專利名稱：包括金屬導(dǎo)向裝置的體內(nèi)微創(chuàng)檢查設(shè)備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種經(jīng)體壁的檢查設(shè)備的功能，一種使用本發(fā)明的功能化設(shè)備在體 外分析底物的方法，以及這種設(shè)備用于制造一種用于診斷病人體內(nèi)癌癥、感染、炎癥、 神經(jīng)變性疾病或移植排斥的工具的用途。
背景技術(shù)：
檢查或體內(nèi)治療設(shè)備為本領(lǐng)域技術(shù)所公知。這樣的設(shè)備呈內(nèi)窺鏡類型的硬管 形式或者由軟管構(gòu)成的導(dǎo)管形式，這樣的導(dǎo)管，特別是通過天然路徑或者血管，插入生 物體內(nèi)，并且使其到達(dá)器官或特定組織。這些設(shè)備可以專門地消除血凝塊，或者當(dāng)它們 與光纖聯(lián)合時(shí)，可以顯現(xiàn)和體內(nèi)控制一個(gè)系統(tǒng)(如消化管)或一個(gè)器官(如結(jié)腸)的狀 態(tài)。然后，使由于使用這些設(shè)備對(duì)患者造成的創(chuàng)傷降至最低，但仍有待改善。然而， 用這些設(shè)備分析患者體內(nèi)的器官或者組織不一定是可能的。這種不可能性可能是由于與 血液循環(huán)或者天然路徑相比，對(duì)所述組織或器官的可接進(jìn)性降低，或者是由于沒有對(duì)所 述器官或組織的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)致地研究而很難做出可靠的診斷。這種情況下，現(xiàn)有技術(shù)中 使用至今的，通常是對(duì)所述組織或器官的片段進(jìn)行取樣(活組織檢查)，從而體外控制這 些組織或器官的形態(tài)，或者，特別是通過細(xì)針，更加細(xì)微地對(duì)其組成細(xì)胞之一進(jìn)行取樣 (FNA 或《Fine Needle Aspiration》Engelstein 等人，Br.J.Urol.，7 210-213，1994 ； Rodrigues 等人，J.Am.Acad.Dermatol.，42: 735-740，2000 ； Ariga 等人，Am.J.Surg.， 184 410-413，2002 ； P6rez-Guillermo 等人，Diagn.Cytopathol.，32: 315-320，2005 ； Femandez-Esparrach 等人，Arch.Bronconeomol.，43: 219-224，2007)。而且，也可以 分析一定數(shù)量標(biāo)記物的表達(dá)狀況，該標(biāo)記物的表達(dá)與特定的病理狀態(tài)(特別是癌癥、炎 癥、感染、神經(jīng)變性疾病或者移植排斥)有關(guān)。然而，由于活組織檢查的取樣或者細(xì)胞的抽吸，這些不同的方法有時(shí)會(huì)對(duì)所述 組織或器官并且最終對(duì)患者造成嚴(yán)重的創(chuàng)傷。由于連續(xù)取樣的出血或者生成瘢痕，特別 是對(duì)特定器官(腦、胰腺、肝臟或者肺臟)，生物體后來可能會(huì)遭受痛苦的折磨。所以至今仍需要新的可以進(jìn)行可靠準(zhǔn)確診斷的檢查方法，特別是與不同病理 (如癌癥、炎癥、感染或者神經(jīng)變性疾病)有關(guān)的特異性標(biāo)記物的表達(dá)相比，同時(shí)限制對(duì) 患者造成的創(chuàng)傷。專利EP 1 358 481描述了一種分析或者體內(nèi)治療的設(shè)備，其包括⑴不同于通過 分析熒光信號(hào)的檢查底物的微系統(tǒng)，(ii)柔性鉸鏈(butt)，其一端固定于所述微系統(tǒng)， 而另一端用來控制所述微系統(tǒng)，(iii)醫(yī)療器械，其具有內(nèi)部通路，在該內(nèi)部通路中所述 柔性鉸鏈可以滑動(dòng)，(iv)保護(hù)微系統(tǒng)的滑動(dòng)系統(tǒng)，其為可拆卸的并與底物位于同一水平 上，以及(V)在所述微系統(tǒng)的水平上的組織或細(xì)胞的撕裂系統(tǒng)，其與選自通過感受器(觸 覺、視覺、理化或者數(shù)值信息(numerizedinformatic))遠(yuǎn)距離控制進(jìn)行監(jiān)測(cè)的設(shè)備中的一 個(gè)或幾個(gè)設(shè)備相連，來進(jìn)行活組織檢查、治療、局部注射生物或化學(xué)制品。為了可以進(jìn)入血管以及撕裂組織或細(xì)胞，所述微系統(tǒng)因此與另一個(gè)剛性更大的系統(tǒng)相連，優(yōu)選在末端位置相連，來確保這一功能。然而，在體內(nèi)檢查設(shè)備的情況中，檢查設(shè)備時(shí)常通過使用血管內(nèi)或腔內(nèi)路徑直 達(dá)目標(biāo)器官或者組織。微系統(tǒng)與撕裂系統(tǒng)的連接于是會(huì)使所述設(shè)備一端的直徑以不可忽 略的方式增大。后者隨后會(huì)陷入太復(fù)雜的使用中，以至于不能在沒有同時(shí)改變血液循環(huán) 路徑的情況下正確直達(dá)其目標(biāo)位點(diǎn)。同時(shí)，關(guān)于使器官或組織穿孔所需的剛性的獲得， 連接多種元件會(huì)損害設(shè)備的總?cè)嵝圆⒁虼藫p害其正確導(dǎo)向。

發(fā)明內(nèi)容
在一些重要的研究之后，發(fā)明人現(xiàn)已設(shè)法開發(fā)出一種包括金屬導(dǎo)向裝置的設(shè) 備，其穿孔一端直接與反應(yīng)基團(tuán)(特別是待測(cè)底物的特異性抗體或者抗體片段)結(jié)合，并 且其另一端用于操縱所述導(dǎo)向裝置從插入位點(diǎn)到所述底物的微量分析位點(diǎn)和/或微量取 樣位點(diǎn)。所述導(dǎo)向裝置可以插入到可拆卸的保護(hù)系統(tǒng)(例如柔性導(dǎo)管)中，隨后其可以 保護(hù)所述導(dǎo)向裝置的功能端到達(dá)由組織、器官或它們的細(xì)胞構(gòu)成的待測(cè)底物的微量分析 位點(diǎn)和/或微量取樣位點(diǎn)。本發(fā)明構(gòu)造了導(dǎo)向裝置的表面從而使導(dǎo)向裝置上具有一些斑點(diǎn)，例如孔 (well),反應(yīng)基團(tuán)會(huì)在此沉積并在此會(huì)發(fā)生生物化學(xué)相互作用。所述“孔”可以采用不 同的方法得到，如通過聚焦離子束的光刻(FIB或見《Focused Ionbeam》Xie等人， Nuclear Instruments & Methods in Physics research SectionB—beam Interactions with Materials and Atoms, 211(3) 363-368，2003)、激光光刻及其后的電化學(xué)攻擊和激光?？蛇x地，可以構(gòu)造金屬導(dǎo)向裝置從而使所述導(dǎo)向裝置上具有一些斑點(diǎn)，例如至 少一個(gè)呈線形、圓形或帶狀形式的溝(furrow)，在其中連帶地連接至少一個(gè)小型生物芯 片，反應(yīng)基團(tuán)會(huì)在此沉積并會(huì)發(fā)生生物化學(xué)反應(yīng)。由導(dǎo)向裝置的表面的結(jié)構(gòu)形成的斑點(diǎn) (例如孔)不會(huì)在導(dǎo)向裝置的表面形成浮凸，而是形成一些溝或者凹陷(hollow)。因此， 由導(dǎo)向裝置的表面的結(jié)構(gòu)形成的斑點(diǎn)不會(huì)增大導(dǎo)向裝置的直徑。有利地，由導(dǎo)向裝置的表面的結(jié)構(gòu)形成的斑點(diǎn)位于導(dǎo)向裝置的表面，這意味著 這些斑點(diǎn)直接與液體、組織和細(xì)胞接觸。而且，所述設(shè)備可以插入具有內(nèi)部通路的醫(yī)療器械中，所述金屬導(dǎo)向裝置可以 在其中滑動(dòng)，且尤其是在經(jīng)體壁的針穿刺中，特別是經(jīng)皮的或經(jīng)粘膜的，或者在內(nèi)窺鏡 中，其包括血管內(nèi)導(dǎo)航系統(tǒng)。而且，所述設(shè)備可以與光纖連接，或者所述設(shè)備的金屬導(dǎo)向裝置可以用光纖替 換，其穿孔一端連接至其上直接結(jié)合了反應(yīng)基團(tuán)(尤其是待測(cè)底物的特異性抗體或者抗 體片段)的金屬環(huán)，以便于在考慮到診斷和最終預(yù)后評(píng)價(jià)所需的體內(nèi)捕獲的要素的情況 下，進(jìn)行細(xì)微的原位觀測(cè)。使用光纖的目的是成像以及從原位觀測(cè)的位置設(shè)置所述設(shè)備。根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備，由于簡化，在保持微創(chuàng)的同時(shí)，呈現(xiàn)出與現(xiàn)有技術(shù)的設(shè)備 相比改進(jìn)的柔性或彈性。于是，其可以更有效地用于通過腔內(nèi)路徑(尤其是血管內(nèi)路徑) 或者通過經(jīng)體壁的路徑(尤其是經(jīng)皮的或經(jīng)粘膜的路徑)檢查。而且，根據(jù)本發(fā)明的設(shè) 備，由于使用金屬導(dǎo)向裝置，其一端與特異性反應(yīng)物結(jié)合，其功能端具有足夠的剛性用 以對(duì)組織或器官進(jìn)行有效穿孔。最后，根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備，其端部直徑足夠小用以在血液循環(huán)或自然體腔中可以容易導(dǎo)航，并且特別是將對(duì)必須進(jìn)行穿孔的組織或器官造成的 創(chuàng)傷減至最低。更進(jìn)一步地，在收回所述設(shè)備后，也能夠運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行體外鑒定，如免疫 酶劑量或者免疫熒光，例如在固體載體上[ELISA技術(shù)，蛋白質(zhì)芯片(ESPINA等人， J.Immunol.Methods, vol.290, p 121-133，2004)],在根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備的末端處并因
