專利名稱：：人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的新用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明主要涉及一種人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的用途。尤其涉及人參皂苷Rd在制備治療潰瘍性結(jié)腸炎藥物的用途。
背景技術：
：潰瘍性結(jié)腸炎(UlcerativeColitis,UC)是一種病因及發(fā)病機制均不明確的慢性結(jié)腸炎癥，腹痛、腹瀉、黏液便和血便是其主要臨床癥狀。UC急性暴發(fā)型病死率高，慢性持續(xù)型癌變率高、易反復發(fā)作，目前無特效藥物，故被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治病之一。本病在歐美國家發(fā)病率較高，患病率為0.4%。1%。，在國內(nèi)未見精確的統(tǒng)計報告數(shù)據(jù)，但近年來呈明顯增加的趨勢。由于眾多醫(yī)療和科研工作者對UC的關注，治療UC的新藥不斷出現(xiàn)。目前，柳氮磺吡啶(SASP)作為臨床上普遍應用的治療潰瘍性結(jié)腸炎的常用藥，療效較明顯，并且它及其代謝產(chǎn)物5-氨基水楊酸(5-ASA)被發(fā)現(xiàn)具有較強的清除氧應激反應代謝產(chǎn)物的作用，但SASP可能在一些患者治療過程中產(chǎn)生與劑量相關的厭食、惡心、皮疹及血液毒性(主要包括中性粒細胞減少、粒細胞缺乏癥、溶血性貧血、血小板減少癥、兩種血細胞減少、各類血細胞減少或再生障礙性貧血)等不良反應，部分男性患者可能會出現(xiàn)精子活動能力下降而致不育癥。上述不良反應使得SASP用藥具有一定局限性。因此發(fā)現(xiàn)新的、副作用低的治療潰瘍性結(jié)腸炎的新藥，仍是目前國內(nèi)外新藥研究的一個重點。三七(Panaxnotoginseng)屬五加科人參屬植物，其主要活性成分為達瑪烷型四環(huán)三萜皂苷，與人參成分相似，入藥部位多為根塊。傳統(tǒng)中醫(yī)學理論證實三七具有強壯補虛和止血的作用，多用于治療一些心血管疾病、炎癥和各種身體疼痛、外傷及有外傷導致的體內(nèi)體外出血癥狀。大量的植物化學和藥理學研究證實達瑪烷型四環(huán)三鵬皂苷為其主要的藥理活性成分，其中人參皂苷Rd占總皂苷的4.07%，是其中主要具有顯著藥理活性成分的四種皂苷之一(Rgl、Rbl、Rl、Rd)。人參皂苷Rd是二醇型人參皂苷在人體腸道內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物之一，具有廣泛的生物活性，對心腦血管、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等作用獨特，在鎮(zhèn)痛、神經(jīng)保護作用方面作用顯著。人參皂苷Rd對腦缺血的保護作用的臨床III期研究業(yè)已完成，正在申請新藥生產(chǎn)批文。我們的前期工作還表明，Rd抑制有絲分裂原ConA誘導的人T細胞增殖、抑制遲發(fā)性超敏反應，抑制膠叉菜膠誘導的大鼠關節(jié)炎，有極強的抗炎作用(該項研究結(jié)果已由本發(fā)明人申請Rd治療關節(jié)炎等的發(fā)明專利，專利初審通過，見《人參皂苷-Rd丙二醇水溶液制備及其抗炎、免疫抑制與抗器官移植排斥的新用途》，受理號200810208119.2)。但具有抗炎作用的藥物(如乙酰水楊酸類)并不一定具有治療潰瘍性結(jié)腸炎的作用，而關于人參皂苷Rd治療大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的研究國內(nèi)外未見報道，尚需實驗證實。人參皂苷-Rd，是從中藥五加科植物三七中經(jīng)多步分離而得的一種單體化合物，屬原人參二醇型皂苷。它的中文化學名為20-(S)-原人參二醇-3-20-0-l3-D-吡喃葡萄糖苷，英文化學名為20(S)—Protopanaxadiol3_0_[P_D_glucopyranosyl(1—2)_P_D_glucopyranosyl]_20-O-P-glucopyranoside，化學結(jié)構(gòu)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>C48H820183H20;1001.20關于從三七藥材中提取人參皂苷Rd的方法，首先提取粗總皂苷，然后通過大孔吸附樹脂乙醇梯度洗脫分離去大多數(shù)其它組分，獲得雜質(zhì)較少的Rd組分，再經(jīng)硅膠柱以"氯仿2甲醇2水"溶劑梯度洗脫，一次性得到純度達93.16%的Rd單體。最終純度可達95%以上。(中藥材第29巻第3期2006年3月，《從三七藥材中快速批量分離提取人參皂苷Rd的方法》劉德育，曾颯中山大學藥學院，廣東廣州510080)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于避免現(xiàn)有技術的不足之處而提供一種人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用。本發(fā)明的目的通過試驗說明人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用。所述的人參皂苷Rd在制備治療潰瘍性結(jié)腸炎藥物的應用，是人參皂苷Rd在制備治療潰瘍性結(jié)腸炎藥物的應用。所述的人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用，是人參皂苷Rd在制備治療非細菌性慢性結(jié)腸炎藥物的應用。所述的人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用，是人參皂苷Rd口服制劑在制備治療潰瘍性結(jié)腸炎藥物的應用。所述的人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用，其特征是所述的口服制劑為為膠囊、微囊、脂質(zhì)體、顆粒劑、片劑、口服液。