專利名稱：檢測豬瘟病毒特異性抗體的方法及其酶聯(lián)免疫試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種檢測豬瘟病毒特異性抗體的方法及其專用酶聯(lián)免疫試劑盒。
技術背景豬瘟是由豬瘟病毒引起的一種高度傳染性、高致病性和高致死性的烈性動物疫 病，對養(yǎng)豬業(yè)危害巨大，是世界動物衛(wèi)生組織確定的法定報告的烈性傳染病之一， 也是我國確定的一類動物疫病之一。
一直以來，我國對于豬瘟疫情所采取的措施是"防制"。防，就是通過免疫的方式，用減毒活疫苗(豬瘟兔化弱毒疫苗)進行預 防接種；制，就是對疫情進行控制，進行監(jiān)測、隔離，甚至是局部的"撲殺"。在 豬瘟的防制工作中，監(jiān)測和檢測豬血清中豬瘟病毒特異性抗體的水平是非常重要的 一個環(huán)節(jié)。對于尚未接種的豬只，血清中的豬瘟病毒特異性抗體既可能反映了母源 抗體的影響，也可能反映了隱性感染的跡象。母源抗體含量在一定水平之上和隱性 感染的存在都會影響到減毒活疫苗接種的效果，甚至可能使疫苗無效，無法產(chǎn)生對 病毒的免疫防護，導致免疫失敗。對于已經(jīng)接種的豬只，血清中的豬瘟病毒特異性 抗體的水平則反映了免疫的效果。由于豬瘟病毒和同屬的牛病毒性腹瀉病毒以及羊邊界病毒，在抗原結構上有共同抗原決定簇，因此，由這三種病毒制備的抗血清具有較強的交叉反應；牛病毒性 腹瀉病毒和羊邊界病毒也可以感染豬只。另一方面，豬瘟病毒的各個毒株雖然同屬于一個血清型，但在毒力、致病性和抗原性等生物學特性上存在著復雜性、多樣性 和可變性，國內(nèi)外制備的豬瘟病毒特異性單克隆抗體中，能廣泛識別多個毒株的， 屈指可數(shù)。豬瘟病毒的血清學診斷是一項極為重要而細致的工作，既需要對毒種有 "特異"的鑒別診斷作用，又需要能廣泛識別豬瘟病毒的不同毒株的廣譜作用。在 診斷方法和診斷試劑的生產(chǎn)工藝上，還需要快速、簡便、實用和降低生產(chǎn)成本，以 適應于田間大規(guī)模推廣。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種檢測豬瘟病毒特異性抗體的方法及其專用酶聯(lián)免疫試 劑盒。本發(fā)明所提供的檢測豬瘟病毒特異性抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括豬瘟病毒抗 原多肽和酶標豬瘟病毒特異性抗體；所述豬瘟病毒抗原為含有一個或一個以上的序 列1所述氨基酸殘基序列的多肽。
所述試劑盒還包括酶標板、陽性血清對照、陰性血清對照、顯色劑、洗滌液、 終止液。所述酶標豬瘟病毒特異性抗體為辣根過氧化酶標記豬瘟病毒特異性抗體；所述 豬瘟病毒特異性抗體是以豬瘟病毒為免疫原得到的多克隆抗體，用偶聯(lián)有上述豬瘟 病毒抗原的免疫親和層析柱經(jīng)層析純化后得到的針對具有序列1所述的氨基酸殘基 序列的豬瘟病毒表位抗原的豬瘟病毒特異性抗體。所述豬瘟病毒優(yōu)選為豬瘟病毒兔化弱毒。所述豬瘟病毒抗原多肽是以PBS為溶劑的豬瘟病毒抗原溶液，在包被酶標板時 用0. 1M， pH9. 6的碳酸氫鈉溶液作為包被緩沖液；所述酶標豬瘟病毒特異性抗體是 以PBS為溶劑的酶標豬瘟病毒特異性抗體溶液。所述陽性血清對照為豬瘟病毒兔高免血清；所述陰性血清對照為未感染過豬瘟 病毒的健康兔血清。所述洗滌液為含有體積百分含量為0. 05 %的Tween-20的PBS緩沖液；所述終止 液為2mol/L硫酸溶液；所述封閉液為含有質量百分含量為0. 25%的明膠的PBS溶液。所述顯色劑由顯色液A液和顯色液B液組成，顯色液A液為含有l(wèi)mg/ml OPD pH5.0的檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液，顯色液B為過氧化氫。