專利名稱：：具有抑制和阻斷m2離子通道活性的新化合物及其應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及具有抑制和阻斷M2離子通道活性的新化合物及其在制藥中的應用。最近發(fā)生的危及人類生命的H5N1甲型流感及禽流感引起了全球的關注，針對可能爆發(fā)的疫情世界衛(wèi)生組織及各國都采取了積極的措施，這其中包括疫苗的研制和藥物的研發(fā)。在甲型流感及禽流感感染過程中，甲型流感及禽流感的M2離子通道起著重要作用，它是病毒膜與內涵體膜融合使病毒脫殼釋放基因到細胞內的關鍵蛋白。M2離子通道已經被臨床檢驗證明是一個有效的藥物耙標，金剛烷胺和金剛乙胺作為有效的M2離子通道的阻斷劑在臨床使用數十年。但由于臨床使用太久或/和藥物濫用，近年來臨床上出現(xiàn)了大量的金剛烷胺和金剛乙胺抗藥性流感病毒株。在金剛垸胺和金剛乙胺基礎上一系列化合物已經被設計合成并進行藥理研究(乂C&肌2004，￥7，4975-4978、《/■^肌C&肌Soc.2000,"2,466-473、/Mec/.C/ze附.2003,必，2823-2833、"W39I^2、i:mVMe(/C/^附1996,37,105-110、AtowwZ)n/gD&c01w72006,5，1015-1025)，由于這些化合物基本上與金剛烷胺和金剛乙胺具有相似的作用機理和作用方式，所以它們的抗性流感病毒株具有交叉抗性(如抗金剛烷胺的流感病毒株也抗BL-1743，■/K/i<9￡OGy1996,70,4246~4252)，因此藥物發(fā)現(xiàn)具有新作用機理和新構架的抑制M2離子通道的化合物顯得十分重要。本發(fā)明需要解決的技術問題是提供一種具有抑制和阻斷M2離子通道活性的新化合物。解決上述技術問題的技術方案如下式(I)中的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體
背景技術：
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發(fā)明內容<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中，Ri為H，含有或不含有氟、氮、氧、硫雜原子的無環(huán)烴基，或任意取代的單環(huán)或多環(huán)烴基；R2為H、垸基、?；?，或含有至少一個環(huán)的結構，環(huán)上可以任意取代；R3為H、OR7、SR8、NR9R1()、或任意取代的鏈狀或環(huán)狀烴基；R4、Rs分別為H、烷基、鹵素，或末端是氨基的鏈狀或末端是氨基的環(huán)狀烴基；或R4、R5共同構成末端是氨基的環(huán)狀烴基；R7、R8、R9、Rn)分別為H、垸基、芳基、或雜環(huán)芳基；m，n分別為0到6的整數；X為零、S、O、NH、或CH2;Y為N、或CH。優(yōu)選為，所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，當Y為CH時其具有式(II)其中Ru、Rw分別為H、烷基、或?；?；R!、R2、R3的定義與上述相同。Z、T分別為CH或N?；騼?yōu)選為，所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，當Y為N時其具有式(IV)結構結構:其中Rn、Ru分別為H、烷基、或酰基；Z、T為分別CH或N?；騼?yōu)選為，當Y為CH時其具有式(III)結構其中Ri5、Ri6分別為H、垸基、或酰基；R,、R2、R3的定義與上述相同;Z、T分別為CH或N。或優(yōu)選為，所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，當Y為N時其具有式(V)結構<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中Ri7、Rw分別為H、烷基、或?；?；R,、R2、R3的定義與上述相同;Z、T分別為CH或N?；騼?yōu)選為，當Y為N時其具有式(VI)結構<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>Vl)其中Ri9、R2o分別為H、垸基、或?；籞、T分別為CH或N?；騼?yōu)選為，當Y為N時其具有式(VII)結構xVvll)更優(yōu)選地，當Rs為H時其具有式(VIII)結構:(vm)R2、R3、R4的定義與上述定義相同,具體地，所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，優(yōu)選為1-(N-(l-金剛烷基)-胺甲基)組氨、或l-(N-(l-金剛垸基)-1，2，6-己三胺，或l-(N-(l-金剛烷基)-5-胍基-1，2-戊二胺；或是N-金剛烷甲基組氨酸和酯、N-金剛烷甲基組氨酰胺；N-環(huán)丙垸甲基組氨酸和酯、N-環(huán)戊基甲基組氨酰胺；N-環(huán)己基甲基組氨酸和酯、N-環(huán)己基甲基組氨酰胺、N-環(huán)己基組氨酸和酯、N-環(huán)己基組氨酰胺；N-環(huán)戊基甲基組氨酸和酯、N-環(huán)戊基甲基組氨酰胺、N-環(huán)戊基組氨酸和酯、N-環(huán)戊基組氨酰胺；N-苯甲基組氨酸和酯、N-苯甲基組氨酰胺。