所述的人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用，人參皂苷Rd為從三七中提取的人參皂苷Rd單體化合物，其中人參皂苷Rd單體為95%以上；還包括從五加科人參屬植物人參、西洋參的根、莖、葉、花、果實中提取分離得到的人參皂苷Rd單體化合物。本發(fā)明的有益效果(1)通過實驗首次證實了人參皂苷Rd對實驗性結(jié)腸炎的治療作用。(2)人參皂苷及其活性代謝物在大鼠口服給藥后生物利用低、吸收少，但具有大量聚集在結(jié)腸部位的特點，結(jié)合其具有的強大的抗炎作用，充分展示了人參皂苷Rd對結(jié)腸炎的治療作用，揭示了具有抗氧化作用的鈣池操縱的鈣離子通道阻滯劑對結(jié)腸炎的治療價值，立意新奇。(3)采用形態(tài)與生化測定(MP0活性測定)相結(jié)合，定性、定量觀察藥物對潰瘍性結(jié)腸炎愈合的影響，使對藥物療效的評價更為可靠。機理研究指標緊密結(jié)合結(jié)腸炎的已知有關病理生理機制和人參皂苷Rd抗氧化特性，如炎細胞浸潤(MP0)、氧化損傷與抗氧化能力變化(SOD、GSH-Px)、脂質(zhì)過氧化物(MDA)生成，深入、系統(tǒng)、全方位地揭示人參皂苷Rd抗氧化治療與促進潰瘍性結(jié)腸炎愈合的關系，進而闡明人參皂苷Rd在腸粘膜抗損傷及修復過程中的調(diào)節(jié)作用，思路獨特，構(gòu)思新穎。(4)目前UC的免疫學發(fā)病機制特別是細胞因子發(fā)病機制越來越受到人們的重視。而促炎性細胞因子與抑炎性細胞因子之間的平衡失調(diào)所致的免疫異常被視為UC的重要發(fā)病機制，本實驗也證實了人參皂苷Rd能顯著抑制促炎細胞因IL-113、TNF-a的生成，以及促進抗炎細胞因子IL-10的表達，從免疫學角度闡述了人參皂苷Rd治療結(jié)腸炎與其能抑制結(jié)腸組織致炎因子的表達，促進抑炎因子生成及調(diào)節(jié)免疫平衡密切相關，其觀點新穎。(5)最新研究資料表明，人參皂苷Rd是一種新型的電位非依賴型膜受體鈣激活通道(ROCC)和f丐池操縱的f丐離子通道(SOC)阻滯劑，可以通過ROCC和SOC途徑顯著地抑制受體操縱性Ca"內(nèi)流?，F(xiàn)有的抗炎藥如乙酰水楊酸類、糖皮質(zhì)激素類與及抗UC藥柳氮磺吡啶也均不具鈣拮抗作用。用特異性的SOC阻滯劑來調(diào)節(jié)炎癥反應必將為炎癥的防治提供一個新的靶點，結(jié)合本課題研究結(jié)果，我們預測人參皂苷Rd這一新型的非電位依賴性鈣離子通道阻滯劑可能會成為治療潰瘍性結(jié)腸炎及其它炎癥的新型的治療藥物，為結(jié)腸炎這一被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治疾病的治療提供了一種新的思路。(6)通過系統(tǒng)、全面研究人參皂苷Rd對實驗性結(jié)腸炎的治療作用機理，全方位的揭示了人參皂苷Rd對結(jié)腸炎的治療作用機理，為潰瘍性結(jié)腸炎的藥物治療提供了新的論據(jù)及觀點。具體實施例方式以下結(jié)合最佳實施例作進一步詳述實施例1:人參皂苷Rd治療大鼠急性潰瘍性結(jié)腸炎的量效關系及作用機理1.材料與方法1.1藥物和動物Wistar大白鼠，體重180200g，c^，購自蘭州大學實驗動物中心，動物合格證號醫(yī)動字第SCXK(甘)2009-0004。人參皂苷Rd(純度>95%，制備方法參照已公開專利《化合物(1)，其提取方法及包含所述化合物的藥物組合物》，授權公告號CN1176101C):廣東泰禾生物藥業(yè)有限公司批號080312;柳氮磺吡啶上海信誼嘉華有限公司產(chǎn)品，批號081013。1.2主要試齊U2，4，6-三石肖基苯磺酸(2，4，6_Trinitrobenzenesulfonicacidsolution，TNBS)購于Sigma公司，5%(W/V)水溶液，貨號P2297-10ML，批號20070315);無水乙醇(天津市博迪化工有限公司天津光復研究所，20080327分析純)；冰醋酸(北京化工廠，批號000108，分析純)；GSH-PX試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，批號20080416;髓過氧化物酶(MP0)、超氧化物歧化酶(SOD)、氧化型谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)及考馬斯亮藍試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，試劑批號20090730。1.3主要儀器TGL-16型低溫高速離心機，上海安亭科學儀器廠制造；DY_2型電動玻璃勻漿機，寧波新芝生物科技股份有限公司制造；722S型紫外分光光度儀，上海精密科學儀器有限公司制造KA-1000型臺式離心機上海安亭科學儀器廠制造。2方法2.1分組大鼠70只，按體重隨機分為6組，分別為正常對照組(8只)、模型對照組(14只)、陽性對照組(12只)和人參皂苷Rd低劑量組(12只)、中劑量組(12只)、高劑量組(12只)。2.2急性潰瘍性結(jié)腸炎模型的制備各組大鼠禁食不禁水48h，記錄體重，腹腔注射(i.P)戊巴比妥鈉40mg/kg麻醉。麻醉后，大鼠頭部朝下、肛門朝上倒置，用灌胃針(16號)緩慢插入大鼠結(jié)腸部(深度為距肛門8cm處)，緩慢注入TNBS/50%乙醇溶液(0.4ml/100g大鼠體重，TNBS100mg/kg大鼠體重)。推注耗時約lmin(推注期間防止大鼠腹部被擠壓)。致炎劑推注完畢后緩慢抽出灌胃針，用木夾夾住大鼠肛門，懸掛大鼠尾巴，使整個鼠身傾斜大約60。，保持約30min，取下夾子，把大鼠放歸籠中，保持大鼠體位為頭低臀高狀態(tài)，待自然清醒。正常對照組大鼠分別緩慢注入等體積的生理鹽水，其余操作同前。2.3給藥致炎24h后，正常對照組、模型對照組用注射用水灌胃(lml/100g)，陽性對照組大鼠給予SASP(30mg/kg，lml/100g大鼠體重)溶液灌胃，Rd低、中、高劑量組大鼠分別按人參皂苷Rd20、40、80mg/kg，lml/100g灌胃。連續(xù)給藥7d，每天給藥1次。2.4結(jié)腸炎癥的評價，標本的采集及處理2.4.1每日測體重，觀察腹瀉及糞便性狀，精神活動，食量等。