本發(fā)明所提供的檢測豬瘟病毒特異性抗體的方法，是利用上述的酶聯(lián)免疫試劑 盒，用固相抗原競爭酶聯(lián)免疫法(又稱"阻斷法")檢測豬瘟病毒特異性抗體。本發(fā)明的豬瘟病毒特異性抗體的檢測試劑，主要成分是針對豬瘟病毒結構蛋白 E2上一個高度保守表位(TAVSPTTLR)的特異性抗體和含有該表位的抗原多肽。實驗 證明利用表位合成肽作為抗原包被，并配以酶標TAVSPTTLR表位特異性的血清抗體 (從兔高免血清中純化)，可以通過固相抗原競爭酶聯(lián)免疫法(阻斷法)對豬瘟病 毒特異性抗體進行有效的檢測；豬瘟病毒毒種特有的該B細胞表位保證了鑒別診斷， 而該表位在各毒株間的高度保守性又保證了檢測的特異性。


圖1為抗原在工作濃度的確定結果圖2為本發(fā)明的試劑盒對含有豬瘟病毒抗體的豬血清進行檢測的結果具體實施方式
下述實施例的方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法； 下述實施例中所述的百分含量，如無特別說明，均為質量百分含量。 實施例1、檢測豬瘟病毒特異性抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒的制備 本發(fā)明的檢測豬瘟病毒特異性抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括下述試劑1) 酶標豬瘟病毒單表位特異性的抗體工作液；2) 包被用豬瘟病毒抗原工作液含有氨基酸殘基序列為序列1所示序列的表位 的多肽溶液；10嗎/ml，溶劑為包被緩沖液，即0. 1M， PH9. 6碳酸氫鈉緩沖液；3) 酶標板4) 陽性血清對照豬瘟病毒兔高免血清；5) 陰性血清對照未接觸豬瘟病毒的健康兔血清；6) 洗滌液含有體積百分含量為0. 05 %的Tween-20的PBS緩沖液(PBS緩沖 液為含5. 54g/L Na2HP04 12H20， 0. 39g/L NaH2P04 2H20， 8. 5g/LNaCl， pH7. 2的溶 液)；7) 終止液2mol/L硫酸溶液；8) 底物顯色液顯色液A:含有l(wèi)mg/ml OPD pH5. 0的檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液， 顯色液B:過氧化氫；臨用前將顯色液A與顯色液B按體積比為5000: 9的比例，混合充分后使用；9) 封閉液含質量百分含量為0.25y。的明膠的PBS溶液。其中，酶標豬瘟病毒單表位特異性的抗體、豬瘟病毒抗原、豬瘟病毒高免血清的制備方法如下豬瘟病毒主要保護性抗原E2蛋白上一個B細胞表位，該表位的序列(TAVSPTTLR， 序列l(wèi))在豬瘟病毒中是高度保守的。本發(fā)明制備豬瘟病毒結構蛋白E2上高度保守 表位(TAVSPTTLR)的特異性抗體作為豬瘟病毒單表位特異性的抗體用于制備酶標豬 瘟病毒單表位特異性的抗體，用含有該表位的多肽抗原作為豬瘟病毒抗原包被原。一、酶標豬瘟病毒單表位特異性的抗體工作液的制備1、豬瘟病毒單表位特異性的抗體的制備1) 豬瘟病毒兔高免血清的制備將100個兔體最小感染量(IOO個RMID)的豬瘟病毒兔化弱毒疫苗(乾元浩生 物股份有限公司)經(jīng)靜脈接種大耳白兔。第一次接種后，以2周為間隔，進行反復 接種(劑量仍是100個RMID)。于第三次接種后7天起，采血，制備豬瘟病毒兔高免 血清。2) 表位特異性親和柱的制備①合成具有兩個拷貝序列l(wèi)所示表位序列(TAVSPTTLR)的多肽抗原 CTAVSPTTLRGSTAVSPTTLR(序列表中序列2，標有下劃線的序列為序列1所示的表位)； 用去離子水配制高濃度的多肽抗原溶液(4-10mg/ml)，并用偶聯(lián)緩沖液(O. 1M， pH7. 