此在微量分析和/或微量取樣(器官或組織)位點(diǎn)水平處存在具有相對(duì)濃度的所述特定底 物。最后，由于所述金屬導(dǎo)向裝置的特性，所述設(shè)備呈現(xiàn)的圖像信號(hào)(動(dòng)脈造影、 回波描記、掃描、MRI等)得到改善。在無線電導(dǎo)航對(duì)目標(biāo)組織或器官產(chǎn)生干擾的時(shí) 候，這一特性使其顯著降低。同樣，這一特性使得所述設(shè)備與用于成像的光纖連接時(shí)， 可以進(jìn)行細(xì)微的原位觀測(cè)。因此，本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種用于分析底物的設(shè)備，其特征在于，所 述設(shè)備包括用于對(duì)所述底物進(jìn)行檢測(cè)和/或微量取樣的微創(chuàng)系統(tǒng)，所述系統(tǒng)由至少一個(gè) 金屬導(dǎo)向裝置構(gòu)成，其Ea端(extremity Ea)設(shè)有至少一組孔并且該孔直接與所述底物的至 少一個(gè)特異性反應(yīng)基團(tuán)結(jié)合，所述Ea功能端用于穿孔，而其另一 Em端用于操縱所述金 屬導(dǎo)向裝置并最終與抽吸系統(tǒng)相連。有利地，Ea端的表面可以構(gòu)造成具有至少一組孔，其與所述底物的至少一種特 異性的反應(yīng)基團(tuán)直接結(jié)合，所述Ea端用于穿孔。由于根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備對(duì)患者造成的創(chuàng)傷微小，因此可以對(duì)患者定期進(jìn)行幾次 微量分析或者微量取樣(例如，對(duì)前列腺進(jìn)行分步分析和/或取樣)。除診斷外，所述分 析和/或連續(xù)取樣因此可以用于跟蹤患者體內(nèi)癌癥、炎癥、感染、神經(jīng)變性疾病或者移 植器官的良好保持的發(fā)展。有利地，Ea功能端(functionalized extremity Ea)可以在約0.5 2cm的長度上
呈現(xiàn)出至少一組1 25個(gè)孔，優(yōu)選2X25個(gè)孔，所述孔的平均直徑為約30 80 iim， 優(yōu)選為約40 60 iim，且更優(yōu)選為約50iim，所述孔的深度為約20 30 y m，優(yōu)選為 25 um,所述孔彼此相隔約60 120 ym。優(yōu)選地，所述孔具有光滑或粗糙的壁、卵圓 形或圓形形狀、以及平坦或凹面的底部。有利地，功能端可以設(shè)有許多盡可能隆起的孔?？椎臄?shù)量可以為使金屬導(dǎo)向裝 置具有足夠的剛性以對(duì)組織或器官進(jìn)行穿孔。在這一實(shí)施方式中，功能端的平均直徑可 以為約0.3 3.5mm，優(yōu)選為約0.35mm。有利地，所述金屬導(dǎo)向裝置可以構(gòu)造成0.5 2cm的長度，優(yōu)選lcm，以形成所述孔。有利地，孔的直徑可以為約30 80 y m，優(yōu)選 為約30 60iim，例如35iim。有利地，所述孔的深度可以為約20 30 y m，優(yōu)選為 約25 u m。所述孔之間的間隔可以為20 120 u m，優(yōu)選為25 u m。有利地，所述Ea功能端可以是柱狀、平面或者螺旋狀形式，或者是改進(jìn)的形狀 從而增加所述孔與液體、組織和細(xì)胞接觸的表面。根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備的一個(gè)特定的實(shí)施方式，所述設(shè)備在Ea功能端進(jìn)一步包括可 拆卸的保護(hù)系統(tǒng)。根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備的一個(gè)特定的實(shí)施方式，所述設(shè)備進(jìn)一步包括具有內(nèi)部通路 的醫(yī)療器械，所述的至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置可以在其中滑動(dòng)。
例如，“金屬導(dǎo)向裝置”，是指實(shí)心柔性金屬鉸鏈(butt)或者中空的剛性金屬鉸 鏈，其直徑為0.2 3.5mm，長度為5X 10_2 2m，并且其可以插入血管、小腔中，或者 穿過器官或組織，從而可以從插入位點(diǎn)直接到達(dá)原位微量分析和/或微取樣位點(diǎn)。特別地，實(shí)心柔性金屬鉸鏈可以由光纖構(gòu)成，其Ea端與設(shè)有至少一組孔的金屬 環(huán)相連。所述孔與所述底物的至少一種特異性的反應(yīng)基團(tuán)結(jié)合，所述Ea功能端用于穿 孔。有利地，所述金屬環(huán)的寬度為約0.5 2cm，可以呈現(xiàn)出至少一組1 25個(gè)孔， 優(yōu)選2X25個(gè)孔，所述孔的平均直徑為約30 80 iim，優(yōu)選為約30 y m或40 60 y m， 且更優(yōu)選為約50iim或者35iim，所述孔的深度為約20 30 y m，優(yōu)選為25 y m，所述 孔彼此相隔約20 120 iim，例如約60 120 iim。優(yōu)選地，所述孔具有光滑或粗糙的 壁、卵圓形或圓形形狀、以及平坦或凹面的底部?！敖饘賹?dǎo)向裝置”進(jìn)一步指實(shí)心或者中空的、剛性或柔性的鉸鏈，其全部或部 分由合金構(gòu)成，該合金的柔性、剛性、氧化性以及免疫原性的特性符合其在生物體中特 別是在動(dòng)物、更特別地是在人體中的使用。本領(lǐng)域技術(shù)人員通過其常識(shí)可以容易地確認(rèn) 這種生物相容性合金，并且其主要包括不銹鋼、基于鈦的合金、鎳、鈷，或者它們的混 合物。發(fā)明人已設(shè)法證明了基于鈦鎳合金的導(dǎo)向裝置(鎳鈦記憶合金(Nitinolalloy))在 其末端處的總?cè)嵝院蛣傂苑矫娉尸F(xiàn)出一些特別有益的特性，從而在血管內(nèi)或腔內(nèi)路徑中 能有效使用，并且也能有效地對(duì)組織或器官穿孔，同時(shí)將創(chuàng)傷(對(duì)所述組織或器官的水 平處的穿孔的尺寸為，例如約0.05 0.5mm2，且優(yōu)選約0.07mm2)減至最低。有利地，所述金屬導(dǎo)向裝置為基于鈦鎳合金的導(dǎo)向裝置，優(yōu)選基于鎳鈦記憶合 金(金屬導(dǎo)向裝置由Euroglex society出售)的導(dǎo)向裝置。除在Ea功能端處，所述金屬導(dǎo)向裝置可以被親水性聚合物(優(yōu)選水凝膠)或者 被多孔保護(hù)性聚合物層覆蓋，厚度為約0.1 51 ym。有利地，保護(hù)性聚合物由聚對(duì)亞苯 基二 甲基、Ti02 或者OptoDex (Arrayon Biotechnology，Switzerland)的膜構(gòu)成，并且
更優(yōu)選聚對(duì)亞苯基二甲基膜。其中插入有所述金屬導(dǎo)向裝置的可拆卸的保護(hù)系統(tǒng)可以采用多種形式，主要采 用本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地進(jìn)行測(cè)定的柔性導(dǎo)管的形式，例如，可用于血管內(nèi)、腔 內(nèi)、經(jīng)體壁的以及特別是經(jīng)皮的路徑的形式。所述可拆卸的保護(hù)系統(tǒng)可以通過血管內(nèi)的路徑插入，特別是插入至心臟、大 腦、肺、胰臟、腎臟以及肝臟的血管。所述可拆卸的保護(hù)系統(tǒng)可以通過腔內(nèi)通道插入，特別是通過內(nèi)窺鏡方式，通過 口腔、肛門、泌尿生殖以及呼吸路徑，或者ENT的經(jīng)粘膜路徑，或者也可以通過對(duì)皮膚 進(jìn)行穿刺方式的經(jīng)皮路徑，為了到達(dá)例如乳腺、特別是腎臟中，某一關(guān)節(jié)、椎管中，可 以通過腰椎穿刺或者在肝臟、肺或者腎臟中經(jīng)體壁的路徑，也可以通過經(jīng)粘膜路徑，特 別是用于消化道中。發(fā)明人證實(shí)了根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備通過通常使用的血管內(nèi)、腔內(nèi)或經(jīng)體壁的路 徑，特別是經(jīng)粘膜或經(jīng)皮的路徑，到達(dá)通常難以到達(dá)的組織或器官。一般地說，發(fā)明人證實(shí)了根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備，由于其末端處的總?cè)嵝院蛣傂缘木唧w特性，可以通過經(jīng)體壁(經(jīng)皮的、經(jīng)粘膜的)、血管內(nèi)或腔內(nèi)路徑到達(dá)并對(duì)一些器官 和組織進(jìn)行穿孔，這些組器官和組織為口咽到直腸的消化系統(tǒng)(包括肝臟和胰臟)、泌 尿生殖系統(tǒng)(包括膀胱、腎臟、前列腺、睪丸、卵巢和乳腺)、氣管與支氣管系統(tǒng)(包括 肺)、ENT系統(tǒng)(包括耳和鼻咽)、骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)(包括滑液腔)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、腦神經(jīng)系 統(tǒng)(neurocerebral system)或外被系統(tǒng)中的部分，然后經(jīng)活組織檢查后實(shí)現(xiàn)對(duì)病理的診斷， 而不是經(jīng)肝的活檢時(shí)進(jìn)行深度攻擊性穿刺，包括用細(xì)針抽吸(也稱為FNA)的細(xì)胞取樣。