本發(fā)明的另一需要解決的技術問題是提供上述化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體在醫(yī)藥中的應用。解決上述技術問題的技術方案如下上述化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體在制備流感和禽流感藥物中的應用。上述化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體在制備抗丙肝、艾滋病毒感染或真菌感染的藥物中應用。本發(fā)明另一需要解決的技術問題是提供一種藥物組合物。一種藥物組合物，其主要由上所述化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體作為活性成分與至少一種藥學上可接受的載體組成。本發(fā)明設計和制備了一系列具有多個氨基結構單元的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，這些合理分布的多氨基結構單元組成了這些化物的多個結合官能團和功能區(qū)。這些化合物可能通過新的作用機理抑制和阻斷野生型和變異型流感及禽流感M2離子通道(被臨床檢驗證明是一個有效的流感藥物靶標)的活性從而具有治療野生型和變異型流感及禽流感的藥效功能，同時它們還可能用于治療乙肝、丙肝和愛滋病等，從而為臨床治療提供更多的藥物選擇。圖1膜片鉗檢測金剛垸胺抑制M2離子通道活性結果示意圖；圖2膜片鉗檢測化合物2抑制M2離子通道活性結果示意圖。具體實施例方式本發(fā)明化合物的"藥學上可接受的鹽"包括本發(fā)明化合物和無機或有機酸反應形成的本發(fā)明化合物的常規(guī)無毒鹽。例如，包括得自無機酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等的鹽，也包括得自有機酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、對氨基苯磺酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙垸二磺酸、草酸、羥乙基磺酸、三氟乙酸等的鹽。如果本發(fā)明化合物為酸性的，則適當的"藥學上可接受的鹽"指通過藥學上可接受的無毒堿包括無機堿及有機堿制備的鹽。得自無機堿的鹽包括鋁鹽、銨鹽、鈣鹽、銅鹽、鐵鹽、亞鐵鹽、鋰鹽、鎂鹽、錳鹽、亞錳鹽、鉀鹽、鈉鹽、鋅鹽等。得自藥學上可接受的有機無毒堿的鹽，所述堿包括伯胺、仲胺和叔胺的鹽，取代的胺包括天然存在的取代胺、環(huán)狀胺及堿性離子交換樹脂。例如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、二乙胺、2—二乙基氨基乙醇、2—二甲基氨基乙醇、氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N—乙基嗎啉、N—乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、組氨酸、異丙基胺、賴氨酸、甲基葡萄糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、多胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。本發(fā)明所述化合物可具有不對稱中心、手性軸及手性面，且存在的外消旋物、外消旋物混合物及單一非對映體和所有可能的同分異構體及其混合物包括旋光異構體均包括在本發(fā)明內。另外，本發(fā)明公開的化合物可以互變異構體存在，且兩種互變異構形式都包括在本發(fā)明的范圍內，即使僅描述了其中一種互變異構結構。例如，任何要求保護的下列化合物A都理解為包括互變異構結構B，且反之亦然，同樣包括其混合物。當任何變量(例如R3、R4、R5、Re、R7等)在任何組分中出現(xiàn)超過一次，則其每次出現(xiàn)的定義獨立于其它每次出現(xiàn)的定義.同樣，允許取代基及變量的組合，只要這種組合使化合物穩(wěn)定。本發(fā)明所用術語"烴基"意指包括CVC8烷基、C2-Q烯基、C2-Q炔基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)垸基。自取代基劃入環(huán)系統(tǒng)的線表示所指的鍵可連接到任何能取代的環(huán)原子上。如果環(huán)系統(tǒng)為多環(huán)，其意味著這種鍵僅連接到鄰近環(huán)的任何適當的碳原子上。要理解本領域普通技術人員可選擇本發(fā)明化合物的取代基及取代型式而提供化學上穩(wěn)定的并可通過本領域技術和下列提出的方法自可容易獲得的原料容易的合成的化合物。如果取代基自身被超過一個基團取代，應理解這些基團可在相同碳原子上或不同碳原子上，只要使結構穩(wěn)定。