7 的NaHC03溶液)將多肽溶液稀釋至0.25 mg/ml;② 取NHS-activated S印haroseTM 4 Fast Flow柱材(GE Healthcare) 0. 5ml， 加入4. 5ml ImM鹽酸，混勻，1500rpm離心1分鐘，棄去上清，重復2次；加入4. 5ml 耦聯(lián)緩沖液(O. 1M， pH7.7的NaHC03溶液)，混勻，1500rpm離心1分鐘，棄去上清； 在沉淀中加入250^1步驟①得到的多肽溶液，混勻，室溫反應2-4小時或4。C反應過 夜；③ 加入4. 5ml封閉液(0. 1M， pH8. 3的Tris-HCL緩沖液)，混勻，室溫封閉2-4 小時或4。C封閉過夜；1500rpm離心l分鐘，棄去上清；④ 加入1. 5ml低pH值緩沖液(含0. 5MNaCl的0. 1M乙酸緩沖液)，振蕩，1500rpm 離心1分鐘，棄去上清；加入1. 5ml封閉液，振蕩，1500rpm離心1分鐘，棄去上清； 重復此步驟3 6次；得到偶聯(lián)了具有序列2所示氨基酸殘基序列的多肽抗原的表位 特異性親和柱材，用20%的乙醇保存偶聯(lián)好的柱材，并保存于4。C，備用。3)從豬瘟病毒高免血清中制備表位特異性的抗體① 血清預處理將PK-15細胞培養(yǎng)于37。C， 5%C02，含5y。胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中；用胰酶— EDTA-Na2消化液(含有質量百分含量0. 25%胰酶，0.02% EDTA-Na2， PBS)消化已經(jīng) 致密生長的細胞，用生理鹽水洗滌后，將細胞沉淀凍存?zhèn)溆谩Ｔ诓襟El)制備的高免血清中加入上述制備的PK-15細胞，在4。C攪拌過夜； 4500rpm離心，去除沉淀(PK-15細胞成分可以吸附一部分與細胞成分反應的血清抗 體)；加入二氧化硅粉末，在室溫攪拌30min; 4500rpm離心，去除沉淀(二氧化硅 能吸附脂蛋白)。② 裝柱將步驟2)制備的表位特異性親和柱材裝柱，注意確認柱子底部的篩板 有很好的通透性；用pH7. 2的磷酸鹽緩沖液(PBS)平衡親和柱。③ 上樣將步驟①預處理后的血清先用0.45網(wǎng)的微孔濾膜進行過濾；然后將濾 液過柱收集其流出液，再反復上樣多次；然后用5倍柱床體積以上的PBS (pH7.2) 洗柱，直到流出液用考馬斯亮藍G-250不能檢測到蛋白。 洗脫待柱上的PBS流出后，向柱上加入lml洗脫液(0. 1M， pH2.5甘氨酸緩 沖液)，并用預先加有200|iil 1M pH9.0 Tris-HCl緩沖液的收集管收集留出液，用考 馬斯亮藍G-250進行檢測；顯示有蛋白存在的各收集管中，得到的是純化的抗體。重復上面步驟，繼續(xù)用lml的洗脫液進行洗脫，直到考馬斯亮藍G-250檢測不 到蛋白的存在；得到純化的序列l(wèi)所述表位的特異性抗體溶液。2、豬瘟病毒單表位特異性的抗體的鑒定1)純化抗體溶液的濃縮和緩沖液更換
用濃縮管將純化的抗體溶液進行濃縮，以縮小樣品體積；或用偶聯(lián)有Protein G、 Protein A的親和柱濃縮抗體。用透析或者脫鹽的方式，將樣品的緩沖液更換為0.2mol/L， pH9.5碳酸鈉緩沖 液(準備進行抗體的辣根過氧化物酶標記的偶聯(lián)緩沖液)；抗體濃度用Bradford法測定(用牛血清白蛋白作標準曲線)，也可由紫外分光 光度計測定(1. 440D" lmg/ml)。2)純化抗體的特異性由間接ELISA確定分別以含有豬瘟病毒特異性表位(TAVSPTTLR)的合成肽 CTAVSPTTLRGSTAVSPTTLR /不含有豬瘟病毒特異性表位(TAVSPTTLR)的合成肽(無 關抗原)CKEDYRYAISSTNEIGLLGAGGLT (人工合成)、PK-15細胞裂解上清液(將培 養(yǎng)的PK-15細胞反復凍融離心后的上清液)等作為抗原包被酶標板，進行間接ELISA 檢測步驟1制備的抗體的特異性，具體方法如下所述分別用上述抗原(5叫/ral， 50pl， 0. 