2.4.2大鼠在給藥7d后，腹腔注射戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉，腹主動脈取血，取出肛門至結(jié)腸末端(回盲瓣水平，不含盲腸和闌尾)的整個結(jié)腸和直腸段，沿腸系膜緣剪開腸腔，用冷生理鹽水沖凈腸內(nèi)容物，用濾紙拭干凈后平鋪于塑膠板上(腸粘膜面朝上)，按表1所列評分標準進行大體評分后稱結(jié)腸濕重、量所取腸段長度。取一小塊病變部位結(jié)腸組織，平鋪于紙板上后用4%甲醛固定，石蠟包埋，HE染色，按表2所列評分標準(參考Dieleman等提出的評分標準，并稍作修改)進行組織學評分。再取部分病變部位結(jié)腸組織準確稱重，用眼科剪剪碎，加入冷生理鹽水，低溫下制成10%組織勻漿，取部分未離心的勻漿組織用以測MPO，余下的以3000r/min離心10min，取上清液，-20°〇冰箱保存，待測MDA、SOD、GSH-PX等各項生化指標。取出的血液4t:放置2h后，以3000r/min離心10min，分離血清，-2(TC冰箱保存，待測生化指標。表1結(jié)腸大體與組織學損傷評分標準組織學評分標準CN101791316A大體評分標準0無損傷01充血水腫，但無潰瘍12有潰瘍但無明顯的炎癥23有潰瘍，僅有一處出現(xiàn)炎癥34有兩處或以上潰瘍和炎癥，潰瘍大小4<lcm5有兩處或以上潰瘍或炎癥，至少一處潰5瘍或炎癥部位"cm_正常結(jié)腸組織炎癥或潰瘍病灶限于粘膜層炎癥或潰瘍病灶限于粘膜與粘膜下層炎癥或潰瘍病灶深入固有肌層透壁性炎癥或潰瘍病灶深入漿膜層透壁性炎癥或大面積潰瘍深入漿膜層并穿IL_2.4.3檢測指標的測定1)組織中髓過氧化物酶(MPO)活力測定用分光光度法測定。該酶為髓性過氧化物酶，該酶具有使過氧化氫還原的能力，利用這一特點可以分析酶的活力，并定量測定中性白細胞的數(shù)目。取未離心的10%結(jié)腸組織勻漿901，按試劑盒說明書進行操作，通過供氫體鄰連茴香胺供氫后生成黃色化合物，在460nm處通過比色測定吸光度，從而推算出MPO酶活力單位。組織中酶活力單位定義為每克組織濕片在37t:的反應體系中H202被分解lymol為一個酶活力單位。血清中MPO活力測定測定原理同上，取血清90iU，按試劑盒說明書進行操作，在460nm處通過比色測定吸光度，從而推算出MP0酶活力單位。血清中酶活力單位定義為每升血清在37。C的反應體系中H202被分解1mol為1個酶活力單位。2)Rd對UC大鼠結(jié)腸組織氧化損傷及抗氧化能力的影響組織中丙二醛(MDA)含量測定MDA為脂質(zhì)過氧化物，用硫代巴比妥酸(TBA)比色法測定。過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛可與硫代巴比妥酸縮合，形成紅色產(chǎn)物，在532nm處有最大吸收峰。取10%結(jié)腸組織勻漿上清200測定，以每毫克組織蛋白納摩爾數(shù)(nmol/mgprot)表不。組織中超氧化物岐化酶(SOD)活力測定用黃嘌呤_黃嘌呤氧化酶法檢測。通過黃嘌呤_黃嘌呤氧化酶反應系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基，后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑的作用下呈現(xiàn)紫紅色，用可見分光光度計在550nm處測定其吸光度。當被測樣品中含SOD時，則對超氧陰離子有轉(zhuǎn)移性抑制作用，使形成的亞硝酸鹽減少，比色時測定管的吸光度值低于對照管的吸光度值，通過公式計算可求出被測樣品中的SOD活力。取1%結(jié)腸組織上清70按試劑盒說明書進行操作。組織勻漿中總SOD活力單位(U)定義為每毫克組織蛋白在1ml反應液中SOD抑制率達50%時所對應的SOD量為一個SOD活力單位。組織中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)含量測定GSH-Px可以促進過氧化氫(H202)與還原型GSH反應生成H202及氧化型谷胱甘肽(GSSG)，谷胱甘肽過氧化物酶的活力可用其酶促反應的速度來表示，測定此酶促反應中還原型谷胱甘肽的消耗，則可求出酶的活力。GSH-Px的活力以催化GSH的反應速度來表示，由于這兩個底物在沒有酶的條件下，也能進行氧化還原反應(稱非酶促反應)，所以最后計算此酶活力時必須扣除非酶促反應所引起的GSH減少的部分。取10X結(jié)腸組織勻漿上清60ia，按試劑盒說明書操作。3)Rd對UC大鼠結(jié)腸組織中致炎細胞因子釋放的影響組織中TNF-a測定采用雙抗體夾心ELISA法檢測。操作步驟1.標準品的稀釋將標準品(360ng/L)分別稀釋成240ng/L，160ng/L，80ng/L，740ng/L，20ng/L5個濃度。2.加樣分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品空中先加樣品稀釋液40iU，然后再加待測樣品10iU(樣品最終稀釋濃度為5倍)。加樣時將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育用封板膜封板后置37t:溫育30分鐘。4.配液將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。5.洗滌小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。6.加酶每孔加入酶標試劑50ii1，空白孔除外。7.溫育操作同3。8.洗滌操作同5。9.顯色每孔先加入顯色劑A50iil，再加入顯色劑B50ia，輕輕震蕩混勻，37t:避光顯色15分鐘。10.終止每孔加終止液50ii1，終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。組織中IL-113的測定采用雙抗體夾心ELISA法檢測。操作步驟1.標準品的稀釋將標準品(45ng/L)分別稀釋成30ng/L，20ng/L，10ng/L，5ng/L，2.5ng/L5個濃度。2.加樣分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品空中先加樣品稀釋液40iU，然后再加待測樣品10iU(樣品最終稀釋濃度為5倍)。