有利地，其中插入有金屬導(dǎo)向裝置的所述可拆卸保護(hù)系統(tǒng)采用適用于血管內(nèi)或 腔內(nèi)傳送的柔性導(dǎo)管形式。根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備尤其適用于對(duì)如動(dòng)脈和靜脈、心血管、前列腺、乳腺、胰 臟、腎臟、心肌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及其體腔或管道，大腦或者肝臟進(jìn)行檢查。根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備的第一個(gè)特定實(shí)施方式，將所述其中插入有金屬導(dǎo)向裝置的 可拆卸保護(hù)系統(tǒng)自身插入內(nèi)窺鏡中。根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備便特別適用于腔內(nèi)傳送。根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備便特別適用于對(duì)例如氣管_支氣管系統(tǒng)(包括肺臟)、從咽到 直腸的消化系統(tǒng)(包括肝臟和胰臟)、泌尿生殖系統(tǒng)(包括膀胱、腎臟、前列腺、睪丸、 卵巢和乳腺)、眼系統(tǒng)(淚管)、耳鼻喉系統(tǒng)(包括耳和鼻咽)、骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)、或中樞神經(jīng) 系統(tǒng)進(jìn)行檢查，特別是通過經(jīng)脊柱內(nèi)(endo-spinal)傳送，或者是通過乳管內(nèi)傳送進(jìn)行乳 腺的檢查。根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備的第二個(gè)特定實(shí)施方式，由經(jīng)體壁的抽吸細(xì)針(且更特別的 是經(jīng)皮的或經(jīng)粘膜的抽吸細(xì)針)組成的金屬導(dǎo)向裝置可以插入到可拆卸的保護(hù)系統(tǒng)(例如 柔性導(dǎo)管)中。根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備便特別的適用于特定的經(jīng)皮的或經(jīng)粘膜的傳送。根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備特別適用于對(duì)例如關(guān)于外被(皮膚、頭皮等)、胸部、腎臟、 肺、肝臟、肌肉、骨骼肌或骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)、中樞或末梢神經(jīng)系統(tǒng)或者內(nèi)分泌腺(更優(yōu)選甲 狀腺、甲狀旁腺、腎上腺、睪丸、乳腺或卵巢)進(jìn)行檢查。關(guān)于根據(jù)本發(fā)明設(shè)備的Ea功能端，其設(shè)有至少一組孔，該孔直接與待測(cè)底物的 特異性反應(yīng)基團(tuán)結(jié)合?！疤禺愋苑磻?yīng)基團(tuán)”是指，例如，與待測(cè)核酸序列互補(bǔ)的核酸序列[DNA(擴(kuò)增 產(chǎn)物、基因片段、EST、SNP)或者NRA]，以及待測(cè)抗體的特異性抗原或者待測(cè)抗原的 特異性抗體或者抗體片段，優(yōu)選抗體或者抗體片段。有利地，依據(jù)增加或減少的范圍，將所述特異性反應(yīng)基團(tuán)設(shè)置于根據(jù)本發(fā)明的 設(shè)備的功能端的微孔(micro-well)中。本領(lǐng)域技術(shù)人員使用其常識(shí)和慣常經(jīng)驗(yàn)可以容 易地確定所述范圍與反應(yīng)基團(tuán)對(duì)底物的親和性的函數(shù)關(guān)系。例如，反應(yīng)基團(tuán)的范圍約為 50 500 u g/ml，優(yōu)選為10 100 u g/ml，對(duì)于反應(yīng)物來說，更優(yōu)選對(duì)其底物具有親和 性的抗體，更特別的是抗原的數(shù)量級(jí)為約10_9?！翱贵w”優(yōu)選地指活體生物、哺乳動(dòng)物的免疫球蛋白，更優(yōu)選人類的免疫球蛋 白并且更優(yōu)選IgG?！翱贵w片段”指能夠與其抗原保持特異性固定的抗體片段?？梢砸肍ab、 Fab'、F(ab' )2或Fv片段作為這種抗體片段的例子。結(jié)合反應(yīng)物的方法，特別是將蛋白質(zhì)一次性結(jié)合在金屬載體上的方法是本領(lǐng) 域技術(shù)人員所公知的。由于氨基酸的低化學(xué)反應(yīng)性，這種方法通常需要通過氧化作用機(jī)制或者用至少一個(gè)連接分子(最常見的是聚合物(該聚合物通常例如為巰基、 羧酸和/或胺類))層覆蓋金屬表面來活化金屬表面。這種方法的例子有，功能分 子以自組裝單層(SAM)的形式吸附于金屬載體上，特別是硫醇(alcanethiol)(參照 WITTSTOCK 和 SCHUHMANN，Anal.Chem.，vol.69, p 5059-5066, 1997 ；以及國 際申請(qǐng) WO 03/006948)或者口比口各(electrochemical polymerization of biotinylated pyrrole ； DUPONT-FILLIARD 等.，Anal.Chim.Acta., vol.449, p 45-50，2001)。將抗體或者抗體片段結(jié)合至功能分子層上是指共價(jià)鍵(像硫醇中的游離巰基之 間的二硫鍵)或者非共價(jià)鍵(像吡咯/生物素復(fù)合物的聚合物層的生物素與鏈酶抗生物素 蛋白/抗體復(fù)合物或抗體/鏈酶抗生物素蛋白片段的鏈酶抗生物素蛋白之間的鏈酶抗生物 素蛋白-生物素連接)。依據(jù)第一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備包括至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置，其 Ea端與至少一種反應(yīng)基團(tuán)結(jié)合，所述反應(yīng)基團(tuán)優(yōu)選為對(duì)癌(更特別是乳腺癌、卵巢癌、 前列腺癌、結(jié)腸癌、腹內(nèi)腫瘤、腎癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、中樞或末梢神經(jīng)系統(tǒng)或內(nèi) 分泌腺(更特別是甲狀腺、睪丸或卵巢)腫瘤)標(biāo)記物(抗原)具有特異性的抗體或者抗 體片段。乳腺癌的標(biāo)記物的例子有標(biāo)記CA15-3 (Carcinoma-Associated Antigenl5-3 ； Duffy M.J., SheringS., Sherry F., McDermott E., O' HigginsN., Int.J.Biol.Markers, 20000ct-Dec. ； 15(4) 330-3)、CA 27-29 (Carcinoma-AssociatedAntigen 27-29 ; Kaohsiung J., J.Med.Sci., 1999Sept. ； 15(9) 520-8)、CEA (Carcinoembryonic antigen ； Soletormos G.，Nielsen D., Schioler V., MouridsenH., Dombernowsky P., Eur. J.Cancer, 2004Mar. ； 40(4) 481-6)、TPA (TissuePolypeptide Antigen) > TPS (Tissue Polypeptide Specific Antigen ； Given M., ScottM., Mc Grath J.P., Given H.F., Breast, 20000ct. ; 9 (5) : 277-80)、HER2 (FehmT., JagerW.，KramerS.，SohnC.，Solomayer E., Wallwiener D., Gebauer G.，Anticancer Research, 2004May-Jun ; 24 (3b) 1987-92)、ER(Estrogene Receptor ； Platet N., Cathiard A.M., Gleizes M., Garcia M., Crit.Rev.Oncol.Hematol.，2004Jul. ; 51(1) 55—67)、PR (Progesterone Receptor ； Duffy M.J.，Clin.Chem.，2005Mar. ； 51(3) 494_503.Epub 2005Jan.6.)、Ki_67(cell proliferation-associatedantigen of antibody Ki-67 ； Schliiter C.， Duchrow M., Wohlenberg C.，BeckerM.H.，Key G.，F(xiàn)lad H.D., Gerdes J.，J.Cell.Biol.，1993Nov. ; 123(3) 513-22)禾P UPA (Urokinase Plasmogen Activator ； Duffy M.J.，Crit.Rev.Clin丄ab.Sci.， 2001Jun. ； 38(3) 225-62)。卵巢癌標(biāo)記物的例子有標(biāo)記CA125 (Carcinom Antigenl25 ； Moss E.L., Hollingworth J.，Reynolds T.M., J.Clin.Pathol., 2005Mar. ； 58(3) 308-12)、CA15-3 和 CEA (Valenzuela P.，MateosS.，Tello E., Lopez-Bueno M.J., GarridoN.，Gaspar M.J., Eur.J.Gyn.Oncol.，2003 ； 24(1) 60-2) 前列腺癌標(biāo)記物的例子有標(biāo)記PSA (Prostate-Specific Antigen ； GrayM.A.， Clin丄ab.，2005 ； 51(3—4) 127—33)、PMSA (Prostate—Specific MembraneAntigen)禾口 AR (Androgen Receptor ； Birtle A.J., Freeman A., Masters J.R.，PayneH.A., Harland S.J., BJUInt., 2005Aug. ； 96(3) 303-7)。
