專利名稱：豬瘟合成肽疫苗及其應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種豬瘟合成肽疫苗及其應用。
背景技術(shù)：
豬瘟病毒E2蛋白可以誘導產(chǎn)生中和抗體，是豬瘟病毒最主要的保護性抗原 (Konig等，JVirol，1995，69 :479_86)。關(guān)于豬瘟病毒E2蛋白抗原表位的鑒定已經(jīng)取得了一 定的進展。其中，E2蛋白的829-837位氨基酸是一個主要的抗原表位，而且是保守的豬瘟特 異性的線性表位(Lin等，J Virol, 2000, 74 :11619_25)。大腸桿菌表達的該表位與GST的融 合產(chǎn)物誘導了保護性免疫應答(Liu等，J Virol Meth，2006，134 :125-9)，并且串聯(lián)了 4個 拷貝后，表達的融合蛋白能抵抗豬瘟病毒的攻擊(Liu等，Vaccine, 2006, 24 7175-7180) 0 把該表位人工合成的肽鏈與BSA偶聯(lián)后，免疫豬，僅僅顯示了微弱的保護效力(Dong等， Vaccine, 2006, 24 :1906_1913)。利用合成重疊肽的方法，已經(jīng)鑒定出了一系列的豬瘟E2蛋 白的線性中和表位，把上述表位分別與BSA偶聯(lián)后，免疫豬，能誘導產(chǎn)生中和抗體，但并不 能對豬提供完全的保護(Dong 等，Vaccine, 2006, 24 1906-1913 ；Dong 等，Vaccine，2006， 24 426-434)。上述研究無論是表位與GST融合表達還是合成的肽鏈與BSA偶聯(lián)，都不能對 豬進行有效保護，且免疫動物后都不可避免地產(chǎn)生針對載體的免疫應答，這可能會給免疫 動物帶來一定的風險。而且，短肽鏈與巨大的載體偶聯(lián)會更多地誘導機體產(chǎn)生針對載體的 免疫應答(cease 等，Proc Natl Acad Sci USA, 1987,84(12) :4249_53)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種豬瘟合成肽疫苗，該疫苗不僅避免了載體蛋 白誘導不期望的免疫應答，而且提高了肽疫苗的免疫原性，增強了免疫保護作用。此外，還需要提供一種豬瘟合成肽疫苗在制備預防或治療豬瘟病的藥物中的應用。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)在本發(fā)明的一個方面，提供了 一種豬瘟合成肽疫苗，所述疫苗具有T-L-B或B-L-T 結(jié)構(gòu)，其中，T為輔助性T細胞表位；B為豬瘟病毒E2蛋白B細胞表位，該B細胞表位的數(shù)量大于等于2 ；L為連接T與B的連接肽，該連接肽為分支肽，所述B細胞表位連接在該分支肽的 分支結(jié)構(gòu)上。優(yōu)選的，所述分支肽具有下述通式(I)
權(quán)利要求
一種豬瘟合成肽疫苗，其特征在于，所述疫苗具有T L B或B L T結(jié)構(gòu)，其中，T為輔助性T細胞表位；B為豬瘟病毒E2蛋白B細胞表位，該B細胞表位的數(shù)量大于等于2；L為連接T與B的連接肽，該連接肽為分支肽，所述B細胞表位連接在該分支肽的分支結(jié)構(gòu)上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬瘟合成肽疫苗，其特征在于，所述分支肽具有下述通式⑴
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的豬瘟合成肽疫苗，其特征在于，所述R1 R4均為賴氨酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的豬瘟合成肽疫苗，其特征在于，所述R7、R8選自C0CH2-R5、 COCH2-R6,所述R5、R6均為半胱氨酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求2至4中任一項所述的豬瘟合成肽疫苗，其特征在于，所述分支肽具有 下述結(jié)構(gòu)式
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬瘟合成肽疫苗，其特征在于，所述輔助性T細胞表位包括 通用型輔助性T細胞表位、或來源于病原體的輔助性T細胞表位。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的豬瘟合成肽疫苗，其特征在于，所述輔助性T細胞表位為通用 型輔助性T細胞表位，其包含SEQ ID NO :1所示的氨基酸序列。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬瘟合成肽疫苗，其特征在于，所述豬瘟病毒E2蛋白B細胞 表位包含SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列。
9.一種疫苗組合物，其特征在于，用于免疫動物以對抗豬瘟病毒的感染，所述疫苗組合 物包含權(quán)利要求1所述的豬瘟合成肽疫苗、以及佐劑。
10.權(quán)利要求1所述的豬瘟合成肽疫苗在制備預防或治療豬瘟病的藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種豬瘟合成肽疫苗，該合成肽疫苗用分支肽將輔助性T細胞表位和豬瘟病毒E2蛋白B細胞表位進行連接。本發(fā)明豬瘟合成肽疫苗，不僅避免機體產(chǎn)生針對載體的免疫應答，而且提高了合成肽疫苗的免疫原性，其成份單純，沒有毒副作用和生物安全方面的擔憂，具有產(chǎn)業(yè)化優(yōu)勢。
文檔編號A61K39/187GK101991848SQ201010539268
公開日2011年3月30日 申請日期2010年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月10日
發(fā)明者于海, 周艷君, 李國新, 童光志 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所