本發(fā)明所用術語"垸基"意指包括具有特定碳原子數目的支鏈的、直鏈的或環(huán)狀的飽和脂肪烴基。"d-C8垸基"中"C廣C8"的定義包括以直鏈或支鏈排列的具有1、2、3、4、5、6、7或8個碳原子的基團。例如，"Q-C8垸基"具體包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、戊基、己基、庚基、辛基、環(huán)丙基、甲基-環(huán)丙基、2,2-二甲基-環(huán)丁基、2-乙基-環(huán)戊基、環(huán)己基等。術語"烯基"指直鏈、支鏈或環(huán)狀的，含有2-8個碳原子及至少一個碳-碳雙鍵的非芳香烴基。因此，"C2-Q烯基"指具有2-8個碳原子的烯基。烯基包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、2-甲基丁烯基和環(huán)己烯基。烯基的直鏈、支鏈或環(huán)狀部分可含有雙鍵且如果指明了取代的烯基則此部分可被取代。術語"炔基"指直鏈、支鏈或環(huán)狀的，含有2-8個碳原子及至少一個碳碳三鍵的非芳香烴基。因此，"C2-C8炔基"指具有2-8個碳原子的炔基。炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、3-甲基丁炔基等。炔基的直鏈、支鏈或環(huán)狀部分可含有三鍵且如果指明了取代的炔基則此部分可被取代。則術語"芳基"是指環(huán)中多達7個原子的任何穩(wěn)定的單環(huán)或每個環(huán)中多達7個原子雙環(huán)碳環(huán)，其中至少一個環(huán)為芳香環(huán)。芳基的實例包括苯基、萘基、蒽基及聯(lián)苯基。術語"芳烷基"包括其中上述"烷基"被上述"芳基"取代的基團。芳烷基的實例包括節(jié)基、苯乙基、萘基亞甲基、蒽基亞甲基。術語"雜芳基"代表環(huán)中多達7個原子的穩(wěn)定的單環(huán)或每個環(huán)中多達7個原子雙環(huán)碳環(huán)，其中至少一個環(huán)為芳香環(huán)且含有1-4個選自O、N和S的雜原子。本定義范圍內的雜芳基包括但不限于吖啶基、咔唑基、噌啉基、喹噁啉基、吡唑基、噴哚基、苯并三唑基、呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、喹啉基、異喹啉基、噁唑基、異噁唑基、B引哚基、吡嗪基、噠嗪基、吡啶基、噴啶基、吡咯基。術語"雜芳烷基"包括其中上述"烷基"被上述"雜芳基"取代的基團。雜芳基的實例包括呋喃亞甲基、吡啶乙基、吡咯亞甲基。術語"雜環(huán)基"是指含有1-4個選自0、N和S等雜原子的5-10元芳香性或非芳香性雜環(huán)，且包括雙環(huán)基團。"雜環(huán)基"因此包括上面提及的雜芳基，也包括其二氫化及四氫化類似物。"雜環(huán)基"進一步的實例包括但不限于苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、咪唑基、二氫吲哚基、吲哚基，吲唑基、異苯并呋喃基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、噁二唑基、噁唑基、噁唑啉、異噁唑啉、氧雜環(huán)丁垸基(oxetanyl)、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并吡啶基、噠嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹噁啉基、四氫吡喃基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、氮雜環(huán)丁垸基、1，4一二噁烷基、氮雜環(huán)庚烷基(hexallydroazepinyl)、哌嗪基、哌啶基、吡啶一2—酮基、吡咯烷基、嗎啉基、硫代嗎啉基(thiomorpholinyl)、二氫苯并咪唑基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并噁唑基、二氫呋喃基、二氫咪唑基、二氫吲哚基、二氫異噁唑基、二氫異噻唑基、二氫噁二唑基、二氫噁唑基、二氫吡嗪基、二氫吡唑基、二氫吡啶基、二氫嘧啶基、二氫吡咯基、二氫喹啉基、二氫四唑基、二氫噻二唑基、二氫噻唑基、二氫噻吩基、二氫三唑基、二氫氮雜環(huán)丁烷基、亞甲基二氧基苯甲酰基、四氫呋喃基和四氫噻吩基及其N-氧化物。雜環(huán)取代基的連接可通過碳原子或通過雜原子實現(xiàn)。術語"多環(huán)"包括其中形成至少2個環(huán)的結構，這些環(huán)之中至少有兩個環(huán)之間有1個共同原子的螺環(huán)或至少2個共同的原子的并(合)環(huán)或橋(跨)環(huán)結構。典型的結構如金剛烷、降冰片、降冰片烯、蒎烷、(異)樟烷、蒈垸等的基本結構。這些環(huán)上可以含有或不含取代基的結構，這些多環(huán)結構可以雜多環(huán)。術語"雜環(huán)基"包括其中上述"烷基"被上述"雜環(huán)基"取代的基團。