結(jié)腸癌標(biāo)記物的例子有標(biāo)記CEA (Duffy M.J.，Clin.Chem.，2001Apr.； 47 (4) 624-30)、CA 19-9 (Carcinom Antigen 19-9)、CA242 (Carcinom Antigen242)、 CA 72-4 (Carcinom Antigen 72-4)、TPA、TPS (Duffy M.J.，van Dal en A., Haglund C.，Hansson L., Klapdor R., Lamerz R., NilssonO.，Sturgeon C.，Topolcan O.，Eur. J.Cancer, 2003Apr. ; 39(6) 718-27)。腹內(nèi)腫瘤標(biāo)記物的例子有標(biāo)記CEA或CA19-9 (Coban E.，Samur M.，Bozcuk H.，OzdoganM.，Int.J.Biol.Markers, 2003Ju卜Sep ； 18(3) 177-81)。胰腺癌標(biāo)記物的例子有標(biāo)記TA90-IC(90kDa的免疫原性腫瘤相關(guān)抗原)、 CA-19-9 (Chung M.H., Gupta R.K., Bilchik AJ, Ye W, Yee R.，Morton D丄.，Curr. Surg., 2002March-April ； 59(2) 194-198)、TPS、HCG 3 (hCG beta，Human Chorionic Gonadotropin beta)、CA 72—4、CEA、CA 19-9, CA 242 (Louhimo J.，Alfthan H.， Stenman U.H., Haglund C., Oncology, 2004 ； 66(2) 126-31)。肝癌標(biāo)記物的例子有a -胎蛋白標(biāo)記。肺癌標(biāo)記物的例子有標(biāo)記Cyfra A41 (細(xì)胞角蛋白片段41)、SCC (鱗狀細(xì)胞癌 抗原)、ACE (血管緊張素轉(zhuǎn)換酶)、CA19-9、CA125、NSE(神經(jīng)元特異性烯醇酶)、 嗜鉻粒蛋白A、CYFRA21-1(細(xì)胞角蛋白片段21-1)、CA 15-3。依據(jù)第二個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備包括至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置，其 Ea端與至少一種反應(yīng)物結(jié)合，優(yōu)選與對(duì)炎癥、更特別是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的特定標(biāo)記物具 有特異性的抗體或者抗體片段結(jié)合。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎標(biāo)記物的例子有IL-10、IL-IRa、IL_2、IL-2R、IL_4、 IL-5、IL-6、IL7、IL8、IL10、IL12p40P70、IL-13、IL-15、IL-17、le TNF a、 IFNa、IFNy > le GM-CSF、leMIP-1、IP-10、MIG、Eotaxine、RANTES 和 MCP_l(COCKRUM 等.，Lab Automation, BTi, October 2005，p 19-21)。依據(jù)第三個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備包括至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置，其 Ea端結(jié)合至少一種反應(yīng)物，該反應(yīng)物優(yōu)選為對(duì)感染(更特別是病毒、細(xì)菌或寄生蟲感染) 的特定標(biāo)記物具有特異性的抗體或抗體片段。很多感染標(biāo)記物是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠非常容易 地識(shí)別特異性標(biāo)記物或者與假定感染有關(guān)的標(biāo)記物。依據(jù)第四個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備包括至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置，其 Ea端結(jié)合至少一種反應(yīng)物，優(yōu)選對(duì)移植排斥的特定標(biāo)記物具有特異性的抗體或者抗體片 段。很多移植排斥的標(biāo)記物是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。例如，用于心臟移植的 MIP-1 3 和 VE-鈣粘蛋白(VE-cadherine) ( ROUSSOULIERES 等.，Circulation, vol.111 (20)，p 2636-2644，2005)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以運(yùn)用其常識(shí)，經(jīng)有限的實(shí)驗(yàn)即可容易地鑒別上述特異性標(biāo) 記物，所述抗體或者抗體的特異性片段可以用于本發(fā)明的設(shè)備。這種抗體的例子有在 TEBU或AXXORA可得的抗體。本領(lǐng)域技術(shù)人員也可以運(yùn)用已知的免疫法獲取這樣的抗 體。同樣地，本領(lǐng)域技術(shù)人員將能鑒定出能用于本發(fā)明設(shè)備的適合的特異性核酸。
依據(jù)第五個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備包括至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置，其 Ea端結(jié)合至少一種反應(yīng)物，優(yōu)選抗體或者抗體片段，所述抗體或者抗體片段對(duì)神經(jīng)變性 疾病的一種特定標(biāo)記物或者一系列特定標(biāo)記物具有特異性，所述神經(jīng)變性疾病例如為阿 爾茨海默病(MA)、帕金森綜合癥、肌萎縮性側(cè)索硬化(SLA)，該列表為非窮舉的。有幾種本領(lǐng)域技術(shù)人員已知并已用于研究這種病癥的標(biāo)記物。例如，對(duì) 于精神失常或有精神失常先兆狀態(tài)，總蛋白Tau(MAPT_微管相關(guān)蛋白Tau)、淀粉 狀肽 ABETA1-42、高度磷酸化蛋白 Tau(p.Tau phosphorylated in 128)，由 Waldemar G.等舉例描述[Waldemar G.，Dubois B.，Emre M.等，Eur.J.Neurol.，2007，14，pp 1-26 ； Dubois B., Feldmann H.H., Jacova C.，Dekosky S.T.等，LancetNeurol.2007, 6, pp 734-746 ； Krolak—Salmon P.等. "Vers un diagnostiquebiologique de la maladie d' Alzheimer et des syndromes apparentes “，La Revue demedecine interne (2008), doi 10.1016/J.revmed.2008.01.029]o 這些標(biāo)記物可以由酶聯(lián)免疫吸附的抗原-抗體技術(shù)進(jìn) 行鑒定(ELISA.INNOTEST B-Amyloid type (1-42), INNOTEST hTAUAg, INNOTEST PHOSPHOTAU(181p) ； Innogenetics, Ghent, Belgium.)。其他標(biāo)記物也能檢測(cè)大腦的退化狀態(tài)，并且更特別的是視錐蛋白樣蛋白(VLP6 或 VILIP-1 或 VSNL)，如在文獻(xiàn) Lee J.M.等人，Clin.Chem.，2008，54，ppl617_1623 中
所描述的。在實(shí)施本發(fā)明時(shí)可采用這些標(biāo)記物。關(guān)于帕金森病和多系統(tǒng)(共核蛋白病synucleopathies)萎縮的標(biāo)記物可為 a -SYNUCLEINE (Mollenhauer B., CullenV ，Khanl.，Experimental Neurology, 2008，