1M， pH9.6碳酸氫鈉緩沖液作為包被緩沖 液)包被酶標板過夜；然后用洗滌液(PBST:含有體積百分含量0.05 X的Tween-20 的PBS緩沖液)洗滌，待洗滌液(PBST:含有0.05 X的Tween-20的PBS緩沖液) 洗滌酶標板l次后，用封閉液封閉酶標板30min;再用洗滌液洗滌酶標板3次后，在 包被有不同抗原的孔內(nèi)加入梯度稀釋后的步驟1得到的特異性抗體溶液樣品，孵育 45min;再用洗漆液(PBST:含有0. 05 。％的Tween-20的PBS緩沖液)洗滌酶標板3 次后，加入酶標二抗(DAKO， P0448)，孵育45min;再用洗滌液(PBST:含有0.05 %的Tween-20的PBS緩沖液)洗滌酶標板5次后，加入50^1底物顯色液(OPD 10mg 溶于10mlpH5.0檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液，臨用前加入18pl過氧化氫，混合充分后 使用)，避光顯色10niin，然后用50|il 2M硫酸終止反應，顯色結果由酶標儀讀出(波 長為490nm)。結果表明所純化的單表位特異性多克隆抗體對CTAVSPTTLRGSTAVSPTTLR 多肽具有特異性識別，而對無關多肽CKEDYRYAISSTNEIGLLGAGGLT和PK-15細胞裂解 上清液沒有識別(用肉眼觀察即可看出明顯的顯色和不顯色的差別；用酶標儀讀數(shù)， 可以用P/N^2. l判斷)。3、表位特異性抗體的辣根過氧化物酶標記1) 稱取5mg辣根過氧化物酶(HRP)溶于lml雙蒸水中，加20(^1新配制的0. lmol/L的NaI04，室溫下避光攪拌20min，勿超過此時間，此時溶液呈棕綠色。迅 速將該溶液于4'C，用lmM， pH4.4醋酸鈉緩沖液透析過夜。2) 在步驟l)得到的溶液中加入2(Hil0.2mol/L， pH9. 5碳酸鈉緩沖液，使溶液 pH提升至約9 9.5，檢測一下調整后的pH值，立即加入lml (10mg/ml)步驟2的 步驟l)得到的特異性抗體溶液，室溫避光輕輕攪拌2h。3)在步驟2)得到的溶液中繼續(xù)加入IOOm!新配制的NaBH4，混勻，至于4°C 2h。 于4"C，對O. 15M， pH7.4的磷酸鹽緩沖液(PBS)透析過夜，得到酶標豬瘟病毒單表 位特異性抗體。所得樣品可進行進一步純化，也可以直接使用。4、酶標豬瘟病毒單表位特異性抗體工作液的制備所制得的酶標抗體，盡快進行工作濃度標定，并進行分裝，凍存于-20'C或以下， 備用(每一個批次的酶標抗體都要進行工作濃度標定)。用步驟2的步驟2)所述間接ELISA進行酶標豬瘟病毒單表位特異性抗體工作濃 度的確定，其中，抗原包被使用序列標中序列2所述的多肽抗原(人工合成)為包被抗原，包 被濃度為lpg/ml， lO(Hil，包被緩沖液為O. 1M， pH9.6碳酸氫鈉。酶標抗體按照1:100、 1:200、 1:400、 1:600、 1:1000、 1:1200、......的順序進行稀釋(每孔加入lO(Hil)，以OD值為縱坐標，稀釋度為橫坐標作滴定曲線， 滴定曲線上OD值為1.0左右，且斜率最大時的酶標抗體稀釋度為其工作濃度(工作 濃度在具體的ELISA試驗系統(tǒng)中可進一步優(yōu)化)，結果表明上述制備的酶標豬瘟病 毒單表位特異性抗體工作濃度為1:1000。將酶標豬瘟病毒單表位特異性抗體用含10mg/ral BSA的PBS稀釋到工作濃度， 制成酶標豬瘟病毒單表位特異性抗體工作液，進行分裝，于-20或-4(TC保存，避免 反復凍融。二、包被抗原工作液的制備1、固相抗原競爭ELISA的抗原包被濃度確定合成氨基酸序列為序列表中序列2的含兩個拷貝TAVSPTTLR表位的多肽作為抗 原，以不同抗原濃度包被酶標板50|11/孔，濃度為IO、 5、 2.5、…嗎/ml (以包被 緩沖液為溶劑，包被緩沖液為O. 