鴨坦布蘇病毒弱毒株及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種鴨坦布蘇病毒弱毒株，該弱毒株是由鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒株FX2010經(jīng)在雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)上連續(xù)傳代培養(yǎng)后突變獲得。本發(fā)明還公開(kāi)了預(yù)防或治療鴨坦布蘇病毒病的疫苗，該疫苗是以上述鴨坦布蘇病毒弱毒株為種毒的鴨坦布蘇病毒病弱毒活疫苗或滅活疫苗。本發(fā)明還公開(kāi)了用于診斷鴨坦布蘇病毒病的檢測(cè)抗原，該檢測(cè)抗原為上述鴨坦布蘇病毒弱毒株的病毒顆粒。本發(fā)明的鴨坦布蘇病毒弱毒株，無(wú)論是作為活疫苗還是滅活疫苗，在免疫雛鴨和產(chǎn)蛋鴨后，對(duì)強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)率都達(dá)到100％，且該鴨坦布蘇病毒弱毒株作為檢測(cè)抗原，具有良好的特異性，因此，該鴨坦布蘇病毒弱毒株在鴨坦布蘇病毒病的防治與診斷方面具有非常好的應(yīng)用前景。
【專利說(shuō)明】鴨坦布蘇病毒弱毒株及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及病毒【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種由鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒株經(jīng)傳代培養(yǎng)使其致病力減弱的鴨坦布蘇病毒弱毒株，以及該弱毒株用作鴨坦布蘇病毒病的活疫苗、滅活疫苗及診斷抗原的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]2010年4月以來(lái)，我國(guó)上海、浙江、江蘇等地發(fā)生了以肉鴨生長(zhǎng)遲緩和蛋鴨產(chǎn)蛋急劇下降為特征的一種傳染病，短短幾個(gè)月時(shí)間里，南方各省幾乎所有的蛋鴨場(chǎng)都受到了該病的侵襲，給養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。國(guó)內(nèi)的研究者通過(guò)病毒分離鑒定，病毒基因組序列分析，動(dòng)物回歸試驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)證明該傳染病是由一種新的黃病毒——鴨坦布蘇病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)所引起，該病毒屬于黃病毒屬Ntaya病毒群。該病毒自發(fā)現(xiàn)以來(lái)，在我國(guó)迅速傳播，廣泛流行。2010-2012年，該病毒在上海、浙江、江蘇、安徽、河南、山東、湖南、湖北、福建、河北等地鴨群中均被檢測(cè)到。
[0003]鴨坦布蘇病毒病為新發(fā)傳染病，具有高度傳染性，且一年四季都可流行，給鴨坦布蘇病毒病的防控帶來(lái)了極大的困難，目前，尚無(wú)有效的防控措施，更沒(méi)有疫苗可用，也沒(méi)有有效、快速簡(jiǎn)便的血清學(xué)檢測(cè)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決目前沒(méi)有有效的防控鴨坦布蘇病毒病的疫苗的技術(shù)問(wèn)題，提供一種鴨坦布蘇病毒弱毒株，該弱毒株可用于制備預(yù)防鴨坦布蘇病毒病的活疫苗或滅活疫苗。
[0005]此外，還需要提供一種上述·鴨坦布蘇病毒弱毒株的應(yīng)用，用于制備檢測(cè)鴨坦布蘇病毒抗體的診斷抗原，可快速、靈敏地檢測(cè)出鴨坦布蘇病毒。
[0006]為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0007]在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種鴨坦布蘇病毒弱毒株，該弱毒株是由鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒株FX2010經(jīng)突變獲得，所述突變至少包含以下5個(gè)氨基酸突變位點(diǎn)--第407位D突變?yōu)镹、第599位V突變?yōu)锳、第636位M突變?yōu)镵、第1050位V突變?yōu)锳、和第1820位T突變?yōu)镮。
