譜法或免疫色譜法用試劑組合物含有重均分子量為8000以上的水溶性高分子化合物、2價(jià)或3價(jià)的金屬的鹽、非離子性表面活性劑、及水溶性非質(zhì)子性有機(jī)化合物。(重均分子量為8000以上的水溶性高分子化合物)重均分子量為8000以上的水溶性高分子化合物只要是重均分子量為8000以上、并且具有水溶性的化合物,則沒有特別限定。重均分子量?jī)?yōu)選為10000以上。前述水溶性高分子只要重均分子量為8000以上則可以使用重均分子量已知的市售的化合物。當(dāng)使用合成的水溶性高分子時(shí),使用通過高分子的分子量測(cè)定中通用的凝膠滲透色譜法(以下GPC)測(cè)定得到的重均分子量為8000以上的化合物。當(dāng)重均分子量低于8000時(shí),在核酸的雜交、抗原抗體反應(yīng)中見到的形成與分析對(duì)象物的特異性復(fù)合體的結(jié)合力降低,利用色譜法檢測(cè)的檢測(cè)靈敏度降低。更優(yōu)選使用重均分子量為2萬 100萬的水溶性高分子。重均分子量為8000以上的水溶性高分子化合物的“水溶性”是指,相對(duì)于IL的20°C的水,IOg以上、優(yōu)選50g以上的化合物發(fā)生溶解。重均分子量為8000以上的水溶性高分子化合物例如為選自由聚乙二醇、聚丙二
醇、聚乙二醇/聚丙二醇嵌段共聚物等聚亞烷基二醇類;甲基纖維素、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素等纖維素類;聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯基甲基醚等乙烯基系高分子類;聚甲基丙烯酰胺、聚丙烯酰胺等酰胺系高分子類;及聚陰離子組成的組中的I種以上。作為聚陰離子,可列舉出多糖陰離子、聚谷氨酸、聚天冬氨酸等合成肽系陰離子、合成核酸系聚陰離子,優(yōu)選多糖陰離子。作為多糖陰離子,例如可列舉出選自由硫酸葡聚糖、硫酸乙酰肝素、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸角質(zhì)素、透明質(zhì)酸、肝素及其鹽組成的組中的I種以上。作為鹽,有鈉、鉀、鎂鹽等。其中,從獲得的容易性和經(jīng)濟(jì)性出發(fā),更優(yōu)選硫酸葡聚糖及其鹽。相對(duì)于試劑組合物,重均分子量為8000以上的水溶性高分子化合物的量?jī)?yōu)選為0.1 5重量%,更優(yōu)選為0.5 3重量%。分子量為8000以上的水溶性高分子化合物提高形成與分析對(duì)象物的特異性復(fù)合體的結(jié)合力,促進(jìn)特異性反應(yīng)。(2價(jià)或3價(jià)的金屬的鹽)2價(jià)或3價(jià)的金屬只要是2價(jià)或3價(jià)的金屬則沒有特別限定,例如可列舉出鎂、鈣等堿土金屬(2價(jià))、硼、鋁等鋁族金屬(3價(jià)),優(yōu)選鎂、鈣或鋁,特別優(yōu)選鎂或鈣,最優(yōu)選鎂。當(dāng)使用堿金屬(I價(jià))時(shí),展開速度降低,并且非特異反應(yīng)也增大。2價(jià)或3價(jià)的金屬的鹽的陰離子沒有特別限定,例如可列舉出氯化物、溴化物等鹵化物;硫酸鹽;磷酸鹽;碳酸鹽;硼酸鹽。優(yōu)選使用氯化物、溴化物等鹵化物。2價(jià)或3價(jià)的金屬的鹽優(yōu)選為選自由氯化鎂、硫酸鎂、磷酸鎂、碳酸鎂等鎂鹽;氯化鈣、硫酸鈣、磷酸鈣等鈣鹽及氯化鋁、硫酸鋁、碳酸鋁等鋁鹽組成的組中的I種以上。相對(duì)于試劑組合物,2價(jià)或3價(jià)的金屬的鹽的量?jī)?yōu)選為0.1 IOOmM,更優(yōu)選為