1M， pH9.6碳酸氫鈉緩沖液)，4'C過夜；倒去包被 液，用洗滌液洗滌酶標板l次；用封閉液封閉酶標板30min;分別加入50^1按照步 驟一的步驟1中1)的方法制備的豬瘟病毒兔高免血清(原倍)或未接觸過豬瘟病毒 的健康兔血清(原倍)，于封閉后的酶標板上室溫孵育4h;倒去酶標板上的血清， 用洗滌液(含有體積百分含量為0.05 ^的Tween-20的PBS緩沖液)洗滌酶標板3 次；加入10(Hil步驟一中步驟4制備的酶標豬瘟病毒單表位特異性抗體工作液，室 溫孵育30min;倒去酶標板上的液體，用洗滌液洗滌酶標板5次；加入底物顯色液(OPD 10rag溶于10mlpH5.0檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液，臨用前加入18^1過氧化氫，混合充 分后使用)避光顯色10min，用終止液終止，用酶標儀讀數(shù)(0D49。)。結果如圖1所 示，選取加入兩種血清后差異最為顯著的濃度為工作濃度，即10|ig/ml。將合成氨基 酸序列為序列表中序列2的含兩個拷貝TAVSPTTLR表位的多肽用包被緩沖液配成工 作濃度(10嗎/ml)，分裝得到包被抗原工作液。 三、陽性血清對照的制備豬瘟病毒兔高免血清將100個兔體最小感染量(100RMID)的豬瘟兔化弱毒疫 苗(乾元浩生物股份有限公司)經(jīng)靜脈接種大耳白兔。第一次接種后，以2周為間 隔，進行反復接種(劑量仍是100個RMID)。于第三次接種后7天起，采血，制備 豬瘟病毒兔高免血清。實施例2、本發(fā)明試劑盒的檢測效果實驗用實施例1制備的酶聯(lián)免疫試劑盒檢測含豬瘟病毒抗體的血清，具體步驟如下1、 用實施例1制備的包被抗原工作液加入到酶標板，每孔50pl， 4'C過夜；2、 倒去包被液，用洗液洗滌酶標板l次；3、 用封閉液封閉酶標板30min;4、 分別在步驟3封閉后的酶標板上每孔加入5(^1實施例1的步驟三制備的陽 性血清對照(原倍豬瘟病毒兔高免血清)、陰性血清對照(未接觸過豬瘟病毒的健 康兔血清)和待檢的感染豬瘟病毒的豬血清(購自中國獸藥監(jiān)察所，包括原倍血清、 IO倍稀釋血清和IOO倍稀釋血清，用生理鹽水或PBS稀釋)，室溫孵育4h;5、 倒去酶標板上的血清，用洗滌液洗滌酶標板3次；6、 加入酶標豬瘟病毒單表位特異性的抗體工作液，每孔lOO)iil，室溫孵育30min; 倒去酶標板上的液體，用洗滌液洗滌酶標板5次；7、 加入底物顯色液(顯色液A與顯色液B按5000: 9的比例，混合充分后的溶 液)避光顯色10rain，用終止液終止，用酶標儀讀數(shù)(OD，)。由于存在表位競爭的關系，若待檢樣品中含有豬瘟病毒抗體(陽性樣品)，則 酶標抗體不能或不能完全與包被抗原結合，其結合被待檢樣品中的抗體阻斷，從而顯色結果較淺(與陽性對照相當)；若待檢樣品中不含有豬瘟病毒抗體(陰性樣品)， 則酶標抗體可與包被抗原充分結合，其結合不能為待檢樣品中的抗體所阻斷，從而 顯色結果較深(與陰性對照相當)。結果如圖2所示，結果表明原倍血清和IO倍稀釋血清與陽性血清對照相當，與 陰性血清對照差別顯著，可以肉眼區(qū)別。說明本發(fā)明試劑盒可以準確的在10 100 倍稀釋的血清中檢測到豬瘟病毒特異性的抗體。另取IO份感染豬瘟病毒的豬血清進 行同樣檢測，結果均檢測到豬瘟病毒特異性的抗體。 序列表〈160〉 2<210〉 1<211> 9<212〉 PRT〈213〉 豬瘟病毒(classical swine fever virus)<400> 1Thr Ala Val Ser Pro Thr Thr Leu Arg1 5<210> 2<211> 21<212> PRT<213>人工序列<220> 〈223〉〈400〉 2Cys Thr Ala Val Ser Pro Thr Thr Leu Arg Gly Ser Thr Ala Val Ser 15 10 15Pro Thr Thr Leu Arg 20