[0008]本發(fā)明的鴨坦布蘇病毒弱毒株，是由鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒株FX2010經(jīng)雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)連續(xù)培養(yǎng)傳代而獲得。當(dāng)鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒株FX2010在CEF上傳代培養(yǎng)到第60代病毒(FX2010-60P)時(shí)出現(xiàn)上述5個(gè)氨基酸突變位點(diǎn)，即包括第407位(D突變?yōu)镹)、第599位(V突變?yōu)锳)、第636位(M突變?yōu)镵)、第1050位(V突變?yōu)锳)和第1820位(T突變?yōu)镮)，經(jīng)試驗(yàn)證明這5個(gè)氨基酸位點(diǎn)的突變使鴨坦布蘇病毒對(duì)鴨的致病力減弱，SPFX2010-60P的毒力比其母源毒株FX2010弱。
[0009]鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒株FX2010在CEF上傳代培養(yǎng)到第80代病毒(FX2010-80P)時(shí)，與FX2010-60P相比新增I個(gè)氨基酸突變位點(diǎn)，即第442位(Y突變?yōu)镕)。這個(gè)位點(diǎn)的突變使鴨坦布蘇病毒FX2010-80P對(duì)鴨的致病力減弱，即FX2010-80P的毒力比FX2010-60P弱。[0010]鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒株FX2010在CEF上傳代培養(yǎng)到第100代病毒(FX2010-100P)時(shí)，與FX2010-80P相比新增2個(gè)氨基酸突變位點(diǎn)，即第376位(E突變?yōu)镚)和第444位(A突變?yōu)閂)。這2個(gè)位點(diǎn)的突變使鴨坦布蘇病毒FX2010-100P對(duì)鴨的致病力減弱，即FX2010-100P 的毒力比 FX2OlO-8OP 弱。
[0011]鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒株FX2010在CEF上傳代培養(yǎng)到第130代病毒(FX2010-130P)時(shí)，與FX2010-100P相比新增3個(gè)氨基酸突變位點(diǎn)，即第993位(K突變?yōu)镽)、第2227位(V突變?yōu)锳)和2316位(F突變?yōu)閅)。這3個(gè)位點(diǎn)的突變使鴨坦布蘇病毒FX2010-130P對(duì)鴨的致病力減弱，即FX2010-130P的毒力比FX2010-100P弱。 [0012]鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒株FX2010在CEF上傳代培養(yǎng)到第145代病毒(FX2010-145P)時(shí)，與FX2010-130P相比新增2個(gè)氨基酸突變位點(diǎn)，即第226位(A突變?yōu)閂)和第2378位(S突變?yōu)長(zhǎng))。這2個(gè)位點(diǎn)的突變使鴨坦布蘇病毒FX2010-145P對(duì)鴨的致病力減弱，即FX2010-145P 的毒力比 FX2OlO-13OP 弱。
[0013]鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒株FX2010在CEF上傳代培養(yǎng)到第168代病毒(FX2010-168P)時(shí)，與FX2010-145P相比新增2個(gè)氨基酸突變位點(diǎn)和在3' NCR(3'非編碼區(qū))上的I個(gè)核苷酸突變位點(diǎn)，氨基酸突變位點(diǎn)為第453位(R突變?yōu)镵)和第3313位(V突變?yōu)锳)，核苷酸突變位點(diǎn)為3/ NCR上的第246位(T突變?yōu)镃)。這3個(gè)位點(diǎn)的突變使鴨坦布蘇病毒FX2010-168P對(duì)鴨的致病力減弱，即FX2010-168P的毒力比FX2010-145P弱。
[0014]鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒株FX2010在CEF上傳代培養(yǎng)到第180代病毒(FX2010-180P)時(shí)，與FX2010-168P相比新增4個(gè)氨基酸突變位點(diǎn)和在3' NCR(3'非編碼區(qū))上的I個(gè)核苷酸突變位點(diǎn)，氨基酸突變位點(diǎn)為第980位(R突變?yōu)镚)、第1435位(V突變?yōu)長(zhǎng))、第2171位(F突變?yōu)長(zhǎng))和第2793位(R突變?yōu)镚)，核苷酸突變位點(diǎn)為3' NCR上的第187位(C突變?yōu)門)。這5個(gè)位點(diǎn)的突變使鴨坦布蘇病毒FX2010-180P對(duì)鴨的致病力減弱，即FX2010-180P的毒力比FX2010-168P弱。與親本強(qiáng)毒株FX2010相比，傳代毒FX2010-180P共有19個(gè)氨基酸的突變以及3'非編碼區(qū)2個(gè)核苷酸的突變，正是這些突變導(dǎo)致了鴨坦布蘇病毒致病力的明顯減弱，該鴨坦布蘇病毒弱毒株FX2010-180P的全基因組核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示。
