專利名稱：一種低酚酸銀杏黃酮提取物新的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥有效成分提取分離方法，確切地說是一種低酚酸銀杏黃酮提 取物新的制備方法。
背景技術(shù)：
銀杏(Gimkgo biloba)又名白果樹，為銀杏科，銀杏屬植物。銀杏在我國分布較廣。 主要分布于江蘇、山東、廣西、云南、貴州、四川等地，其擁有量占世界總量的70%以上，近年 來隨著銀杏資源的開發(fā)利用，我國各地有計劃地擴(kuò)大銀杏樹的種植。本世紀(jì)60年代以來， 由于銀杏制劑對防治心腦血管疾病、老年癡呆癥、哮喘作用的發(fā)現(xiàn)，國內(nèi)外加大了對銀杏化 學(xué)成分、藥理活性及臨床應(yīng)用等方面研究的力度，并對銀杏有效成分的提取工藝做了大量 的探索研究。銀杏葉含黃酮類化合物，黃酮甙(其甙元分別為山柰酚、槲皮素、異鼠李素)，銀杏 萜內(nèi)酯(分別為銀杏A、B、C、J、M、白果內(nèi)酯)，原花青素，莽草酸、β-谷甾醇等。黃酮類物質(zhì)是一種生理活性物質(zhì)，有維生素樣的活性，清除自由基的能力，是優(yōu)良 的氧自由基清除劑和脂質(zhì)抗氧化劑。具有降低血壓、防止動脈硬化和抗衰老作用。銀杏酚酸是一種致敏性有害物質(zhì)，市場上銀杏葉提取物中銀杏酸有嚴(yán)格的限量標(biāo) 準(zhǔn)，國際上在5ppm以下，國內(nèi)IOppm以下?？紤]到銀杏黃酮具有上述特殊功效，銀杏酚酸為重要限量指標(biāo)，有必要進(jìn)行銀杏 黃酮的提取分離及脫除銀杏酚酸。而國內(nèi)對銀杏黃酮類化合物提取分離研究較多。主要 以溶劑浸提、大孔樹脂吸附分離為主(例如，①崔堂兵，石漫瑩，郭勇，鄭穗平，趙樹進(jìn).《廣 西農(nóng)業(yè)生物科學(xué)》，2002，21 (4) 266-270 ；②何琦，及元喬，丁立生，唐麗珊，付鐵軍，鄢立新， 彭樹林，王佳莉.《天然產(chǎn)物研究與開發(fā)》，2001，13(1) 56-59)；關(guān)于銀杏酚酸的脫除研 究較少，主要有超臨界流體萃取法(例如，侯峰，華文俊，姚煜東.《中草藥》，2003，34(1) 37-39)，樹脂吸附分離方法(例如，尹秀蓮，楊克迪，仰榴青，陳鈞，歐陽臻.《離子交換與吸 附》，2002，18 (6) 501-507)，大多為實驗研究工藝。經(jīng)由國家知識產(chǎn)權(quán)局網(wǎng)站檢索，截至2010年7月1日，與銀杏黃酮提取分離方法 直接相關(guān)的授權(quán)發(fā)明專利或申請主要有(1)ZL01119824.9(《銀杏葉提取物的系統(tǒng)分離方法及其制劑》)本發(fā)明公開了一 種銀杏葉提取物的系統(tǒng)分離方法及用該方法獲得的提取物的制劑。用該系統(tǒng)分離方法得到 的銀杏總黃酮含量> 50%，銀杏內(nèi)酯B含量> 98%，白果內(nèi)酯含量> 98. 5%。(2)ZL03114826.3(《低酸銀杏葉提取物的制備方法》)本發(fā)明涉及的是一種低酸 銀杏葉提取物的制備方法。其步驟包括以銀杏葉為原料用含水乙醇或甲醇或丙酮提取，取 提取液濃縮回收溶劑，濃縮液用水或純化水稀釋，在20°C以下冷卻沉降，取上清液進(jìn)大孔吸 附樹脂柱吸附，用醇類溶液洗脫，洗脫液再用除酸樹脂柱吸附，再用醇類溶液洗脫，合并流 出液和洗脫液在小于75°C濃縮干燥，或者以銀杏葉提取物為原料，用醇類或丙酮溶液溶解， 溶解液過除酸樹脂柱吸附，用醇類或丙酮溶液洗脫，合并流出液和洗脫液在小于75°C濃縮干燥。(3)CN101596223A(申請?zhí)?00910104242. 4，《一種富集銀杏黃酮化合物的方法》) 該發(fā)明公開了一種富集銀杏黃酮化合物的方法，涉及從銀杏葉中提取純化黃酮化合物的方 法。本發(fā)明以銀杏葉粉為原料，經(jīng)溶解、離心及超濾分離、電滲析、濃縮及凍干，制得銀杏黃 酮化合物凍干粉。本發(fā)明方法的設(shè)備簡單，操作簡便且易于控制，因而生產(chǎn)安全且成本低。