213， pp 315-325)。最后，存在對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(SNC)疾病具有非特異性的標(biāo)記物，也可以將其在 本發(fā)明范圍內(nèi)使用。這些標(biāo)記物是源于SNC (如GFAP蛋白、髓鞘、神經(jīng)肽和神經(jīng)遞質(zhì)) 的蛋白。更特別的是在加州圣地亞哥大學(xué)的文獻(xiàn)Medicine& health/diseases (2009年2月) 中描述的BNDF蛋白(腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子)，也引起了特別的關(guān)注。而且，在實(shí)施本 發(fā)明時(shí)可以使用免疫應(yīng)答蛋白(例如IgG、白蛋白、補(bǔ)體蛋白、反應(yīng)蛋白C)以及炎性蛋 白(如轉(zhuǎn)鐵蛋白、結(jié)合珠蛋白(haptoglobin)、銅藍(lán)蛋白、溶菌酶、烯醇化酶)。本發(fā)明的任何實(shí)施方式中，可以將幾種不同的標(biāo)記物(即不同病理標(biāo)記物)放置 在同一金屬導(dǎo)向裝置的孔中。即，可以將標(biāo)記物置于所述孔中以使不同的標(biāo)記物不相互 反應(yīng)。有利地，根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備或至少是與待分析底物接觸的功能末端部分呈約 10-6的無菌確保等級(jí)(SAL為無菌確保等級(jí))?？梢允褂貌煌目蛇x的解決方案來達(dá)到 這個(gè)無菌等級(jí)。存在一種可能性，在沒有待測(cè)底物的特異性反應(yīng)基團(tuán)存在的情況下，對(duì) 設(shè)備滅菌，然后在無菌條件下加入該反應(yīng)基團(tuán)。存在另一種可能性，在添加反應(yīng)基團(tuán)后 再對(duì)設(shè)備滅菌，這就需要使用不會(huì)顯著降低所述反應(yīng)基團(tuán)的活性的滅菌技術(shù)(例如使用 環(huán)氧乙烷或輻射滅菌)。本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種體外檢測(cè)存在于組織或器官中的底物的方法， 其特征在于包括如下步驟a)當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備的功能Ea端與所述待檢查的組織或器官接觸時(shí)，使用包 含至少一種對(duì)所述底物具有特異性的檢測(cè)劑的溶液孵育所述功能Ea端。
b)檢測(cè)所述底物。孵育步驟需在充裕的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行以便于溶液中的檢測(cè)劑，特別是抗體，能特異 地固定于所述底物(標(biāo)記物、抗原、抗體等)，特別是抗原上，并且非必須地存在于設(shè)備 末端。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以運(yùn)用其常識(shí)和例行實(shí)驗(yàn)容易地確定該孵育時(shí)間與溶液中檢測(cè) 劑的親和性的函數(shù)關(guān)系，特別是抗體對(duì)其底物的親和性，更特別的是抗原。該孵育時(shí)間 也取決于孵育期間的溶液溫度。例如，在溫度為20°C 37°C之間，孵育時(shí)間約為1分鐘 至2小時(shí)，優(yōu)選5分鐘至1小時(shí)，并且特別優(yōu)選10 30分鐘。有利地，溶液中的檢測(cè)劑不同于與根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備的功能端結(jié)合的特異性反 應(yīng)物。優(yōu)選地，所述檢測(cè)劑為抗體。有利地，溶液中的抗體以及結(jié)合至根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備的功能端的抗體各為多克 隆抗體，優(yōu)選所述抗體是相同的。有利地，溶液中的抗體以及結(jié)合至根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備的功能端的抗體各為單克 隆抗體，優(yōu)選所述抗體是不同的。有利地，標(biāo)記溶液中的抗體，并且更特別的是，將其與酶偶聯(lián)，例如與過氧化 物酶或者堿性磷酸酶偶聯(lián)。根據(jù)本發(fā)明方法的第一個(gè)特定實(shí)施方式，所述方法在步驟a)和b)之間進(jìn)一步包 括在溶液中孵育所述端的步驟a')，該溶液包含至少一種對(duì)步驟a)中的檢測(cè)劑具有特異 性的檢測(cè)劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員能運(yùn)用其常識(shí)，容易地鑒定出適合根據(jù)本發(fā)明的方法的抗體。 例如，如果在步驟a)中使用特異性針對(duì)待識(shí)別底物(標(biāo)記物、抗原、抗體等)的小鼠免 疫球蛋白，則可以在第二個(gè)步驟中使用特異性識(shí)別該小鼠免疫球蛋白的抗體。根據(jù)本發(fā)明方法的第二個(gè)特定實(shí)施方式，根據(jù)本發(fā)明的方法，在孵育步驟a)和 可選步驟a')之后，包括沖洗步驟，沖洗步驟能消除沒有特異性固定于標(biāo)記物(抗原) 上的抗體。這樣的沖洗步驟的程序也屬于常識(shí)，并能通過例行實(shí)驗(yàn)很容易地確定。例如， 該步驟可以使用包括一定濃度的洗滌劑(0.05 1%)(如TRITONX100 或TWEEN20 )的溶液來進(jìn)行，具有提高溶液中的抗體對(duì)其特異性抗原的親和性的作用。檢測(cè)步驟根據(jù)活性進(jìn)行，更特別的是根據(jù)與步驟a)或可選步驟a')中所用的抗 體結(jié)合的酶的活性而進(jìn)行。該檢測(cè)步驟所采用的程序取決于所使用的標(biāo)記物，更特別的是所使用的酶，例 如過氧化物酶和堿性磷酸酶，并且這也屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員的常識(shí)。該檢測(cè)步驟能推導(dǎo)出固定于所述設(shè)備功能端的特異性底物(例如抗原)的量，并 且最終推導(dǎo)出存在于器官或組織在進(jìn)行微量分析和/或微量取樣處水平上的特異性底物的量。最后，能用于實(shí)施根據(jù)本發(fā)明的方法的各種反應(yīng)基團(tuán)也是本領(lǐng)域技術(shù)人員周知 的，并且更特別的是，這些反應(yīng)基團(tuán)包括用于免疫酶或免疫熒光劑量技術(shù)的反應(yīng)物，例 如在固體載體上[ELISA技術(shù)，蛋白質(zhì)芯片(ESPINA等.，見上文，2004)]。本發(fā)明的第三個(gè)目的是使用根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備制造一種用于診斷患者體內(nèi)癌癥、炎癥、感染、移植排斥或神經(jīng)變性疾病工具。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特定實(shí)施方式，所述診斷工具可以包括至少一個(gè)插入柔性導(dǎo) 管中的金屬導(dǎo)向裝置，所述柔性管插入于內(nèi)窺鏡中。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)特定實(shí)施方式，所述診斷工具可以包括至少一個(gè)金屬導(dǎo)向 裝置，所述金屬導(dǎo)向裝置由穿過體壁的(并且更特別的是經(jīng)皮的或經(jīng)粘膜的)抽吸細(xì)針組 成，其可以插入可拆卸的保護(hù)系統(tǒng)(例如柔性導(dǎo)管中)中。此外，可拆卸的保護(hù)系統(tǒng)與 金屬導(dǎo)向裝置配合使用以便于使所述導(dǎo)向裝置的功能Ea端與微量分析和/或微取樣位點(diǎn) 接觸。在這兩個(gè)本發(fā)明的特定實(shí)施方式中，所述至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置可以與用于可 視鑒別和定位的光纖長度的至少一部分相連。有利地，所述診斷儀器通過腔內(nèi)路徑傳送。因此，所述工具能夠在從咽至直腸的消化系統(tǒng)(包括肝臟和胰臟)、泌尿-生殖 系統(tǒng)(包括膀胱、尿道、腎臟、前列腺)、氣管-支氣管系統(tǒng)(包括肺)、ORL系統(tǒng)(包 括耳和鼻咽)以及骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)(包括滑液腔)中進(jìn)行微量分析和/或微量取樣。優(yōu)選地，所述診斷工具通過經(jīng)體壁的路徑傳送，更特別的是通過經(jīng)皮或經(jīng)粘膜 的路徑傳送。這種診斷工具也能夠?qū)νㄟ^常規(guī)使用的腔內(nèi)或血管內(nèi)路徑很難到達(dá)的組織或器 官進(jìn)行分析。這種診斷工具也能通過經(jīng)體壁的路徑，在皮膚、睪丸、前列腺、卵巢、乳 腺以及腎臟和肝臟水平，末梢神經(jīng)系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)(更特別的是通過脊柱內(nèi)的路徑) 的水平上以及在內(nèi)分泌系統(tǒng)(例如甲狀腺)水平上，進(jìn)行微量分析和/或微量取樣。在下文中的實(shí)施例可以闡明本發(fā)明，該實(shí)施例作為非限定的實(shí)例給出。