[0015]本發(fā)明的鴨坦布蘇病毒弱毒株(FX2010-180P)，已于2012年7月25日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱CCTCC)，保藏號(hào)為CCTCC NO:V201231，其分類命名為鴨坦布蘇病毒弱毒株(FX2010-180P)Duck Tembusu virus (FX2010-180P)。
[0016]在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種預(yù)防或治療鴨坦布蘇病毒病的疫苗，該疫苗是以上述鴨坦布蘇病毒弱毒株FX2010-180P為種毒的鴨坦布蘇病毒病弱毒活疫苗，或是以上述第60代、80代、100代、130代、145代、168代及180代鴨坦布蘇病毒弱毒株為種毒的鴨坦布蘇病毒病弱毒滅活疫苗。
[0017]FX2010-180P弱毒株IO3 ciTCID5tl劑量肌肉注射可誘導(dǎo)雛鴨和產(chǎn)蛋鴨產(chǎn)生高滴度的抗體，對(duì)強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)率達(dá)100% ,該弱毒株可以作為鴨坦布蘇病毒病活疫苗的種毒株。
[0018]FX2010-180P弱毒株在CEF和DFl細(xì)胞上培養(yǎng)的病毒滴度可達(dá)107_°TCID5(l/mL，該病毒細(xì)胞培養(yǎng)液滅活并與蛋白佐劑混合乳化后，經(jīng)肌肉注射可誘導(dǎo)雛鴨和產(chǎn)蛋鴨產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答，對(duì)強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)率達(dá)100%，該弱毒株可以作為鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗的種毒株。與強(qiáng)毒株相比，用弱毒株生產(chǎn)滅活疫苗具有生物安全的優(yōu)勢(shì)，而且，弱毒株更加適應(yīng)CEF和DFl細(xì)胞，在細(xì)胞上培養(yǎng)的病毒毒價(jià)更高，使滅活疫苗更容易制備和生產(chǎn)。
[0019]在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種用于診斷鴨坦布蘇病毒病的檢測(cè)抗原，該檢測(cè)抗原為上述鴨坦布蘇病毒弱毒株的病毒顆粒。
[0020]鴨坦布蘇病毒弱毒株FX2010-180P的細(xì)胞培養(yǎng)液經(jīng)差速離心純化后的病毒顆粒，可作為檢測(cè)抗原檢測(cè)鴨坦布蘇病毒特異性抗體。
[0021]本發(fā)明的鴨坦布蘇病毒弱毒株，肌肉注射雛鴨和產(chǎn)蛋鴨7天和14天后，可誘導(dǎo)雛鴨和產(chǎn)蛋鴨產(chǎn)生高滴度的抗體，該鴨坦布蘇病毒弱毒株，無(wú)論是作為活疫苗還是滅活疫苗，對(duì)強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)率都達(dá)到100%。此外，該鴨坦布蘇病毒弱毒株作為檢測(cè)抗原，具有良好的特異性。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0022]下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。
[0023]圖1是本發(fā)明鴨坦布蘇病毒在CEF上連續(xù)傳代培養(yǎng)導(dǎo)致的不同代次病毒的氨基酸突變點(diǎn)及3’ NCR上的核苷酸突變點(diǎn)列表圖；
[0024]圖2是本發(fā)明實(shí)施例3的雛鴨免疫FX2010-180P后7天和14天的抗體效價(jià)圖；
[0025]圖3是本發(fā)明實(shí)施例3的產(chǎn)蛋鴨免疫FX2010-180P后7天和14天的抗體效價(jià)圖；
[0026]圖4是本發(fā)明實(shí)施例4的實(shí)驗(yàn)鴨免疫滅活疫苗后14天的抗體效價(jià)圖；
[0027]圖5是本發(fā)明實(shí)施例5的FX2010-180P病毒作為間接ELISA包被抗原檢測(cè)鴨坦布蘇病毒抗體的特異性結(jié)果柱狀圖；
[0028]圖6是本發(fā)明實(shí)施例5的FX2010-180P病毒作為阻斷ELISA包被抗原檢測(cè)鴨坦布蘇病毒抗體的特異性結(jié)果柱狀圖。