(4)CN101327228A(申請?zhí)?00810022162. X，《一種低酸銀杏黃酮及其提取方法》) 該發(fā)明公開了一種低酸銀杏黃酮及其提取方法。所述的此種銀杏黃酮由下列方法提取獲 得將銀杏葉粉碎；將粉碎的銀杏葉放入乙醇浸泡；將浸泡銀杏葉中的乙醇回收；去除浸泡 過銀杏葉中的雜質(zhì)；加入樹脂第一次吸附銀杏酸；用乙醇洗脫，得到洗脫液；加入樹脂第二 次吸附銀杏酸；用乙醇洗脫，得到洗脫液；將乙醇回收；烘干即得到低酸銀杏黃酮。(5)CN101134767A(申請?zhí)?00610068733. 4，《高純度銀杏黃酮類化合物高效提取 制備方法》)本發(fā)明提供一種高純度銀杏黃酮類化合物高效提取制備方法，其提取步驟是 A.用秋天葉未黃時的銀杏葉，烘干，保存；B.將銀杏葉粉碎，備用；C.用50-90%的乙醇進(jìn) 行提??；D.提取液濃縮回收乙醇；E.將濃縮液稀釋、冷卻沉降；F.清液進(jìn)大孔樹脂吸附柱 進(jìn)行吸附；G.用醇類解吸；H.洗脫液減壓濃縮，真空干燥，粉碎包裝。本發(fā)明是一種高純度 銀杏黃酮類化合物高效提取制備方法。(6)ZL02109271.0(《脫酸銀杏葉和脫酸銀杏葉提取物及其制備方法和應(yīng)用》)本 發(fā)明涉及銀杏葉(銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba L)及其提取物的脫酸去毒，它保留了大 部分銀杏葉或提取物中的黃酮苷和萜類內(nèi)酯，但幾乎不含原銀杏葉或提取物中的烷基酚酸 類成分。它可以通過有機(jī)溶劑提取或二氧化碳超臨界萃取方法獲得。(7)CN1795879A(申請?zhí)?00510097920. 0，《低酸銀杏葉提取物的制備方法》)本 發(fā)明涉及的是一種低酸銀杏葉提取物的制備方法。其步驟包括以銀杏葉提取物為原料，用 醇類或丙酮溶液溶解，溶解液過除酸樹脂柱吸附，用醇類或丙酮溶液洗脫，合并流出液和洗 脫液在小于75°C濃縮干燥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在為開發(fā)保健食品、中藥新藥提供高質(zhì)量的原料——低酚酸銀杏黃酮提 取物，所要解決的技術(shù)問題是銀杏黃酮提取物中銀杏酚酸含量低。本發(fā)明所稱的低酚酸銀杏黃酮提取物是指銀杏黃酮提取物中銀杏酚酸的含量 ^ Ippm0本發(fā)明的技術(shù)方案以銀杏葉為原料，包括粉碎、提取、分離、濃縮、萃取和純化，與 現(xiàn)有技術(shù)的區(qū)別是所述的提取是對粉碎后的銀杏葉用PH8 9的水溶液于50 80°C提取 至少兩次，過濾分離，提取液濃縮至原體積的1/3 1/2，調(diào)濃縮液pH6 7，然后用中等極 性有機(jī)溶劑萃取至少兩次，萃取液脫溶至干，最后用復(fù)合樹脂層析柱吸附分離，梯度溶劑洗 脫，收集75 90% (質(zhì)量百分濃度)乙醇洗脫液，脫溶干燥即得銀杏黃酮含量>40%、酚 酸含量< Ippm的銀杏黃酮提取物。萃取使用的中等極性有機(jī)溶液選擇乙醇、丁醇或乙酸乙酯等。層析柱填料復(fù)合樹脂是聚酰胺與DlOl大孔樹脂按1 1 5的質(zhì)量比均勻混合 的復(fù)合樹脂。
具體操作步驟是(1)首先將干燥的銀杏葉通過粉碎機(jī)進(jìn)行破碎，過80 100目篩子，溶于6 15 倍體積、50 80°C的弱堿水(采用5% NaOH溶液調(diào)pH8 9)中，動態(tài)攪拌，轉(zhuǎn)速60r/min， 時間120min左右，提取至少2次；(2)將提取液合并，真空濃縮至原體積的1/3 1/2，再采用HCl將其調(diào)pH至6_7 ；(3)添加2 3倍體積的丁醇或乙酸乙酯等中等極性溶劑進(jìn)行萃取，萃取至少2 次，合并萃取液，真空濃縮至干；(4)進(jìn)行樹脂柱吸附分離，分離介質(zhì)為大孔樹脂D101、聚酰胺等按照一定比例混 合的復(fù)合填料，流動相為石油醚、乙醇水，進(jìn)行洗脫；乙醇水是指100%水、質(zhì)量百分濃度 75 90%乙醇水溶液。(5)收集75 90 %的乙醇水洗脫液，真空濃縮、干燥，制得銀杏黃酮苷含量40 %以 上、銀杏酚酸含量低于Ippm的銀杏葉提取物。本發(fā)明為相關(guān)企業(yè)提供一種集成水浸提_溶劑萃取_樹脂柱吸附分離提取分離方 法，可獲得銀杏黃酮苷含量>40%，酚酸含量< Ippm的低酚酸銀杏黃酮優(yōu)質(zhì)提取物。銀杏 黃酮與酚酸的分析檢測方法參照中華人民共和國藥典2005年版第一部第281頁。