0.5 50mM,進(jìn)一步優(yōu)選為I 10mM。2價(jià)或3價(jià)的金屬的鹽提高毛細(xì)管現(xiàn)象的展開速度,且不會(huì)引起免疫復(fù)合體的非特異反應(yīng)。(非離子性表面活性劑)非離子性表面活性劑例如可列舉出聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基苯酚醚、烷基葡糖苷、聚氧乙烯脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、脂肪酸鏈烷醇酰胺。非離子性表面活性劑的HLB優(yōu)選為10 18,更優(yōu)選為13
18。作為非離子性表面活性劑,優(yōu)選聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯,例如特別優(yōu)選選自由單月桂酸聚氧乙烯山梨糖醇酐、單硬脂酸聚氧乙烯山梨糖醇酐、三硬脂酸聚氧乙烯山梨糖醇酐及單油酸聚氧乙烯山梨糖醇酐組成的組中的I種以上。相對(duì)于試劑組合物,非離子性表面活性劑的量?jī)?yōu)選為0.1 5重量%,更優(yōu)選為
0.5 2.5重量%,進(jìn)一步優(yōu)選為0.5 I重量%。(水溶性非質(zhì)子性有機(jī)化合物)水溶性非質(zhì)子性有機(jī)化合物只要是為水溶性、且不具有質(zhì)子性的有機(jī)化合物則沒有特別限定。“水溶性”是指在不發(fā)生相分離的情況下可與水以任意的比率混合的性質(zhì),優(yōu)選為相對(duì)于IL的20°C的水,IOg以上、優(yōu)選50g以上化合物發(fā)生溶解的有機(jī)化合物。“非質(zhì)子性”是指不含酸性氫,不作為氫鍵供體起作用的性質(zhì)。作為水溶性非質(zhì)子性有機(jī)化合物,可列舉出亞砜類、N,N’- 二烷基酰胺類、酮類、腈類、環(huán)狀醚類等。作為亞砜類,可列舉出二甲基亞砜、甲基乙基亞砜、二乙基亞砜、丁基乙基亞砜等。作為N,N’ - 二烷基酰胺類,可列舉出二甲基乙酰胺等二烷基乙酰胺、二甲基甲酰胺等二烷基甲酰胺、N-甲基-吡咯烷酮、N-乙基-吡咯烷酮、N-(2-羥基乙基)-2-吡咯烷酮等N-烷基吡咯烷酮等。作為酮類,可列舉出丙酮、乙酰丙酮、二乙酮、甲乙酮、甲基丙酮、異丁基甲酮、Y-丁內(nèi)酯、Y-戊內(nèi)酯等。作為腈類,可列舉出乙腈、丙腈、丁腈等。作為環(huán)狀醚類,可列舉出四氫呋喃、2-甲基四氫呋喃、1,4-二噁烷等。作為水溶性非質(zhì)子性有機(jī)化合物,優(yōu)選亞砜類、N, N’ - 二烷基酰胺類,特別優(yōu)選亞砜類。相對(duì)于試劑組合物,水溶性非質(zhì)子性有機(jī)化合物的量?jī)?yōu)選為0.2 5重量%,更優(yōu)選為0.5 3重量%。水溶性非質(zhì)子性有機(jī)化合物改善在利用毛細(xì)管現(xiàn)象的展開中因分析對(duì)象物以外的成分融合、聚集而引起的展開液的不均一性,使其不易引起非特異性反應(yīng)。本發(fā)明的試劑組合物通常包含水作為溶劑,可以通過將上述的成分混合到水、例如超純水中而得到。(核酸色譜法或免疫色譜法)本發(fā)明的試劑組合物用于核酸色譜法或免疫色譜法中。核酸色譜法是基于核酸的雜交的方法。免疫色譜法只要是基于抗原抗體反應(yīng)的方法,則沒有特別限定,例如有競(jìng)爭(zhēng)法、夾心法,其中通用的是夾心法。