[0029]本發(fā)明的鴨坦布蘇病毒弱毒株(FX2010-180P)，已于2012年7月25日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱CCTCC)，保藏號(hào)為CCTCC NO:V201231，其分類命名為鴨坦布蘇病毒弱毒株(FX2010-180P)Duck Tembusu virus (FX2010-180P)。
【具體實(shí)施方式】
[0030]下列實(shí)施例中，未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按常規(guī)條件，如《精編分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指南》(F.M.奧斯伯，R.E.金斯頓，J.G.塞德曼等主編，馬學(xué)軍，舒躍龍的譯.北京:科學(xué)出版社，2004)中所述的方法進(jìn)行。
[0031]為了研制能有效防控鴨坦布蘇病毒病的疫苗，本發(fā)明通過(guò)將鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒株FX2010 (本實(shí)驗(yàn)室分離獲得的鴨坦布蘇病毒奉賢2010分離株，參見(jiàn)已發(fā)表的文章YanP，Zhao Y，Zhang X，Xu D，Dai X，Teng Q，Yan L，Zhou J，Ji X，Zhang S，Liu G Zhou Y，Kawaoka Y，Tong G, Li Z.An infectious disease of ducks caused by a newly emergedTembusu virus strain in mainland China.Virology.2011.417 (I):1_8)經(jīng)雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)連續(xù)傳代培養(yǎng)并用有限稀釋法純化而獲得了新的鴨坦布蘇病毒弱毒株，該弱毒株具有連續(xù)傳代過(guò)程中產(chǎn)生的多個(gè)氨基酸及核苷酸的突變，這些氨基酸及核苷酸的突變是鴨坦布蘇病毒致病力減弱的直接原因，其中第180代病毒即FX2010-180P弱毒株對(duì)鴨的致病力最弱，其作為鴨坦布蘇病毒病弱毒活疫苗效果最佳；第60代、80代、100代、130代、145代、168代及180代弱毒株，都適于制成有效的鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗，只是第180代弱毒株由于致病力最弱，用于生產(chǎn)滅活疫苗時(shí)相對(duì)具有生物安全的優(yōu)勢(shì)。[0032]在下面的具體實(shí)施例中，第180代病毒(FX2010-180P)高劑量(105_5TCID5tl)接種對(duì)雛鴨及產(chǎn)蛋鴨不引起任何不良反應(yīng)，也沒(méi)有對(duì)鴨造成任何明顯的病理?yè)p傷。該弱毒株IO3 tlTCID5ci的劑量肌肉注射可誘導(dǎo)雛鴨和產(chǎn)蛋鴨產(chǎn)生高滴度的抗體，對(duì)強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)率達(dá)100%;該毒株在CEF或DFl細(xì)胞上培養(yǎng)的病毒滴度可達(dá)107_°TCID5(l/mL，該病毒細(xì)胞培養(yǎng)液滅活并與蛋白佐劑混合乳化后，經(jīng)肌肉注射可誘導(dǎo)雛鴨和產(chǎn)蛋鴨產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答，對(duì)強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)率達(dá)100% ;該毒株經(jīng)純化后的病毒顆?？梢宰鳛闄z測(cè)抗原檢測(cè)鴨坦布蘇病毒特異性抗體。
[0033]由此可知，本發(fā)明的鴨坦布蘇病毒弱毒株可作為預(yù)防或治療鴨坦布蘇病毒病的活疫苗或滅活疫苗的生產(chǎn)毒株，也可作為檢測(cè)鴨坦布蘇病毒病特異性抗體的檢測(cè)抗原，在鴨坦布蘇病毒病的防治與診斷方面具有很好的應(yīng)用前景。
[0034]實(shí)施例1鴨坦布蘇病毒傳代培養(yǎng)及序列分析
[0035]用分離到的在自然界中引起鴨發(fā)病的鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒株FX2010，接種雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)長(zhǎng)成單層的T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶，每瓶接種ImL病毒液，吸附1_2小時(shí)后，棄去病毒液，加入12mL含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，36-72小時(shí)后，吸取培養(yǎng)上清液，再接種CEF長(zhǎng)成單層的T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶，連續(xù)傳代培養(yǎng)173代，然后用有限稀釋法純化5次后，傳代至第180代。