權利要求
1、 一種檢測豬瘟病毒特異性抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括豬瘟病毒抗原和酶標 豬瘟病毒特異性抗體；所述豬瘟病毒抗原為含有一個或一個以上的序列1所述氨基 酸殘基序列的多肽。
2、 根據(jù)權利要求1所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括酶 標板、陽性血清對照、陰性血清對照、顯色劑、洗滌液、終止液。
3、 根據(jù)權利要求1或2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述酶標豬瘟病 毒特異性抗體為辣根過氧化酶標記豬瘟病毒單表位特異性抗體；所述豬瘟病毒單表 位特異性抗體是以豬瘟病毒為免疫原得到的多克隆抗體，用偶聯(lián)有所述豬瘟病毒抗 原的免疫親和層析柱經(jīng)層析純化后得到的針對具有序列1所述的氨基酸殘基序列的 豬瘟病毒表位抗原的豬瘟病毒特異性抗體。
4、 根據(jù)權利要求3所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述豬瘟病毒為豬瘟 兔化弱毒。
5、 根據(jù)權利要求4所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述豬瘟病毒抗原多 肽是以PBS為溶劑的豬瘟病毒抗原溶液；所述酶標豬瘟病毒特異性抗體是以PBS為 溶劑的酶標豬瘟病毒特異性抗體溶液。
6、 根據(jù)權利要求5所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述陽性血清對照為 豬瘟病毒兔高免血清；所述陰性血清對照為未感染過豬瘟病毒的健康兔血清。
7、 根據(jù)權利要求6所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述洗滌液為含有體 積百分含量為0. 05 %的Tween-20的PBS緩沖液；所述終止液為2mol/L硫酸溶液； 所述封閉液為含有質量百分含量為0. 25%的明膠的PBS溶液。
8、 根據(jù)權利要求7所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述顯色劑由顯色液A 液和顯色液B液組成，顯色液A液為含有l(wèi)mg/ml 0PD pH5. 0的檸檬酸/擰檬酸鈉緩 沖液，顯色液B為過氧化氫。
9、 一種檢測豬瘟病毒特異性抗體的方法，是利用權利要求1一8中任意所述的 酶聯(lián)免疫試劑盒，用固相抗原競爭酶聯(lián)免疫法檢測豬瘟病毒特異性抗體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測豬瘟病毒特異性抗體的方法及其專用酶聯(lián)免疫試劑盒。該試劑盒，包括豬瘟病毒抗原和酶標豬瘟病毒單表位特異性抗體；所述豬瘟病毒抗原為含有一個或一個以上的序列1所述氨基酸殘基序列的多肽。本發(fā)明的豬瘟病毒特異性抗體的檢測試劑，可以通過固相抗原競爭酶聯(lián)免疫法(阻斷法)對豬瘟病毒特異性抗體進行有效的檢測；所選用的豬瘟病毒毒株特有的B細胞表位保證了鑒別診斷，而該表位在各毒株間的高度保守性又保證了檢測的特異性。
文檔編號G01N33/569GK101144818SQ20071017612
公開日2008年3月19日 申請日期2007年10月19日 優(yōu)先權日2007年10月19日
發(fā)明者昀 戚, 王在時, 陳應華 申請人:清華大學;中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;北京飛凱生物技術有限公司