核酸色譜法或免疫色譜法中,為了標(biāo)記作為分析對(duì)象物的核酸或抗原等,可以使用金、銀或鉬等貴金屬膠體顆粒、氧化鐵等金屬氧化物膠體顆粒、膠乳顆粒等作為標(biāo)記物,優(yōu)選使用金膠體顆粒。這些膠體狀金屬顆粒的平均粒徑優(yōu)選為I 500nm,特別優(yōu)選為可得到強(qiáng)的色調(diào)的IOnm 150nm,更優(yōu)選為40 IOOnm的范圍內(nèi)。標(biāo)記物只要滿足如下方式即可:與對(duì)分析對(duì)象物具有結(jié)合能力的蛋白質(zhì)、具有特異性結(jié)合能力的互補(bǔ)核酸或抗體形成復(fù)合體從而作為對(duì)分析對(duì)象物進(jìn)行標(biāo)記的標(biāo)記試劑使用,且在色譜介質(zhì)上將標(biāo)記試劑展開時(shí)可以與含有分析對(duì)象物的試樣同時(shí)、或者在其后展開。標(biāo)記試劑可以在干燥保持在色譜介質(zhì)的任意部位中后,將展開液或試樣稀釋液供給、滴加到其上游的樣品墊(試樣添加部分)等中使其展開,從標(biāo)記試劑保持部位溶出而展開。此外,也可以分散到展開液或稀釋液中制成分散液,在色譜介質(zhì)上展開而使用。從保存的觀點(diǎn)出發(fā),優(yōu)選將標(biāo)記試劑預(yù)先干燥保持在色譜介質(zhì)的任意部位中。本發(fā)明的試劑組合物優(yōu)選包含封閉劑、例如牛血清白蛋白、牛奶來源的蛋白質(zhì)、脫脂牛奶、酪蛋白、明膠等蛋白質(zhì)、以及Blocking Peptide Fragment (封閉肽片段)(TOYOBO)、變性魚DNA、酵母來源的tRNA、CE510(JSR Corporation)等市售的親水性高分子聚合物等封閉劑。通過使封閉劑共存,能夠在不降低靈敏度的情況下降低背景,所以能夠改善S/N比。只要發(fā)揮本發(fā)明的效果,本發(fā)明的試劑組合物可以包含磷酸鹽、三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽、碳酸鹽、甘氨酸等氨基酸、Good’ s緩沖液等緩沖劑、作為核酸色譜法或免疫色譜法用的試劑組合物慣用的成分。本發(fā)明的試劑組合物可以作為核酸色譜法或免疫色譜法中的展開液使用。作為展開液,通常,使用水作為溶劑,在其中添加重均分子量為8000以上的水溶性高分子化合物、2價(jià)或3價(jià)的金屬的鹽、非離子性表面活性劑、及水溶性非質(zhì)子性有機(jī)化合物。添加的順序沒有特別限定,也可以同時(shí)添加。當(dāng)作為展開液使用時(shí),可以將預(yù)先將包含所檢測(cè)的分析對(duì)象物的試樣和展開液混合而成的溶液供給、滴加到色譜介質(zhì)、標(biāo)記試劑保持部位、或者樣品墊上使其展開,也可以先將試樣供給、滴加到樣品墊上,然后將展開液供給、滴加到樣品墊上使其展開。當(dāng)作為試樣稀釋液使用時(shí),將試樣稀釋而成的稀釋液可以通過直接作為展開液供給、滴加到色譜介質(zhì)、標(biāo)記試劑保持部位、或者樣品墊上而使用。此外,本發(fā)明的試劑組合物在核酸色譜法或免疫色譜法中也可以預(yù)先保持在樣品墊或標(biāo)記試劑的干燥保持部位中。作為稀釋劑使用的本發(fā)明的試劑組合物、保持在樣品墊或標(biāo)記試劑的干燥保持部位的本發(fā)明的試劑組合物在之后的工序中作為展開液或其一部分使用。