雜環(huán)基實例包括咪唑亞甲基、吡咯烷乙基、四唑亞甲基。術語"鹵素"意指包括氟、氯、溴和碘。術語"pKa"意指質子化的氮解離其中的質子所形成的平衡常數的負對數。"pKa不小于4的烴基"實例包括但不限于取代或未取代的氨基、吡咯烷基、奎寧環(huán)、哌啶基；P比啶基、喹啉、異喹啉、咪唑基。目標化合物制備的是通過相應的醛與合適的氨(胺)發(fā)生氨化還原或羧酸及羧酸酯與氨(胺)形成酰胺后還原。所用的原料醛、羧酸或酯、氨(胺)等除了市場購買的外，以下為相應的基本制備方法和原則，本領域的技術人員可以根據本發(fā)明制備到所述的任一種化合物1)醛、羧酸或酯的制備可以根據目標化合物的需要合成，如從氨基酸開始的一系列轉化形成相應的；醇可以氧化成相應的羧酸并可以轉化成對應的酯；通過羧酸或酯經部分還原成醛，或羧酸或酯完全還原制備成醇后再氧化成醛。2)氨(胺)的制備可以由對應的醇、鹵代物、醛、羧酸、酰胺等轉化而來。實施例1.N-金剛烷甲基組氨酸甲酯(化合物2和3)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>取氫化鋁鋰0.43g(11.3mmo1)置于50ml兩口瓶中，加入15ml無水乙醚，在冰浴中攪拌10min，緩慢滴加l-金剛垸甲酸甲酯的THF溶液(1.62g，8.4mmol溶于3.5mlTHF)，滴完后升溫回流5h。反應結束后放入冰浴，依次緩慢滴加0.5mlH20，15%NaOH溶液0.5ml，1.5mlH20，繼續(xù)攪拌30min，恢復至室溫，過濾，濾餅用乙醚洗滌，合并有機相，無水Na2S04干燥，過濾濃縮干燥得1-金剛垸甲醇1.3g(收率92.8%)。取l-金剛垸甲醇lg(6mmo1)，溶于50mlCH2C12，冰浴下加入PCC2.6g(12mmol)，攪拌10min恢復至室溫，繼續(xù)反應I.5h。反應結束后在冰浴下緩慢加入乙酸乙酯，取清液過60-100粗硅膠柱，收集濾液濃縮干燥得l-金剛垸甲醛(化合物l)0.86g(收率87.6%)。取L-組氨酸甲酯或D-組氨酸甲酯0.09g(0.53mmo1)溶于5mlMeOH，加入1-金剛垸甲醛0.106g(0.65mmo1)，室溫下攪拌1.5h，在冰浴下加入NaBH3CN0.07g(l.llmmol)，恢復至室溫，TLC至反應結束。在冰浴下緩慢加入飽和NaHC(V溶液，CH2C12萃取三次，合并有機相，無水Na2S04干燥，過濾濃縮，硅膠柱(MeOH/CH2Cl2=2/98)分離得N-金剛烷甲基組氨酸甲酯(化合物2或3)0.126g(收率31%)。2)PCC/CH2C12l)LiAlH4/THF2,L-組氨酸衍生物3，D-組氨酸衍生物實施例2.N-桃金娘烯甲基組氨酸甲酯(化合物4)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>取D-組氨酸甲酯0.15g(0.89mmo1)溶于7mlMeOH，加入桃金娘烯醛((-)-Myrtenal)0.5mmo1，室溫下攪拌1.5h，在冰浴下加入NaBH3CN0.25g(3.98mmo1)，恢復至室溫，TLC至反應結束。在冰浴下緩慢加入飽和NaHC03溶液，CH2Cl2萃取三次，合并有機相，無水Na2S04干燥，過濾濃縮，硅膠柱(MeOH/CH2Cl2-5/95)分離得N-桃金娘烯甲基組氨酸甲酯(化合物4)50mg(收率40%)。實施例3.N-環(huán)丙垸甲基組氨酸甲酯(化合物5)NaCNBH3/MeOHHistidinemethylester取組氨酸甲酯0.15g(0,89mmol)溶于7mlMeOH,加入環(huán)丙烷甲醛0.07ml(0.94mmol)，室溫下攪拌1.5h，在冰浴下加入NaBH3CN0.25g(3.98mmol)，恢復至室溫，TLC至反應結束。在冰浴下緩慢加入飽和NaHC03溶液，CH2Cl2萃取三次，合并有機相，無水Na2S04干燥，過濾濃縮，硅膠柱(MeOH/CH2Clf5/95)分離得N-環(huán)丙垸甲基組氨酸甲酯(化合物5)0.025g(收率12.6%)。實施例4.2-N-取代組氨酸甲酯化合物(化合物6)N\\《》NH、NH2,、、、么CO,MeCHOMeOH/NaCNBH36o2Me6將L-組氨酸甲酯0.36mmmo1溶于10ml甲醇'加入醛0.43mmol(1.2eq)，2h后加入NaBH3CN27mg(0.43mmo1，1.0eq)，室溫反應8h后濃縮，硅膠柱色譜提純(CH2C12/CH30H洗脫)得50mg2-N-取代組氨酸甲酯化合物即化合物6。產率32%。實施例5.N-金剛烷甲基組氨酸(化合物7和8)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>7，L-組氨酸衍生物8，D-組氨酸衍生物0.5mmolL-組氨酸或D-組氨酸的鹽酸鹽懸浮在5ml甲醇中，依次加入0.55mmol三乙胺和0.6mmol金剛烷醛(2)，反應體系在室溫下攪拌5小時，小心脫空氣后加入催化量的Pd/C，再充氫氣。還原氨化反應約需8小時完成，過濾除去催化劑，硅膠柱層析(MeOH/DCM5%到15%)得到N-金剛垸甲基組氨酸(化合物7和8)(53%收率)。