專利名稱：犬細(xì)小病毒弱毒疫苗株及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株病毒弱毒疫苗株，尤其涉及一株由犬細(xì)小病毒強(qiáng)毒株CPV-YN傳 代致弱的弱毒疫苗株CPV-YNR，本發(fā)明還涉及該弱毒疫苗株在制備預(yù)防或治療由犬細(xì)小病 毒所致疾病的藥物中的用途，屬于犬細(xì)小病毒的防制領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
犬細(xì)小病毒于1978 年首次被發(fā)現(xiàn)(AppelM J, Scott Fff, CarmichaelL E.Isolation and immunization studies of a canine parco-like virus from dogs withhaemorrhagic enteritis. Vet Rec，1979，105 (8) : 156-159.)，此后本病流行于世界各 地，我國(guó)于1982年證實(shí)存在犬細(xì)小病毒感染(梁士哲，渠川玫，魏喜仁，等.犬傳染性腸炎 的研究I-腹瀉犬糞便中檢出的細(xì)小病毒顆粒.上海畜牧獸醫(yī)通迅，1982，2 (4) :172.)，次年 徐漢坤等正式報(bào)道了本病的流行(徐漢坤，郭保發(fā)，金淮，等.血凝和血凝抑制試驗(yàn)在犬群 暴發(fā)犬細(xì)小病毒腸炎中的應(yīng).中國(guó)畜禽傳染病，1983(4) :43-45.)。犬細(xì)小病毒是引起犬急 性出血性胃腸炎和幼犬急性心肌炎的病原(A fshar A. . Canine Parvovirus infection-a review. Vet Bull，1981，51 :605_612.)，主要危害幼犬，特別是2 6月齡犬。該病發(fā)病急， 病程短，死亡率高，傳染性強(qiáng)，對(duì)實(shí)驗(yàn)犬，軍犬，警犬等犬群以及寵物犬均具有很大的危險(xiǎn) 性。國(guó)外為預(yù)防與控制該病，已研制出多種商品用單苗與聯(lián)苗；國(guó)內(nèi)已有犬用五聯(lián)苗 (狂犬病、犬瘟熱、犬副流感、犬腺病毒2型病和細(xì)小病毒病)、犬用三聯(lián)苗(犬瘟熱、狂犬病 和犬細(xì)小病毒)研制成功的報(bào)道。哈爾濱獸醫(yī)研究所也研制成功犬瘟熱單苗。但目前以 上疫苗存在造價(jià)昂貴，抗原針對(duì)性不強(qiáng)等缺點(diǎn)，因此開發(fā)一種新型高效的⑶疫苗已迫在眉睫。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的之一是提供一株由犬細(xì)小病毒強(qiáng)毒株傳代致弱的弱毒疫苗株。本發(fā)明目的之二是將上述弱毒疫苗株應(yīng)用于預(yù)防或治療由犬細(xì)小病毒所致的各 種疾病。本發(fā)明目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的犬細(xì)小病毒強(qiáng)毒株的分離與鑒定2002年冬季哈爾濱市道外區(qū)某養(yǎng)殖場(chǎng)的犬群 暴發(fā)流行病，患病犬表現(xiàn)為嘔吐，腹瀉，糞便呈紅色膠凍狀或水樣，病死率較高。剖檢可見腸 管膨大，腸壁上充血或出血，腸道內(nèi)充滿著膠凍狀內(nèi)容物或血水，4 6周齡幼犬剖檢后可 見心室擴(kuò)張，懷疑為犬細(xì)小病毒感染引起的出血性腸炎和心肌炎。通過CRH(細(xì)胞分離病 毒，對(duì)分離毒進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，血凝、血凝抑制、特異性鑒定、動(dòng)物回歸試驗(yàn)及生物學(xué)鑒定， 證明分離的病毒為犬細(xì)小病毒，命名為CPV-YN株。本發(fā)明犬細(xì)小病毒弱毒株CDV-YBR的培育將本發(fā)明分離的犬細(xì)小病毒(CPV-YN 株)通過連續(xù)同步接種CRH(細(xì)胞傳代至110代，在傳代過程中，病毒的滴度逐漸提高，毒株越來越適應(yīng)CRFK細(xì)胞。