由于當(dāng)保持在標(biāo)記試劑的干燥保持部位中時(shí),有時(shí)在展開時(shí)產(chǎn)生一些聚集,所以優(yōu)選預(yù)先保持在展開液、稀釋液或它們的一部分、或者樣品墊中的方式。作為本發(fā)明的分析對(duì)象物,只要是存在或者能夠制造與其特異性結(jié)合的物質(zhì)即可,沒有特別限定?!疤禺愋越Y(jié)合”是指基于生物體分子所具有的親和力而結(jié)合。作為這樣的基于親和力的結(jié)合,具代表性的是抗原與抗體的結(jié)合,在免疫測(cè)定法中被廣泛利用,不僅這樣的結(jié)合,本發(fā)明中,也可以利用糖與凝集素的結(jié)合、激素與受體的結(jié)合、酶與抑制劑的結(jié)合、核酸與互補(bǔ)的核酸、核酸與具有與核酸的結(jié)合能力的蛋白質(zhì)的結(jié)合等。分析對(duì)象物可以是完全抗原這樣的其自身具有抗原性的物質(zhì),或者半抗原(不完全抗原)這樣的其自身不具有抗原性但通過制成化學(xué)改性物而具有抗原性的物質(zhì)。只要是存在或者能夠制造與這些分析對(duì)象物特異性結(jié)合的檢測(cè)物質(zhì)即可,作為檢測(cè)物質(zhì),可列舉出與分析對(duì)象物的核酸互補(bǔ)的核酸或核酸結(jié)合蛋白質(zhì)、單克隆抗體或多克隆抗體等。若例示出本發(fā)明的分析對(duì)象物,可列舉出培養(yǎng)細(xì)胞株、末梢血或者細(xì)菌、病毒等微生物等中所含的核酸(單鏈核酸或者雙鏈核酸)或其擴(kuò)增物、癌胚抗原(CEA)、HER2蛋白、前立腺特異抗原(PSA)、CA19_9、α -甲胎蛋白(AFP)、免疫抑制酸性蛋白(IPA)、CA15-3、CA125、雌激素受體、孕酮受體、大便潛血、肌鈣蛋白1、肌鈣蛋白T、CK-MB、CRP、人絨毛膜促性腺激素(HCG)、促黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、梅毒抗體、流感病毒、衣原體抗原、A族β溶血性鏈球菌抗原、HBs抗體、HBs抗原、輪狀病毒、腺病毒、白蛋白、糖化白蛋白及花粉、螨、室內(nèi)塵埃、食品等變應(yīng)原、變應(yīng)原特異性IgE等。優(yōu)選使用培養(yǎng)細(xì)胞株、末梢血或者細(xì)菌、病毒等微生物等中包含的核酸,具體而言,可列舉出DNA、RNA、寡核苷酸、多核苷酸、它們的擴(kuò)增物等。它們可以將核酸自身作為分析對(duì)象物,也可以是被具有與標(biāo)記試劑的結(jié)合能力的結(jié)合基或結(jié)合蛋白質(zhì)修飾過的核酸。作為包含上述被檢測(cè)物質(zhì)的試樣,例如可列舉出生物試樣、即全血、血清、血漿、尿、唾液、吐的痰、鼻腔或咽頭擦拭液、髓液、羊水、乳頭分泌液、淚、汗、來自皮膚的滲出液、來自組織或細(xì)胞及糞便的提取液等以及牛奶、雞蛋、小麥、豆、牛肉、豬肉、雞肉等或包含它們的食品等的提取液等。此外,可列舉出培養(yǎng)細(xì)胞株、末梢血或者細(xì)菌、病毒等微生物等中包含的核酸的提取液、包含所提取的核酸的擴(kuò)增物的液體、或者包含被與這些核酸具有結(jié)合能力的結(jié)合基或結(jié)合蛋白質(zhì)修飾過的核酸的液體,但并不限定于這些。以下,對(duì)于核酸色譜法,采用夾心法對(duì)檢測(cè)方法、判定方法及檢測(cè)原理的例子進(jìn)行說明。(檢測(cè)方法的例子)