實施例6.1-(N-(l-金剛烷基)-胺甲基)組氨類化合物NH，Boc、Boc20COOH麵co,NHBocBoc、AdNH7HCl'COOHTBB蘭MOL-組氨酸D-組氨酸TFA9,L-組氨酸衍生物10，D-組氨酸衍生物11，L-組氨酸衍生物12，D-組氨酸衍生物NH7NHAdLawesson'sreagentNH,RanevNi13，L-組氨酸衍生物"D-組氨酸衍生物NHAd15，L-組氨酸衍生物16，D-組氨酸衍生物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>17，L-組氨酸衍生物18，D-組氨酸衍生物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>19，L-組氨酸衍生物20,D-組氨酸衍生物21，L-組氨酸衍生物22，D-組氨酸衍生物NHAd23，L-組氨酸衍生物24，D-組氨酸衍生物取L-組氨酸或D-組氨酸2g(12.卯mmo1)用10ml飽和NaHC03溶解后再加入30ml二氧六環(huán)，在冰水浴中慢慢滴加Boc2O7.0g(32.25mmoI，用10ml二氧六環(huán)溶解)，在室溫下反應24小時。反應結束后，用3x60ml石油醚洗滌，水相用飽和NaHS04水溶液調節(jié)pH值至3-4后用3x60ml乙酸乙酯萃取，無水Na2S04干燥，過濾濃縮，硅膠柱(甲醇/二氯甲烷=1/20，300毫升洗脫劑加1毫升甲酸)分離得4.27克產物9或10(產率93%)。取金剛烷胺鹽酸鹽1.59g(8.45mmoD投入到100ml二氯甲烷中，加入三乙胺3ml，30min后依次投入3g(8.45mmo1)產物9或10、2.72gTBTU(8.47mmo1)及l(fā)mlN-甲基嗎啉，室溫反應18小時。反應結束后，濃縮過柱，硅膠柱層析(甲醇/二氯甲烷=1/30)分離得1.9g產物11或12(產率87%)。取0.9g11或12(1.84mmo1)溶于20ml二氯甲垸，在冰浴中注入lmlTFA，加畢將反應挪至室溫繼續(xù)攪拌5小時。反應結束后濃縮，硅膠柱(甲醇/二氯甲烷=1/15，IOO毫升洗脫劑加l毫升氨水)分離得0.51g產物13或14(產率93%)。取0.1g(0.347mmo1)13或14和0.35g(O細mmol)Lawesson試劑投入到20ml苯中，加熱回流20h;蒸干溶劑后加入80%叔丁醇(含水20%)20ml和1.0gRaneyNi，加熱回流8h后。反應結束后，過濾濃縮，硅膠柱(甲醇/二氯甲烷=1/5)分離得0.072g產物15或16(兩步產率為76%)。取0.5g15或16(1.82mmo1)用20ml水溶解后，注入2ml三乙胺，在冰水浴中慢慢滴加0.80gBoc2O(3.6mmol，用3ml二氧六環(huán)溶解)，滴完后移至室溫繼續(xù)反應20h。反應結束后，用3x50ml石油醚洗滌，水相用3x50ml乙酸乙酯萃取，無水Na2S04干燥，過濾濃縮，硅膠柱(甲醇/二氯甲烷=1/15)分離得0.76g產物19或20(產率88%)。取0.45g19或20(0.949mmo1)溶于20ml甲醇，加入0.2gNaHCO3(2.3mmol)和0.674g碘甲烷(4.74mmol)，室溫反應20h。反應結束后，濃縮，硅膠柱(甲醇/二氯甲烷=1/20)分離得0.41g產物21或22(產率89%)。取0.2g21或22(0.41mmol)溶于10ml二氯甲烷，在冰浴中注入lmlTFA，滴畢挪至室溫繼續(xù)反應3h。反應結束后，濃縮，硅膠柱(甲醇/二氯甲烷=1/10，IOO毫升洗脫劑加I毫升氨水)分離得0.11g最終產物23或24(產率94%)。實施例7.2-(N-金剛烷甲基)-精氨酸酯NHFmocHHN"、PbfHN25Piperidine^HN^UC02HyPbfHN26AdCHO'NaBH3CN，CH2AdMeQHu~HCH2AdC02HsOCI2yw、C02MeP國27H2N28取25lg(1.54mmol)溶于40ml二氯甲烷，加入2.3ml哌啶，室溫攪拌40min。反應結束后，蒸去絕大部分溶劑，加入40ml水，用4x40ml石油醚萃取，水層用4x40ml乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯層，無水Na2S04干燥，濃縮，硅膠柱(甲醇/二氯甲烷=1/15)，得0.59g產物26(產率91%)。取260.852g(2.0mmol)溶于30ml甲醇，加入0.361gAdCHO(2.2mmol)禾卩3g無水Na2S04，室溫反應25h后，在冰水浴中加入0.69g氰基硼氫化鈉(lOmmol)，20min后移至室溫攪拌過夜。反應結束后，硅膠柱(甲醇/二氯甲烷=1/15)，得1.02g產物27(產率89%)。取270.7克(U8mmo1)溶于20ml甲醇，加入催化量DMAP和6ml二氯亞砜，5min后加熱回流16h。反應結束后，過濾，加入20ml乙酸乙酯重結晶，得0.267g產物28(產率65%)。實施例8.5-(N-金剛垸胺基)-2-氨基戊酸酯類化合物(化合物31和32)AdNH2/ZnCI義B。C2TFAMe。