與之相反，病毒對(duì)犬的致病力隨著傳代次數(shù)的增加而逐漸減 低；通過形態(tài)學(xué)鑒定、純粹性檢驗(yàn)、病毒的特異性和外源病毒檢驗(yàn)等試驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證了培育 的CPV-YN弱毒株(CPV-YNR)具有典型的細(xì)小病毒粒子特征，純凈無(wú)外源病毒污染。本發(fā) 明將所分離的CPV-YN弱毒株(CPV-YNR)提交專利認(rèn)可的機(jī)構(gòu)保藏，其微生物保藏號(hào)是 CGMCCNo. 3841 ；分類命名為犬細(xì)小病毒；保藏時(shí)間是2010年5月14日；保藏單位是中 國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心；保藏地址北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3 號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。本發(fā)明將所分離的犬細(xì)小病毒強(qiáng)毒株CPV-YN通過在CRFK細(xì)胞上傳代，培育了 CPV-YN致弱毒株(CPV-YNR)，致弱評(píng)價(jià)試驗(yàn)證明了致弱毒株培育成功。通過對(duì)致弱毒株病 毒的形態(tài)學(xué)觀察、純凈性檢驗(yàn)、病毒的特異性和外源病毒檢驗(yàn)等試驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證了本發(fā)明所 培育的CPV-YN弱毒株(CPV-YNR)具有典型的細(xì)小病毒粒子特征，純凈無(wú)外源病毒污染。免 疫效力試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明犬細(xì)小病毒弱毒疫苗株(CPV-YNR)對(duì)同源強(qiáng)毒攻擊的犬可以 提供很好的保護(hù)力。安全性和免疫原性試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明弱毒疫苗株CPV-YNR株對(duì)同 源強(qiáng)毒攻擊的犬可以提供很好的保護(hù)力。由此可見，CPV-YNR株具有良好的免疫原性，本發(fā) 明弱毒疫苗株CPV-YNR可制備成單苗或聯(lián)苗(活疫苗或滅活疫苗)，可有效預(yù)防或治療犬瘟 熱。本發(fā)明弱毒疫苗株CPV-YNR遺傳性穩(wěn)定，有免疫持久、效果好、安全可靠、保存期長(zhǎng)等優(yōu) 點(diǎn)ο


圖1本發(fā)明將所分離的犬細(xì)小病毒強(qiáng)毒株CPV-YN的病毒電鏡照片。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而 更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù) 人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式 進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。實(shí)施例1犬細(xì)小病毒強(qiáng)毒分離株(CPV-YN)的分離鑒定1材料和方法1.1 材料1. 1. 1病料哈爾濱市道外區(qū)誼農(nóng)綜合養(yǎng)殖場(chǎng)的發(fā)病死亡犬。1. 1. 2細(xì)胞CRFK(65 95代下同)，購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，按常規(guī)方法培養(yǎng)。1.1. 3試驗(yàn)動(dòng)物選用2 4月齡幼犬(CPV抗體效價(jià)彡1 2)，購(gòu)自哈爾濱醫(yī)科大 學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部，經(jīng)驅(qū)蟲和1周觀察后，確定健康備用。1. 1. 4血清CPV標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清(抗體效價(jià)彡1 16), CPV陰性血清，由哈爾濱獸 醫(yī)研究所提供。