圖1示出了構(gòu)造金屬導(dǎo)向裝置的各種可能性；圖2示出了 FIB制成的不同孔的掃描電子顯微鏡圖片(能夠觀察到由于不均一蝕 刻產(chǎn)生的重要的表面糙度)；圖3示出了氟輔助銑削技術(shù)的遮蔽效應(yīng)的圖解和觀測(cè)結(jié)果；圖4示出了微觀成型操作的進(jìn)步；圖5示出了(a)光學(xué)顯微鏡觀察到的半球形孔，(b)用掃描電子顯微鏡在使用鎳 鈦記憶合金的導(dǎo)向裝置上觀察到的一組孔，(c)腔的細(xì)節(jié)，(d)腔內(nèi)的表面糙度與導(dǎo)向裝 置的表面糙度的比較；圖6示出了與圖5中相同的半球形孔在電化學(xué)磨光處理后的掃描電子顯微圖 片；圖7示出了本發(fā)明的設(shè)備用第一個(gè)單克隆抗體(AcM 1)進(jìn)行免疫捕獲和用第二 個(gè)單克隆抗體(AcM 2)使抗原ACE顯露的圖解；圖8示出了用捕獲抗體5910和用抗體5909顯露的ELISA結(jié)果(使用抗原ACE
陽性血清獲得的吸光度)；圖9示出了用捕獲抗體5910和用抗體5909顯露的ELISA結(jié)果(使用抗原ACE
陰性血清獲得的吸光度)；
圖10示出了用捕獲抗體5905和用抗體5909顯露的ELISA結(jié)果(使用抗原ACE
陽性血清獲得的吸光度)；圖11示出了用捕獲抗體5905和用抗體5909顯露的ELISA結(jié)果(使用抗原ACE
陰性血清獲得的吸光度)；圖12示出了用具有捕獲抗體5910的剛性塑料鉸鏈和用抗體5909顯露的的ELISA 結(jié)果(使用抗原ACE陽性血清獲得的吸光度)；這些圖片用于說明所用方法的敏感性和特異性。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 基于鎳鈦記憶合金的金屬導(dǎo)向裝置的制造及其活化將基于鎳鈦記憶合金的金屬導(dǎo)向裝置(Euroflex)的表面進(jìn)行構(gòu)造使其具有特定部 位，例如孔，反應(yīng)基團(tuán)會(huì)置于其中并會(huì)在此發(fā)生生物化學(xué)反應(yīng)(圖1)；所述“孔”可以使用多種方法獲得，例如聚焦離子束光刻(FIB，Xie等， Nuclear Instruments & Methods in Physics research Section B—beam Interactionswith Materials and Atoms, 211(3) 363-368，2003)、通過激光光刻及隨后的電化學(xué)蝕刻和激光燒蝕。使用FIB技術(shù)，機(jī)器產(chǎn)生聚焦到必須進(jìn)行構(gòu)造的表面上的離子束。在離子束的 機(jī)械作用下，表面材料的原子自表面除去。在適合的時(shí)間用FIB技術(shù)可以通過束流為 20nA的8 y m3s_1的蝕刻寫入器(etching reader)形成直徑為20 y m的孔。圖2示出直徑 為5、20和40 y m且深為10和20 y m的孔。在蝕刻期間，由于粉末狀材料的再沉積， 所述孔的底部表面粗糙。在200nm miiT1在直徑為40 y m且束流為20nA的圓形區(qū)域上測(cè) 定了蝕刻率。該蝕刻速率的結(jié)果為OJiimbC-1 (約SiimY1)，其相當(dāng)于在20分鐘的加工 時(shí)間內(nèi)制造出直徑為20i!m且深20i!m的孔。為了改善表面糙度，可使用氟(XeF2)輔 助的銑削技術(shù)；隨后可以得到非常低的表面糙度，但是由于乂評(píng)2并非精確地沿著蝕刻光 束的軸，故產(chǎn)生了遮蔽效應(yīng)(圖3)。激光光刻技術(shù)和電化學(xué)蝕刻存在于用聚合物層涂覆表面的第一步。第二步中， 使用激光燒蝕對(duì)聚合物層進(jìn)行機(jī)械加工。第三步中，用等向性電化學(xué)蝕刻穿過置于聚合 物層中的開口，對(duì)表面進(jìn)行蝕刻(圖4)。圖5示出了在基于鎳鈦記憶合金的金屬導(dǎo)向裝 置上的各種結(jié)構(gòu)測(cè)試的結(jié)果。此外，用于體內(nèi)的基于鎳鈦記憶合金的金屬導(dǎo)向裝置經(jīng)常通過電化學(xué)拋光進(jìn)行 加工，這使得具有生物相容性的Ti02層取代了本征NiTi氧化層。為了評(píng)價(jià)這種方法對(duì)孔 結(jié)構(gòu)的影響，機(jī)械加工的具有孔的導(dǎo)向裝置須經(jīng)歷這種方法(圖6)。另一種在基于鎳鈦記憶合金的導(dǎo)向裝置表面上制造洞的方法是使用激光燒蝕。 在不會(huì)因熱的生成而影響周圍金屬的條件下，使用短激光脈沖使金屬局部蒸發(fā)。報(bào)道的 最小尺寸約為20iim。如果上述的三種方法都能制造出孔，則電化學(xué)蝕刻方法的結(jié)果最佳。實(shí)施例2 連續(xù)將金屬導(dǎo)向裝置體內(nèi)插入至特定器官所引起的創(chuàng)傷這些實(shí)驗(yàn)中使用的是金屬微型導(dǎo)向裝置(MTI 0.012" Silver speed),并且將所述 金屬導(dǎo)向裝置插入至微型導(dǎo)管中。在抽吸水平上將所述裝置引入全麻狀態(tài)下的豬體內(nèi)，隨后在股三角(Scarpa)水平通過血管內(nèi)路徑(通過股動(dòng)脈)向上到達(dá)腎臟。該導(dǎo)向裝置通過動(dòng)脈造影由位于股動(dòng) 脈中的所述設(shè)備的追蹤觀察進(jìn)行操縱。當(dāng)所述設(shè)備處于腎臟入口時(shí)，其可以通過入侵動(dòng)脈路徑到達(dá)腎臟。這樣穿刺進(jìn) 入組織幾毫米深處，并且所述設(shè)備在那里停留約10分鐘。最后，移除所述設(shè)備。在根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備進(jìn)行穿刺后，處死動(dòng)物并將其腎臟作為樣本來評(píng)價(jià)它們的 狀況。結(jié)果顯示腎臟中沒有與入侵相關(guān)的重大出血。觀察到的最為嚴(yán)重的損傷是在入 侵位點(diǎn)上3 X 1 mm大小的范圍。根據(jù)本發(fā)明的設(shè)備因此能夠到達(dá)器官并同時(shí)產(chǎn)生及其輕微地侵害。實(shí)施例3 在肝臟中插入設(shè)備伴隨的微創(chuàng)與實(shí)施例1不同，將所用的金屬微型導(dǎo)向裝置(MTI 0,012" Silver speed)設(shè)置在
纖維鏡中。在抽吸水平上將所述裝置引入全麻狀態(tài)的豬體內(nèi)，隨后在股三角水平上通過血 管內(nèi)路徑(通過股動(dòng)脈)向上到達(dá)肝臟。該導(dǎo)向裝置由位于股動(dòng)脈中的所述設(shè)備通過動(dòng) 脈造影進(jìn)行操縱。當(dāng)接近肝臟時(shí)，將設(shè)備引入至該器官。穿刺進(jìn)入組織幾毫米深處，并且所述設(shè) 備再次在那里停留約10分鐘。最后，移除所述設(shè)備。如前所述，該操作中的肝臟樣本能用于評(píng)價(jià)該操作對(duì)這一器官的侵害程度。肝臟表面沒有肉眼可見的損傷。當(dāng)切割時(shí)，可以看到被膜下薄壁組織內(nèi)有 1.5X0.4cm和1.8X0.5cm尺寸的兩個(gè)出血節(jié)點(diǎn)。在組織學(xué)結(jié)構(gòu)上，肝組織的每一個(gè)方向 上的竇狀隙、肝門小靜脈和中央小葉靜脈有一點(diǎn)充血，但并沒有任何異常。結(jié)論結(jié)果顯示出血性損傷很小可以在顯微鏡下看到兩個(gè)很小的傷口，但沒有損壞 薄壁組織細(xì)胞，并且毛細(xì)血管和中央小葉靜脈有一些充血。因此，使用金屬導(dǎo)向裝置能產(chǎn)生很小的創(chuàng)傷，在任何情況下，這些創(chuàng)傷都遠(yuǎn)遠(yuǎn) 小于活組織檢查造成的創(chuàng)傷。實(shí)施例4 構(gòu)思和制造確保在固體載體上進(jìn)行體外免疫捕獲和檢測(cè)抗原ACE的 設(shè)備參數(shù)的研究所述設(shè)備使用ELISA技術(shù)的原理使抗原ACE顯露。兩個(gè)識(shí)別該抗原上的不同 表位的單克隆抗體用于捕獲(AcMl)和顯露抗原ACE(AcM2)。這些具有相同的同位素 的單克隆抗體(IgGl)，用單克隆抗體偶聯(lián)至生物素和鏈酶抗生物素蛋白_過氧化物酶的 復(fù)合物上從而使ACE抗原顯露(圖7)。使用兩種類型的載體，用于ELISA的板或者剛性塑料。用于ELISA 的板(Greiger)將100 u 1的用碳酸鹽/碳酸氫鹽緩沖液稀釋(1/5000和1/128000)的針對(duì)ACE 抗原的單克隆抗體(克隆5910或克隆5905，在小鼠中制備并由MedixBiochemical出售) 置于每一個(gè)孔中，然后將該板在37°C下放置1小時(shí)。用碳酸鹽/碳酸氫鹽緩溶液代替所述抗體作為陰性對(duì)照。用250 ii 1的PBS將每一個(gè)孔沖洗三次后，在37 V下，用200ml 3 %的 PBS_BSA(牛血清白蛋白)飽和該板的自由位點(diǎn)(free site)兩小時(shí)。然后用250 ii 10.5%的PBS-吐溫對(duì)每個(gè)孔沖洗三次，之后在每個(gè)孔中加入用 PBS-吐溫按1/10、1/100、1/1,000范圍內(nèi)稀釋的100 iU的抗原ACE陽性血清，并在 37 °C下孵育該板1小時(shí)。然后用250 iU的PBS-吐溫對(duì)每個(gè)孔沖洗三次，隨后再添加100 ii 1的用PBS-吐 溫按1/500范圍內(nèi)稀釋的生物素化的針對(duì)ACE抗原的單克隆抗體(小鼠中制備的克隆 5909并且由Medix Biochemical出售，由于恒定的親和力和識(shí)別表位，故不同于之前使用 的捕獲抗體)，并在37°C下再次孵育該板1小時(shí)。用PBS-吐溫沖洗三次后，在每個(gè)孔中加入100 u 1的按1/2000范圍內(nèi)稀釋的偶 聯(lián)至過氧化物酶的鏈酶抗生物素蛋白復(fù)合物，并在37°C下孵育1小時(shí)。