將檢測(cè)方法的例子示于圖1中。⑴采集分析試樣(例如、鼻涕)。( )從分析試樣中提取病毒等基因等。(iii)根據(jù)需要,利用PCR法等并使用基因擴(kuò)增裝置將所提取的基因等進(jìn)行擴(kuò)增。(iv)將基因等添加到免疫測(cè)定用試劑盒中。(V)添加展開液將基因等展開。(vi)在例如15分鐘后,判定陽(yáng)性或陰性。(判定方法)將判定方法示于圖2中。陽(yáng)性或陰性的判定以紅線的有無來決定。若在Test線(T位置)上出現(xiàn)紅線,則作為對(duì)象病毒等陽(yáng)性(圖2(a)),若沒有出現(xiàn),則作為對(duì)象病毒等陰性(圖2(b))。此時(shí)內(nèi)部控制線(internal control line) (I位置)對(duì)于從患者的鼻子等中采集病毒等檢體時(shí)一起包含的患者自身的正常人細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。因此,當(dāng)采集檢體時(shí)的分析試樣的采集不適當(dāng)時(shí)(例如,鼻腔擦拭不充分時(shí))、或者在基因等的擴(kuò)增(PCR)中產(chǎn)生不良情況時(shí),內(nèi)部控制線不出現(xiàn),需重做檢查。此外當(dāng)不出現(xiàn)流動(dòng)控制線(C位置)時(shí),為在測(cè)定中產(chǎn)生不良情況,需再次檢查。(檢測(cè)原理)圖3中示出測(cè)定原理。添加到免疫測(cè)定用試劑盒中的擴(kuò)增基因(例如經(jīng)生物素修飾的擴(kuò)增的單鏈DNA)等例如介由生物素-鏈霉親和素結(jié)合在標(biāo)記物(例如,金膠體)上。然后,若添加展開液,則擴(kuò)增基因-金膠體復(fù)合體通過毛細(xì)管現(xiàn)象在固定于T線及I線中的DNA上移動(dòng)。由于T線中預(yù)先固定僅與對(duì)象病毒等來源的DNA結(jié)合的互補(bǔ)DNA,I線中預(yù)先固定僅與正常人細(xì)胞來源的DNA結(jié)合的互補(bǔ)DNA,所以在陽(yáng)性的情況下形成由金膠體形成的紅線。C線中固定與標(biāo)記物(例如鏈霉親和素結(jié)合金膠體)結(jié)合的例如生物素標(biāo)記蛋白質(zhì),在展開良好地進(jìn)行的情況下,C線處產(chǎn)生由金膠體形成的紅線。本發(fā)明進(jìn)一步為核酸色譜法或免疫色譜法測(cè)定方法,該方法包括使用前述的試劑組合物將待測(cè)物展開的工序。該工序包括使用前述的試劑組合物作為測(cè)定試樣的稀釋劑、或者預(yù)先保持在樣品墊中并在之后的展開時(shí)將其作為展開液的至少一部分的方式。本發(fā)明為核酸色譜法或免疫色譜法測(cè)定試劑盒,該試劑盒包含前述的試劑組合物作為待測(cè)物的展開液。該試劑盒也包括包含前述的試劑組合物作為待測(cè)物的稀釋劑,或者,預(yù)先保持在樣品墊等中,在稀釋后,使用其作為展開液的方式。即,展開液可以為了與包含所檢測(cè)的分析對(duì)象物的試樣預(yù)先混合而使用,也可以將該混合液供給、滴加到色譜介質(zhì)、標(biāo)記試劑保持部位、或者樣品墊上使其展開。此外,也可以先將試樣供給、滴加到樣品墊上后,將展開液供給、滴加到樣品墊上使其展開。當(dāng)使用展開液作為試樣稀釋液時(shí),將試樣稀釋而成的稀釋液可以通過直接作為展開液供給、滴加到色譜介質(zhì)、標(biāo)記試劑保持部位、或者樣品墊上而使用。此外,展開液在核酸色譜法或免疫色譜法中也可以預(yù)先保持在樣品墊或標(biāo)記試劑的干燥保持部位中。