專利名稱：一種天麻多糖及其降解產(chǎn)物,其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從天麻根莖中提取的天麻多糖及其降解產(chǎn)物，以及天麻多糖降解產(chǎn)物的制備方法，本發(fā)明還涉及天麻多糖降解物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
胰腺癌與黑色素瘤為臨床常見腫瘤，死亡率高。尤其是胰腺癌，患者從腫瘤發(fā)現(xiàn)至死亡時(shí)間平均只有3-6個(gè)月。胰腺癌是消化道常見的惡性腫瘤之一，是惡性腫瘤中最常見的，多發(fā)生于胰頭部。 胰腺癌被稱為癌癥中的王中之王，因其手術(shù)成功率低，病情惡變快，患者疼痛劇烈，大多都以短期治療緩解癥狀，延長(zhǎng)生命為主，然后再考慮如何治愈。一般認(rèn)為胰腺癌對(duì)于放療和化療均不甚敏感，多數(shù)藥物的近期有效率低于10%。相比之下較為有效的藥物有5-氟脲嘧啶(5-Fu)、絲裂霉素(MMC)、鏈脲霉素(STZ)、阿霉素(ADM)/表阿霉素(E-ADM)、異環(huán)磷酰胺 (IFO)、吉西他濱(GEM)以及雷替曲塞(Raltitrexed，Tomudex)等。對(duì)于轉(zhuǎn)移性或局部晚期合并廣泛腹膜播散的胰臟癌，化療扮演了重要的角色。但是因?yàn)檫@些藥物或者化療都會(huì)對(duì)病人的身心帶來巨大的副作用，目前正在尋在更好的候選藥物。黑色素瘤是一種惡性程度相當(dāng)高的惡性腫瘤，又稱惡性黑瘤，是死亡率最高的一種皮膚癌。大多原發(fā)于皮膚，也可起源于眼、鼻腔等處，早期可發(fā)生轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移部位多見肺、 腦。治療黑色素瘤的藥物主要有亞硝脲類藥物與氮烯咪胺(DTIC)。但是這些藥物的毒性給患者帶來了巨大的痛苦，因此，如果能研發(fā)出有抗腫瘤活性又對(duì)正常細(xì)胞毒性較小的藥物，無疑是腫瘤治療的一個(gè)重大突破。天麻(Gastrodia elata BL.)是一味常用而比較名貴的中藥。之前有本發(fā)明人的相關(guān)研究已經(jīng)報(bào)道(Hong Qiu ；Wei Tang ；Xiankun Tong ；Kan Ding Jianping Zuo. Carbohydr. Res. 2007，342，2230-2236.)從天麻中分離得到的一個(gè)均一多糖，它的硫酸化衍生物可以通過抑制血管生成進(jìn)而抑制腫瘤生長(zhǎng)。在本發(fā)明中發(fā)明人基于以往的研究從天麻中分離得到一個(gè)天麻均一多糖(編號(hào) WGE)，該多糖與上述已報(bào)道結(jié)構(gòu)有一定的相似性，但分子量相差巨大，是一種新的多糖化合物。在8mg/ml劑量下能有效抑制胰腺癌細(xì)胞和黑色素瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，其抑制率分別為45% 和32%。它的降解產(chǎn)物(編號(hào)WGE-AD-I和WGE-AD-0)有更好的活性，其中WGE-AD-I是 WGE酸降解產(chǎn)物的透析袋內(nèi)成分，WGE-AD-O是WGE酸降解產(chǎn)物的透析袋外成分。特別是 WGE-AD-0,在lmg/ml劑量下表現(xiàn)出比原多糖WGE在8mg/ml劑量更強(qiáng)的活性，它對(duì)胰腺癌細(xì)胞和黑色素瘤細(xì)胞的抑制率分別為42%和50%。在2mg/ml的濃度下，對(duì)胰腺癌的抑制率為87%。同時(shí)，原多糖與其降解產(chǎn)物對(duì)正常肝細(xì)胞幾乎都沒有毒性，因而有望開發(fā)為抗腫瘤藥物。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種從天麻中提取的天麻多糖，該天麻多糖的結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.從天麻根莖中提取的天麻多糖WGE，其中該天麻多糖的結(jié)構(gòu)式如下
2.一種如權(quán)利要求1所述的天麻多糖的降解產(chǎn)物WGE-AD-I，其特征在于，所述降解產(chǎn)物WGE-AD-I按照以下方式獲得將權(quán)利要求1中所述天麻多糖WGE置于干燥燒瓶中，加入1. Omol/L三氟乙酸，密塞， 100°C保溫0. 5至3h，反應(yīng)液經(jīng)減壓蒸餾除去三氟乙酸后，對(duì)蒸餾水透析，透析袋內(nèi)液濃縮后凍干，得到天麻多糖降解產(chǎn)物WGE-AD-I ；該天麻多糖降解產(chǎn)物WGE-AD-I的結(jié)構(gòu)重復(fù)單元與權(quán)利要求1中所述天麻多糖WGE — 樣，其分子量范圍為8kD-12kD，平均分子量為IOkD;其比旋度為[a]19D+78°，其中測(cè)試條件為19°C，濃度為0. 05g/100ml的水溶液。