把第60代、80代、100代、130代、145代、168代及180代病毒進(jìn)行全基因測(cè)序，結(jié)果如圖1所示(圖1中，灰色陰影表示與前面測(cè)序的病毒基因相比新增加的突變點(diǎn)；氨基酸位置是指該位點(diǎn)在多聚蛋白上的位置；核苷酸位置是指該位點(diǎn)在3, NCR上的位置)，鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒株FX2010在CEF傳代至第60代(FX2010-60P)時(shí)，發(fā)生了 5個(gè)氨基酸的突變，而第 80 代(FX2010-80P)、100 代(FX2010-100P)、130 代(FX2010-130P)和145代(FX2010-145P)病毒分別新增1、2、3和2個(gè)氨基酸的突變，第168代(FX2010-168P)和180代(FX2010-180P)分別新增2個(gè)和4個(gè)氨基酸突變，并在3' NCR分別新增I個(gè)核苷酸突變。與親本強(qiáng)毒株FX2010相比，傳代毒FX2010-180P共有19個(gè)氨基酸的突變以及3'非編碼區(qū)2個(gè)核苷酸的突變，正是這些突變導(dǎo)致了鴨坦布蘇病毒致病力的明顯減弱，該鴨坦布蘇病毒弱毒株FX2010-1·80P的全基因組核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示。鴨坦布蘇病毒FX2010強(qiáng)毒株在傳代培養(yǎng)過(guò)程中的突變點(diǎn)，第226、376、407、442、444、453、599、636、980、993、1050、1435、1820、2171、2227、2316、2378、2793、3313 位氨基酸分別位于 Μ、E、NS1、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5蛋白上，2個(gè)核苷酸突變點(diǎn)位于Y NCR上。本發(fā)明的鴨坦布蘇病毒弱毒株(FX2010-180P)，已于2012年7月25日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱CCTCC)，保藏號(hào)為CCTCC NO:V201231，其分類命名為鴨坦布蘇病毒弱毒株(FX2010-180P)Duck Tembusu virus (FX2010-180P)。
[0036]實(shí)施例2不同代次病毒對(duì)鴨的致病力分析
[0037]把上述實(shí)施例1中不同代次病毒感染雛鴨和產(chǎn)蛋鴨，通過(guò)觀察鴨的臨床癥狀，剖檢后的病理變化以及病毒在鴨體內(nèi)的增殖及分布情況，分析不同代次病毒對(duì)鴨的致病力。具體方法如下:
[0038](I)雛鴨鼻腔感染試驗(yàn)
[0039]60只21日齡健康雛鴨，隨機(jī)分成6組，每組10只。第1_5組分別鼻腔接種FX2010 (劑量為 IO3.5TCID50)、FX2010-60P、FX2010-80P、FX2010_100P 和 FX2010-130P (劑量為IO5 5TCID5tl),第6組為空白對(duì)照組。接種后第4天，剖檢，觀察臟器的病理變化，并取脾、肺、腎和腦等組織，每克組織加lmLPBS，研磨后，離心，取上清，用DF-1細(xì)胞分離病毒。
[0040](2)產(chǎn)蛋鴨鼻腔感染試驗(yàn)
[0041]60只180日齡健康產(chǎn)蛋鴨，隨機(jī)分成6組，每組10只。第1_5組分別鼻腔接種FX2010 (劑量為 IO3.5TCID50)、FX2010-60P、FX2010-80P、FX2010_100P 和 FX2010-130P (劑量為IO5 5TCID5tl),第6組為空白對(duì)照組。接種后第4天，剖檢，觀察臟器的病理變化，并取脾、肺、腎、腦和卵巢組織，每克組織加lmLPBS，研磨后，離心，取上清，用DF-1細(xì)胞分離病毒。
[0042](3)雛鴨肌肉注射感染試驗(yàn)
[0043]70只21日齡健康雛鴨，隨機(jī)分成7組，每組10只。第1_6組分別肌肉注射FX2010(劑量為 IO3 5TCID5tl)、FX2010-100P、FX2010-130P、FX2010-145P、FX2010-168P 和FX2010-180P (劑量為105_ 5TCID50)，第7組為空白對(duì)照組。接種后第4天，剖檢，觀察臟器的病理變化，并取脾、肺、腎和腦等組織，每克組織加lmLPBS，研磨后，離心，取上清，用DF-1細(xì)胞分離病毒。其中，F(xiàn)X2010、FX2010-168P和FX2010-180P感染鴨另外取心臟、肝臟、氣管、胰臟、法氏囊和小腸等組織分離病毒。
[0044](4)產(chǎn)蛋鴨肌肉注射感染病毒