作為稀釋劑使用的展開液或保持在樣品墊或者標(biāo)記試劑的干燥保持部位中的展開液作為之后的展開工序中的展開液的全部或其一部分使用。由于當(dāng)保持在標(biāo)記試劑的干燥保持部位中時(shí),有時(shí)在展開時(shí)產(chǎn)生一些聚集,所以不優(yōu)選,優(yōu)選將前述的試劑組合物預(yù)先保持在展開液(包括作為稀釋液的使用)或其一部分、或者樣品墊中的方式。[實(shí)施例]通過實(shí)施例及比較例對(duì)本發(fā)明更 詳細(xì)地進(jìn)行說明。%為重量基準(zhǔn)。1.核酸色譜法
〔1.捕獲探針用稀釋液的制作〕稱量87.7g氯化鈉、及44.1g檸檬酸鈉2水合物,溶解到純化水800mL中,將pH調(diào)節(jié)成7.0。將該溶液定容為IOOOmL,進(jìn)行高壓釜滅菌,制作了捕獲探針用稀釋液?!?.色譜介質(zhì)上的反應(yīng)部位的制作〕使用探針用稀釋液將甲型流感病毒(influenza A virus)捕獲探針稀釋至
2.0 μ M的濃度。將該溶液用涂布機(jī)(BioDot公司制)涂布到25X2.5cm的硝基纖維素膜(Millipore Corporation制)上,在50°C下干燥5分鐘后,進(jìn)一步在80°C下干燥I小時(shí),制作了色譜介質(zhì)上的反應(yīng)部位?!?.標(biāo)記試劑溶液的制作〕在金膠體懸浮液(田中貴金屬工業(yè)株式會(huì)社制:平均粒徑為40nm)20mL中添加40mM的磷酸緩沖液(pH8.5) ImL并進(jìn)行攪拌。接著,添加4mL用磷酸緩沖液(pH8.5)稀釋至0.0lmg/mL的濃度的鏈霉親和素,在室溫下靜置15分鐘。接著,添加lmLCE510(JSRCorporation),在室溫下靜置15分鐘。以8000 Xg進(jìn)行15分鐘離心分離。在離心分離后,除去上清,添加含有I重量%的牛血清白蛋白(BSA)的緩沖液(pH7.4)4mL,制作了標(biāo)記試劑溶液?!?.色譜介質(zhì)的制作〕將上述3中制作的標(biāo)記試劑溶液400 μ L均一地添加到玻璃纖維制墊(16mmX IOOmm)上后,利用真空干燥機(jī)進(jìn)行干燥,作為標(biāo)記試劑保持構(gòu)件。接著,在由支撐片構(gòu)成的基材上貼合上述調(diào)制的色譜介質(zhì)、標(biāo)記試劑保持構(gòu)件、添加試樣的部分中所用的樣品墊(Millipore Corporation制:300mmX30mm)、及用于吸收展開的試樣、剩余的標(biāo)記試劑的吸收墊。最后,用切割機(jī)切割成5_寬度,作為色譜介質(zhì)?!?.展開液的調(diào)制〕(實(shí)施例1 8及比較例I 4)以表I中記載的量,在超純水中添加10%Tween20、0.1M硫酸鎂、二甲基亞砜、20%葡聚糖硫酸鈉(重均分子量:50萬)、及達(dá)到2%的CE510 (JSR Corporation)并混合。進(jìn)一步添加作為防腐劑的10%疊氮化鈉使其達(dá)到0.05%并混合,得到試劑組合物。[表 I]
權(quán)利要求