3.—種如權(quán)利要求1所述的天麻多糖的降解產(chǎn)物WGE-AD-0，其特征在于所述降解產(chǎn)物WGE-AD-I按照以下方式獲得將權(quán)利要求1中所述天麻多糖WGE置于干燥燒瓶中，加入1. Omol/L三氟乙酸，密塞， 100°C保溫0. 5至3h，反應(yīng)液經(jīng)減壓蒸餾除去三氟乙酸后，對(duì)蒸餾水透析，透析袋外液濃縮后凍干，得到天麻多糖降解產(chǎn)物WGE-AD-O ；該天麻多糖降解產(chǎn)物WGE-AD-O為寡糖混合物，其中包括葡萄糖單糖，以及2-19個(gè)單糖組成的葡聚糖；其平均分子量為3kD;其比旋度為[a]19D+142°，其中測(cè)試條件為19°C，濃度為0. 05g/100ml的水溶液。
4.一種從天麻根莖中提取權(quán)利要求所述天麻多糖的方法，該方法包括以下步驟(1)取天麻原藥材，用95%乙醇脫脂，脫脂后室溫自然干燥。干燥后的天麻原藥材用沸水提取4至6次，每次4h到他，天麻原藥材與每次加水量的比例為Ikg藥材加水8至10L， 硫酸-苯酚法檢測(cè)提取液的糖含量，直至糖反應(yīng)不明顯；(2)將每次的提取液合并，最終濃縮至5-15L，扎透析袋，以截留分子量約為3000，對(duì)流動(dòng)水透析三天，透析袋內(nèi)液濃縮至5-10L，加入5-10L 30% (W/V)三氯乙酸溶液，使其終濃度為15% (W/V)，脫蛋白，之后用10% NaOH中和至pH為7.0至8.0，對(duì)流動(dòng)水透析三天去蛋白，以透析袋截留分子量約為3kD，內(nèi)液濃縮至5L，離心去沉淀，上清液加入3至4倍95 % 乙醇沉淀，靜置，沉淀離心，用95%乙醇洗滌數(shù)次后烘干，得到天麻水提粗多糖GE ；(3)取步驟O)中的水提粗多糖GE，適量水溶解，離心除去不溶物，上清液通過二乙基氨乙基纖維素[DEAE-纖維素(Cl_型)]柱進(jìn)行分離，逐步以蒸餾水、0. lmol/L NaCl洗脫， 硫酸-苯酚法繪制洗脫曲線，根據(jù)洗脫曲線分別收取合并洗脫液，其中0. lmol/L NaCl洗脫液經(jīng)濃縮至30-40ml，裝透析袋以截留分子量為3kD，對(duì)蒸餾水透析4至6次，每次2L，透析袋內(nèi)液冷凍干燥后得到白色絮狀固體，為天麻多糖WGE。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任意一項(xiàng)所述天麻多糖或其降解產(chǎn)物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其中所述腫瘤為胰腺癌與黑色素瘤。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從天麻原藥材中提取的天麻多糖WGE和其降解產(chǎn)物WGE-AD-I和WGE-AD-O，及其制備方法和在制備抗腫瘤藥物中的用途。該天麻多糖的結(jié)構(gòu)式如下，其中x和y為整數(shù)且x+y＝16；n為整數(shù)，其平均分子量為1000kD(平均分子量范圍為800-1200kD)，其比旋度為[α]19D+382°(c0.05，H2O)。所述天麻多糖部分酸水解的降解產(chǎn)物多糖WGE-AD-I的結(jié)構(gòu)重復(fù)單元與WGE一樣，但平均分子量為10kD(平均分子量范圍8～12kD)。另一降解產(chǎn)物WGE-AD-O為寡葡聚糖的混合物(分子量范圍320～3,000Dalton)。該天麻多糖及其降解產(chǎn)物經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)證明能顯著抑制胰腺癌細(xì)胞和黑色素瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，而且對(duì)正常細(xì)胞幾乎沒毒性，因而有望開發(fā)為抗腫瘤藥物。
文檔編號(hào)A61K31/7016GK102464725SQ201010548119
公開日2012年5月23日 申請(qǐng)日期2010年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月17日
發(fā)明者丁侃, 曹殿秀, 陳霞 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院上海藥物研究所