1.2分離方法1. 2. 1病毒的分離5份 患病犬帶血糞便病料用MEM細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)液制成1 9的懸液， 混勻，5000r/min離心lOmin，取上清，0. 22 μ m微孔濾膜過濾，置_20°C保存。1. 2. 2病毒的培養(yǎng)處理的樣品按培養(yǎng)液體積同步接種CRFK細(xì)胞(購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所)，37°C靜止培養(yǎng)，同時(shí)設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照。每天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況和細(xì)胞病 變，若無(wú)CPE，則于培養(yǎng)的第4 5天收取上清，細(xì)胞繼續(xù)按常規(guī)傳代培養(yǎng)，至第5代仍無(wú)病 變視為陰性，出現(xiàn)細(xì)胞病變的經(jīng)-20°C凍融3次后收毒，置-20°C保存。1.2. 3病毒的鑒定
1. 2. 3. 1 電鏡觀察取培養(yǎng)72h的CPV第五代細(xì)胞培養(yǎng)液作負(fù)染色，電鏡觀察病毒形態(tài)。1.2. 3.2耐酸性試驗(yàn)取CPV第5代細(xì)胞培養(yǎng)物，調(diào)pH至3.0，于37°C下作用2h后，與pH為7. 2的細(xì)胞 培養(yǎng)物同時(shí)分別接種CRFK，在37°C培養(yǎng)96h，收獲后測(cè)定其病毒含量，觀察該培養(yǎng)物抗酸能 力。1.2. 3.3耐熱性試驗(yàn)取CPV的第5代細(xì)胞培養(yǎng)物，置56°C水浴中作用不同時(shí)間，取出后分別接種CRH(， 37°C培養(yǎng)96h，收獲后測(cè)定其病毒含量，觀察該培養(yǎng)物耐熱能力。1.2. 3. 4耐乙醚試驗(yàn)取CPV的第5代細(xì)胞培養(yǎng)物，加乙醚至20%，在4°C作用24h后取出，去掉乙醚，接 種CRFK，37°C培養(yǎng)96h，觀察該培養(yǎng)物對(duì)乙醚的耐受能力。1.2. 3. 5核酸型鑒定將加有5-溴脫氧尿苷(BUDR)的CPV第5代細(xì)胞培養(yǎng)物，接種CRFK，37°C培養(yǎng)96h， 收獲后測(cè)定其病毒含量，觀察兩組病毒增殖情況，確定病毒核酸的類型。1. 2. 3. 6 血凝(HA)試驗(yàn)取CPV毒株第5代細(xì)胞培養(yǎng)物用1 %豬紅細(xì)胞(RBC)進(jìn)行HA試驗(yàn)。1. 2. 3. 7病毒含量測(cè)定將CPV的第5代細(xì)胞培養(yǎng)物作10倍系列稀釋，取10_6、10_5、10_4三個(gè)稀釋度，分別 接于6瓶CRFK懸液內(nèi)，每瓶Iml。于37°C培養(yǎng)96h，觀察CPE，按Reed-Muench法計(jì)算其病
毒含量。1. 2. 3. 8特異性測(cè)定將CPV第5代毒用MEM液稀釋成IOOTCID5ci，與等量抗犬細(xì)小病毒特異性血清混合， 置37°C水浴中和Ih后，同步接種CRFK，每瓶lml，觀察5d，逐日記錄CPE。同時(shí)設(shè)CPV 5代 毒同步接種CRH(對(duì)照。1.2. 3.9動(dòng)物感染試驗(yàn)將6只2 4月齡犬隨機(jī)分成2組，對(duì)照組2只，實(shí)驗(yàn)組4只，試驗(yàn)組動(dòng)物口服分 離細(xì)胞培養(yǎng)病毒1ml，對(duì)照組犬口服細(xì)胞培養(yǎng)液lmL，每天觀察臨床表現(xiàn)，每天測(cè)體溫2次， 觀察14d，并對(duì)死亡犬觀察剖檢變化。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2. ICPV分離與培養(yǎng)接種第5代病毒的細(xì)胞，在72h左右開始出現(xiàn)腫脹、圓縮、凝聚成團(tuán)，并在細(xì)胞核 內(nèi)形成圓形和橢圓形嗜酸性、大小不等的包涵體等規(guī)律性細(xì)胞病變，該分離病毒命名為 CPV-YN 株。2.2CPV毒株的鑒定