加樣時將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育用封板膜封板后置37t:溫育30分鐘。4.配液將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。5.洗滌小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。6.加酶每孔加入酶標試劑50ii1，空白孔除外。7.溫育操作同3。8.洗滌操作同5。9.顯色每孔先加入顯色劑A50iil，再加入顯色劑B50ia，輕輕震蕩混勻，37t:避光顯色15分鐘。10.終止每孔加終止液50ii1，終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。3)Rd對UC大鼠結(jié)腸組織中抑炎細胞因子IL-10釋放的影響采用雙抗體夾心ELISA法檢測。8操作步驟1.標準品的稀釋將標準品(72ng/L)分別稀釋成48ng/L，32ng/L，16ng/L，8ng/L，4ng/L5個濃度。2.加樣分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品空中先加樣品稀釋液40iU，然后再加待測樣品10iU(樣品最終稀釋濃度為5倍)。加樣時將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育用封板膜封板后置37t:溫育30分鐘。4.配液將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。5.洗滌小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。6.加酶每孔加入酶標試劑50iU，空白孔除外。7.溫育操作同3。8.洗滌操作同5。9.顯色每孔先加入顯色劑A50iil，再加入顯色劑B50ia，輕輕震蕩混勻，37t:避光顯色15分鐘。10.終止每孔加終止液50ii1，終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。2.5統(tǒng)計學處理參數(shù)檢驗用Student'st檢驗，均以均數(shù)±標準差(；±s)表示P<0.01，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義，非參數(shù)檢驗用Mann-WhitneyU檢驗。3.結(jié)果3.1大鼠外觀體征一般觀察用TNBS-50%乙醇建立大鼠潰瘍性結(jié)腸炎，動物于造模第2d出現(xiàn)稀便、消瘦、食欲減退、蜷縮、毛發(fā)不光澤、活動減少等。各給藥組動物外觀癥狀均輕于模型對照組。3.2人參皂苷Rd對大鼠體重變化的影響在實驗期間，正常對照組體重呈增加趨勢，平均增加18.4%;模型對照組體重先減后增，但增長緩慢，平均增加9.4%;SASP組、GSPE低、中、高劑量組體重先減后增，但增加速度較模型對照組快，分別平均增加14.7%、12.2%、13.8%和12.3%。對各組大鼠處死前體重作統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示，模型對照組大鼠體重明顯低于正常對照組及各給藥組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01或P<0.05)，結(jié)果見表2表2人參皂苷Rd對UC大鼠體重變化的影響G士s，n=8_14)組別造模前體重(g)處死前體重(g)正常對照組172±10.86203±14.44模型對照組171±6.91187±5.78**陽性對照組172±9.76198±11.78#Rd低劑量組174±8.56195±8.67#Rd中劑量組174±11.94193±19.57#Rd高劑量組177±11.89196±14.88#模型對照組與正常對照組比較rp<0.01;給藥組與模型對照組比較<0.05，##p<0.013.3人參皂苷Rd對大鼠結(jié)腸濕重變化的影響與正常對照組相比，各給藥組大鼠結(jié)腸濕重指數(shù)都有所增加，其中模型對照組結(jié)腸濕重指數(shù)(結(jié)腸重量/結(jié)腸長度，mg/mm)增加最大，與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);各給藥組與模型對照組比較結(jié)腸濕重指數(shù)降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01或P<0.05)，見表3。表3人參皂苷Rd對UC大鼠結(jié)腸濕重指數(shù)變化的影響G±s，n=8_14)組別重量(g)長度(mm)結(jié)腸濕重指數(shù)(mg/mm)正常對照組1.33±0.22109.94±10.0612.13±1.50模型對照組2.03±0.54109.25±10.7020.00±4.94**陽性對照組1.62±0.41103.55±10.0513.48±5.19##Rd低劑量組1.68±0.41105.56±12.515.29±2.29#Rd中劑量組1.678±0.24107.00±5.12315.72±2.36#Rd高劑量組1.59±0.37105.56±6.5713.95±1.75"模型對照組與正常對照組比較**p<0.01;各給藥組與模型對照組比較#p<0.05，##p<0.013.4大體觀察評分結(jié)果與正常對照組比較，模型對照組結(jié)腸組織損傷明顯加重，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，與模型對照組比較，各給藥組結(jié)腸組織損傷明顯減輕，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。結(jié)果顯示見表4。