具體實施例方式實施例1 (1)、稱取Ikg銀杏干葉，通過粉碎機(jī)進(jìn)行破碎，過80目篩子，溶于12倍體積、60°C 的弱堿水(采用5% NaOH溶液調(diào)pH8-9)中，動態(tài)攪拌，轉(zhuǎn)速60r/min，時間120min左右，提 取至少2次；(2)、將提取液合并，真空濃縮至原體積的1/2左右，再采用HCl將其調(diào)pH至6_7 ；(3)、添加2倍體積的丁醇溶劑進(jìn)行萃取，萃取至少2次，合并萃取液，真空濃縮至 干；(4)、進(jìn)行樹脂柱吸附分離，分離介質(zhì)為大孔樹脂DlOl與聚酰胺的混合樹脂 (3 1，W/W)，先用2倍柱體積的石油醚洗脫，再用2倍柱體積的去離子水洗脫，最后用3倍 柱體積的75%乙醇水洗脫；(5)、收集75%的乙醇水洗脫液，真空濃縮、干燥，獲得12. 8g銀杏黃酮提取物，其 中銀杏黃酮苷含量42. 3% (HPLC檢測)、銀杏酚酸含量0. 9ppm(HPLC檢測)。實施例2 (1)、稱取Ikg銀杏干葉，通過粉碎機(jī)進(jìn)行破碎，過100目篩子，溶于10倍體積、 65V的弱堿水(采用5% NaOH溶液調(diào)pH8_9)中，動態(tài)攪拌，轉(zhuǎn)速60r/min，時間120min左 右，提取至少2次；(2)、將提取液合并，真空濃縮至原體積的1/3左右，再采用HCl將其調(diào)pH至6_7 ；(3)、添加3倍體積的乙酸乙酯溶劑進(jìn)行萃取，萃取至少2次，合并萃取液，真空濃 縮至干；(4)、進(jìn)行樹脂柱吸附分離，分離介質(zhì)為大孔樹脂DlOl與聚酰胺的混合樹脂 (5 1，W/W)，先用3倍柱體積的石油醚洗脫，再用2倍柱體積的去離子水洗脫，最后用3倍 柱體積的85%乙醇水洗脫；
(5)、收集85%的乙醇水洗脫液，真空濃縮、干燥，獲得13. Ig銀杏黃酮提取物，其 中銀杏黃酮苷含量41. 9% (HPLC檢測)、銀杏酚酸含量Ippm(HPLC檢測)。
權(quán)利要求
一種低酚酸銀杏黃酮提取物新的制備方法，以銀杏葉為原料，包括粉碎、提取、分離、濃縮、萃取和純化，其特征在于所述的提取是粉碎后的銀杏葉用pH8～9的水溶液于50～80℃提取至少兩次，過濾分離，提取液濃縮至原體積的1/3～1/2，調(diào)濃縮液pH6～7，然后用中等極性有機(jī)溶劑萃取至少兩次，萃取液脫溶至干，最后用復(fù)合樹脂層析柱吸附分離，梯度溶劑洗脫，收集75～90％乙醇洗脫液，脫溶干燥得到低酚酸銀杏黃酮提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的中等極性有機(jī)溶劑選自乙醇、丁醇 或乙酸乙酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的復(fù)合樹脂層析柱的填料為大孔樹 脂D101、聚酰胺的混合物，其質(zhì)量比1 5 1。
全文摘要
一種低酚酸銀杏黃酮提取物新的制備方法，以銀杏葉為原料，包括粉碎、提取、分離、濃縮、萃取和純化，所述的提取是粉碎后的銀杏葉用pH8～9的水溶液于50～80℃提取至少兩次，過濾分離，提取液濃縮至原體積的1/3～1/2，調(diào)濃縮液pH6～7，然后用中等極性有機(jī)溶劑萃取至少兩次，萃取液脫溶至干，最后用聚酰胺與D101大孔樹脂復(fù)合樹脂層析柱吸附分離，梯度溶劑洗脫，收集75～90％乙醇洗脫液，脫溶干燥得到低酚酸銀杏黃酮提取物。本提取物中銀杏黃酮含量≥40％，銀杏酚酸含量低于1ppm。
文檔編號A61K127/00GK101904877SQ20101025268
公開日2010年12月8日 申請日期2010年8月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月6日
發(fā)明者張文成 申請人:合肥工業(yè)大學(xué)