2c,v、choMeOH/NaCNB'H3MeC^cr^^^ch2C'I2Me。2ca，ad3031NHCH,AdMeOH/NaCNBH3Meo2c'32,NHAdAd=_!將291.0g(2.9mmmol)溶于50ml甲醇，加入金剛烷鹽酸鹽0.65g(3.47mmol，1.2叫)，冰浴下加入ZnCl22.0g(14.5mmol，5eq)的甲醇溶液，移至室溫2h后力QNaBH3CN220mg(3.47mmol，l.Oeq)，4h后加10ml水，NaHC03飽和溶液，乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗，無水Na2S04干燥，硅膠柱色譜提純(以2%氨水的CH2Cl2/CH3OH的飽和液洗脫)得l.lg化合物30。產率79%。將化合物301.0g(2.1mmmol)溶于30ml無水CH2C12，N2保護，冰浴下滴加TFA，移至室溫4h后反應完全，濃縮至干，硅膠柱色譜提純(以2。/。氨水的CH2Cl2/CH30H的飽和液洗脫)得化合物310.55g。產率94%。將化合物31100mg(0.36mmmol)溶于10ml甲醇，加入AdCHO65mg(0.39mmo1，l.l叫)，2h后力卩NaBH3CN23mg(0.36mmo1，l.Oeq)，室溫反應8h后濃縮，硅膠柱色譜提純(CH2Cl2/CH30H洗脫)得65mg化合物32。產率42%。實施例9.2-(N-金剛烷甲基)賴氨酸酯(化合物35)和2,6-二(N-金剛烷甲基)賴氨酸酯(化合物36)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>Fmoc-Lys(Boc)-OH，l.OOg于100ml反應瓶中，抽真空注入氮氣，再注入50ml重蒸CH2C12和2ml哌啶，室溫攪拌。兩小時后反應完成。CH2Cb萃取兩次，合并有機相用飽和NaCl溶液各洗滌兩次。無水NaS04千燥，脫溶劑后粗硅膠(60-100目)3.0g拌樣，硅膠柱色譜提純(洗脫極性CH30H:CH2C12，1:3),得到480mg白色晶體即化合物33，收率91.4%。取900mg化合物33,500mgAdCHO于100ml單口燒瓶中，注入30mlCH3OH，室溫攪拌過夜。次日，稱取194mgNaBH3CN溶于5mlCH30H中，再將其緩慢注入反應體系。兩小時后檢測，反應完成。體系用水稀釋，CH2Cl2萃取三次合并有機相。無水NaS04干燥，脫溶劑后粗硅膠拌樣進行硅膠柱色譜提純(洗脫極性CH30H:CH2C12,1:6)。得白色晶體34730mg，收率50.6%。稱取lOOmg化合物34于25ml二口燒瓶中，注入10mlCH3OH，緩慢注入1.5mlSOCl2，加熱回流12h后停止反應。將體系直接旋干除去殘留的SOCl2，硅膠柱色譜提純(洗脫極性CH30H:CH2C12，1:6)。得60mg淡黃色晶體即化合物35，收率77%?；衔?6的制備與34的制備類似。實施例10.2-(N-金剛烷甲基)谷氨酸二酯(化合物37)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>將谷氨酸二甲酯100mg(0.57mmmol)溶于10ml甲醇，加入AdCHO103mg(0.63mmo1，l.leq)，2h后力tlNaBH3CN36mg(0.57mmo1，l.Oeq)，室溫反應6h后濃縮，硅膠柱色譜提純(CH2Cl2/CH30H洗脫)得83mg化合物37，產率45%。實施例11.5-(N-金剛垸胺基)-2-(N-桃金娘烯胺基)戊酸酯類化合物(化合物38)Me02C',瞧dCHOHN31MeOH/NaCNBH3MeO,C',NHAdAd=-！38將100mg(0.36mmmol)化合物31溶于10ml甲醇，加入桃金娘烯醛((-)-Myrtenal)64mg(0.43mmo1,L2叫)，2h后加入NaBH3CN27mg(0.43mmo1，l.Oeq),室溫反應8h后濃縮,硅膠柱色譜提純(CH2Cl2/CH30H洗脫)得51mg化合物38，產率35%。實施例12.5-(N-金剛烷胺基)-2-(N-環(huán)烷基)戊酸酯類化合物(化合物39)OMe02C'-NHAdHN31MeO,CNBH3,,,NHAdAd=39將100mg(0.36mmmol)化合物31溶于10ml甲醇，加入環(huán)己酮0.43mmo1(1.2叫)，2h后加入NaBH3CN27mg(0.43mmo1，l.Oeq)，室溫反應8h后濃縮，硅膠柱色譜提純(CH2C12/CH30H洗脫)得45mg化合物39,產率34%。實施例13.5-(N-金剛烷胺基)-2-(N-環(huán)垸基)戊酸酯類化合物(化合物40)ONHMe02C-NHAdHN'31MeOH/NaCNBH.3MeO,C一,NHAd40將100mg(0.36mmmol)化合物31溶于10ml甲醇，加入環(huán)戊酮0.43mmol(L2eq)，2h后加入NaBH3CN27mg(0.43mmo1,1.0eq)，室溫反應8h后濃縮，硅膠柱色譜提純(CH2CI2/CH3OH洗脫)得40mg化合物40，產率33%。