表4人參皂苷Rd治療后UC大鼠結(jié)腸大體損傷評分結(jié)果(n=8_12)10評分/只數(shù)組別012345正常對照組8模型對照組"12423陽性對照組##72Rd低劑量組"2321Rd中劑量組^1Rd高劑量組"2513模型對照組與正常對照組比較,p<0.01;各給藥組與模型對照組比較，p<0.013.5病理組織學評分結(jié)果光鏡下觀察，模型對照組結(jié)腸粘膜組織內(nèi)可見大量炎性滲出物和組織壞死；人參皂苷Rd各劑量組潰瘍面可見大量再生上皮組織和新生腺體；與正常對照組比較，模型對照組結(jié)腸組織損傷明顯，差異有統(tǒng)計學意義(P〈0.01)，與模型對照組比較，各給藥組大鼠結(jié)腸組織損傷程度減輕，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。結(jié)果見表5。表5人參皂苷Rd治療后UC大鼠結(jié)腸組織學損傷評分結(jié)果(n=8_12)評分/只數(shù)組別012345正常對照組8模型對照組"121陽性對照組##72Rd低劑量組"63Rd中劑量組"41Rd高劑量組^46模型對照組與正常對照組比較,p<0.01;各給藥組與模型對照組比較，p<0.013.6Rd對白細胞浸潤程度的影響3.6.1Rd對大鼠血清中MPO活性的影響實驗各組大鼠血清中MPO含量值見表6，由表可見與正常對照組比較，模型對照組MPO活力明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P11<0.01);SASP給藥組，Rd低、中、高各劑量中MPO與模型對照組比較活力明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01或P<0.05)。3.6.2Rd對大鼠結(jié)腸組織中MPO活性的影響實驗各組大鼠結(jié)腸組織中MPO含量值見表6，由表可見與正常對照組比較，模型對照組MPO活力明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);SASP給藥組，Rd低、中、高各劑量中MPO活力與模型對照組比較明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01或P<0.05)。表6人參皂苷Rd對TNBS誘導的UC大鼠結(jié)腸組織及血清中MPO活力的影響(；±s，n=8-12)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>模型對照組與正常對照組比較**p<0.01，*p<0.05;各給藥組與模型對照組比<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>3.7Rd對UC大鼠結(jié)腸組織氧化損傷及抗氧化能力的影響3.7.lRd對大鼠結(jié)腸組織中MDA含量的影響實驗各組大鼠結(jié)腸組織中MDA含量測定值見表7，由表可見與正常對照組比較，模型對照組MDA含量明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與模型對照組比較，各給藥組結(jié)腸組織中MDA含量明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。3.7.2Rd對大鼠結(jié)腸組織GSH-PX活性的影響實驗各組大鼠結(jié)腸組織中GSH-PX活性測定值見表7，由表可見與正常對照組比較，模型對照組GSH-PX活性明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);SASP給藥組，Rd低、中、高劑量中GSH-PX活性較模型對照組明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。3.7.3Rd對大鼠結(jié)腸組織SOD活性的影響實驗各組大鼠結(jié)腸組織中SOD活性測定值見表7，由表可見與正常對照組比較，模型對照組SOD活性明顯降低差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);SASP給藥組，Rd低、中、高劑量中GSH-PX活性較模型對照組明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。表7人參皂苷Rd對TNBS誘導的大鼠UC結(jié)腸組織MDA含量、GSH-Px與SOD活力的影響(；士s，n=8-12)組別結(jié)腸組織GSH-PX活力(U/mgprot)結(jié)腸組織MDA含量(nmol/mgprot)結(jié)腸組織SOD活力(U/mgprot)正常對照組80.74±31.021.06±0.48106.71±21.64模型對照組55.01±23.04**1.94±0.76**89.90±9.66*陽性對照組48.40±10.81##1.03±0.48##130.16±18.59##Rd低劑量組75.41±14.75##0.97±0.33##129.50±20.92##Rd中劑量組74.88士8.05##0.85±0.53##142.99±18.68##Rd高劑量組78.39±26.48##0.82±0.32##144.39±41.34##3.8Rd對UC大鼠結(jié)腸組織中致炎細胞因子表達水平的影響3.8.1Rd對大鼠結(jié)腸組織TNF-a表達水平的影響實驗各組大鼠結(jié)腸組織中TNF-a表達水平測定值見表8，由表可見與正常對照組比較，模型對照組TNF-a表達水平顯著增加(P<0.01);SASP給藥組，Rd低劑量、中、高劑量中TNF-a表達水平較模型對照組明顯降低(P<0.01)。3.8.2Rd對大鼠結(jié)腸組織IL-IP表達水平的影響實驗各組大鼠結(jié)腸組織中IL-IP水平測定值見表8，由表可見與正常對照組比較，模型對照組IL-113表達水平明顯增高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);SASP給藥組，Rd低、中、高劑量中IL-IP表達水平較模型對照組明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。3.9Rd對UC大鼠結(jié)腸組織中抑炎細胞因子IL-10水平的影響實驗各組大鼠結(jié)腸組織中IL-10水平測定值見表8，由表可見與正常對照組比較，模型對照組IL-10表達水平顯著降低(P<0.01);SASP給藥組，Rd低劑量組與高劑量中IL-10表達水平較模型對照組明顯增加(P<0.05)。