2. 2. 1電鏡觀察在培養(yǎng)72h的病毒培養(yǎng)物負(fù)染電鏡標(biāo)本中，可見到多數(shù)為空芯，少數(shù)為實(shí)芯、直徑 為20nm、呈圓形的細(xì)小病毒粒子，見圖1。2. 2. 2耐熱性試驗(yàn)CPV-YN第5代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)56°C處理30min和60min，TCID50基本無(wú)變化，說明分 離的病毒具有耐熱性。
2. 2. 3耐酸性試驗(yàn)CPV-YN5培養(yǎng)物經(jīng)pH3. 0處理，TCID5q為IO5_7/0. Iml與對(duì)照無(wú)明顯差別，說明分離 的CPV-YN對(duì)pH3. 0有一定的抵抗力。2. 2. 4耐乙醚試驗(yàn)經(jīng)乙醚處理的試驗(yàn)組與未處理的對(duì)照組的TCID5tl無(wú)明顯差別，說明該分離毒對(duì) 20%乙醚具有一定耐受力。2. 2. 5核酸型鑒定CPV-YN5經(jīng)BUDR處理后，病毒含量為102 9TCID5(1/lml，說明BUDR使病毒增殖受到 了明顯抑制，表明該分離病毒是DNA病毒。2. 2. 6HA試驗(yàn)CPV-YN5細(xì)胞培養(yǎng)物的HA效價(jià)為1 256。2. 2. 7病毒含量測(cè)定測(cè)定第5代病毒培養(yǎng)物的病毒含量，其結(jié)果為106_OTCID5tlA). 1ml。2. 2. 8病毒特異性試驗(yàn)中和后的CPV-YN第5代培養(yǎng)物接種CRFK，觀察5d，細(xì)胞無(wú)CPE，對(duì)照組在90 120h出現(xiàn)典型的CPE。2. 2. 9動(dòng)物感染試驗(yàn)用細(xì)胞分離病毒液感染健康犬6d后，試驗(yàn)組4只幼犬有2只先后發(fā)病。2只臨床 表現(xiàn)為精神不振、食欲減退、嘔吐，發(fā)熱，次日發(fā)病幼犬精神高度沉郁，食欲廢絕，劇烈嘔吐、 腹瀉，排出暗紅色、有強(qiáng)烈腥臭味的糞便，嚴(yán)重脫水，體溫稍高，第7d死亡1只。剖檢病死幼 犬發(fā)現(xiàn)；腸道粘膜出血、脫落，心臟腫大、發(fā)炎，其他器官無(wú)特征性變化。對(duì)照組2只幼犬臨 床上無(wú)任何異常。3實(shí)驗(yàn)小結(jié)3. 1對(duì)分離毒的培養(yǎng)和電鏡觀察表明，CPV-YN株同步接種CRFK，CPE出現(xiàn)比較規(guī) 律，即接毒后72h，細(xì)胞開始圓縮、凝集成團(tuán)；在電鏡下，分離毒為散在實(shí)芯和空芯、直徑為 20nm、圓形、無(wú)囊膜的顆粒，通過動(dòng)物回歸試驗(yàn)也證明了分離的是CPV。3. 2分離毒能凝集豬紅細(xì)胞與CPV標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清呈特異性結(jié)合反應(yīng)。分離毒有耐 酸(pH3.0)、耐熱(56°C 60min)與抗乙醚的理化學(xué)特性。3. 3對(duì)爆發(fā)流行的犬細(xì)小病毒用CRH(傳代表明，不同代次的分離毒，其CPE出現(xiàn)時(shí) 間比較規(guī)律，毒價(jià)較高也比較穩(wěn)定，說明分離毒株用CRFK傳代，穩(wěn)定性良好且毒力較強(qiáng)。實(shí)施例2犬細(xì)小病毒弱毒疫苗株CPV-YNR的培育1. 1試驗(yàn)材料試驗(yàn)動(dòng)物為2 4月齡的健康犬(CPV抗體效價(jià)< 1 2)；抗犬細(xì)小病毒特異性 血清、0. 2%紅細(xì)胞懸液由本實(shí)驗(yàn)室制備，強(qiáng)毒為實(shí)施例1所分離的的CPV-YN 6代。