17實施例14.5-(N-金剛垸胺基)-2-(N-環(huán)烷基)戊酸酯類化合物(化合物41)O41將100mg(0.36mmmol)化合物31溶于10ml甲醇，加入醛0.43mmo1(1.2eq)，2h后加入NaBH3CN27mg(0.43mmo1，l.Oeq)，室溫反應8h后濃縮，硅膠柱色譜提純(CH2Cl2/CH3OH洗脫)得50mg化合物41，產率32%。實施例15.化合物對野生型和變異型H5N1-M2離子通道的抑制活性1.構建穩(wěn)定表達野生型和變異型H5N1-M2離子通道的細胞系見文獻(Sun,J.;Li,C.;Xu,W.;Li，Z.;Liu,J.;Chen,L.J5zoec/z2008，1902)。2.膜片鉗檢測一些化合物對H5N1-M2離子通道阻斷能力表達H5N1-M2離子通道的293T-rex細胞經過1pg/ml四環(huán)素誘導24-48小時后，在室溫下使用膜片鉗(Axopatch200B)記錄電流的變化情況(參考Li,Z.等/A^nwc/e"ce2004,24，7378-7386)。加藥和調節(jié)pH使用自動加樣系統(tǒng)。請參閱表l，膜片鉗實驗結果表明流感野生型H5N1-M2離子通道的陽性藥金剛垸胺的半數抑制活性IC5o在4.2^iM，但金剛垸胺對流感變異型M2離子通道沒有抑制能力；新化合物2對流感野生型和變異型均有較好的抑制活性且活性相當，半數抑制活性IC5o在5l(HiM;新化合物5對流感野生型和變異型均有一定的抑制活性且活性相當，半數抑制活性ICso在0.30.4mM;新化合物13對野生型有一定的抑制活性。表1.部分化合物抑制野生型和變異型H5N1-M2離子通道的活性<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>8NANDND13137.2NDNA14NANDND17NANANA18NANANDNA表示沒有抑制活性；ND表示未檢測圖1和圖2是膜片鉗檢測化合物抑制H5N1-M2離子通道活性結果，其中(A)是在保持細胞膜內外電勢差在40mV下，改變細胞外pH6.8到5.5，表達野生型、金剛垸胺抗性H5N1-S31N和H5N1-L26I/S31N的M2離子通道的293T-rex細胞的膜電流變化。藍線是對照，紅線是使用藥物后的電流；藥物使用量已經標注。(B)是化合物用量與抑制率的關系，數據的重復次數在4~6。實施例16.化合物抗M2離子通道野生型和變異型流感病毒H1N1活性細胞MDCK狗腎細胞；培養(yǎng)液DMEM+10%FBS;維持液DMEM+2%FBS;病毒H1N1型流感病毒A/PR/8/34(M2野生型)禾nA/WS/33(M2S31N變異型)。1.病毒毒力測定(病毒毒力TCID50為10—5'5)將MDCK細胞以5xl0V孔接種于96孔板，細胞長成單層后，加入100^1IO倍系列稀釋的6個濃度的病毒液(病毒原液來源于雞胚增殖，DMEM稀釋)吸附l-2小時后，傾出病毒，PBS洗兩次，加入維持液培養(yǎng)后每天用倒置顯微鏡觀察細胞病變(CPE)、血凝效價測定和用MTT染法觀察細胞存活狀態(tài)以及病毒擴增情況，用Reed-Muench法計算病毒半數感染劑量(TCID50)，每濃度設8個復孔，重復實驗確定毒力。2.抗病毒實驗得到病毒的TCID50和藥物的CC0后，在MDCK細胞上進行抗病毒活性篩選，將細胞以5xl0V孔接種于96孔板，細胞長成單層后，按如下兩種方式進行實驗(1)先攻毒后加藥組(記為A組)將藥物(2倍稀釋，一般從最大無毒濃度開始)和病毒(100TCID50)同時加入細胞開始感染，吸附2小時后，傾出病毒，PBS洗兩次，然后加200^1含同樣藥物的維持液。(2).毒、藥同時作用組(記為B組)每孔加100(^1(100TCID50)病毒感染，吸附2小時后，傾出病毒，PBS洗兩次，然后加入20(^12倍梯度稀釋的待測藥物。試驗設病毒對照、細胞對照及陽性藥物對照("利巴韋林Rabavirin"，金剛垸胺Amantadine,19達菲Tamiflu)。以病毒對照孔出現(xiàn)病變達75%以上時終止試驗。倒置顯微鏡觀察對細胞的致病變作用(CPE)(24，48,72)，同時在24h和48時取培養(yǎng)液上清測定其血凝效價，最后72小時后進行MTT實驗。用Reed-Muench法計算半數有效濃度(EC50)。抑制H1N1病毒活性研究結果表明1)化合物對H1N1的抑制活性與化合物加入順序有關，化合物35受到加藥時間影響較??；2)化合物32、35、38、41有較好的抑制M2野生型和變異型H1N1流感病毒的活性。表2.部分化合物抗M2離子通道野生型和變異型流感病毒H1N1活性<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>H1N1-M2野生型病毒A/PR/8/34;H1N1-M2變異型病毒A/WS/33。權利要求1.