Rd中劑量組IL-10表達水平值與模型對照組相比較有增加的趨勢但差異不具有統(tǒng)計學意義。表8人參皂苷Rd對TNBS誘導的大鼠UC結(jié)腸組織IL_1P、TNF_a、IL-10表達水平的影響(；±s，n=6-12)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>模型對照組與正常對照組比較**p<0.01，*p<0.05;各給藥組與模型對照組比較抑p<0.01，#p<0.054.結(jié)論近來國內(nèi)外學者對于人參皂苷進行了大量研究，研究發(fā)現(xiàn)這些皂苷類活性成分具有血液系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)，物質(zhì)代謝系統(tǒng)，以及抗炎、抗衰老、抗腫瘤等多方面的藥理活性。本課題研究的對象是其主要活性成分之一人參皂苷Rd，研究了其對于TNBS-50X乙醇誘導的大鼠急性潰瘍性結(jié)腸炎的治療作用，并對其抗炎機理進行了初步研究。大鼠結(jié)腸濕重指數(shù)(結(jié)腸重量/長度)被認為是可以指示TNBS-50X誘導的實驗性大鼠潰瘍性結(jié)腸炎嚴重程度的較為穩(wěn)定和可靠的指標之一，本研究結(jié)果表明不同劑量人參皂苷Rd給藥組大鼠結(jié)腸濕重指數(shù)與模型對照組相比較顯著降低。人參皂苷Rd還能防止TNBS-50%誘導的UC大鼠體重下降；從大體和病理學評分也可以看到人參皂苷Rd能夠減輕大體形態(tài)學及病理學病變，顯著減少了組織壞死和潰瘍的形成、減輕炎性細胞浸潤，促進上皮細胞和潰瘍面的修復。國內(nèi)外研究結(jié)果已證實炎性介質(zhì)和活性氧的代謝產(chǎn)物與炎癥性腸病的產(chǎn)生和發(fā)展有關。大量的動物實驗也證實活性氧的代謝產(chǎn)物可能與炎癥的發(fā)生密不可分，同時研究結(jié)果顯示炎性腸炎患者粘膜中過量、大量的活性氧的代謝產(chǎn)物可能與此類疾病的發(fā)病有關。這些代謝產(chǎn)物可能是導致潰瘍性結(jié)腸炎患者粘膜損傷的誘因之一。吞噬細胞是其主要來源，在炎癥發(fā)病期間這些細胞大量的滲入腸粘膜，發(fā)生應激反應釋放大量的活性氧，而導致腸粘膜的氧化損傷。盡管腸粘膜具有很好的抗氧化損傷的防御機制，但與機體的其它器官如肝和肺相比能力比較低。氧應激產(chǎn)物的過度釋放可能破壞腸道系統(tǒng)本身的粘膜防御機制。目前，腸粘膜中由于吞噬細胞應激產(chǎn)生的過量活性氧和脂質(zhì)過氧化物的增加已作為描述炎性腸炎患者活檢標本(IBD)的指標。個別研究者還發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rd具有免疫佐劑活性，并且能夠通過調(diào)節(jié)細胞因子的產(chǎn)生和表達來激發(fā)和平衡Thl和Th2免疫應答反應。由于細胞因子在免疫系統(tǒng)調(diào)控有著重要地位，目前UC的免疫學發(fā)病機制特別是細胞因子發(fā)病機制越來越受到人們的重視。而促炎性細胞因子與抑炎性細胞因子之間的平衡失調(diào)所致的免疫異常被視為UC的重要發(fā)病機制。本發(fā)明也證實了人參皂苷Rd在清除氧自由基、抗氧化，免疫調(diào)劑的作用，其對于大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的作用機制我們可從以下幾個方面進行進一步的探討和總結(jié)?！d對白細胞浸潤程度的影響①髓性過氧化物酶(MPO):是中性粒細胞中含量較高的一種酶，其含量的增高可以反映中性粒細胞在某一組織中浸潤，間接反映炎癥在組織中的存在，而炎癥組中MPO水平可反映中性粒細胞的浸潤數(shù)目和活性，MPO已被作為評價腸道炎癥嚴重程度的指標之一^'^。本實驗中正常對照組大鼠結(jié)腸及血清樣本中MPO活力在各組中最低，模型對照組MPO活性在各組中最高，這也說明了模型對照組中性粒細胞浸潤及腸道炎癥損傷最嚴重。與模型對照組相比較，SASP組，人參皂苷Rd低、中、高劑量組UC大鼠結(jié)腸組織中的MPO活性明顯降低(呈劑量依賴關系)，[18]MP0檢測結(jié)果與病理學組織檢測結(jié)果相符。說明Rd能減輕中性粒細胞浸潤程度，緩解炎癥。二、Rd對UC大鼠結(jié)腸組織氧化損傷及抗氧化能力的影響①丙二醛(MDA)與超氧化物岐化酶(SOD):機體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸(PUFA)，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，并因此形成脂質(zhì)過氧化物，如丙二醛(MDA)、羥基、羰基、酮基、氫過氧基或內(nèi)過氧基，以及新的氧自由基等。氧自由基不但通過生物膜中多不飽和脂肪酸的過氧化引起細胞損傷，而且還能通過脂氫過氧化物的分解產(chǎn)物引起細胞損傷。因而測試MDA的量可反映機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接的反應出細胞的損傷程度；并且MDA與SOD有著密切聯(lián)系，SOD活力的高低間接反應了機體清除氧自由基的能力，而MDA得高低又間接反應了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度。本實驗中，模型對照組大鼠結(jié)腸組織MDA含量較正常對照組明顯升高，而SOD活力明顯降低，各用藥組與模型對照組相比較結(jié)腸組織中的MDA含量明顯降低，而SOD活力顯著升高且呈劑量依賴關系。這一結(jié)果表明Rd在治療潰瘍性結(jié)腸炎損傷中有較強的抗氧化作用，且其抗炎作用可能與減輕脂質(zhì)過氧化反應有關。②谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px):是機體內(nèi)廣泛存在的一種重要的過氧化物分解酶，它的生理功能主要是催化GSH參與過氧化反應，清除在細胞呼吸代謝過程中產(chǎn)生的過氧化物和羥自由基，從而減輕細胞膜多不飽和脂肪酸的過氧化作用。從而保護細胞膜的結(jié)構(gòu)及功能不受過氧化物的干擾及損害。因此GSH-Px活性的變化也可反映機體抗氧化能力的變化。