用PBS-吐溫沖洗三次后，在每個(gè)孔中加入200 u 1底物(H202)和色原(OPD， Sigma)的混合物，該底物和色原于檸檬酸-磷酸鹽對(duì)照溶液中(pH5)。平行地，使用“正常”患者的血清作為抗原(陰性對(duì)照，ACE劑量<5Ul/ml) 進(jìn)行同樣的操作。然后，通過在每個(gè)孔中加入50 iU 1M的硫酸終止反應(yīng)。在492nm下用酶標(biāo)儀 (參考ELX.800UV)測(cè)定吸光度。圖8示出了對(duì)于抗原ACE陽性血清以及圖9中示出了對(duì)于抗原ACE陰性血清， 用單克隆抗體5910 (稀釋范圍在1/500內(nèi)然后一半一半(halftyhalf)稀釋至1/128000)進(jìn) 行免疫捕獲以及用生物素化的單克隆抗體5909顯露的結(jié)果。圖10示出了對(duì)于抗原ACE陽性血清以及圖11示出了對(duì)于抗原ACE陰性血清， 用單克隆抗體5905 (稀釋范圍在1/100、1/200、1/500內(nèi)然后一半一半稀釋至1/32000) 進(jìn)行免疫捕獲以及用生物素化的單克隆抗體5909顯露的結(jié)果。圖8 11說明縱坐標(biāo)492nm處的吸光度(DO)，橫坐標(biāo)捕獲抗體(5909或5905)的稀釋， 1/10范圍內(nèi)稀釋的ACE陽性血清，■ 1/100范圍內(nèi)稀釋的ACE陽性血清，A 1/1000范圍內(nèi)稀釋的ACE陽性血清，x=無血 i青。結(jié)果顯示，當(dāng)所使用的捕獲單克隆抗體在1/500的稀釋范圍內(nèi)時(shí)，1/10稀釋范 圍內(nèi)的抗原ACE陽性血清的吸光度(DO)在0.5以上(圖8)。在同樣條件下，抗原ACE 陰性血清的DO低于0.15 (圖9)。然而，應(yīng)當(dāng)注意到，用捕獲單克隆抗體5905以及檢測(cè)單克隆抗體5909的組合得 到的結(jié)果(圖10和11)優(yōu)于用捕獲單克隆抗體5910以及檢測(cè)單克隆抗體5909的組合得 到的結(jié)果(圖8和9)。事實(shí)上，1/10范圍內(nèi)稀釋的抗原ACE陽性血清的吸光度為1時(shí) (圖10)，而在同樣條件下抗原ACE陰性血清的吸光度為0.1 (圖11)。這些結(jié)果由使用 不同稀釋條件的捕獲單克隆抗體5910證實(shí)(數(shù)據(jù)未顯示)。
剛件標(biāo)準(zhǔn)載體在第一步中，將以長為2 3cm且直徑為0.5 1mm的鉸鏈形式的剛性塑料載 體活化。第二步中，將由此活化的載體置于1ml溶血(haemolyse)的微型管(Fisher)
中，并在37°C下用針對(duì)ACE抗原的單克隆抗體(克隆5910在小鼠中制備并由Medix Biochemical出售)使其功能化1小時(shí)，所述抗體用碳酸鹽/碳酸氫鹽對(duì)照液(250 y 1/管) 在1/50、1/100、1/250、1/500范圍內(nèi)稀釋。用碳酸鹽/碳酸氫鹽對(duì)照液代替單克隆抗體 作為陰性對(duì)照。在固定和沖洗后，使用500iU3%的PBS-BSA在+4°C下過夜使其飽和。然后，將載體用250iU的經(jīng)PBS在1/10、1/100范圍內(nèi)稀釋的抗原ACE陽性血 清或者使用同樣稀釋范圍內(nèi)的“健康”被試者的血清(抗原ACE陰性對(duì)照)在37°C下孵 育1小時(shí)。lmg/ml范圍內(nèi)的針對(duì)ACE抗原的單克隆抗體(克隆5909在小鼠中制備并由 Medix Biochemical出售，由于其固有親和性和識(shí)別表位，與純化的克隆5910不同)在 0.1M pH 8.8的硼酸鹽對(duì)照液中4°C過夜透析。然后以50 ii g/mg抗體的量加入10mg/ml 的DMSO生物素溶液。室溫下孵育4小時(shí)后，在攪拌條件下以2(^1/25(^8生物素的量 加入1M的氯化銨，并將所得溶液在室溫下再次孵育1分鐘。終止反應(yīng)后，有標(biāo)記的抗 體在PBS中+4°C透析24小時(shí)，然后將該標(biāo)記抗體等分并在-20°C下保存。用PBS-吐溫沖洗3次后，將所述載體用250 u 1的經(jīng)PBS-吐溫按1/500范圍內(nèi) 稀釋的生物素化的抗體5909在37°C下孵育1小時(shí)。37°C下，使用在PBS中按1/2000范圍內(nèi)稀釋的鏈酶抗生物素蛋白-過氧化物復(fù) 合物(Amersham Biosciences) 1小時(shí)證實(shí)了生物素(6-生物素酰胺基己?；０坊核?6 -biotinamidocaproylamido-caproic acid)與 N_ 羥基琥珀酰亞胺的酯，Sigma)的檢測(cè)。通過在檸檬酸鹽-磷酸鹽對(duì)照液(pH 5)中每管加入750 u 1底物(H202)和色原 (OPD, Sigma)混合物，來使酶活性顯露。然后，加入1M的硫酸終止反應(yīng)。吸光度在492nm下讀取。在塑料鉸鏈上的ELISA結(jié)果如圖12所示。圖12說明縱坐標(biāo)492nm處的吸光度(DO)，橫坐標(biāo)捕獲抗體5910的稀釋， 1/10范圍內(nèi)稀釋的抗原ACE，■ 1/100范圍內(nèi)稀釋的抗原ACE，A 1/10范圍內(nèi)稀釋的陰性對(duì)照，xl/100范圍內(nèi)稀釋的陰性對(duì)照?？傊?，結(jié)果顯示使用抗原ACE陽性血清的DO值比使用抗原ACE陰性血清的OD 值高7 10倍。使用剛性塑料載體所得的最佳結(jié)果是其上固定有按1/50或1/100范圍內(nèi)稀釋的 捕獲單克隆抗體5910。檢測(cè)的最佳抗原ACE濃度相當(dāng)于按1/100范圍內(nèi)稀釋的患者的血清，SP6UI/ ml(與“正?！北壤嘟?lt;5UI/ml)，以及相當(dāng)于檢測(cè)單克隆抗體5909按1/500范圍內(nèi)稀釋時(shí)。使用塑料載體能夠證實(shí)在根據(jù)上述步驟的功能化金屬鉸鏈上的免疫捕獲過程的 特異性和敏感性。結(jié)論通過體外免疫捕獲和顯露技術(shù)測(cè)定抗原ACE的結(jié)果較佳，其證實(shí)了 “功能化鉸 鏈”設(shè)備可以在體內(nèi)捕獲抗原ACE以及隨后離體顯露的有效性。實(shí)施例5:例如在成像技術(shù)以及更特別的放射線技術(shù)控制下，乳腺腫瘤標(biāo)記 ACE的表達(dá)鑒定根據(jù)PCT申請(qǐng)WO 03/006948描述的實(shí)驗(yàn)步驟，在第一步中，硫醇層被吸附在基 于鎳鈦記憶合金的金屬導(dǎo)向裝置(Euroflex)的其中一端上。第二步中，該層中的游離巰 基的作用是能與針對(duì)ACE抗原的單克隆抗體形成二硫鍵。將得到的金屬導(dǎo)向裝置隨后引入適用于動(dòng)物或人的活檢穿刺針中。在從乳腺癌患者體內(nèi)移除腫瘤(乳房腫瘤)后，使用該設(shè)備對(duì)所要操作的腫瘤 進(jìn)行臨時(shí)的解剖-病理檢查。依據(jù)一個(gè)可選的解決方案，在允許的醫(yī)療道德條件下，在 局部或全身麻醉?xiàng)l件下，對(duì)乳腺癌患者的乳房上進(jìn)行微切口。將其內(nèi)插入有與針對(duì)ACE 抗原的抗體結(jié)合的金屬導(dǎo)向裝置的細(xì)針，引入至腫瘤，或者在通過成像追蹤其進(jìn)展的同 時(shí)，通過微切口然后引導(dǎo)到達(dá)腫瘤，更特別的是模仿書寫。然后，所述微創(chuàng)導(dǎo)向系統(tǒng)可以去掉與針對(duì)ACE抗原的抗體結(jié)合的金屬導(dǎo)向裝置 的末端。金屬導(dǎo)向裝置的末端隨后被引入至腫瘤(通過穿孔)約幾毫米深處。在約10 分鐘的短暫等待后，在這期間確保了腫瘤任選表達(dá)的抗原ACE的免疫捕獲，移除設(shè)備。微量取樣限于體內(nèi)免疫捕獲的分析物，并且也不要求任何活組織檢查。最后，移除設(shè)備，然后用針對(duì)標(biāo)記物ACE的單克隆抗體，在設(shè)備末端上進(jìn)行標(biāo) 記物ACE的ELISA劑量，該單克隆抗體由于對(duì)抗原ACE的固有親和性和識(shí)別表位而與捕 獲抗體不同，并且其與生物素結(jié)合。用鏈酶抗生物素蛋白-過氧化物酶復(fù)合物顯露酶活性能夠推導(dǎo)出腫瘤標(biāo)記物 ACE的表達(dá)，并由此調(diào)整對(duì)患者施用的最佳的治療方案。實(shí)施例6:皮膚癌根據(jù)PCT申請(qǐng)WO 03/006948描述的實(shí)驗(yàn)步驟，在第一步中，硫醇層被吸附在 基于鎳鈦合金的金屬導(dǎo)向裝置(Euroflex)的末端上。第二步中，該層中的游離巰基的作 用是可以與針對(duì)FAP標(biāo)記物(成纖維細(xì)胞激活蛋白；RETTIG等人，Proc.Natl.Acad.Sci. USA, vol.85, p 3110，1988)的單克隆抗體形成二硫鍵。在允許的醫(yī)療道德條件下，將得到的金屬導(dǎo)向裝置隨后引入至動(dòng)物或人的皮 膚腫瘤水平，或者引入至皮膚癌患者切除后的皮膚腫瘤水平，來進(jìn)行常規(guī)或臨時(shí)的解 剖-病理檢查。微量取樣限于體內(nèi)免疫捕獲，并且也不要求特定的活組織檢查。最后，移除設(shè)備，然后用針對(duì)標(biāo)記物FAB的單克隆抗體，在設(shè)備末端上進(jìn)行標(biāo) 記物FAB的ELISA劑量，所述標(biāo)記物FAB與過氧化物酶結(jié)合。過氧化物酶活性的顯露，能夠推導(dǎo)出腫瘤標(biāo)記物FAP的表達(dá)，并由此調(diào)整對(duì)患 者施用的最佳的治療方案。
權(quán)利要求