1. 2CPV-YN弱毒株的培育與鑒定1. 2. ICPV-YN弱毒株的培育通過CRFK細(xì)胞傳代CPV-YN至110代。1. 2. 2CPV-YN弱毒株的形態(tài)學(xué)觀察將收獲的CPV-YN 5、10、20、30、50、70、90、100、105、110 代次病毒細(xì)胞培養(yǎng) 物5000r/min離心30min，取上清經(jīng)20000rpm超速離心，4 °C離心2h，沉淀用適量的 PBS(pH7. 0)懸浮，磷鎢酸負(fù)染電鏡觀察。1. 2. 3CPV-YN的純靜性檢驗(yàn)取CPV-YN的5、10、20、30、50、70、90、100、105、110代次毒，按現(xiàn)行《中華人民共和
國(guó)獸藥典》附錄進(jìn)行，應(yīng)無(wú)細(xì)菌、霉菌和支原體污染。1. 2. 4病毒含量測(cè)定取病毒的5、10、20、30、50、70、90、100、105、110代培養(yǎng)物，分別做10倍遞進(jìn)稀釋
后，各取10_4、10_5、10_6、10_7四個(gè)稀釋度，同步接種0^細(xì)胞。每個(gè)稀釋度接種4瓶，每瓶 Iml。觀察5d，記錄各稀釋度病變細(xì)胞瓶數(shù)，按照Reed-Muench法計(jì)算TCID5(1。1.2. 5病毒的特異性檢驗(yàn)分別取CPV-YN 的 5、10、20、30、50、70、90、100、105、110 代次毒，用 MEM 液稀釋 成100TCID5(1/0. 1ml，與等量抗犬細(xì)小病毒特異性血清混合，置37°C水浴中和lh，同步接種 CRFK，每瓶lml。觀察5d，逐日記錄CPE。同時(shí)設(shè)不中和的病毒對(duì)照組2瓶。1. 2. 6外源病毒檢驗(yàn)1. 2. 6. 1致細(xì)胞病變外源病毒的檢驗(yàn)分別取CPV-YN 的 5、10、20、30、50、70、90、100、105 代次毒，將 CPV-YN 用 MEM 液稀 釋成100TCID5(1/0. 1ml，與等量抗犬細(xì)小病毒特異性血清混合，置37°C水浴中和lh，取2個(gè) 方瓶(IOml容量)的CRH(細(xì)胞，接種中和后的病毒液lml，在37°C下吸附lh，觀察5-7d，檢 查是否出現(xiàn)由接種物引起的CPE，同時(shí)設(shè)未中和的病毒接種細(xì)胞2瓶為對(duì)照。1. 2. 6. 2致紅細(xì)胞吸附的外源病毒檢驗(yàn)將上述接種中和病毒的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用PBS洗滌細(xì)胞單層3次，加入0. 2%紅細(xì)胞 懸液，在4°C培養(yǎng)30min，用PBS洗滌，檢查紅細(xì)胞吸附情況。1. 2. 7CPV-YNR株致弱評(píng)價(jià)試驗(yàn)55只2 4月齡犬隨機(jī)分成11組，每組5只，1 10組犬分別用CPV-YN的5、10、 20、30、50、70、90、100、105、110 代次毒接種，各代次病毒稀釋為 IO5.5TCID50/lml, lml/犬。觀 察21d，記錄臨床癥狀和發(fā)病數(shù)，設(shè)對(duì)照5只犬，并接種相同劑量的滅菌生理鹽水。1. 2. 8CPV-YNR株免疫效力初步評(píng)價(jià)20只2 4月齡犬隨機(jī)分成A組、 組、C組和D組，A組、B組和C組均5只，D組5 只作為對(duì)照，A、B、C組犬分別用CPV-YN的90、105、110代次毒接種，接種劑量為IO4 tlTCID5ci/ 犬，D組接種滅菌生理鹽水lml。21d后，4組犬皮下攻擊同源強(qiáng)毒，劑量為200TCID5Q/犬。 攻毒后觀察21d，記錄臨床保護(hù)數(shù)。2 結(jié)果2. ICPV-YN弱毒株的培育及形態(tài)學(xué)觀察將CPV-YN的5、10、20、30、50、70、90、100、105、110代次毒細(xì)胞培養(yǎng)物負(fù)染電鏡標(biāo)