式(I)中的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體其中，R1為H，或含有或不含有氟、氮、氧、硫雜原子的無環(huán)烴基，或任意取代的單環(huán)或多環(huán)烴基；R2為H、烷基、或酰基，或含有至少一個環(huán)的結構，環(huán)上可以任意取代；R3為H、OR7、SR8、或NR9R10、或任意取代的鏈狀或環(huán)狀烴基；R4、R5分別為H、烷基、鹵素，或末端是氨基的鏈狀或末端是氨基的環(huán)狀烴基；或R4、R5共同構成末端是氨基的環(huán)狀烴基；R7、R8、R9、R10分別為H、烷基、芳基、或雜環(huán)芳基；m，n分別為0到6的整數；X為零、S、O、NH、或CH2；Y為N、或CH。2.根據權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，其特征是，當Y為CH時，其具有式(II)結構<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中Rn、Ru分別為H、烷基、或?；?；&、R2、R3的定義與權利要求l相同；Z、T分別為CH或N。3.根據權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，其特征是，當Y為CH時，其具有式(III)結構<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中R3、R!4分別為H、垸基、或酰基；R,、R2、R3的定義與權利要求l相同;Z、T分別為CH或N。4.根據權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，其特征是，當Y為N時,其具有式(IV)結構其中R!5、Rt6分別為H、垸基、或?；籖"R2、R3的定義與權利要求l相同；Z、T分別為CH或N。5.根據權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，其特征是，當Y為N時,其具有式(V)結構R"力H其中Rn、R!8分別為H、垸基、或酰基；R!、R2、R3的定義與權利要求1相同；Z、T分別為CH或N。6.根據權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，其特征是，當Y為N時,其具有式(VI)結構其中R9、R2o分別為H、烷基、或?；?；R!、R2、R3的定義與權利要求l相同；Z、T分別為CH或N。7.根據權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，其特征是，當Y為N、R5為H時，其具有式(VIII)結構R4、R2、R3、R4的定義與權利要求l相同。8、根據權利要求2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，其為1-(N-(l-金剛垸基)-胺甲基)組氨、或l-(N-(l-金剛烷基)-1，2，6-己三胺。9、根據權利要求6所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，其是N-金剛垸甲基組氨酸和酯、N-金剛垸甲基組氨酰胺；N-環(huán)丙烷甲基組氨酸和酯、N-環(huán)戊基甲基組氨酰胺；N-環(huán)己基甲基組氨酸和酯、N-環(huán)己基甲基組氨酰胺、N-環(huán)己基組氨酸和酯、N-環(huán)己基組氨酰胺；N-環(huán)戊基甲基組氨酸和酯、N-環(huán)戊基甲基組氨酰胺、N-環(huán)戊基組氨酸和酯、N-環(huán)戊基組氨酰胺；N-苯甲基組氨酸和酯、N-苯甲基組氨酰胺。10、根據權利要求7所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，其是l-(N-(l-金剛垸基)-5-胍基-1，2-戊二胺。11、權利要求1一10任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體作為具有抑制和阻斷M2離子通道活性的物質，其在制備流感和禽流感藥物中的應用。12、一種藥物組合物，其主要由權利要求1一10中任一項所述化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體作為活性成分與至少一種藥學上可接受的載體組成。全文摘要本發(fā)明公開了具有抑制和阻斷M2離子通道活性的、式(I)中的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，式中各基團定義詳見說明書。所述化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體可能通過新的作用機理抑制和阻斷野生型和變異型流感及禽流感M2離子通道的活性從而具有治療野生型和變異型流感及禽流感的藥效功能，同時它們還可能用于治療乙肝、丙肝和愛滋病等，從而為臨床治療提供更多的藥物選擇。文檔編號A61P43/00GK101531637SQ20091013782公開日2009年9月16日申請日期2009年4月21日優(yōu)先權日2008年4月30日發(fā)明者劉勁松,周國春,靜徐,李志遠,凌陳,陳緒林申請人:中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院