[0045]70只180日齡健康產(chǎn)蛋麻鴨，隨機(jī)分成7組，每組10只。第1_6組分別肌肉注射 FX2010(劑量為 103.5TCID5tl)、FX2010-100P、FX2010-130P、FX2010-145P、FX2010-168P 和FX2010-180P(劑量為IO5 5TCID5tl),第7組為空白對(duì)照組。接種后第4天，剖檢，觀察臟器的病理變化，并取脾、肺、腎、腦和卵巢等組織，每克組織加lmLPBS，研磨后，離心，取上清，用DF-1細(xì)胞分離病毒。其中，F(xiàn)X2010、FX2010-168P和FX2010-180P感染鴨另外取心臟、肝臟、氣管、胰臟、小腸等組織分離病毒。
[0046]上述試驗(yàn)結(jié)果如下:
[0047]1、不同代次病毒鼻腔感染對(duì)雛鴨的致病力(見(jiàn)下表1)
[0048]表1雛鴨鼻腔感染不同代次病毒的評(píng)價(jià)總結(jié)
[0049]
【權(quán)利要求】
1.一種鴨坦布蘇病毒弱毒株，其特征在于，該弱毒株是由鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒株FX2010經(jīng)突變獲得，所述突變至少包含以下5個(gè)氨基酸突變位點(diǎn):第407位D突變?yōu)镹、第599位V突變?yōu)锳、第636位M突變?yōu)镵、第1050位V突變?yōu)锳、和第1820位T突變?yōu)镮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鴨坦布蘇病毒弱毒株，其特征在于，所述突變的氨基酸位點(diǎn)還包含:第442位Y突變?yōu)镕。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鴨坦布蘇病毒弱毒株，其特征在于，所述突變的氨基酸位點(diǎn)還包含:第376位E突變?yōu)镚、第444位A突變?yōu)閂。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的鴨坦布蘇病毒弱毒株，其特征在于，所述突變的氨基酸位點(diǎn)還包含:第993位K突變?yōu)镽、第2227位V突變?yōu)锳、第2316位F突變?yōu)閅。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的鴨坦布蘇病毒弱毒株，其特征在于，所述突變的氨基酸位點(diǎn)還包含:第226位A突變?yōu)閂、第2378位S突變?yōu)長(zhǎng)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的鴨坦布蘇病毒弱毒株，其特征在于，所述突變還包含2個(gè)氨基酸突變位點(diǎn)和I個(gè)核苷酸突變位點(diǎn)，其中，氨基酸突變位點(diǎn)為第453位R突變?yōu)镵和第3313位V突變?yōu)锳，核苷酸突變位點(diǎn)為3'非編碼區(qū)的第246位T突變?yōu)镃。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的鴨坦布蘇病毒弱毒株，其特征在于，所述突變還包含4個(gè)氨基酸突變位點(diǎn)和I個(gè)核苷酸突變位點(diǎn)，其中，氨基酸突變位點(diǎn)為第980位R突變?yōu)镚、第1435位V突變?yōu)長(zhǎng)、第2171位F突變?yōu)長(zhǎng)和第2793位R突變?yōu)镚，核苷酸突變位點(diǎn)為3'非編碼區(qū)的第187位C突變?yōu)門。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的鴨坦布蘇病毒弱毒株，其特征在于，該弱毒株的保藏號(hào)為CCTCC NO:V201231o
9.一種預(yù)防或治療鴨坦布蘇病毒病的疫苗，其特征在于，該疫苗是以權(quán)利要求7或8所述的鴨坦布蘇病毒弱毒株為種毒的鴨坦布蘇病毒病弱毒活疫苗，或是以權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的鴨坦布蘇病毒弱毒株為種毒的鴨坦布蘇病毒病弱毒滅活疫苗。
10.一種用于診斷鴨坦布蘇病毒病的檢測(cè)抗原，其特征在于，該檢測(cè)抗原為權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的鴨坦布蘇病毒弱毒株的病毒顆粒。
【文檔編號(hào)】A61P31/14GK103571798SQ201210279232
【公開(kāi)日】2014年2月12日 申請(qǐng)日期:2012年8月7日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月7日
【發(fā)明者】李澤君, 李國(guó)新, 肖亞莉, 李雪松, 滕巧泱 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所