本中，可見到多數(shù)為空芯，少數(shù)為實(shí)芯、直徑為20nm、呈圓形的病毒顆粒，未觀察到其它病毒的存在。2. 2CPV-YN的純凈性檢驗(yàn)細(xì)菌、霉菌與支原體檢驗(yàn)按現(xiàn)行《中華人民共和國(guó)獸藥 典》附錄所述方法進(jìn)行，無(wú)細(xì)菌、霉菌及支原體生長(zhǎng)。2. 3 病毒含量測(cè)定 CPV-YN 的 5、10、20、30、50、70、90、100、105、110 代次毒的病毒含量。2. 4病毒的特異性檢驗(yàn)CPV-YN的各代毒中和后接種CRFK，觀察5d，細(xì)胞均無(wú)CPE ； 對(duì)照組2瓶細(xì)胞在90 120h出現(xiàn)典型的CPE。2. 5外源病毒檢驗(yàn)2. 5. 1用細(xì)胞檢驗(yàn)結(jié)果各代次病毒中和后接種CRFK細(xì)胞，經(jīng)觀察均無(wú)CPE產(chǎn)生，對(duì)照組細(xì)胞出現(xiàn)明顯的 CPE。2. 5. 1紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)各代次病毒均不能凝集雞外周血紅細(xì)胞，說明病毒液中不含能使雞外周血紅細(xì)胞 凝集的其它病毒。2. 6CPV-YNR株致弱評(píng)價(jià)試驗(yàn)CPV-YN毒株經(jīng)CRFK傳代后對(duì)犬的致病力逐漸減弱。CPV-YN第5和第10代次毒對(duì) 犬的致病力均為100%，但死亡率開始出現(xiàn)下降，發(fā)病犬出現(xiàn)體溫升高平均在41°C左右、鼻 流清液、排稀便等臨床癥狀；CPV-YN第20、30、50代次毒對(duì)犬的致病力由80%下降到20%， 從50代開始感染犬不出現(xiàn)死亡。從80代開始到110代CPV-YN對(duì)犬的發(fā)病率和死亡率都 降到0。對(duì)照犬均正常，見表2。2.7CPV-YNR株免疫效力初步評(píng)價(jià)免疫組(A、B、C組)犬在接種后21天，皮下攻同源強(qiáng)毒，觀察21天無(wú)發(fā)病現(xiàn)象，也 無(wú)死亡發(fā)生。而對(duì)照組(D組)犬則有100%發(fā)病，死亡率為40%。發(fā)病犬表現(xiàn)為體溫升高 平均在40。C左右、嘔吐、排番茄汁樣便等臨床癥狀，詳見表1。表ICPV-YNR株免疫效力試驗(yàn)
權(quán)利要求
一株由犬細(xì)小病毒(Canine parvovirus)強(qiáng)毒株CPV YN傳代致弱所得到的弱毒疫苗株，其特征在于，其微生物保藏號(hào)是CGMCC No.3841。
2.權(quán)利要求1所述的犬細(xì)小病毒弱毒疫苗株在制備預(yù)防或治療由犬細(xì)小病毒所致疾 病藥物中的用途。
3.按照權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于所述的由犬細(xì)小病毒所致疾病包括犬急 性出血性胃腸炎或幼犬急性心肌炎。
4.一種預(yù)防或治療由犬細(xì)小病毒所致疾病的疫苗組合物，其特征在于由權(quán)利要求1 所述的有效量的犬細(xì)小病毒弱毒疫苗株和藥學(xué)上可接受的載體或輔料組成。
5.按照權(quán)利要求4所述的疫苗組合物，其特征在于所述的由犬細(xì)小病毒所致疾病包 括犬急性出血性胃腸炎或幼犬急性心肌炎。
全文摘要
本發(fā)明公開了犬細(xì)小病毒弱毒疫苗株及其應(yīng)用。本發(fā)明將所分離的犬細(xì)小病毒強(qiáng)毒株通過細(xì)胞上傳代，培育了犬細(xì)小病毒弱毒疫苗株，其微生物保藏號(hào)是CGMCC No.3841。安全性和免疫原性試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明弱毒疫苗株CPV-YNR株對(duì)同源強(qiáng)毒攻擊的犬可以提供很好的保護(hù)力，具有良好的免疫原性，本發(fā)明弱毒疫苗株CPV-YNR可制備成單苗或聯(lián)苗，可有效預(yù)防或治療由犬細(xì)小病毒所致疾病。本發(fā)明弱毒疫苗株CPV-YNR遺傳性穩(wěn)定，具有免疫持久、效果好、安全可靠、保存期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P9/00GK101942419SQ201010244838
公開日2011年1月12日 申請(qǐng)日期2010年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月30日
發(fā)明者劉大飛, 劉立奎, 張洪英, 曲聯(lián)東, 王牟平 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所