1.一種核酸色譜法或免疫色譜法用試劑組合物,其含有重均分子量為8000以上的水溶性高分子化合物、2價(jià)或3價(jià)的金屬的鹽、非離子性表面活性劑、及水溶性非質(zhì)子性有機(jī)化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑組合物,其中,重均分子量為8000以上的水溶性高分子化合物為選自由聚亞烷基二醇類、纖維素類、乙烯基系高分子類、酰胺系高分子類及聚陰離子組成的組中的I種以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑組合物,其中,聚陰離子為多糖陰離子。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑組合物,其中,多糖陰離子為選自由硫酸葡聚糖、硫酸乙酰肝素、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸角質(zhì)素、透明質(zhì)酸、肝素及其鹽組成的組中的I種以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的試劑組合物,其中,水溶性非質(zhì)子性有機(jī)化合物為選自由亞砜類及N,N’ - 二烷基酰胺類組成的組中的I種以上。
6.根據(jù)權(quán)利要求1 5中任一項(xiàng)所述的試劑組合物,其中,2價(jià)或3價(jià)的金屬的鹽為選自由鎂鹽、鈣鹽及鋁鹽組成的組中的I種以上。
7.根據(jù)權(quán)利要求1 6中任一項(xiàng)所述的試劑組合物,其中,非離子性表面活性劑為選自由單月桂酸聚氧乙烯山梨糖醇酐、單硬脂酸聚氧乙烯山梨糖醇酐、三硬脂酸聚氧乙烯山梨糖醇酐及單油酸聚氧乙烯山梨糖醇酐組成的組中的I種以上。
8.根據(jù)權(quán)利要求1 7中任一項(xiàng)所述的試劑組合物,其用于核酸色譜法。
9.根據(jù)權(quán)利要求1 7中任一項(xiàng)所述的試劑組合物,其用于免疫色譜法。
10.根據(jù)權(quán)利要求1 9中任一項(xiàng)所述的試劑組合物,其中,核酸色譜法或免疫色譜法使用金膠體顆粒作為標(biāo)記物。
11.根據(jù)權(quán)利要求1 10中任一項(xiàng)所述的試劑組合物,其作為核酸色譜法或免疫色譜法中的展開液使用。
12.一種核酸色譜法或免疫色譜法測(cè)定方法,其包括使用權(quán)利要求1 11中任一項(xiàng)所述的試劑組合物將待測(cè)物展開的工序。
13.一種核酸色譜法或免疫色譜法測(cè)定用試劑盒,其包含權(quán)利要求1 11中任一項(xiàng)所述的試劑組合物作為待測(cè)物的展開液。
全文摘要
本發(fā)明提供一種試劑組合物,其在進(jìn)行核酸色譜法或免疫色譜法測(cè)定時(shí),通過降低由分析對(duì)象物以外的成分的非特異性反應(yīng)產(chǎn)生的結(jié)合,且提高分析對(duì)象物的分散能力,將色譜載體上的展開性優(yōu)化,同時(shí)促進(jìn)特異性反應(yīng),從而即使使用低濃度的分析對(duì)象物也能夠進(jìn)行準(zhǔn)確且迅速的判斷。一種核酸色譜法或免疫色譜法用試劑組合物,其含有重均分子量為8000以上的水溶性高分子化合物、2價(jià)或3價(jià)的金屬的鹽、非離子性表面活性劑、及水溶性非質(zhì)子性有機(jī)化合物。
文檔編號(hào)G01N33/543GK103097895SQ20118004320
公開日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2011年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月8日
發(fā)明者榊原雄廣 申請(qǐng)人:田中貴金屬工業(yè)株式會(huì)社