本實驗中，模型對照組大鼠結(jié)腸組織GSH-PX活力較正常對照組顯著降低，而SASP組及人參皂苷Rd低、中、高劑量與模型對照組相比較GSH-PX活力明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義，此結(jié)果進一步證實了人參皂苷Rd較強的抗氧化能力。三、人參皂苷Rd對細胞因子平衡的影響①抑制促炎因子的表達IL-113是一種前炎癥因子，它和TNF-a、IL_6、IL_8等細胞因子在誘導結(jié)腸粘膜炎癥中有重要作用，并參與炎癥的持續(xù)和放大。它通過激活免疫細胞級聯(lián)反應使炎癥反應加重。腹瀉是腸道炎癥的主要癥狀，而IL-ie似乎是腹瀉的主要剌激物。高劑量IL-IP引起上皮細胞壞死、水腫、中性粒細胞浸潤和杯狀細胞缺失。目前認為其在UC中發(fā)病作用有4個方面(1)UC粘膜固有層中活化的巨噬細胞可釋放IL-113，激活樹突樣細胞，吞噬、消化外來抗原，釋放抗原片段并呈遞至T淋巴細胞發(fā)生免疫反應；(2)IL-1P能增加由巨噬細胞所產(chǎn)生的細胞因子如IL-6、TNF-a和IL_8，使得中性粒細胞向炎癥部位聚集，進入腸道病變部位，從而引起一系列的腸道病變，如結(jié)腸上皮的損傷、小血管炎、隱窩膿腫等，最終造成UC的發(fā)病；(3)IL-1P與IL-1受體的失衡是UC發(fā)生的重要環(huán)節(jié)；(4)IL-113可以通過誘導釋放H202，影響的Ca2+釋放和NK-A的信號轉(zhuǎn)導途徑的開關，從而導致UC患者的結(jié)腸平滑肌收縮功能紊亂。本實驗中模型對照組大鼠結(jié)腸組織中IL-IP表達水平較正常對照組顯著升高，而人參皂苷Rd各劑量組能夠顯著降低潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織中IL-IP表達水平，說明人參皂苷Rd減輕UC組織損傷的主要機制之一是降低病變部位的IL-113表達水平。腫瘤壞死因子(TNF-a)是一種重要的促炎癥因子和免疫調(diào)節(jié)因子，由活化的巨噬細胞和T淋巴細胞分泌的一種參與UC發(fā)病的細胞因子，TNF-a引起腸道粘膜損傷的機制包括釋放血小板活化因子、生成白三烯和氧自由基，誘導細胞內(nèi)誘生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表達及細胞內(nèi)四氫生物蝶呤(一種NO促生因子)的生成，使NO生成增加而引起細胞的損傷；TNF-a可調(diào)節(jié)中性粒細胞和巨噬細胞的增生、成熟和活化，并促進其粘附、游走和脫顆粒，增強它們的吞噬殺傷功能，促進它們釋放炎癥蛋白和炎癥介質(zhì)，直接參與腸粘膜的損傷；TNF-a上調(diào)的血管內(nèi)皮細胞粘附分子和趨化性細胞因子IL_8的表達而增加炎癥細胞的聚集；TNF-a也能誘生IL-1P的生成而致腸粘膜的損傷；TNF-a過多還可通過激活半胱天冬蛋白酶(Caspases)導致腸道內(nèi)淋巴細胞凋亡，降低腸粘膜的免疫功能。TNF-a在TNBS誘導的結(jié)腸炎發(fā)病機制中發(fā)揮著重要作用，TNF_a是一個具有顯著趨化活性細胞因子，在IL-113的協(xié)同作用下，使相關的酶激活(包括一氧化氮合酶，磷脂酶A、環(huán)氧化酶和蛋白酶等)，從而誘導粘附分子和其他炎性細胞因子表達，直接或間接導致粘膜損傷，這些細胞因子是調(diào)節(jié)和控制炎癥反應重要的生物活性蛋白，與潰瘍性結(jié)腸炎(UC)的發(fā)病機制密切相關。本實驗中模型對照組大鼠結(jié)腸組織TNF-a含量較正常對照組顯著升高，而人參皂苷Rd各給藥組能夠顯著降低潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織中TNF-a表達水平。這一結(jié)果表明人參皂苷Rd治療TNBS誘導的大鼠急性潰瘍性結(jié)腸炎有顯著的治療效果與其能降低組織內(nèi)致炎因子TNF-a表達及調(diào)節(jié)免疫平衡密切相關。②對抑炎因子的調(diào)控作用白介素10(IL-10)是1989年Fiorentino等發(fā)現(xiàn)具有多重功效的炎癥抑制性細胞因子，參與多種免疫反應，其主要的生物學活性是免疫抑制作用，能抑制單核細胞、中性粒細胞、嗜酸粒細胞等產(chǎn)生促炎性因子和趨化因子抑制IL-113、L-6、L-8、TNF-a，粒細胞-巨噬細胞集落剌激因子(GM-CSF)等的產(chǎn)生；阻止抗原特異T細胞的增殖，抑制抗原遞呈細胞(APC)表面的組織相容性復合物(MHC)-II類分子和某些剌激因子如B7的表達，降低APC的抗原遞呈能力，下調(diào)效應細胞的IL-2mRNA的表達，抑制IL_2的產(chǎn)生，抑制炎性介質(zhì)一氧化氮、氧自由基、前列腺素等的合成；抑制巨噬細胞的炎癥相關酶iNOS(誘導型一氧化氮合酶)和C0X-2(環(huán)氧合酶)的表達；通過抑制IFN-Y的產(chǎn)生抑制自然殺傷NK細胞的活性，抑制ThO細胞向Thl細胞的轉(zhuǎn)化，抑制炎癥細胞的遷移。還能抑制由LPS誘導的組織因子的表達，從而抑制凝血系統(tǒng)的活性。另外IL-10還具有免疫剌激作用，可促進B細胞的增殖和分化，產(chǎn)生大量IgG、IgA、IgM，還可增加靜止B細胞的存活率，在組織特異性自身免疫性損傷的啟動和發(fā)展中起著關鍵性調(diào)節(jié)作用。1993年，Kuhn，Lohler，Rennick，Rajewsky，和Muller等研究者發(fā)現(xiàn)IL-10基因敲除的小鼠會誘發(fā)腸道炎癥，并且IL-10的變化與潰瘍性結(jié)腸炎病情變化程度一致，也與治療效果一致。本實驗中模型對照組大鼠結(jié)腸組織IL-10含量較正常對照組顯著降低，人參皂苷Rd低劑量組、高劑量與模型對照組相比較結(jié)腸組織中的IL-10含量顯著增加，這一結(jié)果表明Rd能夠顯著的促進抑炎因子IL-10的表達。由上述結(jié)果可知，人參皂苷Rd治療TNBS/50X誘導的大鼠急性潰瘍性結(jié)腸炎有明顯療效其主要機理之一是能顯著的抑制促炎細胞因子IL-113、TNF-a的生成，以及促進抗炎細胞因子IL-10的表達。