1.一種分析設(shè)備，其特征在于，所述設(shè)備包括用于底物的微創(chuàng)和/或微量取樣檢查的 系統(tǒng)，所述系統(tǒng)由至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置構(gòu)成，該裝置包括Ea端，其表面被構(gòu)造成具有至少一組孔，該孔直接與至少一種對(duì)所述底物具有特異 性的反應(yīng)基團(tuán)結(jié)合，所述Ea端用于穿孔，以及 另一 Em端，其用于操縱所述金屬導(dǎo)向裝置。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其進(jìn)一步包括與Ea端齊平的可拆卸的保護(hù)系統(tǒng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的設(shè)備，其中，所述可拆卸的保護(hù)系統(tǒng)為柔性導(dǎo)管。
4.根據(jù)權(quán)利要求1 3中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其進(jìn)一步包括具有內(nèi)部通路的醫(yī)療器 械，所述至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置能夠在其中滑動(dòng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的設(shè)備，其中，所述醫(yī)療器械選自包括經(jīng)體壁的抽吸針和/或 包括血管內(nèi)導(dǎo)航系統(tǒng)在內(nèi)的內(nèi)窺鏡的組中。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的設(shè)備，其中，所述經(jīng)體壁的抽吸針為經(jīng)皮的或經(jīng)粘膜的抽吸針。
7.根據(jù)權(quán)利要求1 6中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其中，所述至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置選自 包括一個(gè)或多個(gè)實(shí)心柔性金屬鉸鏈和/或一個(gè)或多個(gè)中空的剛性金屬鉸鏈的組中，所述 鉸鏈的直徑為0.3 3.5mm，長度為5X 10_2 2m。
8.根據(jù)權(quán)利要求1 7中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其中，所述至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置與可 視顯示系統(tǒng)在其長度的至少一部分上相連。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的設(shè)備，其中，所述可視顯示系統(tǒng)為光纖。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的設(shè)備，其中，所述至少一個(gè)實(shí)心柔性金屬鉸鏈為光纖，其 Ea端與設(shè)有至少一組孔的金屬環(huán)相連，該孔直接與對(duì)所述底物具有特異性的反應(yīng)基團(tuán)結(jié) 合，所述Ea端用于穿孔。
11.根據(jù)權(quán)利要求1 10中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其中，所述至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置 全部或部分由金屬合金構(gòu)成，該金屬合金選自包括不銹鋼、基于鈦的合金、基于鎳的合 金、基于鈷的合金或其混合物的組中。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的設(shè)備，其中，所述金屬導(dǎo)向裝置全部或部分由鈦鎳合金構(gòu)成。
13.根據(jù)權(quán)利要求1 12中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其中，除Ea端以外，所述至少一個(gè) 金屬導(dǎo)向裝置由厚度為2X 10_3 1 μ m的保護(hù)性聚合物層涂覆。
14.根據(jù)權(quán)利要求1 13中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其中，所述至少一種反應(yīng)基團(tuán)對(duì)癌 癥、炎癥、感染、移植排斥或神經(jīng)變性疾病的特異性底物或抗原具有特異性。
15.根據(jù)權(quán)利要求1 14中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其中，所述至少一種對(duì)底物具有特異 性的反應(yīng)基團(tuán)為抗體或抗體片段，該抗體或抗體片段選自由片段Fab、Fab'、F(ab' )2 和Fv組成的組中。
16.根據(jù)權(quán)利要求1 15中任一項(xiàng)所述的設(shè)備在制造一種用于診斷癌癥、炎癥、感 染、移植排斥或如阿爾茨海默病、帕金森病或肌萎縮側(cè)索硬化癥的神經(jīng)變性疾病的工具 中的用途。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的用途，其中，所述工具包括至少一個(gè)插入至柔性導(dǎo)管中的 金屬導(dǎo)向裝置，所述導(dǎo)管插入至內(nèi)窺鏡中，并且所述工具用于診斷癌癥、炎癥、感染、移植排斥或神經(jīng)變性疾病。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的用途，其中，所述工具包括至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置，所述 金屬導(dǎo)向裝置由經(jīng)體壁的抽吸針構(gòu)成并且插入至柔性導(dǎo)管中，并且所述工具用于診斷癌 癥、炎癥、感染、移植排斥或神經(jīng)變性疾病。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的用途，其中，所述至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置與柔性導(dǎo)管配合 使用，以便于使功能Ea端接觸微量分析和/或微量取樣位點(diǎn)。
20.根據(jù)權(quán)利要求17 19中任一項(xiàng)所述的用途，其中，經(jīng)體壁的路徑選自由經(jīng)皮的 和經(jīng)粘膜的路徑組成的組中。
21.根據(jù)權(quán)利要求17 20中任一項(xiàng)所述的用途，其中，所述至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置 與光纖在其長度的至少一部分上相連。
22.—種用于體外檢測(cè)存在于組織或器官中的底物方法，其特征在于，所述方法包括 如下步驟a)當(dāng)根據(jù)權(quán)利要求1 15中任一項(xiàng)所述的設(shè)備的功能Ea端與所述待檢查的組織或 器官接觸時(shí)，使用包含至少一種對(duì)所述底物具有特異性的檢測(cè)劑的溶液孵育所述功能Ea 端；b)檢測(cè)所述底物。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中，所述步驟a)中的至少一種檢測(cè)劑為對(duì)所述 底物具有特異性的可能標(biāo)記抗體。
24.根據(jù)權(quán)利要求22或23所述的方法，其中，在步驟a)和b)之間進(jìn)一步包括在溶 液中孵育所述端的步驟a')，該溶液包含至少一種對(duì)步驟a)中的檢測(cè)劑具有特異性的檢 測(cè)劑。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中，所述步驟a')中的至少一種檢測(cè)劑為對(duì)步 驟a)中的檢測(cè)劑具有特異性的標(biāo)記抗體。
26.根據(jù)權(quán)利要求22或23所述的方法，其中，跟在步驟a)之后還有沖洗步驟。
27.根據(jù)權(quán)利要求24或25所述的方法，其中，跟在步驟a)和/或步驟a')之后還 有沖洗步驟。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種分析設(shè)備，其中，所述系統(tǒng)包括至少一個(gè)金屬導(dǎo)向裝置，其一端設(shè)有至少一組孔，該孔直接與對(duì)底物具有特異性的反應(yīng)物結(jié)合，所述端為穿孔端，而其另一端用于控制所述導(dǎo)向裝置，并且非必須地與抽吸系統(tǒng)相連。所述導(dǎo)向裝置可以插入到與功能端齊平的可拆卸的保護(hù)系統(tǒng)中，一直到微量分析和/或微量取樣位點(diǎn)，和/或所述導(dǎo)向裝置可以插入至具有內(nèi)部通路的醫(yī)療器械中，所述導(dǎo)向裝置可以在其中滑動(dòng)。本發(fā)明也涉及這種設(shè)備在制造一種用于診斷患者體內(nèi)的癌癥、炎癥、感染、神經(jīng)變性疾病或移植排斥的工具中的用途，優(yōu)選通過經(jīng)體壁的路徑。本發(fā)明還涉及一種使用這種設(shè)備在體外分析底物的方法。
文檔編號(hào)A61B5/00GK102014734SQ200980112079
公開日2011年4月13日 申請(qǐng)日期2009年2月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月26日
發(fā)明者阿蘭·蓬皮杜, 阿爾貝-克洛德·貝納姆歐 申請(qǐng)人:博爾斯特姆斯有限公司