四、與鈣離子通道的關系最新研究結(jié)果證實人參皂苷Rd為一新型的非電位依賴性鈣離子通道阻滯劑，而電位非依賴性鈣通道是通過剌激細胞膜受體(膜受體鈣激活通道，ROCC)或者是肌質(zhì)網(wǎng)鈣離子貯存池衰減(鈣池操縱的鈣離子通道，SOC)而完成細胞內(nèi)鈣離子的調(diào)控功能，并且對于多種細胞例如上皮細胞，T淋巴細胞的功能起到非常重要的調(diào)控作用。炎癥細胞屬非興奮細胞，SOC是這些細胞胞外鈣內(nèi)流的主要通道。細胞質(zhì)內(nèi)鈣濃度的升高可使炎性細胞，包括中性粒細胞激活或發(fā)揮作用，可使相關酶和炎癥介質(zhì)激活、釋放。調(diào)節(jié)中性粒細胞胞質(zhì)16內(nèi)Ca"濃度可調(diào)節(jié)炎癥反應的強度。鈣拮抗劑有穩(wěn)定肥大細胞膜和阻止脫顆粒、抑制淋巴細胞轉(zhuǎn)化及IL-2的產(chǎn)生，降低表皮郎格罕細胞數(shù)的作用，鈣通道阻滯劑如硝苯地平、維拉帕米能阻斷鈣通道，減少胞內(nèi)Ca2+濃度，抑制肥大細胞脫顆粒，抑制炎性細胞因子的產(chǎn)生和釋放。但此類藥如硝苯地平阻滯電壓依賴性f丐通道(PDC)，而不影響SOC。由于炎癥細胞屬非興奮細胞，S0C抑制劑對炎細胞上的鈣離子通道較PDC阻滯藥更特異，應能更有效地阻礙炎細胞內(nèi)鈣濃度的上升而對炎癥產(chǎn)生抑制作用。已發(fā)現(xiàn)的S0C阻滯劑有陽離子、細胞色素P-450抑制劑、花生四烯酸代謝酶抑制劑等，但它們大多缺乏理想的特異性，或僅是工具藥。如前所述，現(xiàn)有的抗炎藥如乙酰水楊酸類、糖皮質(zhì)激素類與及抗UC藥柳氮磺吡啶也均不具鈣拮抗作用。用特異性的S0C阻滯劑來調(diào)節(jié)炎癥反應必將為炎癥的防治提供一個新的靶點，尋找能治療UC炎癥的特異性的S0C阻滯劑的研究有重要的理論價值和應用價值。實施例2:人參皂苷Rd治療大鼠急性潰瘍性結(jié)腸炎最佳給藥途徑方法用炎癥誘導劑三硝基苯磺酸(TNBS)/50%乙醇溶液誘導法建立大鼠急性潰瘍性結(jié)腸炎模型。將大鼠隨機分為模型對照組、Rd灌胃給藥組、Rd肌肉注射組。Rd給藥劑量為30mg/kg，每天給藥1次，連續(xù)給藥7天。各項指標具體檢測方法見實施實例1。結(jié)果①與模型對照組比，Rd灌胃給藥組及Rd肌肉注射組大鼠結(jié)腸濕重指數(shù)均明顯減輕，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01或P<0.05)，其中灌胃給藥組大鼠結(jié)腸濕重指數(shù)最低。②與模型對照組相比，Rd灌胃給藥及Rd肌肉注射能夠明顯降低UC大鼠結(jié)腸大體觀察評分及病理組織學評分，減輕大鼠結(jié)腸的病理學損傷(P<0.01)差異具有統(tǒng)計學意義。結(jié)論人參皂苷Rd對TNBS誘導的大鼠潰瘍性結(jié)腸炎有明顯的治療作用，且灌胃給藥方式為治療潰瘍性結(jié)腸炎最佳的給藥途徑。權利要求人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用。2.如權利要求l所述的人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用，其特征是人參皂苷Rd在制備治療潰瘍性結(jié)腸炎藥物的應用。3.如權利要求l所述的人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用，其特征是人參皂苷Rd在制備治療非細菌性慢性結(jié)腸炎藥物的應用。4.如權利要求1或2或3所述的人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用，其特征是人參皂苷Rd口服制劑在制備治療潰瘍性結(jié)腸炎藥物的應用。5.如權利要求4所述的人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用，其特征是所述的口服制劑為膠囊、微囊、脂質(zhì)體、顆粒劑、片劑、口服液。6.如權利要求l-3、5任意之一所述的人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用，其特征是人參皂苷Rd為從三七中提取的人參皂苷Rd單體化合物，其中人參皂苷Rd單體為95%以上；還包括從五加科人參屬植物人參、西洋參的根、莖、葉、花、果實中提取分離得到的人參皂苷Rd單體化合物。7.如權利要求4所述的人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用，其特征是人參皂苷Rd從三七中提取的人參皂苷Rd單體化合物，其中人參皂苷Rd單體為95%以上；還包括從五加科人參屬植物人參、西洋參的根、莖、葉、花、果實中提取分離得到的人參皂苷Rd單體化合物。全文摘要本發(fā)明主要涉及一種人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的用途。尤其涉及人參皂苷Rd在制備治療潰瘍性結(jié)腸炎藥物的用途。本發(fā)明通過試驗說明人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用。人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用是人參皂苷Rd在制備治療潰瘍性結(jié)腸炎藥物的應用。人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用是人參皂苷Rd在制備治療非細菌性慢性結(jié)腸炎藥物的應用。人參皂苷Rd在制備治療結(jié)腸炎藥物的應用是人參皂苷Rd口服制劑在制備治療潰瘍性結(jié)腸炎藥物的應用。本發(fā)明利用人參皂苷Rd口服難吸收、主要進入結(jié)腸內(nèi)這一特性，結(jié)合其具有的強大的抗炎作用，充分展示了人參皂苷Rd對結(jié)腸炎的治療作用，揭示了抗氧化劑對結(jié)腸炎的治療價值，立意新奇。文檔編號A61P1/00GK101791316SQ20101012940公開日2010年8月4日申請日期2010年2月16日優(yōu)先權日2010年2月16日發(fā)明者吳勇杰,范福林,黃艷輝申請人:蘭州大學;廣東泰禾醫(yī)藥科技有限公司